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Nas questes de 31 a 70, marque, para cada uma, a nica opo correta, de acordo com o respectivo comando. Para as devidas marcaes, use a folha de respostas, nico documento vlido para a correo das suas provas.

CONHECIMENTOS ESPECFICOS
QUESTO 31 QUESTO 33

Considerando que a microscopia eletrnica de transmisso (MET) se diferencia da microscopia de luz em muitos aspectos, assinale a opo que apresenta apenas elementos pertencentes MET. A utilizao de corantes, observao de material includo em parafina e cortado em micrtomo, uso de luz no espectro do ultravioleta (UV) B metalizao do material a ser observado, marcao com anticorpos primrios e secundrios, observao de amostras vivas C uso de feixe de eltrons para a formao das imagens, uso de solues de sais de metais pesados como contrastantes, observao de cortes ultrafinos das amostras, de cerca 70 nm de espessura D secagem das amostras ao ponto crtico, congelamento da amostras em nitrognio lquido, uso de sondas fluorescentes associadas a anticorpos E uso de resinas hidroflicas para incluso das amostras, observao de amostras coradas com azul de toluidina, uso de oligonucleotdios marcados com fluorocromos especficos
QUESTO 32

A microscopia eletrnica de varredura (MEV) tambm utiliza feixe de eltrons que interagem com a amostra. Na MEV, o feixe de eltrons emitido

A a partir de uma placa de ouro submetida a uma elevada diferena de potencial. B termionicamente, a partir de um catodo (filamento) de tungstnio ou hexaboreto de lantnio, acelerado por meio de um anodo. C a frio, a partir de uma placa de titnio submetida ao processo de eletrlise qumica. D a partir de uma bobina eletromagntica, pela qual elevada corrente eltrica passa, removendo uma nuvem eletrnica, que atrada para a coluna do microscpio de varredura por elevada carga positiva. E a partir de uma ampola de gs nenio, que submetida a grande diferena de potencial eltrico.
QUESTO 34

Na MET, a imagem se forma quando A um feixe de eltrons atravessa a amostra, podendo ser desviado pela interao com os agentes contrastantes presentes nessa amostra. Nesse caso, a imagem formada por uma combinao de eltrons que alcanam e no alcanam o cran do microscpio. B a amostra atravessada por um feixe de eltrons, que colidem com os eltrons dos tomos dessa amostra, provocando a liberao de raios X. Nesse caso, a imagem formada com base na medio dos raios X emitidos pela amostra. C um feixe de prtons utilizado para atravessar a amostra e provoca a desestabilizao do ncleo dos tomos dessa amostra; ocorre, ento, a liberao de partculas pelo ncleo desses tomos, a energia das partculas captada e medida, e a imagem gerada com base nessas medies. D um laser de alta potncia transmitido atravs da amostra corantes especiais so utilizados para maximizar as cores obtidas da amostra e um fotodetector recebe a imagem formada, transimitindo-a para um programa que a exibe em um monitor de computador. E a amostra atravessada por um feixe de eltrons que trocam de lugar com os eltrons das camadas mais externas dos tomos, presentes na amostra biolgica. Essa troca de posio eletrnica libera energia na forma de calor, fazendo que uma imagem trmica seja formada, a partir da amostra, com o auxlio de um programa especfico.

O tungstnio, metal de escolha para a produo de filamentos para microscopia eletrnica, apresenta como vantagens, para esse tipo de aplicao, entre outras, o fato de

A ser encontrado dissolvido na gua do mar e ser fcil de purificar, sendo extremamente abundante para uso industrial. B ter baixo ponto de fuso e alta resistncia temperatura, sendo ideal para uso como fonte emissora de eltrons. C ser metal refratrio ao calor e ter alta presso de vapor, apresentando ndice de desprendimento de eltrons elevado. D possuir grande resistncia oxidao e elevado ndice de combinao com outros metais, sendo o metal de escolha para a produo de ligas metlicas. E ter alto ponto de fuso e baixa presso de vapor, permitindo que seja aquecido para a emisso de eltrons.
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QUESTO 35 QUESTO 38

Na MEV tpica, durante a interao do feixe de eltrons com a amostra, ocorre troca de energia entre o feixe de eltrons e a amostra. Essa interao acarreta A reflexo de eltrons de alta energia por interao elstica, emisso de eltrons secundrios por interao inelstica e emisso de radiao eletromagntica. B emisso de partculas carregadas oriundas da desintegrao nucelar dos tomos da amostra, emisso de raios UV e emisso de radiao trmica. C emisso de ftons devido mudana de orbital dos eltrons, emisso de partculas gama pelos ncleos atmicos e emisso de raios X. D emisso de luz no comprimento de onda do UV, emisso de micro-ondas e emisso de calor. E emisso de ftons de baixa energia, emisso de raios X e emisso de ftons nos comprimentos de onda de 560 nm a 650 nm.
QUESTO 36

