yUNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO DEPARTAMENTO DE FARMACIA Y BIOQUMICA ANLISIS BIOQUMICO CLNICO PRACTICA N 3 HEMATOLOGIA

II 1. OBJETIVOS. Realizar el recuento diferencial de glbulos blancos segn Schilling. Realizar el recuento de glbulos rojos en la cmara de Neubauer. Realizar el recuento de glbulos blancos en la cmara de Neubauer. Determinacin de tiempo de sangra. Determinacin del tiempo de coagulacin. 2. GENERALIDADES 2.1 FORMULA LEUCOCITARIA. El hemograma normal traduce la normalidad anatomofisiolgica de los centros hematopoyticos y el equilibrio entre la produccin y destruccin entre los elementos figurados de la sangre. Su alteracin es la expresin de cambios fisiolgicos y patolgicos en el organismo. Los glbulos blancos de la sangre no son todos idnticos. Hay cinco formas diferentes segn el tamao, forma del ncleo, color de las granulaciones y del citoplasma, la frmula leucocitaria normal (%) es: Granulocito Eosinfilos 1-3 Granulocito Basfilos 0.5-1 Granulocito Neutrfilo con ncleo en cayado 0-4 Granulocito Neutrfilo segmentados 60-70 Linfocitos 20-30 Monocitos 4-6 MATERIAL. Un microscopio (ocular 10x, objetivo 100x; de inmersin). Aceite de inmersin. Frotis delgado de sangre de puncin capilar, puncin venosa, colorado con Wright. RECUENTO DIFERENCIAL. Como los granulocitos generalmente estn en los mrgenes del extendido y los linfocitos en el centro, el

conteo es mejor realizarlo por el mtodo de Schilling que consiste en tomar cuatro puntos marginales distintos recorriendo el campo en zigzag desde el borde hacia la parte central, contar 25 o 50 elementos en cada uno de los cuatro puntos, en total se completa a 100 elementos. En la actualidad existe un contador digital que tiene un contador especial, el fundamento de los contadores es el mismo, todos llegan hasta el 100%, tiene un contador de leucocitos y la cantidad de cada tipo, el registro es automtico, la desventaja es su costo es elevado. 2.2 RECUENTO GLOBULAR. MATERIAL. A. PIPETAS DE DILUCIN.- Como se indic en la gua anterior, con la diferencia que para glbulos rojos el tubo capilar corto tiene una marca de 11 para glbulos blancos, 101 en caso de los glbulos rojos. La capacidad de la pipeta para los glbulos rojos es 100 veces mayor que la de la parte graduada del tubo y contiene 101 volmenes desde el extremo a la marca 101 mientras que de los glbulos blancos es de 10 veces mayor. B. CAMARA CUENTAGLOBULOS.- La cmara ms usada actualmente es la clsica de Thoma y su modificacin de la Neubauer. Consiste en una lmina de vidrio grueso e incoloro, atravesando transversalmente por dos surcos que limitan tres porciones: una central, en la cual se encuentra el retculo y dos laterales, donde se apoya el cubreobjetos y cuya altura 0.1 mm. El cubre objetos se adhiere mediante ligera presin, la que se evidencia por la aparicin de los anillos de Newton. El retculo de Thoma tiene un cuadrado de 1mm lado o sea 1 mm, y est dividido 400 pequeos cuadrados en 16 porciones iguales de 1/400 mm de superficie reunidos en grupos, limitados por lneas triples que sirven de orientacin. Se usa para el recuento de glbulos rojos. Dada la altura de la cmara la 01 mm el volumen total, es 1/10 mm. La cmara de Neubauer tiene en su parte central el retculo de Thoma y adems en sus cuatro ngulos, sendas cmaras de idntica superficie y volumen, con un reticulado sencillo, que est dividido en 16 cuadrados mediados 1/10 m de superficie que se emplea para el recuento de glbulos blancos. C. LIQUIDOS DE DISOLUCIN.

D.

E.

