Cintica qumica

1.- Velocidad de reaccin 2.- Teora de las colisiones. 3.- Factores que influyen en la velocidad de reaccin

1.Velocidad de reaccin
La velocidad de una reaccin qumica indica cmo vara la concentracin de reactivos o productos con el tiempo Ejemplo: Para la reaccin

aA + bB

cC + dD

La velocidad de la reaccin se puede expresar:

V= - 1 [A]= 1 [B]=1][C] =1 [D]1 d [D ] 1 d [A] 1 d [B 1 d [C ] v = atbtctdt = = = a dt b dt c dt d dt

Las letras minsculas representan los coeficientes estequiomtricos (es el nmero de moles de cada sustancia) mientras que las letras maysculas representan a los reactante y los productos.

2. Teora de las colisiones

Las reacciones qumicas se producen por los choques eficaces entre las molculas de reactivos
Veamos la reaccin de formacin del HI a partir de I2 e H2
H H I I I I I H H I H

Choque
No e

c ef i

az

HI + HI
H

fic

az

I I

H H I I H H

I2 + H2

I2

H2

Adems del choque adecuado las molculas tienen que tener una energa suficiente, esta energa mnima se denomina energa de activacin.

Complejo activado

Complejo activado

Energa de activacin
Energa potencial Energa potencial

Energa de activacin

Productos

Reactivos

H<0

H>0
Reactivos

Productos

Transcurso de la reaccin

Transcurso de la reaccin

Reaccin exotrmica

Reaccin endotrmica

Complejo activado

El complejo activado es una asociacin transitoria muy inestable, ya que su energa es superior a las molculas de reactivo y producto

Complejo activado

Energa de activacin
Energa potencial Energa potencial

Energa de activacin

Productos

Reactivos

H<0

H>0
Reactivos

Productos

Transcurso de la reaccin

Transcurso de la reaccin

Reaccin exotrmica

Reaccin endotrmica

3. Factores que influyen en la velocidad de reaccin

1.- Estado fsico de los reactivos
Las reacciones son ms rpidas si los reactivos son gaseosos o estn en disolucin. En las reacciones heterogneas la velocidad depender de la superficie de contacto entre ambas fases, siendo mayor cuanto mayor es el estado de divisin.

2.- Concentracin de los reactivos 3.- Temperatura

Un incremento de la temperatura provoca un incremento en la energa cintica de las molculas, lo que hace que sea mayor el nmero de molculas que alcanza la energa de activacin.

4.- Catalizadores

Concentracin de los reactivos

La velocidad de la reaccin se incrementa al aumentar la concentracin de los reactivos, ya que aumenta el nmero de choques entre ellos.

CATALIZADORES
Reaccin no catalizada Reaccin catalizada Complejo activado Complejo activado

Energa de activacin
Energa potencial
E.A

Energa potencial

Energa de activacin

Productos

Reactivos

H<0

H>0
Reactivos

Productos

Transcurso de la reaccin

Transcurso de la reaccin

Reaccin exotrmica

Reaccin endotrmica

Los catalizadores cambian la energa de activacin de una determinada reaccin, y por lo tanto incrementan la velocidad de reaccin

CATALIZADORES
Los catalizadores negativos aumentan la energa de activacin E.A sin catalizador E.A con catalizador negativo E.A con catalizador positivo Complejo activado Los catalizadores positivos disminuyen la energa de activacin

Complejo activado

Energa

Energa

Energa de activacin
E.A

Energa de activacin

E.A Productos Reactivos

H<0
Reactivos Productos

H>0

Transcurso de la reaccin

Transcurso de la reaccin

Reaccin exotrmica

Reaccin endotrmica

Influencia de la concentracin de E

Cintica de las reacciones enzimticas

Principios de la Catlisis Los catalizadores no alteran la Keq de una reaccin, aumentan la velocidad
ki : k velocidad hacia la izquerda kd : k velocidad hacia la derecha

