Cuaderno de Precticas de Cia y Farmacocinetica

Dpto.
FARMACIA Y TECNOLOGA FARMACEUTICA FACULTAD DE FARMACIA

UNIVERSIDAD DE ALCALA
CUADERNO DE PRACTICAS
BIOFARMACIA y FARMACOCINTICA
Apellidos ........................................................... Nombre ........................... Curso / Grupo ................/.............
NDICE Pg. Experimentacin en animales. Principios ticos Estudio farmacocintico del Rojo Fenol en rata Administracin intravenosa Administracin intraperitoneal Aplicacin del mtodo de Doluisio a la absorcin de sulfonamidas Simulacin in vitro de un modelo farmacocintico Monocompartimental. Administracin intravenosa rpida (bolus) Ensayo N 1. Simulacin de datos plasmticos Ensayo N 2. Simulacin de datos de orina Administracin extravascular Ensayo N 3. Simulacin de datos plasmticos Ensayo N 4. Simulacin de datos de orina Administracin intravenosa en perfusin Ensayo N 5. Simulacin de datos plasmticos Ensayo comparativo de cesin in vitro Enseanza asistida por ordenador Introduccin a la Farmacocintica Curso de Biofarmacia Simulacin de datos farmacocinticos Ajuste de datos farmacocinticos mediante un programa de regresin no lineal Datos Grupos I al VII 49 51 54 58 63 1 3 7 13 17 23 25 25 29 33 33 37 41 41 47
Protocolos de Experimentacin animal: Normas ticas
EXPERIMENTACIN EN ANIMALES
El empleo de animales en la experimentacin es clave en el avance de las ciencias biomdicas y biolgicas. Con esas investigaciones se ha logrado adquirir un profundo conocimiento de las caractersticas de los seres vivos y de su fisiologa, que resulta imprescindible para poder disear, estudiar y ensayar nuevos frmacos. El Comit Nacional del ICLAS (International Council for Laboratory Animal Science)/CSIC (consejo Superior de Investiagaciones Cientificas) ha redacto hace algn tiempo los siguientes: Principios ticos de la Experimentacin Animal Principios bsicos Artculo 1. Los progresos del conocimiento humano son necesarios y, sobre todo, los de la biologa, la medicina del hombre y de los animales. Artculo 2. El hombre tiene necesidad de utilizar al animal en la bsqueda del conocimiento humano, igual que para alimentarse, vestirse y trabajar. De ah el deber de respetar al animal, entre auxiliar y ser viviente comn a l. Artculo 3. Toda persona que emplee animales con fines experimentales debe tener presente que estn dotados de sensibilidad y memoria y son susceptibles al dolor y sufrimiento. Responsabilidades del experimentador Artculo 4. El experimentador es moralmente responsable de sus actos en el marco de la experimentacin animal. Artculo 5. Las experiencias concernientes a los seres vivos y las extracciones de tejidos a sujetos vivos con fines de investigacin deben ser realizados por un cientfico cualificado o bajo su control directo. Las condiciones de conservacin de los animales en experimentacin deben ser definidas y controladas por un veterinario o por un cientfico competente. Artculo 6. En los estudios sobre la utilizacin de animales debe existir una probabilidad razonable para que estos estudios contribuyan de manera importante a la adquisicin de conocimientos que desembocaran eventualmente en la mejora de la salud y del bienestar del hombre y de los animales. Artculo 7. Los mtodos estadsticos, los modelos matemticos y los sistemas biolgicos in vitro deben ser utilizados cuando sean apropiados para completar la experimentacin animal y para reducir el nmero de los sujetos utilizados. Artculo 8. El experimentador debe utilizar el animal mejor adaptado a su investigacin y tener en cuenta tambin los grados sensoriales y psquicos propios de cada especie. Los animales en peligro de extincin no debern ser utilizados ms que en circunstancias excepcionales muy definidas. Mientras sea posible, los animales utilizados en el laboratorio provendrn de cras especializadas para asegurar las mejores condiciones de equilibrio biolgico. Artculo 9. El experimentador debe velar por que las condiciones de conservacin del animal de laboratorio sean las mejores posibles y aportar los cuidados necesarios antes, durante y despus de las intervenciones. Artculo 10. El experimentador tiene el deber de ahorrar al animal todo sufrimiento fsico o psquico intil. Debe poner en marcha los mtodos que permitan limitar el sufrimiento y los dolores en el caso o casos que sean inevitables.
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Protocolos de Experimentacin animal: Normas ticas
Sociedad Espaola para las Ciencias del Animal de Laboratorio (SECAL)

