Hibridacin fluorescente in situ

Hibridacin fluorescente in situ

FISH o hibridacin fluorescente in situ es una tcnica de marcado de cromosomas en la que se provoca que los cromosomas especficos brillen bajo el microscopio. Esta tcnica permite la rpida determinacin de aneuploida, la ausencia del cromosoma completo o la presencia de un cromosoma adicional, as como la adjudicacin de un marcador gentico a un cromosoma (cartografa gentica). Los cromosomas que son usualmente utilizados con FISH son los 13, FISH metafsico en humanos. En amarillo, el 18, 21, X e Y; sin embargo, como son posibles marcados adicionales cromosoma 2. del cromosoma, otros cromosomas pueden ser visualizados con esta tcnica. FISH usa segmentos de una nica hebra de ADN que son tintados, o etiquetados, con una sustancia fluorescente que puede ligarse a un cromosoma especfico; estos segmentos de ADN son llamados sondas. El primer paso de la tcnica consiste en la desnaturalizacin del DNA para separar la doble hlice. A la muestra desnaturalizada se le aade entonces la sonda de inters (fragmento de ADN marcado fluorescentemente). Primero, las sondas hibridan a regiones especficas. Despus, se tien los ncleos con un color de contraste inespecfico (generalmente DAPI). Las sondas de DNA pueden marcarse con molculas fluorescentes (mtodo directo) o no fluorescentes que se detectan con anticuerpos fluorescentes (mtodo indirecto). La tcnica FISH puede realizarse a los cromosomas en metafase o en interfase. En metafase se utiliza para detectar microdeleciones especficas, translocaciones o para identificar material extra de origen desconocido. Los tipos de sondas usadas son csmidos,satlites alfas y sondas completas (painting probes). Los csmidos son secuencias nicas que hibridan con fragmentos pequeos. Se emplean en estudios de microdeleciones. Las sondas satlites estn formadas por secuencias altamente repetidas que se encuentran cerca de lo centrmeros. En la mayora de los casos son especficas de cada cromosoma. Se usan para determinar aneuploidias o para identificar el origen de cromosomas marcadores. No siempre es posible tener ncleos fijados en metafase para realizar el FISH. Normalmente, cuando se fija una clula sin tratar el ncleo se encuentra en interfase, con los cromosomas descondensados. A pesar de ello, es posible realizar el FISH aunque los resultados obtenidos no sean tan especficos. Se emplea sobre todo para la deteccin de aneuploidias o grandes deleciones, duplicaciones o translocaciones en clulas fetales o tumorales.

FISH interfsico en ratn.

Adems del FISH mltiple, est el FISH en hebra y el FISH inverso. El FISH en hebra es un FISH en el que se extiende linealmente en un porta el fragmento de cromosoma que nos interesa estudiar; permite distinguir pequeas reorganizaciones sin tener que clonar y secuenciar, esta tcnica se usa bastante para detectar deleciones en clones o para estimar huecos en los proyectos de genoma.Por su parte, el FISH inverso es una tcnica que consiste en recortar un fragmento de cromosoma teido con Giemsa o con una sonda, esto sirve para marcar ese ADN y convertirlo en una nueva sonda; se utiliza para detectar el origen de un ADN marcador o fabricar sondas inespecficas que hibriden con determinada regin. Esta tcnica ha resultado ser muy til en el campo de la Medicina Reproductiva, con aplicacin en el diagnstico gentico preimplantatorio (DGP). Resulta una forma muy precoz de diagnstico que, apoyndose en las tcnicas