Estados de transicin y energa de activacin ( E* ) La nter conversin de dos compuestos, X e Y durante una reaccin qumica implica un estado de transicin que tiene una energa libre ms alta que cualquiera de los dos tipos de molculas que participan, la diferencia de energa libre X y el estado de transicin ( T* ) es la energa de activacin hacia la derecha X T* Y Cuanto ms grande es E*, ms lenta es la velocidad de reaccin X Y Tx Si E* y Ex son iguales las kvel son iguales, as en el equilibrio la X es igual a la de Y en el equilibrio. Las enzimas reducen la E* (o la energa libre del estado de transicin)

Cintica de las reacciones y constantes de velocidad

Las reacciones qumicas se clasifican segn su comportamiento cintico y se distinguen por el orden cintico: Reacciones de orden 0; 1er orden; 2do orden; 3er orden As el orden de reaccin qumica se describe mediante una ecuacin sencilla que relaciona la velocidad de reaccin con la concentracin de los reactivos. El ejemplo ms simple est dado en la reaccin de 1er orden: As la velocidad que avanza la reaccin A X es directamente proporcional a la [A] por lo tanto a la velocidad que desaparece A en el tiempo, -[A ] / t = k [A] k cte. de vel tiempo -1 (representa cambio) La velocidad de desaparicin de A se reduce exponencialmente a medida que se consume el reactivo A
[R] 1,0
0,5

t1/2: tiempo necesario para que desaparezca la

mitad del reactivo, se llama vida media de la reaccin y es independiente de la [ ] inicial. t1/2 tiempo

- [A] / t

Si A X o en funcin de X en el tiempo

+ [X]/ t as v = - [A] / t = + [X]/ t = k[A]n Si n 0 v = k[A]0 = k si n 1 v = k[A]1 = k[A] seg-1 Si n 2 v = - [A] / t = k[A] [X] si la ecuacin es 2A X - [A] / t = k[A] [A]= k[A]2 M-1seg-1 oA+A oA+B - [A] / t - [A] / t X - [A] / t = k[A] [A]= k[A]2 M-1seg-1 X reaccin bimolecular = k[A] [B] = k[A] puede ser de primer orden

Otro ejemplo, considerar una reaccin qumica: 2A X + Z

La velocidad de reaccin puede considerarse en trminos de la rapidez de variacin con el tiempo de la concentracin de cualquiera de las sustancias envueltas: asi v = - [A] / t, o como el aumento de X o de Z en el tiempo [X] /t o [Z] /t. Estas expresiones estn relacionadas entre si estequiomtricamente por la reaccin. Como se produce una molcula de X y una de Z en la reaccin total, la rapidez de aumento de [X] y [Z] debe serla misma. Por otra parte como se consumen dos molculas de A por cada molcula de X o Z producidas, la rapidez de disminucin de [A] debe ser dos veces la rapidez de aumento de [X] o [Z] as: - [A] /t = 2 [X] /t = 2 [Z] /t (cualquiera que se elija es satisfactoria) En general, la v de cualquier reaccin es funcin de las concentraciones de todos los reaccionantes y productos, as aplicando a lo anterior - [A] / t = f([A] , [X] , []) que es la ecuacin de v de la reaccin O -[A] / t = k [A]@ [X] []
donde k es la cte. de vel de la reaccin cte. reacci

, y son los ordenes de reaccin de A, respectivamente

Concepto de velocidad inicial

[ ]

[ ] v = t , t -> 0

s t

Variables que influyen en la velocidad de una reaccin enzimtica

1. Concentracin de enzima 2. Concentracin de substrato 3. pH 4. Temperatura 5. Efectores (Activadores e Inhibidores)

Efecto de la concentracin de enzima: relacin lineal

. ..

.. .

. .

.. .

[E]

Efecto de la concentracin de enzima

S
ES E EP
Una cintica lineal implica un proceso regenerativo, cclico

Ciclo cataltico de una enzima

Una cintica hiperblica implica un proceso saturante:

Hay un nmero limitado de sitios en la enzima para fijar substrato; una vez que estn ocupados todos, por mucho que aumente la concentracin de substrato, la velocidad permanecer constante tendiendo a un valor asinttico

E+S

k+1 k-1

ES

kcat

E+P

Efecto de la concentracin de substrato

. .

. . . . .

