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Universidad Jurez del Estado de Durango

Facultad de Medicina Gmez Palacio, Dgo. Laboratorio de Microbiologa y Parasitologa

III Semestre

M a n u a l d e P r c t ic a s d e Microbiologa y Parasitologa

Docente

L.Q.A.C. Rosantina Torres Vargas

Alumno: Secc:

Prologo
El objetivo primordial de este manual, es introducir al estudiante de Medicina, en el rea de laboratorio, que ser gran auxiliar de diagnstico en su vida profesional, de aqu la importancia de una estrecha comunicacin entre el Mdico y el Qumico que permitir conjuntar ms eficientemente la informacin de un paciente, para poder llegar al diagnstico de las enfermedades. El Laboratorio clnico como Ciencia interdisciplinaria, pertenece tanto a la esfera Mdico Biolgica, como a la de Investigacin Analtica Experimental, y tiene como misin de servicio, suministrar datos o resultados al mdico til en la atencin del paciente. El Mdico en el trabajo diario siempre se encontrar ante estos conceptos: El Examen adecuado, e el momento preciso, del paciente indicado, y al final de todo esto, la interpretacin de los resultados. A travs de este curso, el estudiante tendr la oportunidad de estar en contacto con las principales pruebas que necesitar como pan de cada da para diagnosticar a sus pacientes.- Pretende abarcar los mtodos de diagnstico de laboratorio de las enfermedades transmisibles ms frecuentes, desde los ms sencillos de practicar en laboratorios pequeos, mencionando los que requieren infraestructura de laboratorio ms elevada. Para lograr las perspectivas de este curso, se requiere que la actitud del alumno sea de inters, comprensin y dinamismo, que nos permita lograr la meta, ya que se trabajar con microorganismos vivientes y con muestras infecto-contagiosas, que exigen de una disciplina de orden y atencin. Contrario a lo que se piensa del rea de laboratorio, que se observa de lejos como un trabajo tedioso, aburrido, cansado, rutinario y difcil de entender, y que ha sido la causa de que se pierda esa importante comunicacin clnico-experimental, el estudiante observar que es una experiencia fascinante introducirse en un microcosmos que dar como resultado que nuestras mentes imaginativas, curiosas y productivas den rienda suelta a la investigacin cientfica.

El investigador, es aquella persona que ve todas aquellas pequeas cosas, que el resto de la gente no es capaz de ver.

L.Q.A.C. Rosantina Torres Vargas

Objetivos
Al finalizar el curso, el alumno estar capacitado para: 1. Reconocer los estudios que se requieren como apoyo de diagnstico de las enfermedades infecciosas ms frecuentes. 2. Reconocer las caractersticas de los agentes causales en las enfermedades infecciosas entre ellos: caractersticas de desarrollo, morfologa, ciclo de vida, factores ambientales que influyen en su epidemiologa, mecanismos de transmisin, adecuada toma de muestra, y respuesta inmunolgica. 3. Reconocer las pruebas ms adecuadas para cada diagnstico como la seleccin de la mejor prueba, y el momento preciso de la solicitud de las pruebas, as como el mejor mtodo y los ms actualizados. 4. Realizar una adecuada interpretacin de los resultados, correlacionando la clnica con los datos, y reconociendo la interferencia de medicamentos en los mismos. 5. Mantener una comunicacin ms adecuada con el rea de laboratorio, que le permitir obtener un apoyo ms certero para el diagnstico de las enfermedades.

Reglamento de Laboratorio
1. El alumno deber estar a la hora indicada de la prctica en el laboratorio. 2. El maestro pasar lista de presentes 5 (cinco) minutos despus de la hora indicada y no se permitir la entrada al laboratorio una vez terminada la computacin de la asistencia. 3. No se permitir la entrada al saln de prcticas si el alumno no tiene la bata puesta. 4. Es obligacin de los alumnos leer la prctica que se va a realizar antes de entrar al laboratorio, esto le permitir captar ms fcilmente el proceso de la misma. 5. No se repetirn las prcticas por causas ajenas al departamento, ejemplo por faltas. 6. El alumno deber dejar limpio su rea de trabajo despus de la prctica. 7. El material de trabajo sucio se depositar en el lugar de lavado segn las indicaciones que le proporcione la maestra o el laboratorista. 8. El reporte de las prcticas desarrolladas se entregara los Martes de la siguiente semana para su revisin, y se presentarn con formato de portada, nombre de la prctica, nombre del alumno y seccin a la que pertenece, el reporte de la prctica, resultados, dibujos y conclusiones. 9. Los reportes se recogern una semana despus ya calificados, y debern conservarlos para su evaluacin final. 10. Al finalizar el semestre el alumno entregar su manual engargolado con todos los reportes de sus prcticas para su evaluacin final. 11. La calificacin final se emitir en base a: a) Reporte de la prctica: debe incluir, dibujo del desarrollo de la tcnica, resultados y las conclusiones de la prctica. Las conclusiones deben de ser realizadas basndose en la interpretacin de los resultados.(70%) b) Comportamiento, asistencias, puntualidad y disciplina: 30%

Bioseguridad en el Laboratorio
1. No tener contacto directo con las muestras 2. Al sembrar en medios de cultivo las muestras, deben de mantener las cajas petri cerca del mechero, y las tapas no deben de dejarse sueltas en la mesa de trabajo. 3. Se debe etiquetar el material utilizado durante la prctica: tubos, laminillas, cajas, placas, etc. 4. Informar al maestro o laboratorista si algn cultivo o muestra se ha derramado, para su limpieza inmediata ya que es causa de alto riesgo. 5. Recuerde no ingerir alimentos, ni fumar, ni introducirse los dedos u objetos a la boca, as como no limpiarse los ojos con las manos o guantes mientras estn en prctica. 6. Al encender el mechero hgalo con precaucin separado del mismo, encendiendo primero el cerillo acercndolo al mechero y poco a poco abrir la llave del gas, regular la llama hasta que la flama sea azul. 7. Desarrolle su prctica en orden, con disciplina, no dejando pipetas ya utilizadas sobre la mesa, depostelas en el recipiente que le indique el laboratorista. 8. Siempre tenga a la mano un par de guantes de ltex, y siempre tenga una pastilla de jabn de manos para su aseo. 9. Mantenga libros, bolsas, utensilios fuera de las mesas de laboratorio. 10. Esta prohibido rotundamente sentarse en las mesas de laboratorio, por precaucin si es que se ha derramado alguna muestra o lquido y no contaminar nuestra ropa. 11. Procure dejar las sillas en su lugar, sillas atravesadas han sido causa de accidentes y derramamiento de muestras infecto contagiosas en muchos laboratorios, dejarla en su lugar. 12. Antes de retirarse de laboratorio, tengan la precaucin de lavarse las manos, conservar su bata en una bolsa de plstico y someterla a lavado despus de cada prctica. 13. Recuerda trabajaras con muestras potencialmente activas.

Programa de Prcticas
Prctica I INTRODUCCION GENERAL 1. Toma de muestras 2. Manejo de Microscopio Fecha

Plenaria

II MICROBIOLOGIA 1. Introduccin : cultivos, medios de cultivo, Tcnicas de siembras y pruebas bioqumicas. 2. Tinciones: Tincin de Gram Tincin de Ziehl Neelsen 3. Cultivo de Exudado Faringo-amigdalino 4. Urocultivo 5. Coprocultivo 6. Cultivo de Exudado Vaginal y Uretral. III. INMUNOLOGIA 1. Antiestreptolisinas. 2. Factor Reumatoide. 3. Protena C Reactiva. 4. Reacciones Luticas: V.D.R.L. 5. Reacciones Febriles 6. Virus de Inmunodeficiencia Humana :Anticuerpos Anti-HIV 7. Antgeno de Superficie de Hepatitis B IV. PARASITOLOGA 1. Revisin de parsitos: preparaciones. 2. Coproparasitoscpico seriado: tcnica de Faust concentrado. 3. Amiba en fresco y Sangre Oculta en Heces 4. Tcnica de Graham. V. MICOLOGIA 1. Introduccin: Toma de muestras, estudio directo. 2. Observacin de cultivo de Hongos. 3. Microcultivo VI. EVALUACION FINAL

Plenaria

Plenaria

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PLENARIA TOMA DE MUESTRAS

El objetivo de la pltica es que el alumno conozca que siempre hay un examen adecuado para cada padecimiento, y que siempre existir un momento oportuno para solicitarlo y practicarlo, esto permitir que el paciente reciba las mejores indicaciones para presentarse al laboratorio, y como consecuencia una calidad en la elaboracin de sus estudios y una mejor interpretacin por parte de su mdico REPORTE: El alumno realizar un resumen de la pltica, resaltando los puntos de ms inters. (2 cuartillas)

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PRACTICA # 1 INTRODUCCION AL MANEJO DEL MICROSCOPIO

OBJETIVO DE LA PRACTICA: El objetivo de la prctica radica en recordar el manejo del microscopio, reconocer las partes que lo componen, seleccionar el objetivo adecuado para cada preparacin, y valorar la capacidad de observacin en detalle que tiene el alumno. MATERIAL: Solucin concentrada de NaCl (cloruro de sodio) Papel peridico Hilos de diversos colores Cabello Frotis teido al Gram Cubreobjetos Portaobjetos Aceite de inmersin Microscopio TECNICA 1. Colocar una gota de solucin concentrada de NaCl en un portaobjeto y dejarlo secar, observar al microscopio una vez que este seca. 2. Hacer la observacin de cada uno de los materiales enlistados, dibujando cada una de las preparaciones, indicando los objetivos que utilizaron. 3. Dibujar el microscopio enunciando las partes que lo componen. DIBUJOS: CONCLUSIONES:

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Seccin II

Bacteriologa

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PLENARIA INTRODUCCION AL DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO OBJETIVO: En esta plenaria el alumno conocer las tcnicas ms relevantes en el cultivo de las bacterias, medios de cultivo y tcnicas de sembrado, asi como las tinciones ms tiles como auxiliares de diagnstico, que posteriormente pondr en prctica. DIAGNSTICO MICROBIOLOGICO En esta seccin del curso, estaremos en contacto con muestras infecto-contagiosas que contienen microorganismos vivientes, los cuales podemos identificar por medio de distintas metodologas, que nos darn la oportunidad de poner de manifiesto el agente causal de las infecciones. Los mtodos usados pueden ir, desde un simple y sencillo frotis de la muestra teido al Gram, pasando por los insustituibles cultivos que son los ms comunes, hasta lo ms actualizado como puede ser mtodos de Inmunofluorescencia, PCR o reaccin en cadena de la polimerasa, Biologa molecular y experimentos en animales de laboratorio. Obtener una muestra de sangre o insertar un hisopo en una cavidad con secrecin purulenta, es mucho ms que eso, es el primer eslabn de una serie de eventos que se completa cuando el mdico recibe los resultados de su paciente.- Debido a que la obtencin de una muestra es el primer eslabn de esta cadena, el hecho representa un momento muy importante. En las muestras de sangre siempre habr un procedimiento Qumico ya establecido por aplicar, pero si hablamos de un Diagnstico Microbiolgico se dificultan mas las cosas, ya que no hay un mtodo disponible que permita aislar todos los microorganismos que existen, de ah que sea de vital importancia toda la informacin clnica que el mdico pueda proporcionar para que el Qumico seleccione el mtodo mas especfico en cada caso.. El xito en el resultado radica en la toma de un buen espcimen , que haya sido tomado del sitio exacto de la lesin bajo condiciones adecuadas. Entre las recomendaciones que se pueden mencionar para una buena toma de muestra en bacteriologa estn: 1. De preferencia obtener la muestra antes de la administracin de antibiticos, de lo contrario informar al laboratorio del tipo de medicamento aplicado, de esta manera el laboratorio toma las medidas pertinentes. 2. Tomar la muestra del lugar exacto que se sospeche que este presente el germen 3. Tomar la muestra en el momento preciso segn la etapa de la enfermedad y en cantidad suficiente, por ejemplo: Para aislar Salmonella typhi de la sangre debe ser en la primera semana del padecimiento, de la segunda semana en delante de heces fecales. 4. Evitar la contaminacin de la muestra con otros fluidos. 5. Transportar la muestra rpidamente al laboratorio antes que se deteriore la calidad del microorganismo. 6. De no ser as conservarlo a una temperatura adecuada y en medios de transporte hasta el momento de su proceso. 7. Identificar adecuadamente la muestra.

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La primera parte de esta seccin la dedicaremos a las TINCIONES, en la cual el alumno tendr la oportunidad de hacer frotis con extensiones de microorganismos de muestras de pacientes, posteriormente teirlos y observar su morfologa: cocos, diplococos en pares, en cadena, en racimo, bacilos, cortos o largos, y clasificar sus caractersticas tintoriales. La segunda parte de la seccin la dedicaremos a los CULTIVOS, aislaremos los microorganismos mas frecuentes de inters mdico. MEDIOS DE CULTIVO La gran mayora de las bacterias, proporcionndoles los nutrientes necesarios y especficos como son: pH adecuado, sales, agua, protenas, oxgeno, dixido de carbono, agares y temperatura pueden ser recuperadas en el laboratorio. Estos medios en donde crecen los microorganismos son llamados MEDIOS DE CULTIVO, y existen de distintas composiciones segn la familia de bacterias que se trate de aislar, de nuevo aqu la importancia de la informacin del mdico.- Los medios pueden ser SOLIDOS O LIQUIDOS, en caja Petri o en tubo segn el caso y se clasifican en la forma siguiente:

MEDIOS DE TRANSPORTE Son medios slidos que permiten mantener sin alteraciones a las bacterias, para su traslado fuera del laboratorio o bien para posterior proceso, como ejemplo tenemos: Agar de Stuart, Agar Cary-Blair.

CALDOS DE ENRIQUECIMIENTO Son caldos con nutrientes que nos permiten hacer que las bacterias patgenas que deseamos aislar se multipliquen en mayor cantidad para poder recuperarlas, como ejemplo: Caldo de Tetrationato, Caldo de Tioglicolato, Agua peptonada, etc.

MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO (SOLIDOS) Se utilizan para aislamiento de bacterias difciles de aislar, y a los cuales se les agregan substancias de enriquecimiento e inhibidoras de otros microorganismos que no tienen inters, permitindonos que crezca solamente la que nos interesa, ejemplo: Agar sangre, Agar chocolate, Agar Tayer-Martin.

MEDIOS SELECTIVOS Para aislar un gnero de bacterias en especial, ejemplo: Agar Salmonella-Shigella (SS), Agar Leer, Agar Lowenstein-Jenssen, Agar XLD.

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MEDIOS DIERENCIALES Son medios de cultivo que nos permiten aislar grupos de bacterias ejemplo: Agar Eosina Azul de Metileno (EMB), Agar ENDO.

MEDIOS PARA PRUEBAS BIOQUIMICAS Son medios de cultivo que nos permite estudiar l comportamiento bioqumico de las bacterias para poder hacer su clasificacin, ejemplo: Triple Azucar y Hierro (TSI o Kliger), Citrato de Simonns, Caldo Urea, Lisina Descarboxilasa (LIA), Agar MIO, Agar Fenilalanina, etc.

TECNICA DE SEMBRADO Para recuperar las bacterias, de muestras de pacientes como son: orina, heces fecales, secreciones purulentas, flemas, heridas, faringe, vagina, uretra, etc. Se requiere de procesar un Cultivo, por medio del cual determinar el agente causal.- Al proceso de inocular los medios de cultivo con la muestra se le llama Sembrado o Siembra.- Con una asa bacteriolgica se toma un inculo de la muestra y se deposita en los medios haciendo estras en Zig-Zag sobre la superficie como se indica en el siguiente esquema:

Inoculo 1 Fase 2 Fase 3 Fase

Este procedimiento nos permite que en la 3 Fase del sembrado, al desarrollarse las colonias se encuentren ms aisladas, de tal manera que no se mezclen una con la otra y as tener la posibilidad de observar las caractersticas de cada una de ellas. A esa siembra hay que proporcionarle una temperatura adecuada de incubacin para su desarrollo.Hay bacterias que crecen a temperaturas de 15C, 25C, o 37C, segn sea la especie, por lo regular se deben conservar en la incubadora de 24 a 48 horas, hay algunas que requieren mas tiempo por lo que se deben revisar continuamente las placas, a este perodo de tiempo se le llama Tiempo de incubacin. Despus de este tiempo se observa en la superficie del medio, unas pequeas vesculas o promontorios formados por clulas de bacterias llamadas Colonias UFC (unidades formadoras de colonias). Todas las colonias son de diferente morfologa, y con el tiempo, experiencia y destreza esta morfologa le permite al Qumico ir reconociedolas, y se pueden diferenciar observando: su tamao, color, consistencia, elevacin, superficie, clasificndolas de distintas formas.

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FORMA. Circular, irregular, puntiforme, filamentosa, miceloide, etc. SUPERFICIE: Lisa, rugosa, cerebriforme, radiada, etc. BORDE: Continuo, lobulado, rizado, ondulado. ELEVACION: Levantado, Convexa, aplanada, umbilicada, etc. COLOR: Describir el color utilizando luz reflejada o trasmitida. OPACIDAD: Brillante, Opaca, traslcida, transparente. CONSISTENCIA CON EL ASA: Mucoide, gelatinosa, dura, etc. De esta manera podemos darnos una idea de cual es el posible gnero del microorganismo, posteriormente deben hacerse algunas pruebas especiales llamadas Pruebas Bioqumicas que nos dan a conocer la clasificacin exacta. PRUEBAS DE IDENTIFICACION BIOQUIMICA PARA ENTEROBACTERIAS: Despus de que ya creci la colonia e identificamos las caractersticas de ellas, hasta ah podemos sospechar de que microorganismo se trata, sin embargo debemos de clasificar con exactitud cual es, por lo que requerimos de realizar ms pruebas en ellas para hacer la identificacin Las bacterias tienen distintas funciones bioqumicas y por ello utilizamos estas caractersticas para poder diferenciarlas, y entre las pruebas ms utilizadas se encuentran: Fermentacin de carbohidratos: glucosa, sacarosa, lactosa Produccin de gas Produccin de cido sulfhdrico Utilizacin de C y N Descarboxilacin de la Lisina Motilidad Produccin de Indol Descarboxilacin de la Ornitina Desdoblamiento de la molcula de Urea Estas pruebas las realizamos sembrando la colonia en distintos medios de cultivos se incuban a 37C y despus se interpretan observando los cambios en los medios: ejemplo MEDIO DE CULTIVO MIO Citrato de Simmons Kliger o TSI Caldo de Urea TIPO DE SIEMBRA Picadura Picadura inclinado Picadura Inclinado Resuspender DETERMINA PRUEBA Indol Citrato H2S Urea Motilidad Lisina Ornitina Glucosa/Gas Lactosa Sacarosa identificacin RESUL TADO + + + + +/+ + encuadra

Produccin de Indol Utilizacin de C y N Producin de cido sulfhdrico(H2S) Desdoblamiento de la molcula de Urea MIO Picadura Motilidad Lisina (LIA) Picadura inclinado Descarboxilacin de la Lisina Ornitina Picadura Descarboxilacin de la Ornitina Kliger o TSI Picadura inclinado Fermentacin de carbohidratos: Glucosa, Lactosa, Sacarosa y produccin de gas El ejemplo en la columna de resultado, haciendo una comparacin con la tabla de perfectamente en un esquema de una Escherichia coli

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OTRAS PRUEBAS BIOQUIMICA.