Hibridacin fluorescente in situ de reproduccin asistida, posibilita el estudio de embriones antes de ser transferidos al tero materno y, por consiguiente, antes de que se lleve a cabo la implantacin embrionaria. Para el anlisis de anomalas cromosmicas embrionarias, tanto numricas como estructurales, puede utilizarse la tcnica DGP-FISH. Para este fin se requiere una biopsia embrionaria, mediante la cual se extrae una clula del embrin en cultivo "in vitro". Seguidamente, se procesa la muestra de tal manera que quede fijado el ncleo en interfase y se hibrida con sondas especficas para el estudio cromosmico de la patologa que se sospecha pueda estar presente en el embrin. Entre las anomalas cromosmicas que pueden ser analizadas, caben citarse: Anomalas numricas. Alteraciones en cromosomas sexuales: Alta frecuencia de mosaicismo en pacientes implica que, en muchos casos, slo se den defectos leves en el desarrollo. Gran relevancia en Medicina Reproductiva por ir asociado, en mayor o menor grado, a problemas de fertilidad. Tales son los casos de sndrome de Klinefelter, trisoma X y monosoma X. Edad materna avanzada, aborto de repeticin de causa desconocida y/o fallo de implantacin: Ms de la mitad de los casos son debidos a alteraciones en los cromosomas 13, 16, 18, 21, 22, X e Y. En estos casos, la seleccin de aquellos embriones normales para los cromosomas citados, aumenta las probabilidades de conseguir una gestacin a trmino. Factor masculino grave: Con este estudio embrionario, se pueden evitar las alteraciones cromosmicas surgidas en la descendencia de aquellos grupos de pacientes con calidad seminal baja y que tienen que recurrir a la tcnica de microinyeccin intracitoplasmtica del espermatozoide (ICSI). Anomalas estructurales.Surgen espontneamente, en la mayora de los casos, como consecuencia de un fallo de meiosis durante la oognesis o espermatognesis, en los casos en que los padres presentan cariotipos normales. Algunas veces, algn miembro de la pareja puede ser portador de una anomala estructural equilibrada, que podra transmitir a su descendencia. De esta manera, por medio del estudio gentico especfico de embriones de la pareja portadora, podran distinguirse aquellos embriones desequilibrados cromosmicamente de los equilibrados. Un vez hecha esta seleccin de embriones, podran transferirse con total tranquilidad al tero materno los embriones que no presentan la alteracin gnica.

Mltiple FISH
El FISH Multicolor, M-FISH o SKY (Spectral Karyotiping) es una adaptacin del FISH que permite la visualizacin de los 23 pares de cromosomas a la vez, teidos con diferentes sondas fluorescentes. Para colorear los cromosomas, dado que slo hay 5 colores distintos posibles, se puede usar la sonda de un color concreto, o combinar dos tipos de sondas para crear un nuevo color. Un programa informtico se encarga de analizar las imgenes y formar el cariotipo: organiza los cromosomas de acuerdo a la emisin de las sondas que tiene integradas y las combina hasta dar las 23 combinaciones. Se utiliza con frecuencia en el estudio de clulas tumorales. El poder de dicho mtodo reside en su habilidad para: determinar rpidamente si hay algn cromosoma extra en el cariotipo y de qu cromosoma se trata, determinar si est presente algn cromosoma translocado y qu cromosomas estn implicados en la translocacin, permite la rpida identificacin de material cromosmico de un cromosoma que haya sido insertado en otro cromosoma, y ayuda en gran manera a la identificacin de cromosomas pequeos o fragmentados que frecuentemente implican el problema de averiguar de qu cromosoma son originarios.

Fuentes y contribuyentes del artculo

Fuentes y contribuyentes del artculo

Hibridacin fluorescente in situ Fuente: http://es.wikipedia.org/w/index.php?oldid=50219344 Contribuyentes: Belb, DMG0708 idelsai, GermanX, Hortelano, Midi.900, Natrix, Nubecosmica, Retama, Roto2esdios, UPO649 1011 abiglrom, UPO649 1011 clmilneb, UPO649 1011 mdlimgar, UPO649 1011 mperalc, UPO649 1011 omjimmar, 8 ediciones annimas

Fuentes de imagen, Licencias y contribuyentes

Image:Chr2 orang human.jpg Fuente: http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Archivo:Chr2_orang_human.jpg Licencia: Creative Commons Attribution-Sharealike 2.5 Contribuyentes: Verena Schubel, Stefan Mller, Department Biologie der Ludwig-Maximilians-Universitt Mnchen. Image:MouseChromosomeTerritoriesBMC Cell Biol6-44Fig2.jpg Fuente: http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Archivo:MouseChromosomeTerritoriesBMC_Cell_Biol6-44Fig2.jpg Licencia: Creative Commons Attribution 2.0 Contribuyentes: Robert Mayer, Alessandro Brero, Johann von Hase, Timm Schroeder, Thomas Cremer, Steffen Dietzel

Licencia
Creative Commons Attribution-Share Alike 3.0 Unported //creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/