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MECANISMOS DE REPARO DE LESES: A PRESERVAO DA INFORMAAO GENTICA O papel biolgico desempenhado pelas molculas de DNA exige que elas possuam duas propriedades fundamentais: (i) de auto-replicao e (ii) de preservao da informao gentica. Para que o contedo informacional do DNA seja preservado e corretamente transmitido de gerao em gerao, indispensvel que haja fidelidade na replicao semiconservativa e que existam mecanismos de reparo de modificaes estruturais produzidas no material gentico por agentes fsicos, qumicos e biolgicos. Erros na replicao semiconservativa podem ocorrer espontaneamente, mas so bastante raros, dada a existncia de mecanismos capazes de impedi-los ou corrigi-los. Durante a formao das novas cadeias polinucleotdicas, alm das diferenas de afinidades das bases nitrogenadas (formao preferencial de pares entre adenina-timina ou entre citosina-guanina, a atuao seletiva da DNA polimerase evita grande parte dos erros de pareamento devido a sua capacidade exonucleoltica (funo editorial)). Outros mecanismos podem se expressar aps a replicao, por meio de enzimas capazes de remover bases nitrogenadas incorretamente incorporadas cadeia ou de degradar segmentos nos quais tenham erros. Para tal, indispensvel distino entre as hlices neossintetizadas e as pr-existentes, o que depende dos diferentes graus de metilao existentes entre elas. Quando persistem erros de pareamento aps a replicao, algumas enzimas entram em ao. As protenas MutS e MutL reconhecem os erros de pareamento e a protena MutiH corta o DNA nas seqncias 5GATC3 no metiladas (ou novas). Posteriormente a DNA polimerase copia o novo o trecho retirado pelo sistema Mut. A atuao conjugada destes processos faz com que a probabilidade de ocorrncia e/ou persistncia de um erro de pareamento seja bastante reduzida, da ordem de grandeza de 10-10, ou seja. de um nucleotdeo indevidamente inserido para cada 1010 nucleotdeos. Uma base nitrogenada incorporada erroneamente acarreta alterao do contedo informacional transmissvel s geraes subseqentes, constituindo a mutagnese direta. REPARO DE LESES Diversos agentes fsicos ou qumicos do meio ambiente e mesmo componentes biolgicos podem promover modificaes estruturais na molcula de DNA, englobadas sob a designao genrica de leso, cuja persistncia representa um obstculo manuteno dos processos bioqumicos intracelulares regulares. Assim fcil entender a importncia dos mecanismos enzimticos que atuam restaurando a integridade do genoma ou criando vias que permitam clula tolerar as leses, isto , manter suas funes mesmo sem a eliminao dos danos provocados no DNA. A no funcionalidade dos mecanismos de reparao conduz inativao da clula aps o seu tratamento com o agente fsico ou qumico ou, eventualmente, pode ocorrer modificao do patrimnio gentico, isto . podem surgir mutaes. Mas nem sempre os mecanismos de reparo atuam corretamente. Em alguns casos eles podem promover o desaparecimento da leso, com alterao do contedo informacional, o que caracteriza a mutagnese indireta. Os mecanismos de reparao do DNA, em geral, so dependentes dos produtos de diversos genes e se caracterizam por possurem vrias etapas. possibilitando vias alternativas, muitas vezes coexistentes e competitivas. REVERSO DIRETA DAS LESES Alguns tipos de leses podem ser revertidos diretamente mediante a ao de uma nica enzima. que desfaz a leso produzida, restaurando a integridade da molcula de DNA. Como exemplos de mecanismos deste tipo de reparao podem ser citados a fotorreativao e a remoo de grupamentos alquil. FOTORREATIVAAO Entre os fotoprodutos formados pelas radiaes UV germicidas, os dmeros de pirimidinas so os mais freqentes. sendo os responsveis pela inativao celular. A fotorreativao consiste na eliminao de dmeros de pirimidinas mediante exposio das clulas previamente irradiadas com UV germicida a novas irradiaes com UV ou luz visvel. O processo mediado pela enzima de fotorreativao ou fotoliase, que tem a propriedade de combinar-se, mesmo em ausncia de luz, com DNA contendo dmeros de pirimidinas. Quando o complexo enzima-substrato iluminado, ele se dissocia, sendo liberados o DNA reparado e a enzima. esta podendo atuar em outros stios nos quais ainda existam dmeros. A fotoliase age rompendo a ligao ciclobutano entre duas pirimidinas. Os
