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INDICAO MDICA DO EXAME A determinao da amilase em amostras de sangue, urina e outros lquidos biolgicos so testes teis no diagnstico da pancreatite aguda e suas complicaes. PRINCPIO A amostra incubada com um substrato de amido e a diminuio da cor azul, aps a adio de iodo, comparada com um controle, sendo proporcional atividade da amilase na amostra. AMOSTRA Preparo do paciente No necessrio preparo especial. Tipos de amostra Usar soro ou plasma (colhido em heparina), urina (colhida em intervalo de 2 a 24 horas) e lquidos (asctico, duodenal ou pleural). Amostras com citrato, EDTA ou oxalato no devem ser usadas porque estes anticoagulantes reduzem a atividade da amilase, produzindo resultados falsamente diminudos. Quando se determina a amilase na amostra de uma mico, deve-se tambm determinar a creatinina na mesma amostra. O resultado dever ser reportado como Relao Amilase/Creatinina (U/g), com o objetivo de compensar as variaes da atividade da amilase em amostras obtidas em cada mico. Armazenamento e estabilidade da amostra A atividade enzimtica estvel por 7 dias entre 15 25 C e por 2 meses entre 2 8 C. As amostras de urina devem ser armazenadas entre 2 8 C. No adicionar preservativos. Outros lquidos biolgicos tambm devem ser colhidos sem preservativo. Volume mnimo (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise) Volume ideal (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise) Critrios para rejeio da amostra Presena de hemlise ou sinais de contaminao bacteriana. Fazer referncia ao manual ou POP de colheita, separao e distribuio de material. PRODUTO UTILIZADO Amilase, Catlogo 11 ANVISA - 10009010044 Labtest Diagnstica Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 Lagoa Santa, MG, 33400-000 Substrato: Armazenar entre 2 8 C. Contm amido 0,4 g/L, tampo fosfato pH 7,0 e estabilizador. Reagente de Cor (Estoque): Armazenar entre 2 8 C. Contm iodato de potssio 16,7 mmol/L, iodeto de potssio 271 mmol/L e cido clordrico 112 mmol/L. Preparo do Reagente de Cor de Uso: transferir o contedo da ampola para o frasco vazio anexo, adicionar 45 mL de gua destilada ou deionizada e misturar. Estvel por 6 meses entre 2 8 C. Precaues e cuidados especiais

1. Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao do reagente. Fazer

referncia ao manual ou POP de segurana.

2. Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies indicadas so estveis at a

data de expirao impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos contaminao de natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da estabilidade. O laboratrio deve estabelecer a estabilidade em suas condies operacionais. 3. Pipetar o substrato com a boca, soprar no substrato, usar material contaminado com saliva e suor e conversar junto ao frasco destampado so aes que podem contaminar o reagente com quantidades microscpicas de saliva ou suor, capazes de deteriorar irreversivelmente o substrato. 4. Uma diminuio maior que 10% na absorbncia do controle, indica contaminao do substrato com saliva.

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EQUIPAMENTOS Procedimento manual 1. Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia em 660 nm ou filtro vermelho (620 a 700 nm). 2. Incubador ou banho-maria mantido a temperatura constante (37 C). 3. Pipetas para medir amostras e reagentes. 4. Cronmetro. Procedimento automatizado Indicar o nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento analtico; fazer referncia ao manual ou POP de procedimentos do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Enumerar as diferenas esperadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, nmero de catlogo), instrues de preparo e frequncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever o procedimento para definio dos limites de tolerncia, o sistema adotado para utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante de valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao manual ou POP de procedimentos para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controles e/ou reagentes Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e de reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle da qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. PROCEDIMENTO Para a dosagem na urina, ajustar para pH entre 7,0 e 7,4 usando carbonato de sdio slido quando o pH for menor que 7,0 e fosfato monopotssico slido quando for maior que 7,4. Procedimento manual 1. Tomar 2 tubos de ensaio e proceder como a seguir: Substrato (n 1) nvel dos reagentes nos tubos de ensaio. Amostra (cronometrados). Reagente de Cor de Uso gua destilada ou deionizada 0,5 mL 4,0 mL 0,5 mL 4,0 mL 0,01 mL ----Teste 0,5 mL Controle 0,5 mL

2. Colocar em banho-maria a 37 C durante 2 minutos. O nvel da gua no banho deve ser superior ao

3. Misturar e incubar em banho-maria a 37 C durante EXATAMENTE 7 minutos e 30 segundos

4. Misturar e esperar 5 minutos. 5. Determinar as absorbncias do teste e controle em 660 nm ou filtro vermelho (620 a 700 nm),
acertando o zero com gua destilada. A cor estvel por 30 minutos. Procedimento automatizado Fazer referncia ao manual ou POP de procedimentos do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico. Precaues e cuidados especiais 1. Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas estabelecidas de segurana. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana.