PRUEBA DE LA COAGULASA: Es una prueba para diferenciar el gnero Staphylococcus: Satphylococcus aureus= Coagulasa positiva Staphylococcus epidermidis = Coagulasa negativo Se realiza de la siguiente manera: poner una asada de la colonia en 1 ml de plasma humano, se incuba por 24 hs a 37C y se observa si el plasma coagulo. Existen innumerables pruebas bioqumicas pero estas son las ms comunes. Consultar la prueba de la Bacitracina y la Optoquina para diferenciar Streptococcus pyogenes y Diplococcus pneumoniae. Consultar la prueba de Tubo Germinativo para Candida albicans Consultar como se hace un antibiograma

REPORTE: El alumno realizar un resumen de los puntos ms importantes de este tema, anexando un cuadro sinptico de la secuencia de la investigacin desde su inicio hasta la emisin del reporte del paciente, y har las consultas solicitadas.

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PRACTICA # 2 IDENTIFICACION BACATERIANA POR TINCION DE GRAM FUNDAMENTO: La Tincin de Gram es uno de los mtodos ms bsicos para hacer la identificacin presuntiva de una bacteria, y nos es til en la identificacin morfolgica as como de sus caractersticas tintoriales.- Hacer un extendido (frotis) y colorearlo nos permite diferenciar las bacterias Gram positivas de las Gram negativas. La diferencia entre estos dos grupos reside en la pared celular, las bacterias son primero teidas con Cristal violeta y Yodo y luego decoloradas con alcohol-acetona, posteriormente teidas con el colorante de contraste Safranina.- Las Gram positivas fijaran el Cristal violeta, mientras que las Gram Negativas la Safranina MATERIAL: Asa bacteriolgica Mechero Bunsen Portaobjetos Microscopio TECNICA: 1. Hacer una suspensin bacteriana con una gota de solucin salina, extenderla en el portaobjeto y dejar secar, luego fijar con calor en la flama del mechero. 2. Teir con Cristal Violeta 1 minuto 3. Lavar con agua corriente de la llave. 4. Colorear con Lugol 1 minuto. 5. Lavar con agua y decolorar con solucin Alcohol-Acetona hasta que la preparacin cese de desteirse. 6. Lavar con agua y se le aplica el colorante de contraste Safranina durante 30 segundos. 7. Lavar con agua y secar el frotis, se observa al microscopio usando una gota de aceite de inmersin con el objetivo de 100X. REPORTE: En una hoja anexa dibuje su observacin al microscopio y dibuje la tcnica de la tincin. CONCLUSIONES: Conteste las siguientes preguntas: 1. La tincin de Gram para que es til? 2. En que consiste la diferencia en la pared celular entre estos dos grupos? 3. Qu colorante fija cada grupo? COLORANTES: Cristal Violeta Lugol Alcohol-Acetona Safranina MATERIAL BIOLOGICO: Cepas Gram positivas Cepas Gram negativas

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PRACTICA #3 COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN

FUNDAMENTO: Existe u grupo de organismos con caractersticas diferentes a las bacterias, y pertenecen al gnero Mycobacaterium.- Una de sus especies Mycobacterium tuberculosis, tambin llamado bacilo de Koch es el agente causal de la tuberculosis, por ello la gran importancia mdica que tiene su estudio. Su morfologa es un bacilo sumamente resistente a los cidos y alcoholes fuertes por lo que suelen ser llamados BACILOS ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES (BAAR).- Resisten temperaturas ms altas, y en medios de cultivo como el de Lowenstein-Jennsen su desarrollo es lento, tardando hasta 15 a 20 das en crecer en cultivos de expectoracin. Utilizando esa caracterstica que tiene el Mycobacterium de ser BAAR, el mdico suele utilizar una prueba presuntiva y ms rpida para su identificacin, llamada BACILOSCOPIA SERIADA EN FLEMA BAAR SERIADO, que no es otra cosa que una tincin de Ziehl-Neelsen para poner de manifiesto los BAAR en tres muestras de flema de tres das consecutivos. Debe explicarse al paciente que la muestra debe ser flema y NO SALIVA, y recolectarla en un frasco estril de boca ancha. La coloracin consiste en utilizar distintos colorantes: primero Fuschina Fenicada que fijara a los BAAR, despus decolorar con Alcohol-Acido y despus el colorante de contraste Azul de Metileno. A la par con esta prueba es obligatorio realizar el cultivo de flema para poner de manifiesto el bacilo. MATERIAL: Portaobjetos Asa bacteriolgica Mechero Bunsen Microscopio Pinzas COLORANTES: Fuschina Fenicada Alcohol-Acido Azul de Metileno Agua MUESTRA: Flema

TECNICA: 1. En un portaobjetos hacer un frotis de la flema 2. Fijar la preparacin con calor en el mechero bunsen 3. En el lavabo:Cubrir el frotis con Fuschina-Fenicada, flameando (fuego) el portaobjetos por debajo hasta la emisin de vapores de fenol, aproximadamente 8 minutos 4. Lavar con agua y decolorar con Alcohol-Acido 5. Lavar y aplicar el colorante de contraste Azul de metileno por 4 a 5 minutos 6. Lavar con agua, secar la preparacin y observar al microscopio utilizando una gota de aceite de inmersin con objetivo de 100X.

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REPORTE: En una hoja anexa dibuje los resultados al microscopio y la tcnica de la tincin CONCLUSIONES: 1. Consulte la diferencia de la pared celular de los BAAR a diferencia de las otras bacterias 2. De que color se tieron los BAAR? 3. Para que nos es til la Baciloscopa seriada? 4. Exprese sus propias conclusiones sobre la prctica.

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PRACTICA # 4 INFECCIONES DE VIAS RESPIRATORIAS CULTIVO EXUDADO FARINGO AMIGDALINO

Poner de manifiesto el agente causal de las infecciones de vas respiratorias, implica primero hacer una clasificacin de este tipo de patologas, tanto de vas respiratorias altas o bajas.- Las primeras implican desde la faringe, amgdalas, nasal, senos craneales y por consecuencia odo medio.- En las segundas se implica: trquea bronquiolos, alvolos pulmonares que normalmente deben ser estriles. Las infecciones del aparato respiratorio pueden ir desde una simple amigdalitis, faringitis en vas respiratorias altas, hasta procesos mas complicados como una Neumona o Bronconeumona en vas respiratorias bajas. Por la gran variedad de flora bacteriana que existe en la boca, es necesario mencionar algunos microorganismos considerados como flora bacteriana normal para poder diferenciarlos de los que son patgenos FLORA NORMAL: VIAS ALTAS BOCA: Streptococcus alfa hemoltico Staphylococcus epidermidis Branhamella catarrhalis Difteroides Lactobacilos Espiroquetas Vibriones Haemophilus Levaduras VIAS BAJAS BRONQUIOLOS NORMALES: Pueden existir escasas bacterias BRONQUIOLOS Y ALVEOLOS: Estriles FLORA PATOGENA: VIAS ALTAS: Staphylococcus aureus Streptococcus pyogenes Corynebacterium diphteriae Bordetella pertusis Haemophilus influenzae Diplococcus pneumoniae Neisseria meningitidis VIAS BAJAS: Las mencionadas anteriormente adems de Mycobacterium tuberculosis Enterobacterias Pseudomona aeruginosa Mycoplasma pneumoniae Candida albicans Otros Hongos Virus MEDIOS DE CULTIVO Colorantes de Gram Agar EMB, Agar S110, Agar Sangre Agar Azida de Sodio

MATERIAL Mechero Bunsen Asas bacteriolgicas Portaobjetos

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TOMA DE MUESTRA: El paciente debe presentarse sin estar bajo tratamiento de antibiticos, sin haberse aseado la boca.- Se debe revisar la faringe y las amigdalas tratando de visualizar membranas o placas blancas o lceras.- Tomar un par de hisopos y con un abatelenguas bajar la lengua del paciente, pasar los hisopos por la parte que se sospeche se encuentra afectada.

TECNICA
CULTIVO DE EXUDADO FARINGO-AMIGDALINO

HISOPOS CARGADOS

HACER UN FROTIS TEIRLO AL GRAM Cerca del mechero bunsen con el hisopo aplicar un inculo en cada medio de cultivo y con el asa bacteriologica sembrar en estras (Zig-Zag). Agar S110 Agar EMB Agar Sangre Agar Sangre/azida

Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis

Enterobacterias: Escherichia coli Enterobacter sp. Citrobacter sp.

Streptococcus pyogenes grupos de A a D

Streptococcus pyogenes

Incubar 24 horas a 37C Despus de la incubacin revisar las placas y describir las caractersticas de las colonias. Realizar Pruebas Bioqumicas de ser necesario NOTA: En caso de sospecha de Tosferina, incluir una caja de medio de cultivo Bordet-Gengou para aislamiento de Bordetella pertusis En caso de sospechar Difteria, incluir una placa de medio de Loeffer para aislamiento de Corynebacterium difteriae

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RESULTADOS: Describa las caractersticas de las colonias: superficie, bordes, color, brillo, etc.

