--------------------------RESUMO DE BICHAO ---------------------------> Catalise biologica e diferente da quimica porque tem condicoes mais brandas d e T, P, pH, concentracoes...

Alem disso, ao contrario do catalisador quimico, ele aumenta durante o processo. -> Biorrefinaria: desenvolvimento sustentavel (minimiza residuos e reaproveita), inovacao tecnologica (limpa) ->Vantagem da bioquimica: podem-se criar novas cepas -> Biotransformacao: atuacao de somente uma enzima. Simplifica separacao, purifi cacao, e tem so uma etapa. -> Desenvolvimento de um processo: selecao da cepa (cepa estavel, viavel, inocua, com boa produtividade) otimizar meio de cultivo (maximixar celulas e produto) ensaios em biorreator em bancada (aumento de escala) - escolher batelada /alimentada/continuo -> Efeitor de inibicao nao-competitiva: muda Vmax competitiva: muda Km inibicao pelo substrato: V diminui qdo S aumenta muito -> Grau de redutibilidade(gama): n de eletrons transferidos num processo de oxida cao completa gama=[(n C)x4 - (n N)x3 - (n o)x2 + (n H)]/(n C) ---------------------------------------------------------------------------Calculo do numero economico de biorreatores e seu volume correspondente ----------------------------------------------------------------------------> t=te+tf+ts, normalmente te=ts, caso contratio o fornecimento deixa de ser con tinuo -> Vazao de descarga: phi= DV/ts -> Numero de biorreatores D=2+tf/ts e V=phi.tf/(D-2) -> Avaliacao economica P=k.V^a, P=preco e V=volume logP=logK+a.logV total=D.K.V^a (derivar para D para achar o mximo) -> Numero economico de bioreatores >>>>E= 2/(1-a) > Ve=F.tf.(1-a)/2a -------------------------------------------------------Classificacao de Processos Fermentativos --------------------------------------------------------> Batelada convencional: cada reator parte de uma cultura pura com recuperacao de inoculo (celulas so podem ser utilizadas ate 5 vezes, depois Yp/s cai) - ha uma filtracao que seleciona celulas robustas que possam s uportar outra fermentacao

por cortes: cada biorreator opera em condicoes diferentes, com um inocul o vindo do anterior -> Batelada Alimentada (com fornecimento de meio esteril nutritivo durante a fer mentacao) serve para prolongar a tempo de crescimento das celulas o processo termina quando o volume maximo de meio e atingido -> Continuo (continua adicao de meio esteril) principal problema e o envelhecimento das celulas ---------------------------Contagem de celulas ----------------------------> Metodos Diretos contagem (para nao filamentosos) peso seco (requer filtracao) absorbancia tipica curva de crescimento -> Metodos Indiretos [ATP] DNA/RNA (RNA e ruim para medir crescimento) [CO2] (cresce na fase exponencial e diminui na estacionaria) calor envolvido (calor gerado na fase exponencial) ------------Cinetica -------------> taxa especifica de crescimento: mi = 1/X.dX/dt = d(lnX)/dt (representa o comp ortamento do catalisador num dado t) como e constante para fase exponencial, ln(X/Xo)=mi.t As taxas podem ser parecidas em ambientes diferentes. Um mesmo perfil de crescimento pode ser observado em um ambiente com alta concentrao de nutrientes e baixa [X] e em um com baixa concentrao de nutrientes e alta [X], com muito produto no meio. -> fase estacionaria: dx/dt = 0 -> fase exponencial de crescimento: Int (x0 ~ xf) (dlnx) = Int (x0 ~ xf) (mi(x) dt) = ln (x/x0) = mix.t t = 0 -> incio da fase exponencial (fase industrialmente interessante)

-> Determinao de mi no cultivo contnuo Balano: Acmulo = Extra - Sai + Gerado V(dx1/dt)ac = Fx0 - Fx1 + V(dx1/dt)g (dx1/dt) ocorre devido a um estmulo externo (ex.: variacao na vazao volum etrica) Estado estacionrio: V(dx1/dt)ac = 0 F/V = 1/x1 (dx1/dt)g => F/V = mi = D (taxa de diluio - renovao de uma frao do volume total para um reator continuo no estado estacionario) Podemos alterar o comportamento cinetico/crescimento microbiano variando um parametro do projeto (volume util, vazao volumetrica) -> Equao de Monod F1 -> F1/V = D1 = mi1 -> S1, X1, P1 ctes