[s]

Michaelis-Menten

Michaelis L and Menten M L 1913 Kinetik der Invertinwirkung; Biochem. Z. 49 333369

* Los primeros experimentos de cinetica enzimtica, realizados bajo condiciones

controladas de pH, lo realizaron Michaelis y Menten en 1913, (una vez que en 1909 Sorensen introdujera el concepto de pH).
Realizaron sus estudios utilizando el concepto de velocidades iniciales de reaccin y diferentes concentraciones de sustrato. Con lo que eliminaban factores: - reversibilidad, - inhibicin por producto y - desactivacin de la enzima.

La Ecuacin de Michaelis-Menten representa la velocidad para la catlisis enzimtica

La Ecuacin de la hiprbola rectangular ax Y= --------- (1) : b+x

a : es la asntota de la curva (el valor de Y a un valor infinito de X) b : es el punto en la abscisa que corresponde a un valor de Y al infinito/2 Se puede obtener la ecuacin de velocidad para la representacin E + S ES E + P (2) sustituyendo los trminos de
la cintica enzimtica en la ecuacin genereal para una hiprbola rectangular:

Y = vo

x = [S]

a = Vmax

b= es la Km quedando:

Vmax [S] v = -------------- (3) que es la ecuacin de Michaelis-Menten Km + [S]

Hiptesis de Michaelis-Menten

E+S

k+1 k-1

ES

kcat

E+P

- La primera parte del mecanismo,

E+S

k+1 k-1

ES

Tiene lugar mucho ms rpidamente que la segunda:

ES

kcat

E+P

E + S vo = kcat [ES]
(4)

k1 k-1

ES

kcat

E + P ; kcat = Vmx [E]total

(6)

; Vmx = kcat [E]total

(7)

(5)

[E] = [E]total - [ES]

Un valor constante para ES es el estado estacionario o estado uniforme, el cual requiere que la velocidad de formacin y degradacin del complejo ES sean iguales. As la velocidad de formacin es y la velocidad de degradacin es

k1 [E] [S] k-1 [ES] + kcat [ES]

k1 [E] [S ] = k-1 [ES] + kcat [ES]

As desde este estado uniforme y la E libre tenemos:

----

(k-1 + kcat) [ES] = k1 ([E]total - [ES]) [S]

-----------

(8)

(k-1 + kcat) [ES] = k1 ([E]total - [ES]) [S] Reacomodando: (k-1 + kcat) k1 Km ([E]total - [ES]) [S] [ES]

(8)

(9)

Se rehace para [ES] [ES] Km = ([E]total - [ES]) [S] Al desarrollarla [ES] Km = [E]total [S] - [ES] [S] Reuniendo los trminos [ES] ([ES](Km + [S] ) = [E]total [S]
Luego

(10)

(11)
([ES] Km + [ES] [S] = [E]total [S] )

(12)

[ES]=

[E]total [S] Km + [S]

(13)

[ES]=

[E]total [S] Km + [S]

(13)

Como la velocidad de la reaccin catalizada por la enzima depende de la velocidad de ruptura de ES a E + P (ecuacin (4):

vo = kcat [ES]

La ecuacin de velocidad, se puede obtener al sustituir el valor de [ES] de la ecuacin (13) en la (4): vo = kcat [ES] (4); kcat [E]total [S] Km + [S]

vo =

(14)

Tambin debido a que kcat [E]total = Vmx (5) la ecuacin (14) Se puede escribir en la forma de la ecuacin de Michaelis Menten Vmx [S] Km + [S]

vo =

(15)

Km es equivalente a la concentracin de sustrato en el cual Vo es la mitad de Vmax

APROXIMACIN DEL ESTADO ESTACIONARIO: ratamiento de BriggsHaldane * La formulacin o tratamiento de Michaelis y Menten se basa en suponer la existencia de un equilibrio rpido para la primera etapa y en suponer que la constante de velocidad para la segunda etapa es despreciable frente a la constante de la reaccin inversa del equilibrio. *Hay sistemas enzimticos estas condiciones no se cumplan kcat <<<k1 En 1925, Briggs y Haldane propusieron un nuevo modelo, ms general, que inclua los dos anteriores. A diferencia de Van Slyke y Cullen, Briggs y Haldane proponen la existencia de un estado estacionario en el que la concentracin de cualquiera de las formas en que se encuentre la enzima, prcticamente es constante.