A reconstruo tridimensional de imagens em MET passou a ser mais prtica com o surgimento de microscpios de mdia e alta voltagem. Nesse contexto, assinale a opo correta com relao ao procedimento utilizado na tomografia de eltrons. A So utilizados cortes extremamente delgados do material, a amostra fotografada com diferentes voltagens de acelerao dos eltrons, as imagens so adquiridas por uma cmera CCD e utilizadas para a reconstruo tridimensional pelo tomograma. B Dentro da coluna do microscpio, encontram-se associadas uma cmera CCD de alta velocidade de registro de imagens e uma lmpada estroboscpica, o material cortado em sees de cerca de 70 nm, e o feixe de eltrons desativado no momento da captura da imagem. A lmpada estroboscpica acionada e a cmera captura uma srie de imagens do material. Essas imagens sero utilizadas para a reconstruo tridimensional em um programa especfico. C So utilizados cortes espessos do material, de 1 :m a 2 :m. Para a tomografia, o espcime girado no eixo Y com incremento de 2 de 60 a + 60 . As imagens obtidas com esse procedimento correspondem s diversas retas que atravessam o volume do espcime e sero utilizadas na reconstruo pelo tomograma. D So utilizados cortes espessos do material, de cerca de 1 mm. O espcime colocado no porta-amostra e girado em ngulo de 90; obtida uma imagem a cada 90 do material, at que ele tenha girado 360. Essas imagens sero carregadas em um programa de reconstruo de imagem para gerar a imagem definitiva. E A amostra cortada em espessura de rotina (cerca de 70 nm) colocada no porta-amostra para que se obtenha uma imagem a cada 10 s, sendo que, a cada imagem, h uma variao da corrente do filamento da ordem de 1 A. Ao final, as imagens so carregadas em um programa de reconstruo tridimensional, que reconstri a imagem final.
QUESTO 39

As imagens formadas a partir da MEV apresentam diferenas significativas quando comparadas s imagens obtidas pela MET. Nas imagens obtidas por MEV, a principal caracterstica da imagem ser A topogrfica, tipicamente da superfcie da amostra, gerada em tons de cinza e em trs dimenses. B plana, em duas dimenses e colorida, tipicamente representando o interior da amostra. C colorida, representativa das estruturas analisadas e em duas dimenses. D composta por linhas de contorno, em duas dimenses e em preto e branco. E colorida, mostrando cores apenas em um comprimento de onda selecionado pelo operador, ou seja, uma imagem exclusivamente do interior do material observado.
QUESTO 37

O microscpio de varredura de dois feixes apresenta algumas vantagens sobre o microscpio de varredura convencional. Assinale a opo que descreve a configurao tpica para emisso e a natureza dos feixes. A uma coluna nica, com dois canhes de emisso de eltrons, um de baixa e outra de alta voltagem. B duas colunas, uma para emisso de eltrons em alto vcuo e outra para emisso de eltrons em condies ambientais. C uma coluna nica, com dois canhes de emisso de eltrons, sendo que os feixes de eltrons so emitidos intercaladamente, cada um incidindo na amostra em momentos diferentes. D uma coluna para o feixe primrio de ons e uma coluna para o feixe de eltrons. E duas colunas que emitem cada uma um feixe de ons, sendo que a acelerao dos ons na coluna primria feita por alta voltagem e na secundria ,por baixa voltagem.

As principais vantagens da tomografia de eltrons em relao reconstruo tridimensional a partir de cortes seriados incluem A sua propriedade de gerar imagens coloridas, mesmo utilizandose eltrons. B ser capaz de reconstruir uma imagem tridimensional a partir de uma nica imagem capturada e com gasto mnimo de tempo. C ser mais precisa, por utilizar imagens obtidas das emisses de raios X, e poder ser executada em menor tempo, sendo, portanto, ideal para reconstruir molculas como cido desoxirribonucleico e protenas. D ser mais precisa, de tal modo que se mostra ideal para reconstruo atmica das molculas contidas em amostra biolgica ou em outros tipos de materiais, especialmente os metlicos. E ser menos laboriosa, apresentar maior fidelidade e preciso, especialmente em relao a estruturas delgadas e de grande extenso, como tbulos T e retculo endoplasmtico.
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QUESTO 40 QUESTO 42