DIBUJOS:

CONCLUSIONES:

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PRACTICA # 5 UROCULTIVO

Para poner de manifiesto los agentes causales de infecciones de vas urinarias, se requiere de practicar un cultivo de orina llamado UROCULTIVO.- Este tipo de padecimiento se presenta en todas las edades y en ambos sexos, aunque con mayor incidencia en mujeres. La flora bacteriana que se encuentra con mayor frecuencia en estos padecimientos son las llamadas Enterobacterias, bacterias cuyo hbitat es el intestino grueso, como son: Escherichia coli, causante del 50% de estas infecciones, Enterobacter, Citrobacter, Proteus, Pseudomona, Streptococcus.- La uretra es colonizada por diversas bacterias como las de la piel o por contaminacin fecal, sobre todo en mujeres por la cercana del ano y la vulva. La orina normalmente debe ser estril, pero an con la presencia de bacterias en la orina, es importante definir si realmente es una infeccin, y la forma de hacerlo es cuantificando la cantidad de bacterias en la orina, a este proceso se le llama CUENTA DE KASS.- La interpretacin del resultado ser: cuentas superiores de 80,000 a 100,000 UFC/ml es clara evidencia de una infeccin, mientras que cuentas entre 5,000 a 10,000 UFC/ml nos reflejan una posible contaminacin de la muestra en la recoleccin o en el proceso del estudio.- El recuento entre estas cifras requiere de un seguimiento de la evolucin del paciente, o bien que la sintomatologa del paciente sea muy evidente. Es importante aclarar que para hacer el diagnstico de infeccin urinaria, no solamente es importante saber cual es la bacteria, sino tambin saber cuantas son. REECOLECCION DE LA MUESTRA: Practicar un aseo previo de sus partes genitales, recolectar la primera orina de la maana en un frasco estril proporcionado por el laboratorio, orinar y descartar la primera parte en el sanitario y recolectar la de la mitad de la miccin (chorro) en el frasco, esto es con el fin de que la primera parte arrastre los contaminantes que hay superficialmente y que la orina que se recolecte sea directamente de la vejiga. MATERIAL: Mechero Bunsen Asas Bacteriolgicas Pipetas estriles Tubos de vidrio Placas petri con 3 divisiones Placas petri sin divisin MEDIOS DE CULTIVO Agar Casoy Agar Nutritivo Agar Sangre Agar EMB Agar S 110

TECNICA
El Urocultivo completo consta de: 1) Lectura del sedimento Urinario, 2) Cuenta de Kass, 3) Cultivo, 4) Antibiograma de ser necesario.

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1) SEDIMENTO URINARIO: En un tubo de 13x100, llenar el tubo con orina, centrifugar por 5 minutos, y decantar el sobrenadante, colocar una gota del sedimento en un portaobjetos, cubrir con un cubreobjeto, y observar al microscopio en bsqueda de: clulas, leucocitos, bacterias, cilindros, cristales, levaduras, etc. 2) CUENTA DE KASS: Para realizar la cuantificacin de las bacterias es necesario hacer diluciones de la orina en solucin salina estril, estas diluciones deben ser 1:10, 1:100, 1:1000.- En esta prctica haremos solamente la dilucin 1:100, tomar con una pipeta estril 1 ml de esta dilucin y depositarla en una caja petri sin divisin vaca, aadirle 18 ml de Agar Casoy o nutritivo previamente licuado a bao mara y depositarlo en la caja petri de la dilucin, mezclar en forma de 8 para que se homogeneice la muestra con el agar, dejar solidificar y despus incubar a 37C. 3) CULTIVO: Sembrar con el asa bacteriolgica una asada de orina en cada medio de cultivo y sembrar en estras.

MUESTRA

SEDIMENTO URINARIO

CUENTA DE KASS
Dil 1 ml + Agar

Orina

Centrifugar y decantar

Portaobjeto y cubreobjeto

Microscopio observar

Orina

Dilucin 9.9 salina + 1 ml orina

Una asada de orina sin diluir en cada uno de los medios

Agar S 110

Agar EMB

Agar Sangre

Agar Biggy

Staphylococcus sp.

Enterobacterias

Streptococcus sp.

Candida sp.

Incubar 24 Hs a 37C Despus de la incubacin revisar las placas y describir las caractersticas de las colonias. Realizar Pruebas Bioqumicas

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RESULTADOS: Describa las caractersticas de las colonias.

DIBUJOS:

REPORTE FINAL PARA EL PACIENTE: Dr.(a): Ref: Fecha: Estudio Solicitado: Sedimento Urinario: Cuenta de Kass: Grmen aislado: Antibiograma: Urocultivo

CONCLUSIONES:

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PRACTICA # 6 COPROCULTIVO

Las infecciones del intestino humano son producidas por inumerables microorganismos, su manifestacin mas clsica es la diarrea.- Para poner de manifiesto el agente causal se requiere practicar un cultivo de heces fecales llamado comnmente Coprocultivo. Los microorganismos encontrados en el contenido intestinal son llamados Enterobacterias, se pueden considerar algunos como flora bacteriana normal, pero dentro de los directamente involucrados como causantes de diarrea se pueden mencionar: Escherichia coli (enteropatgena), Salmonella typhi (fiebre tifoidea), especies del gnero de Shigella sp (disentera), Campilobacter sp., Vibrio cholerae (Clera). Son las infecciones ms importantes, sin embargo debe tenerse presente que hay parsitos causantes tambin de diarrea como son: Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Balantiduium coli etc. Existen cuadros intestinales muy evidentes por intoxicaciones alimentarias, de los cuales los mas frecuentes son causados por una endotoxina del Staphylococcus aureus El Coprocultivo busca aquellos gneros que pueden ser enteropatgenos para el hombre, y se sustenta en la siembra de muestras fecales en medios de cultivo selectivos, diferenciados y de enriquecimiento. TOMA DE MUESTRA: La materia fecal debe recogerse antes de proporcionar antibitico al paciente, en la etapa aguda del cuadro clnico, y deben de sembrarse lo ms rpido posible, para que no se daen los microorganismos.- Para sembrar deben seleccionarse las reas de moco y pus

MATERIAL: Mechero bunsen Asas bacteriolgicas Cajas Petri

REACTIVOS: Medios de cultivo de Caldo de tetrationato Agar XLD Agar Mac Conkey Agar Sulfito de Bismuto.

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TECNICA DE COPROCULTIVO

MATERIA FECAL Tomar una muestra de materia Fecal e inocular

CALDO DE TETRATIONATO Incubar 18 hs a 37C Resembrar en los medios:

Agar XLD

Agar Mac Conkey

Agar Sulfito de Bismuto

Shigella sp Salmonella sp.

Enterobacterias

Salmonella sp.

Incubar 24 hs a 37C Observar las colonias y registrar sus caractersticas. Resembrar por picadura en medios de cultivo para Pruebas Bioqumicas.

Kliger TSI

Citrato de Simmons

Agar LIA

Agar MIO

Ornitina

Urea

Incubar 24 hs a 37C Observar los cambios, anotar (+ -), y comparar con la tabla para identificar el microorganismo.

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RESULTADOS: PRUEBA INDOL CITRATO H2S UREA MOTILIDAD LISINA ORNITINA GAS/GLUCOSA LACTOSA Germen aislado: RESULT

DIBUJOS:

CONCLUSIONES

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PRACTICA # 7 CULTIVO DE EXUDADO VAGINAL Las infecciones de los genitales femeninos son muy variadas dada su complejidad anatmica, pueden ir desde una infeccin de vulva (vulvitis), o sus glndulas (Bartholinitis), o bien la vagina (vaginitis), las cuales presentan un proceso inflamatorio con descarga de una secrecin denominada Exudado vaginal.Estas infecciones pueden afectar el cuello uterino, endometrio, o trompas de Falopio. Los agentes causales de las infecciones del tracto genital pueden ser: Trichomonas vaginalis (protozoario), Cndida albicans, as como las Enterobacterias cuyo hbitat normal es el intestino, entre ellas podemos mencionar: Escherichia coli, Proteus sp., Enterobacter sp. Citrobacter sp. Haemophilus vaginalis, Streptococcus fecalis, Staphylococcus aureus. TOMA DE MUESTRA: Debe tomarse la muestra con espejo vaginal, revisar bien las mucosidades y el cervix uterino, se usaran cuatro hisopos y con ellos se recolectara la muestra de acuerdo con el esquema de la tcnica. MATERIAL Y REACTIVOS Hisopos Cubreobjetos Guantes de Ltex Tubos 13x100 con Sol Salina estril Espejos vaginales Cajas petri con medios: Cubrebocas Agar-Sagre Microscopio Agar EMB Mechero Bunsen Agar S110 Asas bacteriolgicas Agar Biggy Portaobjetos Agar Tayer-Martin TECNICA:

Examen en fresco: Con un hisopo cargado con muestra, introducirlo en un tubo con sol salina estril, resuspender la muestra, poner una gota en el portaobjeto y cubrirlo con un cubreobjeto, revisar la preparacin al microscopio reportando la cantidad aproximada de: Clulas, leucocitos/campo, bacterias, Trichomonas vaginalis, levaduras, etc.

Frotis al Gram: Con otro hisopo cargado con muestra, realizar un frotis en un portaobjeto, fijarlo al calor y teirlo con la tcnica de Gram.- Reportar la flora bacteriana presente: Gram positiva o Gram negativa.

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CULTIVO DE EXUDADO VAGINAL

HISOPOS CON MUESTRA (4)

HISOPO PARA EXAMEN EN FRESCO

FROTIS AL GRAM

Agar S 110

Agar EMB

Agar-Sangre

Agar Biggy

Agar Tayer-Martin

Staphylococcus sp.

Enterobacterias

Streptococcus sp.

Candida albicans

Neisseria gonorrhoeae

Incubacin 24 C aerobiosis/ Tayer-Martin en CO2

Identificar las caractersticas de las bacterias y hacer las pruebas bioqumicas.