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A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao manual ou POP de procedimentos para limpeza e verificao da qualidade da limpeza dos materiais. 2. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes e usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos < 0,1 mg/L (gua tipo II). Para o enxge da vidraria a gua pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou condutividade 10 microsiemens. No enxge final utilizar gua tipo II. Quando a coluna deionizadora est com sua capacidade saturada ocorre a produo de gua alcalina com liberao de vrios ons, silicatos e substncias com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da gua. Fazer referncia ao manual ou POP de gua reagente. 3. Como ocorre com toda reao enzimtica, a rigorosa observao do tempo e da temperatura de incubao de grande importncia para a qualidade dos resultados obtidos. A diferena de 1 minuto no tempo de incubao, introduz um erro de 13,3% nos resultados. CLCULOS Ver Linearidade. Ac - At Amilase (Unidades/dL) = Ac Ac: Absorbncia do controle At: Absorbncia do teste Unidades/dL x V Amilase urinria (Unidades/hora) = H x 100 V: volume de urina em ml H: nmero de horas em que foi coletada a urina RESULTADOS Unidade de medida U/dL Valores de referncia Soro: 60 a 160 U/dL Urina: 50 a 140 U/hora Definio de Unidade: uma unidade igual quantidade de enzima que hidrolisa totalmente 10 mg de amido em 30 minutos a 37 C. Valores de referncia no so aplicveis aos outros lquidos biolgicos, uma vez que a presena de atividade da amilase, em qualquer quantidade, considerada anormal. Valores crticos Valores maiores que 3 vezes o limite superior de referncia indicam aumento considervel da atividade da amilase srica. Incluir o procedimento a ser adotado diante de um resultado crtico. LIMITAES DO PROCEDIMENTO Linearidade O resultado da medio linear at 400 U/dL. Para valores superiores diluir a amostra com NaCI 150 mmol/L e repetir a determinao. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. Diluir a amostra de tal modo que o valor encontrado se situe entre 80 e 320 U/dL. Indicar o procedimento de diluio utilizado no laboratrio. Interferncias 1- Valores de Bilirrubina acima de 5 mg/dL, Hemoglobina acima de 30 mg/dL e Triglicrides acima de 250 mg/dL produzem resultados falsamente diminudos. 2- Medicamentos colinrgicos, narcticos (morfina) e analgsicos anlogos, lcool e diurticos tiazdicos produzem resultados falsamente elevados da amilase srica. A presena de macroamilase na amostra de soro, que resultante da complexao da amilase com protenas de elevado peso molecular, tais como imunoglobulinas, pode produzir resultados falsamente elevados na ausncia de pancreatite. 3- Para reviso das formas fisiopatolgicas e medicamentosas de interferncia nos resultados e na metodologia, sugere-se consultar Clin Chem 1975; 21:1D-432D.

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SIGNIFICADO CLNICO A amilase sangunea provm de duas fontes principais: pncreas e glndulas salivares. Outras fontes potenciais de amilase srica so os rgos de reproduo e o fgado. A elevao da amilase srica no um achado especfico da pancreatite e causas no pancreticas de hiperamilasemia podem dificultar a interpretao dos resultados em alguns casos. Estes incluem leses inflamatrias envolvendo as glndulas salivares, tais como a parotidite epidmica, lcera pptica perfurada, envolvendo ou no o pncreas, infarto ou obstruo intestinal, colelitase, peritonite, apendicite aguda, cetoacidose diabtica, carcinoma extrapancretico (especialmente de esfago, pulmo e ovrio), gravidez ectpica rota, insuficincia renal e macro-amilasemia. Nesta ltima condio, a amilase no se encontra elevada na urina. A determinao da amilase srica e urinria so os testes mais teis para o diagnstico da pancreatite e em muitos casos a relao entre as depuraes da amilase e da creatinina pode ser til no diagnstico da pancreatite aguda e pancreatite recorrente. Neste caso, o valor da relao se encontra entre 7,0 e 15,0%. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Caraway WT. Am J Clin Path 1959;32:97. 2. Howe L, Elmslie, RG. Aust J Exp Med Sci. 1971;49:513. 3. Smith BW, Roe JH. J Biol Chem. 1949;179:53. 4. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada, 1972. 5. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. 6. Van Loon EJ, Likins MR, Seger AJ.Am J Clin Path 1952; 22:1134. 7. Westgard JO, Groth T. Clin Chem 1981; 27: 493-501. 8. Amilase, Instrues de Uso, Labtest Diagnstica. Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razo: Nmero Cpias Destino Assinatura Data ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___