En el ao 1989 se fundo la sociedad SECAL, cuyo objetivo es racionalizar y mejorar el uso el animal de laboratorio, al servicio de la salud del hombre y de los animales, fomentando la relacin y cooperacin entre los profesionales del sector. Engloba a personas de todos los niveles acadmicos y profesionales relacionados el animal de laboratorio. Principios ticos en Investigacin y Docencia con Modelos Animales 1.- Se debe evitar el uso de animales cuando exista un mtodo alternativo que proporcione resultados satisfactorios. 2.- El beneficio final del uso de animales de experimentacin debe estar claramente definido en cada protocolo. La evaluacin de la necesidad de su uso debe realizarse a travs de un Comit tico de Experimentacin Animal. 3.- Los ensayos que incluyan animales como modelo experimental deben realizarse en Establecimientos Usuarios registrados. Los animales deben proceder de Establecimientos de Cra registrados en aquellos casos en que as lo establezca la legislacin vigente. 4.- Las personas que tomen parte en los experimentos (diseo, manipulaciones, cuidados) deben tener formacin especfica en las ciencias del animal de laboratorio. Los animales estarn siempre bajo control veterinario. 5.- En cada ensayo hay que utilizar el mnimo nmero de animales posible que garantice resultados estadsticamente fiables. 6.- Los animales tienen que ser estabulados en jaulas y recintos apropiados, en espacios con condiciones ambientales estandarizadas y controladas. Igualmente debe estar garantizada la posibilidad de que los animales desarrollen los comportamientos propios de su especie siempre que las necesidades experimentales lo permitan. 7.- Los ensayos deben realizarse con un grado de refinamiento que evite el dolor, sufrimiento o angustia de los animales. Se deben establecer criterios de punto final y pautas de anestesia y analgesia en funcin de la severidad de cada procedimiento. 8.- Para la eutanasia, cuando sea necesaria, se debe aplicar un mtodo tica y cientficamente aprobado que reduzca al mximo el dolor y el estrs en los animales. 9.- Legislacin bsica actual: El Real Decreto 1201/2005, de 10 de octubre, sobre proteccin de los animales utilizados para experimentacin y otros fines cientficos (BOE n 252, de 21 de octubre, p. 34367), traspone y desarrolla la Directiva 86/609/CEE. Establece la creacin de Comits ticos de bienestar animal y establece 4 categoras que habilitan profesionalmente para el manejo de animales de laboratorio. Se necesita una acreditacin en una de estas catergoras: A: Cuidador de animales de laboratorio, B: Experimentadores, C: Investigadores, y D: Responsables en Bienestar y Salud Animal. Ley 32/2007, de 7 de noviembre, para el cuidado de los animales, en su explotacin, transporte, experimentacin y sacrificio, incorpora un rgimen sancionador. Direcciones de inters http://www.iclas.org/ International Council for Laboratory Animal Science http://www.felasa.org/ Federation of European Laboratory Animal Science http://www.secal.es/ Sociedad Espaola para las Ciencias del Animal de Laboratorio
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Estudio Farmacocintico del R.F. en la rata
ESTUDIO FARMACOCINETICO DEL ROJO FENOL EN LA RATA

OBJETIVO
Esta prctica tiene por objeto exponer la metodologa utilizada en el estudio farmacocintico de un medicamento. Como frmaco modelo se utiliza el rojo fenol, administrndose a una rata en dos condiciones experimentales: por va intravenosa y por va intraperitoneal, en regimen de dosis nica de 10 mg/ Kg. En primer lugar es necesario disponer de una curva de calibracin para el rojo fenol en plasma de rata. Una vez puesto a punto el procedimiento de valoracin, se realizar en otra rata una administracin intravenosa de rojo fenol y se extraern muestras de sangre a los tiempos previamenmte establecidos. A partir de los datos de nivel plasmtico de frmaco/tiempo obtenidos y mediante el adecuado tratamiento matemtico, se podr proponer el modelo farmacocintico que mejor se se ajusta a los resultados observados y calcular sus constantes farmacocinticas que caracterizan. Por ltimo, se realizarn estas mismas operaciones en el caso de una administracin intraperitoneal. La finalidad de la prctica consiste pues en determinar dichas constantes en el caso de una administracin intravenosa y otra intraperitoneal de rojo fenol, as como la biodisponibilidad conseguida por esta ltima va.
MATERIAL Y METODOS Animales de experimentacin

Se utilizan ratas Wistar anestesiada con pentobarbital sdico a la dosis de 60 mg/Kg.
Material * Material quirrgico