Com referncia aos requisitos bsicos para a fixao de material biolgico no processamento de amostras biolgicas para observao por microscopia eletrnica, assinale a opo correta. A A luminosidade da sala onde o processamento ser realizado deve ser mantida inalterada, porque as solues fixadoras so severamente afetadas pela exposio luz; por isso, tanto o estoque quanto o manuseio de tais solues devem ser feitos em cmaras escuras. B O pH das solues fixadoras deve ser mantido inalterado, porque materiais fixados em solues fixadoras no tamponadas sofrem profundas alteraes, visto que a acidificao da amostra precede a fixao e pode dissociar molculas, como, por exemplo, protenas em peptdios de menor peso molecular. C O tempo de remoo da amostra deve ser rigorosamente controlado, por ser um fator crtico em sua preservao, visto que, quanto mais tempo a amostra ficar fora das solues fixadoras, exposta diretamente ao ar, maior ser sua preservao. O ar ainda traz o benefcio de oxidar as molculas biolgicas, evitando, dessa forma, sua dissecao. D O ponto de ebulio das solues fixadoras deve ser cuidadosamente modificado pela adio de solutos no volteis, propriedade coligativa que determina o aumento da capacidade de fixao do agente fixador por promover o abaixamento do seu ponto de congelamento. E O tamanho da amostra em relao ao volume de soluo fixadora um dos requerimentos bsicos para a preservao das amostras, desta forma deve obter o maior fragmento possvel da amostra e fix-lo com o menor volume possvel de soluo fixadora, desta forma o agente fixador que no um composto aditivo penetrar na amostra fixando-a por completo.
QUESTO 41

Assinale a opo que contm algumas exigncias para um bom tampo para uso no preparo de amostras biolgicas para microscopia eletrnica. A 1,5 e 3,0, baixa solubilidade em gua, suscetibilidade oxidao e altas concentraes de aminas primrias que possam reagir com o glutaraldedo, melhorando a fixao. B 12 e 14, alta solubilidade em xilol, alta condutibilidade eltrica e efeito acentuado com ons presentes nas solues fixadoras. C 1 e 2, alta solubilidade em gua, alta condutibilidade trmica, baixo ponto de ebulio e baixo ponto de congelamento. D 0,5 e 2, mercrio bem solubilizado, alta condutibilidade eltrica, baixo ponto de ebulio e alto ponto de fuso. E 6,0 e 8,0, solubilidade mxima em gua e mnima em outros solventes, resistncia oxidao e ausncia de aminas primrias que possam reagir com o glutaraldedo, interferindo na fixao.
QUESTO 43

Durante o processamento de amostras biolgicas para MET, ocorre a etapa de desidratao, que A uma etapa de transio que visa remover a gua presente nas amostras biolgicas por meio de exposio dessas amostras a temperatura de 60 /C por 30 min. Nessa temperatura, a perda da gua ser gradual e o material ter sua morfologia preservada. B uma etapa de transio que visa remover os lipdios presentes nas amostras biolgicas por meio de sua substituio por solventes orgnicos, de forma que as resinas de incluso possam ocupar os espaos antes ocupados por tais molculas. C uma etapa de transio que visa substituir a gua presente nas amostras biolgicas por um fludo miscvel com as resinas de incluso, que so, na maioria das vezes, hidrofbicas. D uma etapa intermediria que visa remover as protenas encontradas no citoplasma, de forma a reduzir a fora osmtica e, dessa forma, remover a gua presente nas amostras biolgicas. E a etapa final do processamento da amostra biolgica, que visa remover os carboidratos presentes nas amostras biolgicas, de forma a minimizar as cargas negativas da superfcie das membranas plasmticas, o que permite a incluso do material nas resinas hidrofbicas.
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Considerando que o pH das solues-tampo est sujeito a variaes sob determinadas condies, assinale a opo correta. A Visto que o solvente da soluo-tampo influencia diretamente o pH da soluo, deve-se fazer sempre solues em HCR para manter o pH em torno de 7,2. B Solues-tampo sempre devem ser preparadas com solventes orgnicos, que impedem a variao do pH e ainda proporcionam os efeitos sinrgicos de tamponamento e desidratao simultnea no material biolgico. C A adio de ctions divalentes nos tampes deve ser feita de forma bastante abundante, notadamente com o uso de cloreto de clcio, uma vez que elevadas concentraes desses elementos estabilizam o pH das solues-tampo. D A temperatura influencia diretamente a constante de dissociao (pKa) de uma soluo-tampo, visto que um mesmo tampo pode variar at uma unidade de pH se estiver a 4 oC ou a 37 oC. E O uso de HCR provoca a elevao do pH das solues-tampo; por isso, tampes diferentes devem conter o mesmo volume de HCR para que o pH fique estvel.

