Informe de microscopia Resumen El microscopio nos permite apreciar objetos que son demasiado pequeos para ser observados

a simple vista. Con el fin de observar la utilidad y propiedades del microscopio, adems de aprender tcnicas de microscopia, se observaron una serie de objetos y se enfocaron a diferentes magnificaciones para su descripcin. El primer objeto observado fue una laminilla con la letra e con la cual comprobamos la inversin de la imagen, se enfoco con el objetivo de rastreo (4x), se movi la platina en las cuatro direcciones mientras se observaba el movimiento contrario a travs de los oculares, luego se enfoco con el objetivo de 10x y se observo una magnificacin significativa de la imagen la, luego se enfoco con el objetivo de 40x con el que se magnifico en gran medida. El segundo objeto observado fue una laminilla con tres hilos de colores cruzados con el objetivo de observar la profundidad de foco; se enfoco con el objetivo de 10x, arrojando resultados positivos. El tercer objeto observado fue agua estancada con dos tcnicas diferentes; la primera fue la tcnica del montaje (frotis) hmedo, se enfoco con el objetivo 40x observndose microorganismos vivos, la segunda tcnica utilizada fue la tecnica de la gota colgante; se enfoco con el objetivo de 40x observndose microorganismos vivos en movimiento. el cuarto objeto observado fue una laminilla con una preparacin de sangre humana, se enfoco con el objetivo de 40x, Luego se enfoco con el objetivo de 100 x observndose aumento en los detalles observados. El quinto objeto observado fue una laminilla con una preparacin de euglena, se enfoco con el objetivo de 40x, Luego se enfoco con el objetivo de 100 x observndose aumento en los detalles observados. El sexto objeto observado fue una laminilla con una preparacin de basilos, se enfoco con el objetivo de 40x, Luego se enfoco con el objetivo de 100 x observndose diferencias significativas en los detalles observados . el sptimo, octavo y noveno objetos observados fueron una abeja, un centavo, fueron observados en el estereoscopio, en ambos se apreciaron claramente diferentes cualidades difciles de ver a simple vista. Todos nuestros resultados mostraron, con el uso del microscopio, una magnificacin de las imgenes, directamente proporcional al nmero de x del lente objetivo utilizado, en las cuales se apreciaron detalles que a simple vistas no fueron discernibles. Dado los resultados quedo comprobada la importancia del microscopio y el uso de las tcnicas adecuadas, a la hora de observar objetos o detalles de estos que a simple vista no se ven.

Introduccin: Algunos organismos pueden observarse a simple vista, sin embargo muchos organismos vivientes o sus componentes son muy pequeos para ser observados a simple vista. Por tal razn, existe una serie de hallazgos biolgicos que se han realizado gracias a la invencin del microscopio. El microscopio es un instrumento que se compone de un sistema de lentes cncavos y convexos que enfocan la luz que pasa a travs de un espcimen, produciendo una imagen magnificada. Adems de los lentes, el microscopio tiene un sistema para iluminar el objeto examinado.(1) No podemos referirnos al microscopio sin mencionar a tres grandes cientficos de la fsica. Es probable que gracias a sus contribuciones se haya inventado el microscopio, en orden cronolgico fueron: johanes Kepler (1571-1630), Galileo Galilei (1564-1642), zacharias janssen (1588-1638) y Christian Huygens (1629- 1695), a los que podran sumarse otros nombres, ya que el invento de este aparato no se le atribuye a alguien en particular. Fundamentalmente existen dos tipos de microscopios: el simple y el compuesto El microscopio simple consta solo de una lente biconvexa o plano convexa, con montura o sin ella. Tambin conocida con el nombre de lupa, que comnmente proporciona una amplificacin moderada del objeto. La construccin del primer microscopio compuesto, el microscopio ptico, fue en 1590 y se le atribuye a zacarias janssen y a su sobrino H. janssen. Posteriormente, en el siglo XVII, se inicia una serie de modificaciones tanto en la mecnica como en la ptica de los microscopios y surge el microscopio de Robert Hooke en 1665, el cual tena una bola de vidrio como condensador de la luz que emita una lmpara de aceite, en 1681 Huygens inventa un ocular para telescopio que, posteriormente se adapt al microscopio ptico. Muchos han sido los cambios que en el transcurso del tiempo ha sufrido el microscopio ptico. Por ejemplo, hasta la fecha se han construido microscopios que usan rayos X, luz ultravioleta, de fluorescencia, de cmara oscura, ultrasonido, microscopio fotonico, entre otros. (2) El microscopio ptico (compuesto): Los primeros microscopios utilizados por los cientficos del renacimiento y los que se usaron en el laboratorio para nuestro experimento eran microscopios pticos. La luz visible atraviesa el preparado y luego las lentes de vidrio. La lente refracta (desva) la luz de manera que la imagen del espcimen se magnifica cuando se proyecta hacia el ojo, sobre una pelcula fotogrfica o hacia una pantalla de video. (3)

