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MICROSCOPA
I. OBJETIVOS En esta experiencia se dar a conocer todas las partes del microscopio compuesto, para adquirir destreza en la utilizacin de este equipo, as como su mantenimiento y sus debidas precauciones al manipularlo. II. FUNDAMENTO TERICO Microscopa Microscopa es el conjunto de tcnicas y mtodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeez estn fuera del rango de resolucin del ojo normal. Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopa, el uso del mismo requiere para producir las imgenes adecuadas, de todo un conjunto de mtodos y tcnicas afines pero extrnsecas al aparato. Algunas de ellas son, tcnicas de preparacin y manejo de los objetos de estudio, tcnicas de salida, procesamiento, interpretacin y registro de imgenes, etc. La microscopa generalmente implica la difraccin, reflexin o refraccin de algn tipo de radiacin incidente en el sujeto de estudio. El microscopio El microscopio (de micro-, , pequeo, y scopio, , observar) es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin. Partes del microscopio compuesto:

Fig.1 Partes del microscopio

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Sistema ptico

Ocular: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo. Objetivo: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta. Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Sistema mecnico

Soporte: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. Platina: Lugar donde se deposita la preparacin. Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular,etc. Revlver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. Tornillos de enfoque: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que consigue el enfoque correcto. Tcnicas de tincin El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente, aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehido, cidos y alcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el colorante, no se producen ulteriores cambios estructurales en el protoplasma. La fijacin se realiza habitualmente en clulas que han sido fijadas sobre un portaobjetos tratando despus ste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tincin. La fijacin produce habitualmente el encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las clulas que han sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin.

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La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas cargadas negativameute (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos colorantes aninicos incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos de la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las gotculas o depstos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn. Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente hbitual es el cido tnco. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de ta1 modo que ahora spodr atacar el colorante.
F IG. 2 TINCIN DE GRAM

La tincin negativa es el reverso del procedimiento de tincin usual: las clulas se dejan sin teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las clulas, tal como la tinta china (que es una suspensin de partculas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua). La tincin negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las clulas en la microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas. Las molculas de colorante forman en ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras celulares autnticas, pero que son formaciones completamente artificiales inducidas por el mismo colorante. Tales estructuras

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se denominan artefactos, y deben tomarse muchas precauciones para tener la seguridad de que no nos estamos equivocando al creer que un artefacto es una estructura realmente existente. III. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Antes de usar el microscopio, verifique que los oculares y los objetivos estn limpios.

Fig.3 Microscopio compuesto

Para realizar preparaciones microscpicas los porta. y cubre-objetos se limpian antes de usarse. Un buen mtodo es guardarlos en alcohol y antes de utilizarlos secarlos con un pao limpio y libre de grasa. Los cubre-objetos deben limpiarse con mucho cuidado porque son frgiles.

Fig.4 Porta y cubre objetos limpios

Se preparan las muestras ms finas posibles, en esta experiencia se us un cabello negro, un cabello marrn oscuro, algodn, papel tisu,pabilo y papel aluminio.

Fig.5 Muestras listas para ser llevadas a la pletina del microscopio

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Enchufe el microscopio, prenda el iluminador y ajuste la intensidad de luz a un nivel cmodo y segn a que objetivo est utilizando. Coloque el portaobjetos en la platina con el lente objetivo de 4x (el de menor aumento) en posicin vertical. Abra el gancho de la platina mecnica, monte el portaobjetos en el centro sin tocar el lente objetivo (para enfocar una preparacin microscpica se debe bajar la platina completamente y colocar el objetivo de menos aumento en posicin de empleo) .Es importante comenzar siempre la observacin con el objetivo de 4X. Esto permite seleccionar el rea ms adecuada del portaobjetos para su posterior observacin del portaobjetos y sujtela con la pinza metlica. Use el tornillo macromtrico para subir la platina hasta la posicin ms alta. Mirando por los lentes oculares, use el tornillo macromtrico para bajar la platina hasta que el objeto quede en foco. Use el tornillo micromtrico para obtener una imagen en perfecto foco. Cierre el ojo derecho y gire el ajuste del lente ocular izquierdo hasta obtener una imagen perfectamente enfocada. Al igual que la distancia interpupilar, este ajuste debe hacerse al comienzo de cada laboratorio. Observe el portaobjetos. Para ver ms detalles, cambie al lente objetivo de 10x y luego al de 40x, ajustando el foco solamente con el tornillo micromtrico. El espcimen debe mantenerse en el centro del campo de visin. Despus de cambiar el lente objetivo, aumente ligeramente la intensidad del iluminador (los lentes objetivos de mayor aumento requieren mayor apertura del diafragma y mayor intensidad de iluminacin). Cuando se termine de utilizar el microscopio, primero se vuelve a ubicar el objetivo de 4X, luego se apaga el equipo, y se traslada siempre sujetando de la base y el brazo del microscopio para luego guardarlo en un lugar seco. OBSERVACIONES La cantidad de luz seleccionada para cada objetivo fue la adecuada ya que en las imgenes se observ diferencia de colores en el caso de los cabellos y una coloracin oscura para las fibras del algodn, pabilo y papel tisu as como los espacios vacos entre dichas fibras. Para el mejor manejo del microscopio tenemos que tener en cuenta el grado de iluminacin, si el objetivo es de 4X-10X se utiliza una iluminacin de 3.5 y si fuera de 40X-100X se utiliza una iluminacin de 5. Debemos tener en cuenta que a travs del microscopio solamente se pueden observar objetos que dejan pasar rayos de luz, por esta razn el preparado

IV.