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QUESTO 44 QUESTO 48

No processamento de amostras biolgicas para microscopia eletrnica, a escolha da acetona como agente desidratante tem a desvantagem de essa substncia A no ser voltil e no provocar a extrao de lipdios dos materiais. B no ser higroscpica e preservar totalmente o contedo lipdico das amostras. C apresentar alto ponto de ebulio (acima de 120 /C) e no ser higroscpica. D provocar menor retrao nos tecidos e apresentar melhor miscibilidade com a resina Epon. E ser higroscpica e apresentar baixa miscibilidade com a resina Epon.
QUESTO 45

Na MET, os reagentes utilizados na observao de partculas virais incluem A AC (cido clordrico), PP (proteinato de prata), VR (vermelho de rutnio), FC (ferritina cationizada). B AP (cido pcrico), AOP (cido ortofosfrico), NP (nitrato de prata), PL (poli-L-lisina). C DMSO (dimetil sulfxido), EDTA (cido etilenodiamino tetraactico), ASF (cido sulfrico filtrado), ACF (cido carbnico fluorizado). D PTA (cido fosfotngstico), SST (silicotungstato de sdio), AM (molibdato de amnia), UA (acetato de uranila) e UC (citrato de uranila). E AF (cido fluordrico), SSK (silicotungstato de potssio), AC (cido clordrico), PP (proteinato de prata).
QUESTO 49

O preparo de amostras biolgicas para a anlise pela MEV introduz alguns elementos novos quando comparado ao processamento para MET. Assinale a opo correspondente a procedimentos executados apenas no preparo de amostras para MEV convencional. A B C D E secagem pelo ponto crtico e metalizao fixao e incluso infiltrao e ultramicrotomia fixao e desidratao ps-fixao e desidratao

A tcnica de freeze-dry corresponde A ao congelamento lento de uma substncia, de forma que toda a gua seja transformada em gelo, ficando o material seco. Esse congelamento realizado em cmera prpria com presso atmosfrica normal, com durao de 12 horas. B secagem de uma substncia por congelamento rpido mediado pela adio de nitrognio lquido diretamente sobre

QUESTO 46

A tcnica que pode ser usada, na MET, para observar macromolculas isoladas e partculas virais a partir do preparo dessas amostras ntegras, visando a uma representao tridimensional, a A B C D E microscopia de campo escuro. contrastao negativa. contrastao opositiva. imunocitoqumica. citoqumica ultraestrutural.

o material; com a gua no estado slido, o material considerado seco. C ao descongelamento rpido de um material qualquer em cmera de alta temperatura e presso. Nessas condies, ocorre rpida evaporao da gua, mantendo-se todas as

QUESTO 47

Na MET, para se observar partculas virais e macromolculas, necessrio o tratamento prvio das grades que recebero o material, que consiste de A revestimento com ouro coloidal e poli-L-lisina. B revestimento com uma camada de ouro de 20 nm e, em seguida, pulverizadas com carbono. C revestimento com pelculas de formvar ou coldio e, em seguida, pulverizadas com carbono. D pulverizao com carbono e, em seguida, revestimento com poli-L-lisina. E revestimento com anticorpos monoclonais e, em seguida, metalizao.

caractersticas estruturais do material. D secagem rpida de um material por resfriamento, seguido de um aquecimento lento; nessa situao o resfriamento condensa a gua como gelo, e o aquecimento remove a gua por evaporao, deixando o material completamente desidratado mas preservando sua estrutura. E secagem de um material por congelamento rpido e remoo da proporo de qualquer solvente associado por direta sublimao no vcuo, a partir da fase slida para a fase gasosa, sem passar pela fase lquida intermediria.
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QUESTO 50 QUESTO 53

O processamento de material biolgico por congelamento rene diversas tcnicas amplamente utilizadas. O principal obstculo a ser evitado no congelamento de uma amostra biolgica A a formao de cristais de gelo; o ideal que a gua, ao se congelar, atinja um estado amorfo, sem cristais, o que denominado vitrificao. B que a gua seja congelada em etapas, para isso o resfriamento dever ser seguido de sucessivos aquecimentos com um congelamento final a 40 C por 8 horas. C que o congelamento seja rpido; o ideal um congelamento lento, que mantenha a amostra entre as temperaturas de 30 oC e 140 oC o maior tempo possvel. D a formao de cristais de gelo, fazendo-se um congelamento inicial brando, em torno de 4 oC, e; em seguida, submetendose a amostra temperatura de 30 homogeneizar o congelamento. E o congelamento por tempo muito longo; o ideal que a gua se congele por poucos segundos temperatura de 4 oC; em seguida, a temperatura deve ser lentamente elevada, para se promover a evaporao da gua, preservando-se toda a estrutura do material.
QUESTO 51
o