Las partes ms importantes de un microscopio de luz son: Brazo: sostiene el cabezal y constituye el cuerpo del microscopio Base: sostiene el microscopio en posicin vertical. Cabezal: contiene prismas o espejos que dirigen la imagen al lente ocular lente ocular: lente ubicada en el tubo del cabezal, cerca del ojo del operador del microscopio. Magnifica la imagen 10 veces. Existen microscopios monoculares, binoculares y trinoculares. Lente objetivo: localizado en el revlver es el lente ms cercano al objeto que se observa, la mayora de microscopios tienen varios tipos de lentes con capacidad de magnificar la imagen de 4 a 100 veces. Revolver: sostiene a los lentes objetivos. Plataforma platina: apoya la laminilla, tiene un orificio en el centro que permite el paso de la luz que eliminar el objeto estudiado. Tornillo micromtrico y tornillo micromtrico: mueven la plataforma para lograr el enfoque. Diafragma: localizado bajo la plataforma y controlado por una palanca, se utiliza para controlar el paso de luz hacia el espcimen bajo estudio. Condensador: lente localizado bajo el diafragma concentra la luz sobre el objeto de estudio. Fuente de luz: bombilla localizada en la base del microscopio. (1)

Microscopio estereoscpico: Tambin conocido como microscopio de diseccin o estereomicroscopio, el microscopio estereoscpico en realidad se trata de un microscopio compuesto doble, que es binocular estereoscpico porque en estos aparatos las imgenes conservan los relieves que pueden observarse simultneamente con los dos ojos. El aumento que normalmente se obtiene es poco, pero con aditamentos especiales como el aumento zoom, se llegan a alcanzar aumentos de 200 veces en promedio. A este microscopio se le conoce como microscopio de diseccin, porque no solo se utiliza para observar cierto tipo de objetos, sino que tambin pueden efectuarse microdisecciones sobre la platina.(3) Otros tipos de microscopios Dos caractersticas de un microscopio que determinan cuan claramente puede verse un objeto pequeo son la amplificacin y la resolucin. La amplificacin del instrumento es la proporcin del tamao de la imagen observada con el

microscopio con respecto al tamao real del objeto. Los mejores microscpicos pticos por lo general amplifican un objeto no ms de 1 000 veces. El poder de resolucin, es la capacidad de distinguir detalles finos en una imagen. Se define como la distancia mnima entre dos puntos a la que ambos pueden distinguirse por separado, en lugar de ser apreciados como un solo punto borroso. El poder de resolucin depende de la calidad de las lentes y la longitud de onda de la luz que ilumina: cuanto menor sea esta longitud de onda, tanto mayor la resolucin. La luz visible que se utiliza en el microscopio ptico tiene longitud de onda de 400 (luz roja) a 700 (luz violeta) lo que limita la resolucin de tales instrumentos a detalles no menores que el dimetro de una clula bacteriana (aprox. 1 m). (4) Adems del microscopio compuesto comn, tambin conocido como microscopio ptico, existen otros tipos de microscopios utilizados en trabajos biolgicos especializados como: de contrate de fases, de polarizacin, de fluorescencia, invertido, de investigacin, de cmara oscura, etctera, y un microscopio especial llamado electrnico. (2) Microscopio electrnico La mayor parte de las estructuras subcelulares, los orgnulos, son demasiados pequeos para la resolucin del microscopio ptico. Con el microscopio electrnico se puede alcanzar tericamente una resolucin de 2 nm: representa una mejora de cien veces con respecto al microscopio ptico. (3) El microscopio electrnico tiene prcticamente el mismo fundamento terico que el microscopio ptico, pero en lugar de trabajar con rayos luminosos como lo hace el microscopio ptico, trabaja con haces de electrones que se enfocan con campos magnticos. El microscopio electrnico de barrido (MEB) sirve para examinar la superficie de los objetos. Produce imgenes de gran aumento (ms de cien mil veces) y muestra la forma real de los objetos. Adems de mostrar increbles figuras, el microscopio electrnico investigador muestra detalles que pueden ser de vital importancia para cientficos en muchas reas, como la medicina. Trabaja examinando la superficie de un objeto con un delgado haz electrnico. El microscopio electrnico de transmisin (MET) trabaja iluminando, un ejemplar en la platina con un haz de electrones y enfocando y aumentando la imagen con lentes magnticas. Esta imagen electrnica, que es invisible, se transforma en una imagen normal, visible mediante una pantalla especial. (2)