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RESULTADOS:

Dr: Referencia: Fecha: Investigacin Solicitada: Examen en fresco: Cultivo de Exudado Vaginal

Frotis al Gram: Germen aislado: Antibiograma:

CONCLUSIONES:

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Seccin III

Inmunologa

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PRACTICA # 8 ANTIESTREPTOLISINAS

Los Estreptococos del Grupo A de Lancfield, producen por lo menos 20 substancias extraclulares antignicas, de las cuales gran nmero no han sido identificadas.- Las ms importantes incluyen Toxina Eritrognica, Estreptocinasa, Estreptodornasa, Hialuronidasa, Estreptolisinas.- Las estreptolisinas son de dos clases: Estreptolisina O y Estreptolisina S. En los pacientes con infecciones por estreptococos del Grupo A, producen anticuerpos en contra de la Estreptolisina O llamados ANTIESTREPTOLISINAS, que son fciles de detectar en el suero de los pacientes. La titulacin de estos anticuerpos proporciona un dato diagnstico de mucho valor para confirmacin de la Fiebre Reumtica, en donde el 80% de los pacientes presentan ttulos altos de Antiestreptolisina O.- El mtodo que se utiliza es una prueba de Fijacin de Complemento.

FIJACION DE COMPLEMENTO FUNDAMENTO: Esta es una reaccin indirecta para determinar la presencia y cuantificacin de antgeno o anticuerpo en un sistema.- Consiste en que en presencia del complejo Ag-Ac se fija el complemento.- Si hay la suficiente cantidad de antgeno como de anticuerpo en el complejo entonces el complemento se fija todo, pero faltando cualquiera de estos dos el complemento queda libre.- Sin embargo sta reaccin es imposible verla microscpicamente, de tal manera que necesitamos un sistema indicador para observar si el complemento se fijo o quedo libre, para ello utilizamos una suspensin de glbulos rojos que se aade a la reaccin, de tal manera que si el complemento queda libre va actuar sobre los glbulos rojos y los hemoliza, si el complemento se fija totalmente al complejo Ag-Ac entonces no hemoliza a los glbulos rojos. Como el anticuerpo anti-glbulos rojos de carnero en presencia del complemento resulta en la lsis de las clulas, nos es posible titular, es decir medir de una manera relativa la cantidad de anticuerpos.Esto se hace diluyendo el suero del paciente para determinar cul es la ms alta dilucin que todava causa destruccin de los glbulos rojos Para la titulacin del anticuerpo se ponen diluciones del suero del paciente (Ac) en una serie de tubos a los cuales se les agrega una cantidad constante de Estreptolisina o hemolisina (Ag) que se vende comercialmente.- Si la cantidad de antiestreptolisinas presente en el tubo es suficiente para neutralizar a la hemolisina, no ocurrir la hemlisis al agregar los glbulos rojos.- Sin embargo hay un punto en alguna de las diluciones en que ya no hay suficiente anticuerpo para neutralizar la hemolisina, entonces se lizan los glbulos y se produce una clara hemlisis de este tubo en adelante.- El ttulo de antiestreptolisinas O es la recproca de la dilucin ms alta del suero que previene la hemlisis de los glbulos rojos, y se expresan en unidades Todd.- Los valores normales pueden expresarse hasta 166 Unidades Todd.

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MATERIAL Y REACTIVOS Tubos de ensaye 13x100 Centrfuga Tubos de ensaye de 16x150 Estreptolisina O comercial Pipetas serolgicas de 1/10 Suero del paciente Pipetas de 5.0 ml Solucin salina Gradillas Buffer Incubadora

TECNICA: Las diluciones siguientes se hacen usando solucin amortiguadora: 1:10 0.5 ml. Del suero del paciente ms 4.5 ml. De buffer 1:100 1.0 ml de la dilucin 1:10 ms 9.0 ml de buffer 1:500 2.0 ml de la dilucin 1:100 ms 8.0 ml de buffer. DILUCIONES DEL SUERO PROBLEMA 1:10
TUBOS Volumen de la Dilucin en ml. (Ac) Volumen de la sol. salina amortiguada en ml. Volumen de Estreptolisina en ml (Ag) 1 0.8 0.2 2 0.2 0.8 3 1.0 0.0 4 0.8 0.2

1:100
5 0.6 0.4 6 0.4 0.6 7 0.3 0.7 8 1.0 0.0 9 0.8 0.2 10 0.6 0.4

1:500
11 0.4 0.6 12 0.2 0.8 13 0 1.5 14 0 1.0

0.5

0.5

AGITAR LOS TUBOS 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

AGITAR E INCUBAR A 37 C DURANTE 15 MINUTOS Volumen de la suspensin 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 de glbulos rojos AGITAR E INCUBAR A 37 C DURANTE 45 MINUTOS TENIENDO CUIDADO DE AGITAR LOS TUBOS DURANTE ESTE TIEMPO CADA 15 MINUTOS. CENTRIFUGAR LOS TUBOS DURANTE 1 MINUTO A 1500 RPM Ttulo en 12 50 100 125 166 250 333 500 625 833 1250 2500 Unidades Todd

RESULTADOS: Dr: Referencia: Fecha: Investigacin Solicitada: ATIESTREPTOLISINAS

El estudio para la investigacin de anticuerpos en contra del Streptococcus grupo A Result: Antiestreptolisinas: unidades Todd

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DIBUJOS:

CONCLUSIONES:

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PRACTICA # 9 PROTEINA C REACTIVA

La Protena C reactiva (PCR), es una betaglobulina probablemente ligada a lpidos del suero.- No se encuentra en el suero de pacientes normales, pero se presenta de 14 a 26 horas despus de la instalacin de estados inflamatorios o de lesiones en los tejidos.- Se encuentra a menudo en el suero de enfermos con infecciones bacterianas, fiebre reumtica activa, infarto agudo del miocardio, y procesos neoplsicos, artritis reumatoide, infecciones virales y tuberculosis activa, pero slo en raras ocasiones en la leucemia crnica, mieloma mltiple y neoplasias. La protena C reactiva se puede determinar y cuantificar por el mtodo en placa con reactivos prefabricados.

MATERIAL Y REACTIVOS Suero humano Solucin salina Controles: positivo y negativo Aplicadores de madera Ltex Centrfuga de mesa Placa de vidrio Pipetas serolgicas,

TECNICA: Dilucin del suero: Diluir previa el suero 1:40 con solucin salina (0.1 ml del suero y 3.9 ml de sol. Salina. 1. 2. 3. 4. En una placa de vidrio perfectamente desengrasada colocar una gota del suero diluido Aadir una gota de Ltex previamente homogeneizado. Mezclar con un palillo de madera y agitar suavemente la placa por espacio de 3 minutos y observar la presencia de aglutinacin macroscpica. Se procesan sueros controles positivo y negativo igual que el suero del paciente.

INTERPRETACION DE RESULTADO: Aglutinacin = Positiva No aglutinacin = Negativa En caso de resultar positiva la prueba, se proceder a la cuantificacin de la Protena C reactiva de la siguiente forma: PRUEBA CUANTITATIVA: 1 En una serie de 5 tubos se depositan 0.5 ml de sol. Salina a c/tubo. 2 Aadir 0.5 ml de suero diluido 1:40 al primer tubo, mezclar bien y transferir 0.5 ml. De la dilucin anterior al segundo tubo.- Continuar efectuando la misma operacin hasta terminar con el quinto tubo.

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Las diluciones obtenidas son las siguientes: Ttulo Tubo 1 1:80 Tubo 2 1:160 Tubo 3 1:320 Tubo4 1:640 Tubo 5 1:1280 4. Utilizando un gotero se coloca una gota de cada dilucin en la placa de vidrio de igual manera que la prueba cualitativa INTERPRETACION: La dilucin ms elevada del suero que muestre aglutinacin visible se considera como el ttulo de Protena C reactiva en el suero del paciente. RESULTADOS: Dr: Referencia: Fecha: Investigacin Solicitada: PROTEINA C REACTIVA

El estudio para la investigacin de la Protena C reactiva resulto:

DIBUJOS:

CONCLUSIONES:

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PRACTICA # 10 FACTOR REUMATOIDE

Un gran nmero de enfermos con Artritis Reumatoide activa, presentan un tipo especial de protena srica capaz de reaccionar con gammaglobulina.- Esta globulina 19S (Factor Reumatoide) se puede demostrar mediante diversas pruebas serolgicas.- La mayor parte de ellas consisten en aglutinacin con suero diluido proveniente de los enfermos reumatoides, de partculas de Ltex. Recubiertas con gammaglobulina humana IgG.- La accin recproca existente entre el factor reumatoide (IgM) y la gammaglobulina IgG tambin se puede demostrar con una reaccin de precipitacin y es posible que represente una reaccin antgeno-anticuerpo.- El factor reumatoide ocurre tambin en pacientes con endocarditis infectante activa. La comprobacin o exclusin de factores reumatoides tiene significado diagnstico sobre todo cuando las anamnesis, datos de exmenes clnicos, Rayos X, apuntan hacia un diagnstico de Artritis Reumatoide.- Debido a la heterogeneidad de los factores reumatoides, se recomienda en la rutina correr pruebas paralelas de IgG. Los ttulos elevados generalmente corresponden a casos graves y generalizados de la enfermedad.- Ocasionalmente se detectan factores reumatoides en sueros de pacientes con Lupus, Hepatitis, Sfilis.