Os reagentes mais comumente utilizados para evitar danos s amostras biolgicas durante o processo do seu congelamento so

A cido actico, sulfato de cobre e permanganato de potssio. B glicerol, DMSO, dextran e sacarose. C sulfato de cobre, xido de enxofre, cido fosfrico e cloreto de potssio. D cloreto de sdio, EDTA, fluoreto de clcio e amido. E manitol, sulfato de alumnio, PVDA e cido carbnico.
QUESTO 54

A criofratura uma tcnica baseada no congelamento das amostras biolgicas, particularmente til para a anlise da estrutura das membranas celulares por MET. Com referncia s caractersticas fundamentais desse tipo de anlise, assinale a opo correta.

C, de forma a

A Quando as clulas so congeladas e fraturadas, a fratura ocorre sempre abaixo das membranas. Dessa forma, observa-se o citoplasma da clula com todos os detalhes das organelas ali imersas. B Ao se congelarem e se fraturarem as clulas, o seu material gentico exposto epor estar congelado, forma estruturas filamentosas de fcil identificao na MET. C Quando clulas so congeladas e fraturadas, a fratura ocorre na regio hidrofbica das membranas biolgicas, separando seus dois folhetos. Dessa forma, possvel identificar no apenas a presena como tambm a distribuio das protenas contidas na membrana em questo. D Clulas congeladas e fraturadas expem seu contedo interno; em seguida, a amostra deve ser descongelada, fixada e includa em resina. Dessa forma, as membranas podero ser observadas com maior detalhamento. E Clulas congeladas e fraturadas expem apenas seus

Como o congelamento de materiais biolgicos importante para a preservao da morfologia, um aspecto crtico, na obteno final de um bom congelamento de amostras biolgicas, A a quantidade de presso sobre o material biolgico. B a variao lenta de temperatura sobre o material biolgico. C a manuteno do estado de vcuo sobre o material biolgico antes do congelamento. D a rapidez no resfriamento do material biolgico. E o aquecimento lento do material biolgico congelado antes da anlise.
QUESTO 52

Os compostos qumicos que interferem com as propriedades fsicas da gua, formando pontes de hidrognio com ela e alterando o seu ponto de congelamento, pertencem classe dos A vitrificadores. B cristalizadores. C crioprotetores. D acidificadores. E criognios.

ribossomos com fitas de cido nucleico (RNA) associadas. Esse material granuloso associado ao RNA filamentoso particularmente til para o estudo do transporte de vesculas pela membrana plasmtica.
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QUESTO 55 QUESTO 58

O processo de sombreamento a deposio A de ouro em camada de 20 nm sobre as faces da fratura, seguida de deposio direta de carbono para aumentar a resistncia mecnica da amostra. B de platina em ngulo de 45o sobre as faces da fratura, seguida de deposio direta de carbono tambm sobre as faces da fratura para dar sustentao camada de metal. C direta de platina sobre as faces da fratura, seguida de deposio de carbono em ngulo de 45o para aumentar a condutibilidade eltrica. D de platina em ngulo de 45o sobre as faces da fratura, seguida de deposio direta de ouro tambm sobre as faces da fratura para aumentar a resistncia mecnica do material. E direta de trio sobre as faces da fratura, seguida de deposio direta de platina tambm sobre as faces da fratura para aumentar a resistncia eltrica do material.
QUESTO 56

A tcnica de congelamento por jet-freezing apresenta algumas desvantagens, dependendo do tipo de amostra utilizada. Assinale a opo que apresenta duas dessas desvantagens.