Materiales y mtodos: Para la realizacin de este experimento se utilizaron: una laminilla con la letra e fijada, una laminilla con hilos coloreados fijados, una laminilla con preparacin de sangre humana fijada, una laminilla con preparacin de bacillius fijada, una laminilla con preparacin de euglena fijada, una laminilla, un cubre objeto, una laminilla de depresin, un poco de vaselina, dos pipetas Pasteur, agua estancada, una abeja, una moneda de un centavo, una hebra de cabello, un microscopio ptico y un microscopio de diseccin. Primero; se observ en el microscopio, con el lente objetivo de 4x, la laminilla con la letra e, colocada en la platina en la misma direccin que se observ a simple vista, se observ a travs de los lentes oculares y se anoto lo observado, se movi la platina en las cuatro direcciones mientras se observ travs del microscopio, anotndose lo observado en cuanto a la direccin del movimiento del objeto. Se enfoco la letra e con el objetivo de 10x y luego con el de 40x, anotando lo observado y describiendo la diferencia. Segundo; se observ al microscopio con el objetivo de 10x una laminilla con hilos de diferentes colores cruzados en el centro uno encima de otro, se determin el orden de estos en la laminilla y se anot lo observado. Tercero: se transfiri con una pipeta de Pasteur una gota de agua estancada a una laminilla, le colocamos un cubre objeto, se examin con el objetivo de 10x y el de 40x, y se dibujara y describir lo observado con ambos objetivos. Luego utilizando una laminilla de depresin, se colocara una gota de agua estancada en el centro de un cubreobjetos, con un palillo se le colocara una cantidad mnima de vaselina sobre los cuatro bordes del cubreobjetos, se colocara la laminilla de depresin invertida sobre la vaselina sin tocar la gota, se invertir rpidamente la laminilla y se examinara con el objetivo de 10x y el de 40x, luego se dibuj y describi lo observado con ambos objetivos. Cuarto; se observaron por separado una laminilla con preparacin de sangre humana, una laminilla con preparacin de bacillius, una laminilla con preparacin de euglena, utilizando el objetivo de 40x y el de 100x en cada una, se dibuj y describi lo observado. Quinto; se utiliz el microscopio de diseccin para observar una abeja, un centavo y una hebra de cabello humano, se observ y se anotaron los detalles.

Resultados: En el primer experimento (observacin de la letra e) cuando se observ con el objetivo de rastreo los resultados fueron los siguientes: se comprob la inversin, al ver la imagen a travs los oculares esta se observ invertida , luego al mover la platina hacia un lado se observ el movimiento contrario a travs de los oculares(fig. 1)

Luego observamos la misma letra e usando el objetivo de 10x, con el cual se vio la letra aun mas magnificada abarcando casi todo el campo visible, al cambiar el objetivo a 40x la letra se magnific aun mas observndose solo una parte de esta. (fig.2)

En el segundo experimento, al observar la laminilla fija con tres hilos de colores (amarillo, rojo y azul) cruzados, los resultados fueron los siguientes: usando el objetivo de 10x, se aprecio como se distingua el orden en el que estos se

encontraban en la laminilla, observndose claramente la forma tridimensional del objeto y por lo tanto la profundidad de foco para este objetivo. En el tercer experimento al observar, la gota de agua estancada preparada con la tcnica del montaje (frotis) hmedo, enfocada a 400x visualizamos residuos de material orgnico y microorganismos (aparentemente artrpodos) haciendo algunos movimientos. Con lo que comprobamos la utilidad de esta tcnica para examinar material vivo (fig. 3-a). Luego al utilizar una gota de la misma agua estancada pero preparada con la tcnica de la gota colgante, enfocada a 400x, visualizamos algunos residuos orgnicos y microorganismos igual que con la tcnica usada anteriormente, pero esta vez se observo un movimiento activo de dichos microorganismo, demostrndose as la utilidad de esta tcnica para observar material vivo y sus movimientos (fig. 3-b).

Fig. 3: gota de agua estancada vista en el microscopio a 400x; a. preparada mediante tcnica de montaje (frotis) hmedo; b. preparada mediante tcnica de gota colgante. Las flechas intermitentes indican movimientos realizados por microorganismos en la muestras.