MATERIAL Y REACTIVOS Suero del paciente Placa de vidrio Solucin salina Aplicadores de Madera Sueros controles: positivo y Tubos de ensaye negativo. Reactivo de Ltex de FR Gradilla Pipetas serolgicas

TECNICA: Dilucin del suero del paciente 1.0 ml de suero y 5.0 ml de solucin salina. 1. Depositar una gota de dilucin en la placa de vidrio en uno de los espacios y correr controles positivos y negativos. 2. Aadir una gota de ltex a cada muestra de suero y controles, mezclar con palillo de madera, agitar 2 minutos y valorar la aglutinacin. INTERPRETACION: AGLUTINACION = POSITIVO NO AGLUTINACION = NEGATIVO Todo resultado positivo requiere practicar una prueba cuantitativa igual que en la Protena C reactiva.

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RESULTADOS: Dr: Referencia: Fecha: Investigacin Solicitada: FACTOR REUMATOIDE

El estudio para la investigacin del Factor reumatoide result:

DIBUJOS:

CONCLUSIONES:

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PRACTICA # 11 REACCIONES LUETICAS: V.D.R.L.

La Sfilis es una enfermedad infecciosa causada por el Treponema pallidum.- El gnero Treponema, junto con los de Spyrochetae, Borrelia, Leptospira y Cristispira forman la familia Spyrochetaceae.- Estos microorganismos se caracterizan por ser filamentos, ondulados, finos en forma de tirabuzn y relativamente flexibles. Son agentes etiolgicos del Mal del Pinto, Pian, Sfilis venrea y no venrea.- Son anaerobios estrictos, no se han podido cultivar en medios artificiales, sintticos ni en embrin de pollo o cultivo de tejidos.- Se cultiva en testculo de conejo con los que se obtienen antgenos de Treponema para realizar la tcnica de inmovilizacin de Treponema o la de inmunofluoresencia. La Sfilis es una enfermedad que pasa por perodos clnicos bien definidos.- Perodo primario: Se caracteriza por la aparicin de lesiones iniciales en los genitales en el 95% de los casos, aproximadamente el 5% se presenta en la mucosa bucal o en el pezn, siendo raras en otras partes del cuerpo. El perodo de incubacin es de 10 a 90 das con promedio de 3 semanas.- La lesin primaria local tpica es indurada, ulcerada superficialmente es incolora o vascularizada, conocindose como chancro duro.- En este perodo el diagnstico se confirma por la demostracin de treponemas en la lesin primaria debiendo realizarse el examen antes de iniciar el tratamiento. El perodo secundario aparece despus de 4 a 8 semanas, pero puede prologarse hasta un ao.- Sus manifestaciones son muy variables, las lesiones de la piel y mucosas son muy ricas en treponemas, pudiendo demostrarse al microscopio en campo obscuro.- En esta etapa aparecen loa anticuerpos que pueden utilizarse para el diagnstico por medio de reacciones serolgicas.- En cambio en la sfilis latente tarda o sfilis terciaria son positivas en 60 a 70%. DIAGNOSTICO DE LABORATORIO. Las pruebas se realizan d acuerdo con el periodo clnico: a) Lesin Primaria: Observacin de treponemas en campo obscuro. b) Reacciones seroluticas para cuantificar anticuerpos o reaginas c) Investigacin de anticuerpos especficos para casos en que el VDRL sea negativo o para descartar falsas positivas. d) Investigacin de anticuerpos especficos por la tcnica de inmovilizacin del treponema. e) Tincin de Fontana-Tribondau para investigar la presencia de treponemas. Existen muchas pruebas para demostrar la presencia de reaginas, entre ellas la de Hinto, Kline, Kolmer, Mazzini, pero la ms utilizada es la de VDRL. FUNDAMENTO: Las reaginas presentes en el suero del paciente con Sfilis causan la floculacin del antgeno VDRL, estabilizado en suspensin.- Como antgeno se emplea un reactivo nico, a base de cardiolipina, colesterol y lecitina.

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MATERIAL Y REACTIVOS Suero del Paciente Pipetas serolgicas Suspensin de Antgeno comercial Sol. Salina Control positivo Placa de vidrio

TECNICA: La suspensin antignica deber estar a temperatura ambiente antes de ser usada y agitar antes de su uso. 1. 3. En la placa de vidrio pipetear 0.05 ml. y 0.02 del antgeno Agitar manualmente por 8 minutos.- Leer inmediatamente en el centro de la placa utilizando un microscopio. NEGATIVO: Sin grumos o aglutinacin POSITIVO: Grumos medianos o grandes.

INTERPRETACION:

RESULTADOS Y DIBUJOS:

CONCLUSIONES

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PRACTICA # 12 REACCIONES FEBRILES

La brucelosis, Tifoidea, Hepatitis, Disentera bacilar, Paratifoidea, Neumona, Escarlatina, son algunas de las enfermedades infecciosas causadas por virus, bacterias, ricketsias, que presentan perodos febriles. En respuesta a esta infeccin el organismo humano produce anticuerpos que se encuentran en circulacin en la sangre, los cuales pueden ser detectados y cuantificados en el suero del paciente mediante pruebas inmunolgicas como son las reacciones febriles. REACCIONES FEBRILES REACCION WIDAL WIDAL WIDAL WIDAL WEIL-FELIX HUDDLESON

ANTIGENO TIFICO O TIFICO H PARATIFICO A PARATIFICO B PROTEUS OX-19 Brucella abortus

DIAGNOSTICO DE: TIFOIDEA TIFOIDEA PARATIFOIDEA PARATIFOIDEA FIEBRE MANCHADA BRUCELOSIS

Placa de vidrio Pipetas de 0.2 ml/0.01 ml Aplicadores de madera

MATERIAL Y METODOS Lmpara Antgenos febriles comerciales Suero del paciente

TECNICA: 1. Colocar con una pipeta 0.08 ml del suero del paciente, en cada uno de los cuadros de la placa de vidrio en forma vertical 2. Aadir una gota de antgeno: Al primer cuadro de Tfico O, al segundo de Tfico H, al tercero de Paratfico A, al cuarto Paratfico B, quinto Proteus-OX19 y el sexto Brucella abortus 3. Homogeneice con un aplicador de madera distinto para cada cuadro, extendiendo la mezcla. 4. Mueva la placa por vaivn por unos minutos para que haga contacto Antgeno-Anticuerpo. 5. Observe si hay aglutinacin con ayuda de una lmpara. Cuando el resultado es positivo, se repite la tcnica haciendo diluciones para determinar el Ttulo de anticuerpos, colocando las cantidades de suero que a continuacin se mencionan, utilizando el antgeno que fue positivo.

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VOLUMEN 0.08 ml de suero 0.04 ml de suero 0.02 ml de suero 0.01 ml de suero 0.005 ml de suero

TITULO 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320

INTERPRETACION: La ltima dilucin que presente aglutinacin es el Ttulo de anticuerpos, No aglutinacin significa resultado Negativo. RESULTADO:

Dr: Referencia: Fecha: Investigacin Solicitada: TIFICO O: TIFICO H: PARATIFICO A: PARATIFICO B: PROTEUS 0X19: Brucella abortus: REACCIONES FEBRILES

DIBUJOS:

CONCLUSIONES:

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PRACTICA # 13 DETERMINACION DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA 1 y 2 (ENSAYO DE ESCRUTINIO DE ANTICUERPOS)

El virus HIV 1 y HIV 2 es generalmente reconocido como el agente causal del Sndrome de la Inmunodeficiencia adquirida (SIDA).- En respuesta a la infeccin se encuentran en el suero del paciente anticuerpos de tipo IgM, IgG, IgD, que pueden ser determinados y cuantificados por medio de una prueba de Inmunoensayo. La prueba para deteccin de anticuerpos anti HIV 1 y 2 es solicitada: en pacientes con sospecha de SIDA, en donadores de sangre, rganos y semen.- Tambin es importante en personal mdico, paramdico y de enfermera de las instituciones hospitalarias los cuales deben ser checados peridicamente. La presencia de anticuerpos de HIV 1 y 2 es aceptada como un indicador de una infeccin pasada o actual con este virus, no es un diagnstico de SIDA. La prueba de Dipstick 1 y 2 requiere 30 min. Para su determinacin.- Consiste en un peine de poliestireno con antgenos pptidos sintticos de HIV1 y 2, untados en la punta de cada diente.- Cuando el peine es incubado con una muestra conteniendo anticuerpos HIV 1 y 2, estos anticuerpos ligan especficamente al antgeno pptido, despus de lavar para remover protenas desligadas, el complejo inmune se vuelve visible por la incubacin del reactivo de la protena (oro coloidal-A).- Un resultado positivo es indicado por la presencia de un color rojo en el rea del antgeno pptido.- La ausencia de color indica que la muestra esta libre de estos anticuerpos.

MATERIAL Y REACTIVOS: Hay distintas marcas y productos con el mismo fundamento que proporcionan los peines con el antgeno impregnado o bien placas con antgenos impregnados.