A No ideal para clulas livres, uma vez que o propano altamente txico, promovendo profundas alteraes

morfolgicas nas clulas. Sua temperatura mxima de resfriamento inferior do nitrognio lquido, por isso, menos eficiente para o congelamento do que o nitrognio lquido. B ideal apenas para tecidos, uma vez que a rea maior das amostras cria uma superfcie de contato maior, o que distribui de forma igual o resfriamento tanto na superfcie como em profundidade. O propano um gs altamente voltil e, para mant-lo no estado lquido, necessrio um ambiente de alto vcuo, o que torna o equipamento grande e caro, e o processo excessivamente demorado. C No prpria para tecidos, uma vez que as microgotas de propano devem espalhar-se uniformemente em torno do material biolgico, o que s conseguido perfeitamente com as clulas livres. O propano apresenta caractersticas inflamveis que tornam seu uso cauteloso, requerendo locais apropriados para esse fim. D ideal apenas para amostras j pr-fixadas quimicamente, uma vez que o jato utilizado para o congelamento focal e de baixa disperso, congelando lentamente as amostras. Aplica-se apenas para tecidos: como o congelamento focal, o tecido transfere a baixa temperatura para todas as suas regies, proporcionando congelamento homogneo principalmente por meio de sua profundidade. E A tcnica ideal apenas para tecido vegetal com espessura mnima de 50 :m: a parede celular presente nas clulas vegetais um timo dispersante de temperatura. Dessa forma,

Na tcnica de criorrelevo (etching profundo), para o sucesso do preparo, a amostra deve ser submetida, sucessivamente a: fixao A ultrarrpida por impacto em superfcie metlica resfriada; fratura em aparelho de criofratura; sublimao prolongada; revestimento com platina e carbono. B ultrarrpida por impacto em superfcie metlica resfriada; fratura em aparelho de criofratura; revestimento com carbono. C ultrarrpida por impacto em superfcie metlica resfriada; sublimao prolongada; revestimento com platina e ouro. D por imerso; sublimao prolongada; revestimento com platina. E ultrarrpida, com imerso em agente de resfriamento; fratura em aparelho de criofratura; sublimao; metalizao com ouro.
QUESTO 57

Um dos fenmenos observados com a gua durante seu congelamento, que reduzido pela tcnica de congelamento por alta presso, A o aumento da cristalizao. B o aumento do ponto de congelamento para 180 oC. C o aumento do ponto de congelamento para 220 oC. D dissociao das ligaes covalentes entre o hidrognio e o oxignio. E a reduo da expanso do volume.

o congelamento d-se de forma homognea em toda a profundidade do material. O propano altamente txico para as clulas vivas; por isso, o material dever ser fixado quimicamente antes de submetido a essa tcnica de congelamento.
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QUESTO 59 QUESTO 61

Na tcnica de congelamento conhecida como spray-freezing, A o criognio lquido fica no interior de um recipiente de cobre ou lato, e o material biolgico lanado em forma de spray sobre ele. Em seguida, faz-se a evaporao do agente criognico com o uso de uma bomba de vcuo rotatria, deixando, no recipiente, as pequenas gotas congeladas do espcime que devero ser processadas imediatamente. B o material biolgico fica no interior de um recipiente de cobre, e o agente criognico lanado em forma de spray sobre ele. Em seguida, faz-se a evaporao do agente criognico, elevando-se a temperatura da cmara. No recipiente, ficaro pequenas gotas congeladas do espcime que podero ser armazenadas temperatura de 20 /C por tempo indeterminado. C o material biolgico fica no interior de um recipiente de lato, e o agente criognico gotejado sobre ele. Em seguida, faz-se a evaporao do agente criognico, lanando-se um spray de ar temperatura ambiente sobre a amostra. As amostras devero ser recolhidas imediatamente e levadas para uma etapa de fixao qumica. D o material biolgico fica no interior de uma cmara onde ser criado vcuo, e o agente criognico ser lanado sobre ele em forma de spray. Em seguida, faz-se a reduo do vcuo e a evaporao do agente por meio do preenchimento da cmera com acetona a 20 /C. A temperatura na cmera dever ser elevada para a evaporao total da acetona e o material deve seguir imediatamente para outras etapas de processamento. E o material biolgico fica no interior de uma cmara onde haver aumento de presso, e, em seguida, o agente criognico lanado sobre ele em forma de spray. A presso reduzida, e a temperatura, elevada para 37 /C simultaneamente com a entrada na cmara do agente fixador glutaraldedo. Aps 30 min, o material dever ser removido e seguir imediatamente para outras etapas de processamento.
QUESTO 60

No processamento de amostras biolgicas, a crioultramicrotomia A proporciona corte ultrafinos, de cerca de 1 nm de espessura, o que facilita de forma excepcional a interao da amostra com o feixe de eltrons na microscopia eletrnica. B promove a remoo das camadas de membranas dos espcimes encontrados na amostra biolgica, expondo o contedo do citoplasma, tornando o material ideal para anlise por MEV. C ideal para o corte de suspenso de macromolculas e partculas virais congeladas, devido sua capacidade de corte proporcionar sees de 1 nm. D proporciona a preservao e a acessibilidade de sondas macromoleculares tais como anticorpos, lectinas e oligonucleotdeos s estruturas intracelulares das amostras. E proporciona a preservao das amostras, uma vez que a temperatura do material elevada rapidamente para a temperatura ambiente, facilitando dessa forma a obtenes das sees que preservam a acessibilidade de sondas macromoleculares tais como anticorpos, lectinas e lipdios s estruturas intracelulares das amostras.
QUESTO 62