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debe ser lo ms delgado y transparente posible, pues un preparado grueso solo nos permite observar una mancha negra. V. RESULTADOS Al poner un cabello bajo el lente del objetivo 4X, se observa una imagen total de la muestra pero cuanto ms aumentamos el dimetro del objetivo se aprecia una parte de la muestra segn donde la enfoquemos.

Fig.6 Cabello marrn y negro

En el algodn las fibras se vean como hilos ligeramente entrelazados y en poca cantidad.

Fig.7 Muestra de algodn

Las fibras del papel tisu se observaron en mayor cantidad y entrelazadas.

Fig.8 Muestra de papel tisu

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En el pabilo las fibras estaban mucho mas unidas y en una cantidad mucho mayor que en los dos casos anteriores.

Fig.3 Muestra de pabilo

Al observarse el papel de aluminio bajo el microscopio se pudo ver una superficie compacta de color negro con rajaduras y rayones en la superficie.

Fig.3 Muestra de papel aluminio

VI.

CONCLUSIONES Una de las causas principales de una imagen borrosa y poco definida es la presencia de sucio en los lentes, especialmente polvo, huellas digitales y depsitos grasosos dejados por el roce de las pestaas con los lentes oculares. La fibra del algodn es como una cinta conformada por hebras muy finas, estirada y retorcida. La fibra se observa aparentemente de forma casi cilndrica. Est compuesto a base molculas de celulosa, con la estructura molecular tpica de sta. Un cabello al microscopio se asemeja a una hebra de lana, en donde superficialmente se aprecia una continuidad de escamas nfimas (las

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"cutculas") determinan el brillo e intensidad de color que se percibe a ojo humano. Esto sucede siempre y cuando las escamas se encuentren ordenadas paralelamente al cabello, e ntegras. Cuando el cabello se halla desnutrido y/o maltratado, estas escamas sufren un deterioro que produce el efecto de cabello opaco, adems de que queda desprotegido, y por ende es ms factible de ser quebradizo y esto a travs del microscopio se manifiesta en forma de discontinuidades al borde del cabello. El pabilo se aprecia con una extrema cantidad fibras, a comparacin de las otras dos, que son ms resistentes porque estn estrechamente entrelazadas. Los mtodos de tincin son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con precaucin, ya que pueden conducir a errores. Si la muestra es iluminada de manera inadecuada, la calidad de la imagen que se obtiene se ver afectada, aun cuando se disponga de un excelente sistema ptico. CUESTIONARIO 1.-Cul es la diferencia entre el numero de aumentos y lmite de resolucin de un microscopio? El aumento de un instrumento ptico permite conocer hasta cuantas veces ms grande se puede observar un objeto dado, mientras el poder de resolucin hace referencia a la capacidad del instrumento ptico para diferenciar dos puntos entre si; es decir, un instrumento puede aumentar una imagen si es que en ella se puede reconocer figura alguna (una imagen aumentada pero distorsionada), pero si a ello se le suma un cierto poder de resolucin, el instrumento adems de aumentar un objeto permite verlo con muchas nitidez y claridad. 2.-Diferencia entre un microscopio de barrido y compuesto. Un microscopio compuesto es un microscopio ptico que tiene ms de una lente de objetivo. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. Mientras que el microscopio de barrido permite la observacin de clulas enteras, sin necesidad de cortes finos de forma que aparecen los relieves originales y las superficies externas, Alcanzan entre 1.000 y 10.000aumentos.

VII.

VIII.

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IX.

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"El reto consista en desarrollar un dispositivo barato y duradero con una batera de larga duracin", seala David Breslauer, estudiante de postgrado del laboratorio de Fletcher. El coste total del primer prototipo, construido a partir de piezas estndar, fue de $75 (48,6). La versin actual incluye su propia iluminacin de la muestra gracias a baratos LEDs de bajo consumo. El dispositivo se encuentra disponible en dos versiones: con un aumento de unas 5 veces, para obtener imgenes de lunares y erupciones; y con un aumento de unas 60 veces, para captar detalles de clulas sanguneas y parsitos. El modelo de mayor aumento tiene el tamao y la forma de un tubo de monedas de 25 centavos. Fletcher planea probar el telfono mvil microscopio en Uganda este verano. En un principio, su laboratorio fabricar prototipos, pero finalmente, entregar el diseo a un fabricante. El Blum Center forDevelopingEconomies de Berkeley, que proporcion la financiacin inicial para la investigacin, ayudar a probar el dispositivo en Kampala. El plan consiste en formar al personal local y proporcionarles el equipo necesario para obtener imgenes de la sangre de los pacientes con el fin de enviarlas, posteriormente, a los especialistas capaces de identificar los parsitos de la malaria. Los investigadores esperan colaborar tambin con un programa de telemedicina de la Universidad de California, Davis, desarrollado en las zonas rurales de California. Los pacientes con leucemia de zonas remotas podran utilizar el telfono microscopio para obtener imgenes de su sangre y transmitirlas a un centro especializado para realizar el recuento de glbulos blancos. Recomendanciones: Nunca hay que tocar nunca los lentes con los dedos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de lente seco y frtelo muy suavemente con el papel de lente No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina, revlver y condensador). El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular. Se debe de centrar bien el objetivo para poder tener una ntida observacin ya que si no es correcto se tiene una imagen borrosa y no se ve lo que se desea estudiar. Todo ello gracias a los tornillos macromtrico y micromtrico.