Fn -> FN/V = Dn = min -> SN, XN, PN ctes (alterao nas vazes, mantendo V e S o constantes) Para mi = mimaximo, temos ks = cte de saturacao cinetica -> alto ks = ba ixa afinidade pelo substrato = consumo mais lento (e vice-versa) Em um grafico mi=d x S, temos uma assintota para y = mimax Para achar ks: existe um ponto [ks,mimax/2] na curva (lembrem de bioquim exp!!) -> Linearizao: 1/mi (y) = 1/mimax (b) + [ks/mimax][1/s] (a.x) O grafico 1/mi x 1/S uma reta que corta o eixo x em -1/ks e o ei xo y em 1/mimax, com coeficiente angular = ks/mimax. mi = mimax (S/ks + S) (lembrando que S = substrato) -> Representao do fator de rendimento Yx/s = (dx/dt)/(- ds/dt) = (Xf - X0)/(Sf - S0) (-ds/dt) = taxa de consumo de substrato (por isso o valor negativo) O fator de rendimento no depende da afinidade pelo substrato; dois meios com diferentes cinticas podem possuir mesmo fator de rendimento. -> Inibicao pelo substrato Um grafico mi x S pode ser dividido em tres fases conforme a curva cresc e: a) regiao a (primeira regiao) -> variacao linear (para baixos valores de S) -> mi = mimax.S/ks b) regiao b (segunda regiao) -> mi = mimax . [S/(ks +S)] c) regiao c (terceira regiao) -> alta [S] -> celular esta submetida a um ambinte osmotico que ela nao pode suportar - curva decai ao inves de continuar crescendo. mi = mimax [Ki/Ki + S] Dupla limitacao pelo substrato: duas fontes diferentes de carbono Inibicao global -> alta concentracao celular inibe o crescimento -> Tecnica de "wash out" Rompe-se a condicao de equilibio (altera a vazao para um valor mais elev ado -> sistema nao consegue atingir o equilibrio novamente -> celula nao tem mais tempo habil para assimilar os nutrientes, crescer e se reproduzir -> sa o arrastadas para fora do biorreator) Balano: V(dx/dt)ac = FXo - Fx + V(dx/dt)g -> Fxo = 0 (alimentacao de meio esteril) -> V(dx/dt)ac = -Fx + V(dx/dt)g -> (dx/dt)ac < 0 (dx/dt)ac = -DwoX + mimax.x -> Dwo = F/V (Dwo a taxa de diluicao do wash out) d(lnx)/dt = -Dwo + umax -> Int [d(lnx)] = Int (t0 ~ t1) (-Dwo + mimax dt ) -> o t0 o momento onde aumentamos a vazo para iniciar o wash out Grafico lnx x t uma reta com coeficiente angular negativo = -Dwo + umax Com o umax obtido pelo grafico, achamos ks na condicao de equilibrio -> mi = mimax.[S/(Ks +s)] -> Determinao de mimax e ks: varios estados estacionarios + calculo pela eq. de Monod OU transiente (quebrando o equilibrio) ---------------------------------Crescimento de microorganismos ----------------------------------> Bacterias e leveduras x = x0e^(mi.t) (fase exponencial) -> tduplicacao (td) = ln2/mix (x0 -> 2 x0) -> Microorganismos elementares

Celulas crescem em submerso, com o aumento do raio na forma de pelletes. O 'x' aqui chamado de 'm'. M = (Mo^1/3 + Gama.t/e)^3, onde Gama = k(36.pi.ro)^1/3 Tempo de duplicacao => (M0 -> 2M0) -> Transicao da fase exponencial para linear durante o crescimento de levedura e m biorreator STR (mistura total) em n-alcanos (substrato) o meio uma emulsao de gua com n-alcano -> fonte de carbono hidrofobica pe rmite crescimento na interface maior velocidade de rotao, mais veloz o crescimento -> diminui-se as gotas de n-alcano dispersas em H2O e aumenta a interface (aumenta a area de crescimento celular) -> Transicao fase (N). fase -> limitao da fase exponencial para linear exponencial: alta concentrao de nutrientes. Concentracao celualar = f linear: se inicia quando o espao hbil para crescimento fica limitado nutricional