A citoqumica ultraestrutural A se baseia no uso de lecitinas acopladas a ouro coloidal, o que permite a marcao e a localizao da maioria das molculas biolgicas presentes nas amostras. Essa tcnica restrita a anlise pelo microscpio eletrnico de transmisso. B explora as similaridades entre as propriedades qumicas das molculas biolgicas por meio do uso de marcadores eletrondensos. Essa abordagem capaz de detectar simultaneamente diversos grupos de molculas nas amostras analisadas; no entanto, essa tcnica restringe a anlise do material MEV. C explora as diferentes propriedades qumicas das molculas biolgicas, ou suas particulares atividades, por meio do uso de marcadores eletrondensos ou granulosos que podem se associar s prprias molculas ou aos seus produtos, de forma a revelar a sua localizao na amostra analisada. Essa tcnica visvel na microscopia eletrnica. D utiliza a afinidade entre as molculas de biotina e avidina para a identificao exclusiva de material gentico. Nessa tcnica, possvel marcar tanto molculas de DNA quanto molculas de RNA mensageiro; no entanto, no possvel identificar molculas de RNA transportador devido a seu dobramento especfico. E explora as semelhanas entre as molculas de lipdios, ou seja, sua hidrofobicidade, para, dessa forma, localiz-la na amostra. A tcnica produz um precipitado insolvel e eletrolucente, de forma a facilitar a observao e a localizao dos lipdios nas amostras biolgicas.
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A crioultramicrotomia dispensa que as amostras passem por determinadas etapas de processamento rotineiro para microscopia eletrnica. As principais etapas do processamento de rotina para microscopia eletrnica que so dispensadas ao se utilizar a crioultramicrotomia so A o congelamento, a fixao e a incluso. B a fixao, a ps-fixao e o congelamento. C a desidratao, o congelamento e a incluso. D o congelamento, a contrastao e a desidratao. E a ps-fixao, a desidratao e a incluso.

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QUESTO 63 QUESTO 65

Os princpios usados para a deteco de enzimas ou seus substratos pela citoqumica ultraestrutural incluem

Carboidratos desempenham importante papel nos sistemas biolgicos. Nesse sentido, as metodologias de deteco de carboidratos em amostras biolgicas contemplam o uso

A a precipitao de metal pesado no stio de atividade enzimtica e a conjugao da enzima a ouro coloidal para a localizao de diversos substratos celulares. B a conjungao de oligonucleotdios a ouro coloidal e a utilizao de perxido de hidrognio radioativo, de modo que o microscpio detecta a emisso da partcula e localiza a atividade enzimtica. C a incubao da amostra em soluo de ouro coloidal que revela exclusivamente a localizao das protenas e a conjugao de acetato de uranila a substratos especficos, de forma a promover a localizao da atividade enzimtica. D a conjugao de peroxidase a ouro coloidal, que revela os stios antignicos presentes nas amostras biolgicas, e a precipitao de prata sobre a amostra devido a sua alta afinidade por enzimas. E a precipitao de componentes insolveis nas membranas celulares e a utilizao de substratos radioativos que, ao serem degradados pelas enzimas, liberaram partculas que sero captadas e tero sua localizao definida pelo microscpio.
QUESTO 64

alternativo de

A fosfatase alcalina, tetrxido de smio ou glicerina. B tampo imidazol, proteinato de prata ou dinitrofenol. C soluo de inosina-5-difosfato, tampo maleato ou tampo acetato. D soluo de ferro coloidal, ferritina cationizada ou vermelho de rutnio. E soluo de $-glicerofosfato, e p-nitrocathecol sulfato ou trimetafosfato de sdio.
QUESTO 66

A imunocitoqumica o processo de deteco de uma molculaalvo

A por meio da utilizao de um lipdio especfico, que se encontrar marcado com compostos que forneam

eletrondensidade para MET ou para a formao de eltrons secundrios ou retroespalhados em MEV. B por meio da utilizao de uma lecitina que se encontrar marcada com compostos que forneam eletrondensidade para MET ou formao de eltrons secundrios ou retroespalhados