La nica diferencia radica en el significado de Km: Km = k-1/k+1 en mecanismo de Michaelis y Menten (MM). Km = (k-1 + kcat)/k+1 en mecanismo de Estado Estacionario (E.E).

La ecuacin de Michaelis-Menten describe como la velocidad de la reaccin depende del equilibrio entre la [S] y la constante kcat (k2)

Significado de la constante Km
1. Constante de equilibrio de disociacin del complejo ES (en condiciones de equilibrio rpido) 2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el substrato (en condiciones de equilibrio rpido) 3. Mide la funcin de fijacin (en cond.de equilibrio rpido) 4. Concentracin de substrato para la que la velocidad se hace igual a la mitad de la reaccin mxima (s0.5) 5. Se define para una pareja enzima-substrato 6. Se mide en unidades de concentracin 7. Permite calcular el grado o porcentaje de saturacin del sustrato sobre la enzima

Significado de la constante Vmax

1. Velocidad asinttica para Sustrato 2. Directamente proporcional a la concentracin de enzima (hoy se prefiere caracterizar a la enzima por kcat) 3. Mide funcin de transformacin cataltica 4. Se expresa en unidades de velocidad

Representacin directa

v
100 80

Vmax

60

40

Vmx s v= Km + s

20

s
0 0 20 40 60 80 100

Km

Representacin recproca doble (Lineweaver - Burk)

0.04

1/v
0.03

y=mx+b

1/Vmax -1/Km
-0.4 -0.2

0.02

0.01

1 Km 1 1 = + v Vmx s Vmx
0.0 0.2 0.4 0.6

0.00

1/s
La representacin grfica de Lineweaver-Burk permite identificar el Km y Vmax; el punto de corte con el eje de ordenadas es el equivalente a la inversa de Vmax, y el de abscisas es el valor de -1/Km.

De manera similar a otras tcnicas que permiten linearizar la ecuacin de Michaelis-Menten, el digrama Eadie-Hofstee permite visualizar rpidamente los parmetros cinticos importantes como Km y Vmax a la vez que est menos afectada por el margen de error que el diagrama de Lineweaver-Burke, debido a que asigna el mismo peso a todos los puntos para cualquier rango de concentracin del sustrato o de la velocidad de reaccin.

Efecto del pH
v

pH

Efecto del pH

Efecto del pH
1. Sobre la fijacin del substrato al centro activo: - Grupos disociables de la enzima - Grupos disociables del substrato 2. Sobre la transformacin cataltica del substrato 3. Sobre la estructura de la protena enzimtica

NH COO CH2 CH2 COO+ +

Arg

C H3N

NH CH
Lys

H3N CH

Succinato y centro activo de SDH pH 7

NH
+

COOH CH2 CH2 COOH

+

H3N

NH CH

H3N CH

Succinato y centro activo de SDH, pH 2

NH C COOCH2 CH2 COOH 2N CH Succinato y centro activo de SDH, pH 13 H 2N NH CH

Efecto de la temperatura
v

Temperatura de mxima actividad

0 10 20 30 40 50 60 Temp. C

Efecto de cambios en temperatura:

k = Ae -Ea/RT
k= constante de velocidad A = factor de frecuencia factor pre-exponencial (refleja la frecuencia de las colisiones) R = constante del gas T = temperatura absoluta Ea = energa de activacin

En el efecto de la temperatura hay dos componentes: 1. Aceleracin de la reaccin segn la ecuacin de Arrhenius k = Ae- Ea/RT
A: factor de frecuencia o factor preexponencial k: constante de velocidad

Forma log10: log k = log A como:

Ea 2,303 R T Ea 2,303 R T

Pero Experimentalmente se miden Vmx as se puede representar

log Vmx = log A -

2. Desnaturalizacin trmica de la protena

Modificacin de la ecuacin de Arrhenius

log Vmx = log A Ea
x

1 T

2,303 R

Log V

1/T La ecuacin de Arrhenius es una expresin matemtica que se utiliza para comprobar la dependencia de la constante de velocidad (o cintica) de una reaccin con la temperatura a la que se lleva a cabo esa reaccin