Glbulos Rojos: El lquido diluyente debe ser isotnico para evitar las lisis y fragmentaciones. Entre los ms comunes est el de Hayem. b. Glbulos blancos: Se emplea el lquido de Turk. CARGADO DE CAMARA.- Una vez realizado el cargado de pipeta, se procede a cargar la cmara cuentaglbulos para lo cual la cmara debe estar bien limpia as como el cubre objetos y adherido perfectamente a las bandas longitudinales de apoyo, lo cual se comprueba por la aparicin de los anillos de Newton. Se agita la pipeta, se desecha las primeras gotas y se aplica la punta de aquella al borde de la cmara, se deja salir una pequea gota para cubrir toda la extensin y se procura evitar el rebasamiento en los surcos laterales, la cmara debe permanecer 2-3 posicin horizontal. RECUENTO. GLBULOS ROJOS. Se usa el objetivo seco de mayor aumento. Se cuenta los glbulos rojos en 80 cuadrados pequeos (o en 402, si se ha efectuado la dilucin 1:100) como estos se encuentran separados en grupos de 16, se deben computar en cinco grupos (uno del centro y cuatro que corresponde a cada vrtice). No deben contarse los glbulos que se hallan sobre la lnea inferior y derecha, pero s los de la lnea superior e izquierda. Al resultado se le aade cuatro ceros. Por ejemplo: si se trabaja con una dilucin 1:200 y en los 80 cuadrados pequeos se han encontrado un total de 490 glbulos, la cantidad total en 1 mm de sangre ser 4,900,000. GLBULOS BLANCOS.- Se debe usar un objetivo de poco aumento en la cmara de Neubauer se computan los elementos distribuidos en los cuatro cuadrados adicionales (cada cuadrado corresponde a un vrtice de la cmara 4 mm). Se debe obtener el promedio de elementos por 1 mm y se multiplica x 10 para calcular as la continuidad por mm de dilucin. Esta se multiplica por la dilucin lo que da el total de elementos por mm. Por ejemplo: si la dilucin es 1:20 y la cantidad de elementos contados es 30, multiplicando por 10 (altura de la cmara) y por 20 (ttulo de la dilucin), lo que equivale a multiplicar directamente por 200 se tendr 30 x 200 = 6.000 leucocitos por mm.

a.

2.3

2.4

TIEMPO DE SANGRIA. Esta prueba consiste en la determinacin de la duracin de la sangra procedente de una herida cutnea estandarizada. La prueba determina en vivo la capacidad plaquetaria para responder una lesin. Det. La accin combinada de la puncin capilar, nmero de plaquetas y capacidad de estas para adherirse a la pared de los vasos entre s. 2.3.1 METODO DE DUKE. MATERIAL. Lanceta descartable. Cronmetro. Papel filtro. Algodn. Desinfectante. 2.3.2 PROCEDIMIENTO. 1. Limpiar el lbulo de la oreja con algodn. 2. Practicar una pequea incisin en el lbulo de la oreja o pulpejo del dedo con una lanceta descartable una profundidad de 1 3 mm. 3. Cuando aparece la primera gota de sangre, secarla con el papel filtro. 4. Comenzar a secar con el papel filtro a intervalos de medio minuto hasta que se detiene la hemorragia. 5. Controlar el tiempo y anotar el resultado. VALORES NORMALES. El tiempo medio normal: 1 3 minutos. TIEMPO DE COAGULACIN. El tiempo de coagulacin de sangre completa, es el tiempo necesario para la formacin de un coagulo firme de sangre recin recogida en tubos de vidrio estandarizados a una temperatura de 37C; el tiempo de coagulacin es una medida de la integridad del sistema intrnseco. METODO DE LEE. Material Jeringa con aguja N 21. 3 tubos de ensayo del mismo tamao. Cronmetro. Bao mara a 37C. Alcohol. Algodn.

1. 2. 3. 4.

5.
6. 7.

PROCEDIMIENTO. Obtener 3 ml de sangre a partir de una venipuncin limpia. Poner en marcha el cronmetro en el momento en que la sangre penetra en la jeringa. Despus de retirada la aguja de la jeringa, introducir con cuidado 1 ml de sangre en tres tubos de vidrio marcados respectivamente 1, 2 y 3. Colocar los tubos en bao mara a 37C. Despus de 3-5 min inclinar el tubo a un ngulo de 45, cada 30 segundos hasta que la sangre se haya coagulado completamente. Registrar el tiempo necesario para la coagulacin de la sangre de cada tubo. Sacar un valor promedio cuando los tiempos de coagulacin de un tubo a otro varan mucho. VALORES NORMALES. Tiempo Normal de coagulacin: 5 15 minutos.

CUESTIONARIO. 1. Desarrolle de manera graficada todo el procedimiento de recuento de glbulos blancos y glbulos rojos, as mismo grafique la Cmara de Neubauer, con los retculos y seale las cuadrculas par la lectura de G. rojos y para los de G blancos 2. Grafique las anomalas presentadas en un frotis de las siguientes enfermedades hematolgicas 5 de la serie roja y 5 de la serie blanca: Anemia macroctica Leucemia ( por lo menos de 3 tipos) Que es el INR, y como se determinan las pruebas de hemostasia en pacientes que toman anticoagulantes, cules seran sus valores normales, en stos casos 4. En que patologas se haya aumentado y disminudos el tiempo de sangra y en cules el tiempo de coagulacin. Seale al menos 5 de cada uno AUMENTADOS Tiempos anormales prolongados son compatibles con: prpura; enfermedades del
hgado; deficiencias de factores de la coagulacin; coagulacin intravascular diseminada; anemia hemoltica del recin nacido; linfoma; Leucemia aguda.

3.

5.

Realice grficamente el procedimiento para la determinacin de la velocidad de sedimentacin y su significancia clnica. REVISAR: http://www.normon.es/media/manual_8/capitulo_02.pdf http://es.scribd.com/doc/6774981/03-SANGRE01