-> Influencia da temperatura sobre mi (taxa especifica de crescimento): mi=A1e^(-Ecresc/RT) - A2e^(-Emorte/RT) Aumentando a temperatura, favorecemos o crescimento microbiano. A partir de certa T a morte microbiana passa a prevalecer (mesmo porque ocorre desnaturao proteica) -> COnsumo de Substrato Energia de manuteno (m) pode ser calculada por -Yx/s = (dx/dt)/(dS/dt)tota l valores de m (glicose como fonte nutricional) para Saccharomyces cerevis ae: anaerobio - m= 0,036; anaerobio NaCl, m= 0,36 -> ESTRESSE Valor de m (glicose como fonte nutricional) para Penicillium: aerobico m= 0,022 -> oxignio pode agir como limitante Nem toda a fonte de carbono foi utilizada para o crescimento -> Stotal > X (formao celular) + P (acmulo de produtos) + m (manuteno) O ideal que a manuteno gaste o menor aporte de substrato possivel (dS/dt)total = (dS/dt)g + (dS/dt)m Correlacao linear: 1/(Yx/s) (y) = 1/Yg (b) + m.[1/mi] (a.x) Em um ambiente com alta pressao osmotica (stress), ha consumo de ATP par a preservacao da integridade fisica da celula ---------------------------------Cintica de Bioprocessos ----------------------------------> Produtividade => Tetap = P/t (tempo de processo). Pode ser massica (g/h) ou v olumetrica (g/L.h). Relacao entre os fatores de rendimento: Yp/s = Yp/x . Yx/s -> Classificacao cinetica de Deindoerfer para cultivos descontinuos - batelada: SIMPLES: produtos do metabolismo degradativo (quebrar moleculas maiores em menores) - ex: fermentao alcoolica - o grafico [] x t mostra uma curva crescente para P e ma decrescente para S0. SIMULTNEA: o grafico []xt mostra uma curva decrescente para S0, uma curva crescente para P1 que fica paralela ao eixo x perto de cruzar a curva S0 e o mesmo para uma curva P2 (variao de concentrao de produtos so diferentes\0 CONSECUTIVA: grafico []xt mostra curva decrescente para S0, curva metade crescente metade decrescente para I e curva crescente para P. A taxa de formacao de produtos diferentes mais lenta que a taxa de formao do intermedirio apr

oveitado pela clula. So -k1-> I -k2-> P (k1>k2). P aumenta, enzima interrompe a transformao do subtrato em intermediario e so continua a formacao do intermediario no produto. EM ETAPAS: S, I e P no coexistem no meio. H a transformao total de So em I e em seguida a transformao total de I em P. Imax => S0 = 0

-> Classificacao cinetica de Gaden para cultivos descontinuos - batelada -> vari acao das taxas especificas mi e qp no tempo a) O produto acumulado durante a fase exponencial do crescimento. b) O produto comea a ser acumulado no meio mais ou menos na metade da fas e exponencial e continua alm dela. c) O produto s acumulado na fase estacionria (no h acmulo na fase exponencia ) -> ex.: fermentao do cido ctrico -> Modelo cinetico de Luedeking-Piret para cultivos descontinuos - batelada -> t axa de formacao de produto (dP/dt) e as fases do crescimento microbiano 1) dp/dt = alfa.dx/dt (dependncia associada ao crescimento celular) 2) dp/dt = alfa dx/dt + beta.x 3) dp/dt = beta.x (dependncia associada fase estacionria) Constantes dependem da temperatura. -> Modelo combinado pode nos informar se o produto mais acumulado na fase expone ncial ou na estacionria. -> Curva da taxa especifica de crescimento:. O grafixo mixt mostra um trapezio. No topo do trapezio, existe a fase ex ponencial. mi cte -> mi = 1/x (dx/dt). -> Processos com estrategia continua com cinetica associada ao crescimento: no ne cessario usar biorreatores em serie (apenas 1) -> Cinetica associada ao crescimento ([]xt): S0 decai, P cresce conforme X cresc e. -> Cinetica semi-associada ao crescimento: S0 decai, P continua a acumular mesmo na fase estacionaria -> Cinetica no-associada ao crescimento: S0 decai lentamente, P comea a acumular n o fim da fase exponencial -> Influencia da temperatura A baixas temperaturas, necessario t maior; modelo deixa de ser associado para ser combinado. (ex.: a 30C ha equilibro na formacao de produtos nas fases exponencial e estacionaria; a 25C a maior parte do produto formada na f ase estacionaria) -> Cinetica de utilizao do substrato dS/dt = (-1/Yg)(dX/dt) - (1/Yp)(dP/dt) - mx O termo com dP/dt o de acmulo do produto. -> Vantagens dos bioprocessos contnuos - eliminao de tempos improdutivos (ex.: para limpar, para alimentar...) - maior produtividade (mantem culas formando produtos) - maior uniformidade do produto (processo possui caractersticas constante s) -> Balano material V(dS1/dt)ac nario. -> Balano material V(dP1/dt)ac d(p1/dt) = para o substrato = FS0 - FS1 + V(dS1/dt)c (c = consumo) = 0 no estado estacio para o prodto: = - FP1 + V(DP1/dt) Yp/x.mi.x1 (para crescimento associado)