TECNICA: Seguir las instrucciones del mtodo

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA:

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RESULTADOS Y DIBUJO Dr: Referencia: Fecha: Investigacin Solicitada: Determinacin de anticuerpos anti-HIV 1 y 2

El examen cualitativo para la investigacin de Anticuerpos anti- HIV-1 y 2 result:

CONCLUSIONES:

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SECCION IV

PARASITOLOGIA

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PRACTICA # 14 COPROPARASITOSCOPICO METODO CONCENTRADO TECNICA DE FAUST Las muestras fecales son analizadas con mucha frecuencia para el diagnstico de parasitosis. La tcnica ms comn es la de concentracin por el mtodo de Faust, que permite que los trofozoitos, quistes y huevecillos sean observados en el microscopio.- Lo particular del examen es que debe de ser un estudio seriado, esto significa que se necesitan tres muestras en tres das consecutivos, esto nos permite tener ms probabilidades de detectar el parsito.- De ser posible orientar al paciente de que puede tomar algn laxante. Las muestras diarricas que contienen trofozoitos deben examinarse inmediatamente despus de la recoleccin, si no el trofozoito se degenera y se convierte en un elemento no identificado. Antes de practicar el examen es importante revisar las muestras, tratando de buscar la presencia de alguna forma adulta o lombriz.- Existen otras pruebas como la de Ritchie que son utilizadas para diagnosticar huevecillos, sin embargo la de Faust tambin proporciona buenos resultados. MATERIAL Y REACTIVOS: Muestra fecal Centrfuga Sulfato de Zinc (Dens. 1.160-1.180) Abatelenguas Densimetro Isopos de madera Colorante Lugol Tubos de ensaye 13x100 Porta y cubreobjetos Sol. Para preservar las muestras. Microscopio

TECNICA: Este mtodo depende de las diferencias en la gravedad especfica entre los quistes y huevecillos por un lado, y los desechos fecales por el otro.- Si se utiliza una solucin de Sulfato de Zinc con gravedad especfica de 1.160-1.180, los quistes y huevecillos flotan, mientras que la mayor parte de los desechos se hunden hacia el fondo. 1. Se emulsiona una muestra de heces del tamao de una nuez en 10 ml. de agua destilada dentro de un tubo de ensaye, con un aplicador de madera. 2. Se centrifuga la emulsin por 2 min. a 1800 r.p.m. y se decanta el sobrenadante 3. Se repite una vez ms el lavado con agua hasta que el sobrenadante este claro. 4. Aadir sol. de Sulfato de Zinc y emulsionar con un aplicador de madera y centrifugar de nuevo. 5. En este caso no se debe decantar, al contrario la membrana de la parte superior del tubo, contiene los parsitos, colocar un cubreobjetos en la boca del tubo y dejar reposar por 5 min. a que la pelcula se adhiera al cubre. 6. Tomar un portaobjetos y colocar una gota de colorante Lugol, depositar con cuidado el cubreobjeto del tubo en la gota de Lugol. 7. Examinar la preparacin al microscpio con objetivos 10X y 40X.

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RESULTADOS Y DIBUJOS:

CONCLUSIONES:

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PRACTICA # 15 AMIBA EN FRESCO

Las muestras diarricas que contienen trofozoitos deben examinarse poco despus de su recoleccin, o bien obtener una muestra con un aplicador de madera con algodn de la parte anal, la muestra se deposita en un tubo con solucin salina y se incuba a 37 C en la incubadora.- El propsito es tratar de obtener el trofozoito lo ms intacto posible, ya que si no se analiza lo mas pronto posible el trofozoito se degenera y se convierte en un elemento no identificado. MATERIAL Y REACTIVOS Solucin salina Muestra fecal Microscopio Aplicadores de madera Porta y cubreobjetos TECNICA: 1. La muestra obtenida debe ponerse en un tubo con sol. salina y conservarse en la incubadora a 37 C. 2. Tomar una muestra de la suspensin y colocarla en el portaobjeto. 3. Colocar un cubreobjeto y revisar al microscopio en busca de trofozoito. RESULTADOS Y DIBUJOS:

CONCLUSIONES:

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PRACTICA # 16 SANGRE OCULTA EN HECES

La sangre en heces es de suma importancia diagnstica, este puede ser el nico signo de padecimientos ulcerativos, neoplsicos o inflamatorios del sistema digestivo.- Para que se produzca melena es necesario 100 ml o ms de sangre proveniente del sistema digestivo.- La demostracin qumica de sangre en las heces depende de la reaccin de los pigmentos hemticos en reaccin con la bencidina, guayaco, o la Ortotoluidina. La sangre en heces se puede deber a cualquiera de las causas siguientes: 1. Ulceras ppticas 2. Carcinoma gastrointestinal 3. Colitis ulcerativa 4 Disentera 5. Obstruccin Portal 6. Ruptura de varices esofgicas. 7. Fiebre tifoidea 8. Tuberculosis del Ileon 9. Ictericia destructiva 10. Ulceracin raspadura o erosin en el tracto gastrointestinal

MATERIAL Y REACTIVOS: Reactivo de perxido de hidrgeno al 5% Papel filtro Materia fecal. TECNICA: 1. Usando un aplicador de madera, tomar una pequea cantidad de materia fecal.- Aplicar una capa muy delgada sobre el papel. 2. Aada una gota del reactivo revelador en el sitio donde se aplic la muestra. ( tape perfectamente el frasco gotero para evitar evaporacin del reactivo.) 3. Observar por un perodo no mayor de 2 minutos. INTERPRETACION DE RESULTADO: PRUEBA POSITIVA= Revelado de un color azul PRUEBA NEGATIVA= No aparece el color.

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RESULTADOS Y DIBUJO:

CONCLUSIONES:

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PRACTICA # 17 TCNICA DE GRAHAM CON CINTA DE CELULOSA PARA EL DIAGNOSTICO DE ENTEROBIASIS

Los helmintos o gusanos son organismos multicelulares que poseen rganos diferenciados. La mayora de los helmintos parsitos no se multiplica dentro del organismo humano, puesto que en su ciclo biolgico existe una etapa necesaria de maduracin fuera del hombre. Las helmintiasis intestinales se dividen en dos grupos: las causadas por nemtodos (gusanos con sexos separados y sin segmentaciones) pertenecientes al phylum Nematelminthes (gusanos redondos) y las causadas por cstodos (helmintos hermafroditas constituidos por segmentos que se denominan progltidos) del phylum Platelminthes (gusanos planos). Dentro de las helmintiasis causadas por nemtodos ms frecuentes tenemos: Ascariasis (Ascaris lumbricoides), Tricocefalosis (Trichuris trichura) Uncinariasis (Necator americanus o Ancylostoma duodenale), Oxiuriasis (Enterovius vermicularis), Estrongiloides (Strongyloides stercolaris). El mecanismo de transmisin del Enterovius vermicularis es el fecalismo o por contacto directo.- Los huevecillos de este helminto son infectantes desde el momento de ser expulsados en la materia fecal. El principal sntoma es el prurito anal que frecuentemente se intensifica durante la noche cuando el gusano migra. En los pacientes con esta sintomatologa el diagnstico se realiza en un examen coproparasitoscpico por la tcnica de Faust o Ritchie las cuales pueden poroporcionarnos de un 70 a 80% de probabilidades de obtener los huevecillos. Sin embargo en el caso de Enterovius hay una tcnica que es la de Graham cuyo propsito es tratar de recolectar los huevecillos depositados en el ano, mediante una cinta adhesiva de celofn.

TECNICA
Con la ayuda de un abatelenguas se pondr en contacto con la superficie anal y perianal la cara adherente de una pequea tira o asa de cinta de celulosa (por ejemplo de Scotch), de preferencia en la noche o muy temprano en la maana. Colquese la tira con la cara adherente hacia abajo en una laminilla. Bsquense huevecillos o parsitos adheridos a la cinta.

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Resultados y Dibujos

Conclusiones:

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Seccin V

Micologa

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Generalidades
Micologa es el estudio de los hongos. Los hongos tienen gran importancia para conservar el equilibrio de la naturaleza pues desintegran o reciclan casi todos los restos orgnicos, intervienen en la produccin del humus del suelo, a esto se denomina biodesintegracin, y es indispensable en la biosfera, pero tambin participan de manera indeseable en el biodeterioro. La Micologa Mdica es una rama de la Microbiologa, que tiene como objeto estudiar las enfermedades producidas por hongos y los hongos que las producen. La micopatologa es variada. Al envenenamiento producido por la ingestin de un hongo se llama micetismo. Se conoce como micotoxicosis a las alteraciones producidas por la ingestin de alimentos que contienen metabolitos o sustancias precursoras de toxinas de hongos como las aflatoxinas. Tambin se pueden producir fenmenos alrgicos de hipersensibilidad en personas normales o atpicas, fundamentalmente asma y rinitis. Las infecciones causadas por hongos microscpicos se llaman micosis, hay muchos agentes infecciosos que causan micosis y pueden ser de origen endgeno exgeno. Los hongos endgenos se encuentran en mucosas o tegumentos de individuos sanos y solo en condiciones especiales del husped se convierten en patgenos. Los hongos exgenos viven fuera del ser humano, la mayora penetran por va cutnea o area. Algunos son parsitos obligados otros son saprfitos., algunos son cosmopolitas y otros muy delimitados a zonas endmicas. Segn su localizacin las micosis se clasifican en cuatro grandes grupos: Micosis exclusivamente tegumentarias. Micosis inicialmente tegumentarias Micosis secundariamente tegumentarias Micosis oportunistas Los hongos presentan varias caractersticas que los separan de otros microorganismos, debido a eso Whittaker en 1969 los coloc en el reino Fungae: Nutricin Talo Hetertrofos Dentro del sustrato Sobre el sustrato Unicelular o filamentoso Septado o cenoctico Dematiaceo o hialino Quitina Ergosterol Eucariotes Uninucleado o multinucleado Asexual y/o sexual Saprfitos Parsitos Simbiontes Simple o complejo.

Pared celular Membrana plasmtica Estado nuclear Sexualidad Hbitat

Ciclo vital

Los hongos poseen una pared celular, citoplasma y ncleo. El talo esta constituido por dos partes: a) talo vegetativo que asegura el desarrollo, nutricin, fijacin y edificacin de la parte reproductora, y b) talo reproductor, donde se forman los rganos de reproduccin.- La hifa son tubos de longitud variable que constituye la zona de extensin y representa la regin de crecimiento. Una masa de hifas es llamada micelio, las hifas pueden ser septadas que son tabiques transversales y forman el micelio tabicado

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Aunque la mayora de los hongos tienen micelio o hifas y se denominan mohos u hongos filamentosos, existen algunos hongos como las levaduras que se reproducen ya sea por gemacin o bien por fisin binaria. Las hifas se desarrollan a partir de una espora o conidia por emisin de un tubo germinativo. La reproduccin puede ser sexuada o asexuada, si no hay esporas se habla de un micelio estril La parte del hongo que se proyecta sobre la superficie del medio es llamado micelio areo, y la parte que penetra dentro del medio es llamado micelio vegetativo.