En el cuarto experimento al observar las tres laminillas ya preparadas, con magnificaciones de 400x y 1000x los resultados fueron los siguientes (cuadro 1): Al observar la laminilla con preparacin de sangre humana enfocada a 400x visualizamos glbulos rojos y leucocitos no clasificables. Al enfocarla a 1000x los glbulos rojos se magnificaron, al igual que los leucocitos a los cuales con este aumento les pudimos ver sus ncleos trilobulados resultando ser neutrofilos, adems se observaron plaquetas que a 400x no se pudieron ver. Al observar la laminilla con la preparacin de bacilos enfocada a 400x visualizamos areas oscuras con bordes irregulares sobre un fondo claro no pudiendo distinguirse que conformaba el rea oscura. Al enfocarla a 1000x se pudieron identificar bacilos de color oscuro organizados en cadenas.

Al observar la laminilla con la preparacin de euglena enfocada a 400x visualizamos varios especmenes de euglena dispersos en la muestra. Al enfocarla a 1000x solo visualizamos dos especmenes uno macho y el otro hembra, pero esta vez con ms detalles pudiendo distinguir orgnulos como el ncleo, vacuola, flagelo y cloroplasto en ambos especmenes. Nombre de la muestra Vista a 400x Vista a 1000x

Sangre humana

bacillus

euglena

cuadro. 1: representacin de tres laminillas con preparaciones fijadas, una de sangre humana, una de bacillus y una euglena, vistas a 400x y a 1000 x, donde se aprecian las diferencias entres las dos magnificaciones de cada una.

En el quinto experimento al observar una abeja, un centavo y una hebra de cabello a travs del microscopio de diseccin los resultados fueron los siguientes:

Al utilizar el microscopio de diseccin se pudieron observar detalles que a simple vista no fueron posible apreciar, adems se observo que el aumento de este tipo de microscopio es menor que el usado para los dems experimentos pero a diferencia de este las imgenes se observa ms ntidas en su forma tridimensional comprobndose su utilidad para examinar especmenes pequeos (no microscpicos) y sus caractersticas fsicas (figs. 5 y 6).

Fig. 4: centavo observado a travs de un estereoscopio.

Discusin: El uso del microscopio fue efectivo para observar objetos y detalles que a simple vista serian imposible de divisar, lo cual confirma que este es un instrumento de gran utilidad a la hora de observar o investigar procesos biolgicos microscpicos. En todos los experimentos fue necesario tener conocimientos sobre el uso correcto del aparato y tcnicas de preparacin para obtener imgenes ptimas dentro de las capacidades de este, los que nos indica la influencia del adiestramiento del observador sobre los resultados de este tipo de experimentos. Pudimos observar diferencias en la capacidad de magnificacin entre los dos tipos de microscopios utilizados, evidenciando la utilidad de cada uno dependiendo del objeto en estudio.

Conclusin: Luego de proceder con el experimento de observar siete (7) objetos diferentes con el microscopio ptico estndar y tres (3) con el estereoscopio o

microscopio de diseccin, utilizar diferentes tcnica de preparacin y observar los mismos objetos a diferentes magnificaciones, adems de haber investigado sobre el origen de este aparato. Podemos decir que el uso del microscopio es efectivo aadiendo una ms amplia perspectiva al estudio de la vida, al permitir la observacin de organismos vivientes o componentes de estos, que son muy pequeos para ser observados a simple vista. Posteriormente a utilizar laminillas con preparaciones fijadas y la minillas con preparaciones hmedas y hacer la comparacin entre ambas podemos concluir que dependiendo el tipo de cualidad (forma, movilidad, partes, etc.) que se vaya a observar debe ser el tipo de preparacin. Tambin al comparar los dos tipos de microscopios utilizados y los objetos observados en cada uno, concluimos que el microscopio ptico estndar es til a la hora de observar detalles a nivel celular y de microorganismos microscpicos, mientras que el estereoscopio cobra utilidad al observar objetos menos pequeos como por ejemplo insectos.

Referencias: 1. GONZLEZ, Livier. DE JESUS, Gadier. TORRES, Ernesto. FBREGAS, Lynnette. BRITO, Rosa. Manual de laboratorio del curso de destrezas 1 tercera edicin. Universidad Interamericana de Puerto Rico 2008.: 46-48p 2. DE LOS ANGELES, M. FUERTES, G. Biologia 1 segunda edicin. Pearson Educacion de mexico S.A. 2004.: 28-34p 3. CAMPBELL, NA and JB REECE. Biology 7th ed. Benjamings cummings. Menlo park, California, USA. 2005.: 95p 4. SOLOMON, Elbra P. BERG, Linda R. MARTIN, Dianan W. Biology 5th ed. Saunder college publishing. Philadelphia, Pennsylvania, USA. 1999.:76-77p