LEITURA COMPLEMENTAR MECANISMOS DE REPARAAO E ALGUMAS DOENAS Em diversas doenas foi verificada a ocorrncia dr determinadas deficincias nos mecanismos de reparao de leses produzidas no DNA por agentes fsicos ou qumicos, devidas a erros hereditrios na sntese de uma ou mais enzimas. O xeroderma pigmentoso uma doena autossmica recessiva, que se caracteriza por elevada sensibilidade ao sol, hiperpigmentao, queratoses, grande incidncia de alguns tipos de cncer de pele, alm de freqentes alteraes da resposta imune, retardo mental, retardo no crescimento, etc. Clulas XP no reparam fotoleses por serem deficientes na endonuclease. Isso pode ser demostrado. Experimentalmente, adicionando a culturas destas clulas, a enzima codificada pelo gene denV do fago T4, o que toma possvel a evoluo normal do processo de exciso. Em alguns variantes da doena, o reparo por exciso normal, mas parece haver deficincia na reparao ps-replicativa, embora os sintomas clnicos sejam anlogos. A progeria ou sndrome de Hutchinson-Gilford caracteriza-se por envelhecimento bastante precoce, de tal forma que crianas portadoras desta doena aparentam se encontrar cm estado senil, sendo comum o aparecimento, na infncia, de sinais e sintomas devidos insuficincia coronariana. Foi proposto que, nestes pacientes, ocorreria impossibilidade de reparao de leses provocadas pelas radiaes ionizantes, sendo o envelhecimento acelerado pelos efeitos deletrios das radiaes ambientais, principalmente dos raios csmicos. Entretanto, esta hiptese ainda no foi confirmada A ataxia telangiectsica (AT) caracteriza-se por distrbios neurolgicos de origem cerebelar (dificuldades de coordenao motora, tremores, desordens da palavra, etc.), dilatao permanente dos capilares, arterolas e vnulas e deficincias imunolgicas. A incidncia de neoplasias bastante elevada, a morte ocorrendo. Usualmente, antes dos 20 anos de idade. Clulas de pacientes com esta doena so bastante sensveis s radiaes ionizantes e agentes alquilantes, o que tem sido interpretado como devido dificuldade para a reparao das roturas produzidas no DNA. Entretanto, o mecanismo ainda controvertido, pois as cinticas dos reparos por exciso e ps-replicativo parecem normais. A anemia de Fanconi caracteriza-se por severas deficincias na hematopoiese, mal-formaes sseas, retardo no crescimento e no desenvolvimento intelectual e pigmentao marrom da pele. A morte costuma ocorrer na infncia ou na adolescncia, muitas vezes por leucemia. Clulas de pacientes acometidos desta doena, embora aparentemente sejam proficientes em reparao ps-replicativa, so muito sensveis a agentes qumicos que provocam ligaes cruzadas, como por exemplo a mitomicina C. A sndrome de Bloom caracterizada por severos retardos no crescimento, eritema telangiectsico nas zonas expostas ao UV solar e elevada sensibilidade a esta radiao. As deficincias imunitrias e a alta incidncia de leucemias, so, quase sempre, as responsveis pela morte. O defeito no mecanismo de reparao ainda no foi identificado, embora clulas destes pacientes sejam muito sensveis a agentes alquilantes como o etil-metanossulfonato. A sndrome de Cockayne caracteriza-se por um desenvolvimento normal na infncia seguida de uma parada deste desenvolvimento fsico e mental, envelhecimento precoce e sensibilidade ao UV solar, embora no parea haver aumento da incidncia de neoplasias. As clulas destes pacientes so muito sensveis ao UV, embora o defeito nos mecanismos de reparao ainda no tenha sido detectado. interessante ressaltar que a incidncia destas doenas parece correlacionada com determinados grupos populacionais, uma vez que a ataxia telangiectsica freqente em Israel em judeus de origem marroquina, enquanto a sndrome de Bloom ocorre significativamente nos Estados Unidos, entre famlias judias oriundas de uma determinada regio da Ucrnia. Esses fatos favorecem a hiptese de que certos genes recessivos estariam relacionados com a potencialidade do desenvolvimento de uma dessas doenas.