-> Influencia da taxa de diluio (D) sobre os valores de equilbrio no estado estacio nario: Conforme D aumenta, a condio do estado estacionario do biotteator varia ocorre mudana na vazo. A produtividade varia muito com a vazo. -> Grfico da Taxa de Diluio (D): XD=produtividade volumtrica (gP/Lh) - curva que passa por um mximo Da equao de fator de rendimento Yx/s: X=(Yx/s) . (S-So) XD=(Yx/s) . D .(S-So) (sustitui-se S pela expresso de Monod) XD=(Yx/s).D .(So-DKs/(umx - D))

-> Expresso de Monod: F/V=D=u=umx.(S/(Ks+S)) Observaes no grfico: *variao de D - variao da vazo volumtrica - variao das condies de equilbr o estacionrio *Dc - ponto em que a curva de S fica constante( mximo) e em que X vai a ze ro - WASH-OUT -vazo grande ao ponto de varrer as clulas *valor mximo da curva de produtividade: - derivada 1a de XD em relao a D - Dm (taxa de diluio mxima) - derivada 2a de XD em relao a D - anlise de mximo ou mnimo. - Dm=umax. [1-(Ks/(Ks+So))^1/2] (o sinal negativo mostra que a equao possu i significado fsico. o sinal positivo indicaria D<umx, que indica que o resultado no possuiria significado fsico. - Dc=umx. So/(Ks+So) - curva de Tg(tempo de gerao) -> Tg=ln2/u -> VALORES DE EQUILBRIO F menor - curvas microbiana nem fonte de Fmaior - mudana NO ESTADO ESTACIONRIO PARA DIFERENTES So: de S coincidentes para diferentes So (no se altera espcie carboidrato) da condio W-0(?)para os diferentes So: Dc=umax. So/(Ks+So)

-> PROCESSO CONTNUO COM UM BIORREATOR COM RECICLO DE CLULAS: V(dX1/dt)ac = alfa.F.Cf.X1 - (1-alfa).F.X1 + V(dX1/dt)g = 0(no estado es tacionrio!) -> PROCESSO CONTNUO COM BIORREATORES EM SRIE: Volume til no varia e s alimentao de meio estril no primeiro reator. A igualdade mi = D s vale para o primeiro reator. -> Balano material para as clulas a partir do 2 biorreator (n>1): V(dx1/dt)ac - Fx(n-1) - Fxn + V(dXn/dt)g = 0 no estado estacionrio DX(n-1) - DXn + min.Xn = 0 (min = taxa especfica para o crescimento no ens imo reator) n aumenta, mi diminui. -> Previso da concentrao celular para uma srie de biorreatores operando continuament e no estado estacionario a partir da cinetica em batelada: a) Laboratrio -> cultivo batelada simples + cintica de crescimento Problema: transpor uma dada condio de sistema descontino para um sistema o perando continuamente Primeiro biorreator: (dx1/dt)g = (F/V).(x1) (a.x) N biorreator: (dxn/dt)g = (F/V).[Xn - X(n-1)] (a.x)