Levadura Blastospora Ascospora Clulas levaduriformes

Artrosporas

Conidioforos

Microconidias

Macroconidias

Conidias

Clamidosporas

Esporangiofooros

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Obtencin de Muestras
Para la obtencin de un buen resultado, la toma de muestra tiene una gran importancia, por lo que a continuacin se presentan algunos tipos de muestra y la forma en que se deben de realizar. ESCAMAS DE PIEL: El rea de infeccin debe lavarse con alcohol al 70% para remover contaminantes de esa superficie. Las escamas deben obtenerse raspando con una navaja reas del borde activo de la lesin y colocarlas e una caja petri. ESCAMAS DE UAS: Limpiarlas con alcohol al 70%, con una navaja estril, raspar y las escamas colocarlas en frasco estril. CABELLOS: Se arrancan con pinzas estriles y colocarlos en frasco estril. HERIDAS: Las lesiones mucocutneas y subcutneas se pueden tomar las muestras con navaja estril de regiones costrosas desde el centro hasta el lado activo de las lesiones. Adems de escamas debe obtenerse material aspirado con jeringa y aguja de los quistes o abscesos en los tejidos. LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO: Se obtiene aspticamente. La muestra se centrifuga y una gota del sedimento se coloca sobre portaobjetos, se aade un cubreobjetos y se observa al microscopio. El resto sembrarlo en medios adecuados. ESPUTO: Debe obtenerse temprano en la maana, antes de que el paciente haya comido o bebido alguna cosa. Despus de lavarse la boca y cerciorarse que el especmen venga desde los pulmones y colocarlo en un frasco de boca ancha y tapn de rosca. SANGRE: Debe obtenerse aspticamente y tomar 10 ml. Una gota se coloca en un portaobjetos y se realiza un frotis, teirlo con colorante de Wright y el resto sembrarlo en una botella con medio bifsico de Agar BHI y Caldo BHI (100ml). ORINA: La orina obtenida al vuelo y con aseo o cateterizado es mejor, ya que se minimiza la flora genital, colocarla en frasco estril y enviar rpidamente al laboratorio. Centrifugar la orina y con una gota de sedimento hacer una preparacin directa con porta-y-cubreobjetos y el resto sembrarlo en medios de cultivo. EXUDADO VAGINAL: La muestra se toma con dos hisopos estriles. Un hisopo sirve para hacer un frotis sobre un portaobjetos y teirlo con Gram, el otro sirve para sembrar.

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PRACTICA # 18 EXAMEN DIRECTO DE LAS MUESTRAS PREPARACIN CON HIDRXIDO DE POTASIO (KOH). El mtodo ms rpido para determinar si un hongo est presente en un especmen clnico, es el examen directo de una parte de la muestra sobre un portaobjetos. Un examen directo permite enviar un reporte preliminar inmediato al mdico, comunicndole si un hongo fue observado en la muestra y el mdico puede en muchos casos empezar el tratamiento. Resultados negativos del estudio no excluye la posibilidad de que un hongo est presente y pueden requerirse procedimientos adicionales, tales como cultivos, tinciones, pruebas serolgicas, etc. Dentro de las preparaciones directas podemos mencionar las pruebas de: Preparacin con Hidrxido de Potasio (KOH), Preparacin de Hidrxido de Potasio-Dimetilsulfxido (KOH-DMSO), Preparacin de Azul de Algodn-lactofenol, Preparacin con Tinta China.

PREPARACIN CON HIDRXIDO DE POTASIO (KOH) MATERIAL Y REACTIVOS Hidrxido de Potasio 10 gr Glicerina 20 ml Agua destilada 80 ml Disolver el KOH en agua, despus aadir la glicerina. Portaobjetos Caja petri Cubreobjetos Gasas Mechero Microscopio Pinzas y asa bacteriolgica

TCNICA: 1. Colocar la muestra sobre el portaobjetos. 2. Aadir una gota de KOH 3. Colocar un cubreobjetos y calentar pasando la flama por abajo del portaobjetos dos o tres veces. No hervir. 4. Dejar pasar 20 minutos para que la muestra se clarifique 5. Observar al microscopio.
El KOH aclara la muestra, al digerir los desechos proteinaceos, blanquea los pigmentos y afloja el material sin daar al hongo. Para todos los tipos de muestras las hifas se deben diferenciar de artefactos como fibras de algodn, lana, materiales sintticos, granos de almidn, gotas de grasa, cristales de colesterol, etc.

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RESULTADOS Y DIBUJOS:

CONCLUSIONES:

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PRACTICA # 19 CULTIVO DE LA MUESTRA PARA INVESTIGACION DE HONGOS. Las muestras llevan un proceso de cultivo en medios de cultivo especficos, entre los que podemos mencionar se encuentran: Agar Dextrosa de Sabouraud para hongos patgenos y contaminantes, Agar Micosel facilita el crecimiento de hongos patgenos en muestras de piel, uas y pelos, Agar BHI con sangre, Agar BHI con sangre + cicloheximida y cloramfenicol. TEMPERATURA DE INCUBACION: Los cultivos de hongos deben incubarse a 30 C. La temperatura ambiente de 25 C es aceptable, aunque algunos microorganismos se multiplican mas lento a esta temperatura. La temperatura de 37 C es til para el crecimiento de levaduras y conversin de la fase levaduriforme. TIEMPO DE INCUBACION: La tasa de crecimiento puede variar, dependiendo de condiciones tales como medios usados, temperatura de incubacin, o inhibidores en el especmen del paciente. Para disminuir el riesgo de reportes falsos negativos, conservar todos los cultivos al menos un mes antes de reportar los resultados y descartar los medios. SEMBRADO:

INCUBACION TIEMPO + TEMPERATURA

El objetivo de la prctica es un cultivo de hongos, no podremos realizarla con una muestra de uas, piel o pelo parasitados pues el tiempo que requiere el cultivo para desarrollar la colonia es muy prologado. Ya que el objetivo es conocer los componentes de un hongo, hifas, esporas, micelio etc., vamos a realizar el cultivo de un hongo contaminante del ambiente, por tal motivo se expondr una caja petr con Agar Saboureaud, abierta y a la intemperie, con el fin de que se depositen esporas contaminantes en el medio de cultivo y as se desarrollen las colonias. Los hongos del ambiente son ms rpidos en crecer. Como producto final de la prctica se revisaran las colonias y se anotaran las caractersticas bajo el seguimiento del examen del cultivo.

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EXAMEN DEL CULTIVO


Una vez que una colonia de hongos ha crecido, se debe observar su morfologa macroscpica, la cual puede ayudar a identificar al hongo. Sin embargo, esta morfologa puede variar entre las cepas, tiempos y temperaturas de incubacin, y medios de cultivo. En los hongos filamentosos, la identificacin final depende bsicamente de la morfologa microscpica. Para levaduras, las pruebas bioqumicas son muy importantes para la identificacin, con menos nfasis sobre la apariencia macro y microscpica.

1. Morfologa colonial (observacin macroscpica). Textura: Algodonosa o lanuda Aterciopelada Granular o polvorienta Glabrosa o creas. Rugosa, con surcos Umbonada, elevacin central como botn Verrucosa, con arrugas. Debe describirse tan especfico como sea posible, ambos lados Del cultivo reverso y anverso.

Topografa

Color:

2. Observacin microscpica. Hay tres procedimientos usados para examinar microscpicamente un cultivo. Tcnica de Cardaje Microcultivo Tcnica de Cinta adhesiva.

Describa la morfologa de la colonia en el tubo:

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PRACTICA # 20

MICROCULTIVO
Colocar un cuadro de 1 cm de PDA (papa dextrosa agar) sobre un portaobjetos. Usando tcnica asptica inocular una pequea porcin de la colonia fngica en cada lado del bloque de agar. Poner un cubreobjetos sobre el cuadrito de agar ya inoculado y presionar suavemente para asegurar un buen contacto entre el agar y el cubreobjetos. Para proporcionar humedad aadir 5 ml de agua destilada estril en el fondo de la placa petri, o humedecer una gasa con agua y depositarla en el fondo de la caja, sobre ella colocar el portaobjetos con el agar. Tapar la caja e incubar. Si toda el agua se evapora con el tiempo volver a poner agua. El hongo crecer sobre los lados del agar. Peridicamente examinar el cultivo en el portaobjetos al microscopio. Cuando el crecimiento sea ya evidente, quitar el cubreobjetos del cultivo. El bloque de agar descartarlo en formaldehdo 5%. Colocar el cubreobjetos sobre una gota de azul de algodn en un portaobjetos limpio. Aadir una gota de azul de algodn usado en el microcultivo y aadir un cubreobjetos limpio.

PDA (papa dextrosa agar)

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RESULTADOS Y DIBUJOS DE LAS OBSERVACIONES:

Conclusiones:

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A MIS ALUMNOS: Durante mi vida profesional he tratado de trasmitir en forma objetiva las bellezas de mi profesin, espero en este caso haber cumplido con la meta propuesta, cuyo fin es proporcionar a mis alumnos los conocimientos necesarios, para disponer de una herramienta adecuada que los apoye en el diagnstico de sus pacientes. Espero que este manual cumpla la misin para lo que fue diseado con tanto cario. Les deseo el mayor de los xitos en su vida profesional, y gracias por compartir este semestre conmigo. Los quiere:

Rosantina