A filipina um antibitico polinico utilizado nas tcnicas de citoqumica devido a sua capacidade de ligao especfica com determinado grupo de molculas. Assinale a opo que apresenta

em MEV. C com eletrondensidade suficiente para ser identificada pela MET ou para a formao de eltrons secundrios ou

o grupo de molculas de ligao da filipina. retroespalhados em MEV. A monossacardios e polissacardios de cadeias ramificadas B colesterol e outros b-hidroxi-esteris C fosfolipdios saturados e hidroxilas livres D protenas e fragmentos de peptdios E DNA e RNA D por meio da utilizao de um feixe de ons detectado por MEV ou pela emisso de raios X para a MET. E por meio da utilizao de um anticorpo que se encontrar marcado com compostos que forneam eletrondensidade para MET ou para a formao de eltrons secundrios ou retroespalhados MEV.
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Cargo 45: Pesquisador-Tecnologista em Metrologia e Qualidade rea: Microscopia Eletrnica

UnB/CESPE INMETRO
QUESTO 67 QUESTO 69

As tcnicas de imunocitoqumica utilizadas na MET esto divididas em dois grandes grupos. Esses grupos so compostos pelas tcnicas

Embora no seja usual, possvel detectar antgenos em amostras processadas rotineiramente para MET e includas em resina hidrofbica. As solues mais utilizadas para se preparar a amostra

A de congelamento e de incluso. B de fixao qumica e de fixao fsica. C com resinas hidroflicas e com resinas hidrofbicas. D de pr-fixao e de ps-desidratao. E de pr-incluso e de ps-incluso.
QUESTO 68

para esse procedimento so

A perxido de enxofre entre 1% e 4%, soluo aquosa de cido clordrico a 1%, soluo saturada de bicarbonato de sdio e soluo saturada de NaOH em acetona. B perxido de hidrognio entre 1% e 4%, soluo aquosa de cido peridico a1%, soluo saturada de metaperiodado de

O fixador glutaraldedo o fixador de escolha para o preparo de amostras para microscopia eletrnica de rotina. Assinale a opo que indica a desvantagem em utilizar esse fixador para as reaes de imunocitoqumica.

sdio e soluo saturada de NaOH em etanol. C sulfeto de hidrognio a 10%, soluo aquosa de cido fosfrico a 1%, soluo saturada de oxalato de clcio e soluo saturada de cido carbnico em etanol. D perxido de enxofre a 4%, soluo aquosa de cido fluordrico a 25%, soluo saturada de carbonato de potssio e soluo saturada de cido actico em etanol. E perxido de hidrognio a 50%, soluo aquosa de cido ltico a 10%, soluo saturada de fluoreto de sdio e soluo saturada de cido frmico em etanol.
QUESTO 70

A Por se tratar de um fixador forte (di-aldedo,) a fixao com glutaraldedo cria ligaes cruzadas inter e intramoleculares. Embora essas ligaes sejam boas para a preservao estrutural, elas modificam a estrutura molecular de determinadas molculas, mascarando os seus stios antignicos. B Por se tratar de um fixador fraco, a fixao com glutaraldedo no preserva de forma adequada as amostras biolgicas, devendo ser usado em seu lugar o citrato de chumbo; caso contrrio, o glutaraldedo promover a degradao das molculas contidas na amostra, inviabilizando a sua deteco. C Por se tratar de um agente desidratante, o glutaraldedo no pode ser usado como fixador. As amostras devero ser fixadas em cacodilato de sdio, que mantm ntegras as propriedades antignicas das amostras biolgicas. D Por se tratar de um agente de captura, o glutaraldedo utilizado apenas nas reaes de revelao de atividade enzimtica, no podendo ser utilizado nas reaes de imunocitoqumica. E Por se tratar de um tampo, o glutaraldedo utilizado apenas para lavar a amostras, no sendo utilizado na fixao. No entanto, ele o tampo adequado para lavar as amostras nas tcnicas de imunocitoqumica.

No mtodo de contrastao utilizado para amostras submetidas s tcnicas de imunocitoqumica, faz-se a incubao das amostras

A por cerca de 12 horas em citrato de chumbo em atmosfera de CO2 e, em seguida, em acetato de uranila (15% em etanol) por 5 min. B por cerca de 1 hora em tampo citrato e, em seguida, em acetato de cobre (5% em gua) por 20 min. C por cerca de 20 min a 30 min em acetato de uranila (5% em gua) e 5 min em citrato de chumbo. D por cerca de 20 min a 30 min em cloreto de magnsio (5% em gua) e 5 min em nitrato de prata a 10% em gua. E por 2 horas em soluo aquosa de cido hipofosfrico a 10% e 5 min em carbonato de clcio.
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