Tijeras de punta roma Jeringuillas de 1 y 10 mL de capacidad Rollo de esparadrapo y Algodn hidrfilo Pinzas rectas Tablero de operaciones Guantes desechables
* Material fungible
10 tubos Ependorf de plstico Pipetas de distinta capacidad (0,2-0,5-5 mL) 10 matraces aforados de 10 mL 20 tubos de vidrio 3 matraces de 100 mL aforados Vasos de precipitados
Soluciones precisas
* Eter etlico y solucin acuosa de pentobarbital sdico (50 mg/mL) utilizadas como anestesicos. * Heparina y solucin acuosa de citrato sdico al 20% que se emplearn como anticoagulantes. * Solucin de rojo fenol de concentracin 6 mg/mL (U.S.P. XX, pg. 1099), ser la solucin del medicamento que se administra a razn de 10 mg/Kg. * Solucin patrn de rojo fenol de concentracin 150 g/mL que se utilizar para la recta de calibracin. * Solucin de cido tricloroactico al 10% utilizada como agente desproteinizante. * Solucin de NaOH 1N empleada en la valoracin del rojo fenol.
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Mtodo de valoracin
Para poder realizar un buen tratamiento de los datos experimentales es necesario, en primer lugar, disponer de un mtodo analtico fiable y apropiado. Ello implica realizar una curva de calibracin del rojo fenol a partir de muestras de concentracin conocida en plasma.
Recta de calibracin - Procedimiento para la obtencin del plasma.

Con el fin de obtener plasma virgen para preparar la recta de calibracin, se anestesiar una rata con pentobarbital sdico a la dosis de 60 mg/Kg. Una vez anestesiado el animal (lo que se confirma al comprobar la prdida de reflejo parpebral), se sujeta al tablero quirrgico con el auxilio de unas tiras de esparadrapo. Se practica a continuacin unas incisiones a nivel pectoral con el fin de poner al descubierto los msculos pectorales y las dos venas yugulares. Una vez puestas al descubierto las dos venas yugulares, se extraer la mayor cantidad posible de sangre con la ayuda de una jeringa de 10 mL de capacidad, lavada previamente con la solucin anticoagulante. La sangre, recogida en un tubo de centrfuga humedecido tambin con la solucin anticoagulante, se centrifuga a 3000 r.p.m. durante 15 minutos, tras lo cual se retira el plasma obtenido.
- Preparacin de la recta de calibracin.

Con el plasma virgen obtenido de una rata no tratada se preparar la recta de calibracin de patrones internos como sigue: 1.- Se prepararn soluciones patrn de rojo fenol de concentraciones: 75, 60, 45, 30, 15, 7.5, 3 y 1.5 g/mL a partir de la de 150 g/mL 2.- Se prepararn 9 tubos que se rotularn: B, 75, 60, 45, 30, 15, 7.5, 3 y 1.5 respectivamente. 3.- Aadir a cada tubo 0.2 mL de plasma. 4.- Aadir al tubo rotulado B , 0.2 mL de agua destilada y a los tubos restantes 0.2 mL de las correspondientes soluciones patrn. 5.- Aadir a todos los tubos 0.5 mL de cido tricloroactico al 10%. 6.- A continuacin, centrifugar los tubos durante 10 minutos a 3000 r.p.m., separar 0.5 mL de sobrenadante y transferirlo a otro tubo rotulado. 7.- Adicionar 0.5 mL de NaOH 1N, y leer las absorbancias en un espectrofotmetro a 558 nm, frente al correspondiente tubo blanco.
Valoracin del rojo fenol en muestras de sangre

1.- Las muestras de sangre, rotuladas con sus tiempos de toma correspondientes, se centrifugarn a 3000 r.p.m. durante 15 minutos. 2.- Se separan 0.2 mL de plasma de cada muestra y se transfieren a su tubo rotulado. 3.- A todos los tubos se adicionan 0.2 mL de agua destilada y 0.5 mL de cido tricloroactico al 10%. 4.- Se centrifugan los tubos durante 10 minutos a 3000 r.p.m. y se separan 0.5 mL de sobrenadante que se transfieren a un tubo rotulado. 5.- Seguidamente se aaden 0.5 mL de NaOH 1N y se leen las soluciones coloreadas en espectrofotmetro a 558 nm frente al correspondiente tubo blanco.
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RESULTADOS - Tabla 1.- Preparacin de soluciones patrn para la recta de calibracin. (Volumen final 10 mL) Vol. sol. 150 g/mL Vol. Agua Conc. Rojo fenol (g/mL) 75 60 45 30 15 7.5 3 1.5
Validacin de un mtodo analtico Explicar qu hay que hacer para conseguir desarrollar un mtodo analtico validado.
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Recta de calibracin
Tabla 2.- Lecturas observadas a 558 nm. Conc. RF(g/ml) Absorbancia 1 Absorbancia 2 75 0.832 0.833 60 0.659 0.647 45 0,493 0.507 30 0.334 0.329 15 0.163 0.164 7.5 0.059 0.072 3 0.034 0.025 1.5 0.012 0.012 Absorbancia 3 0.806 0.641 0.489 0.328 0.165 0.084 0.033 0.013 AbsorbanciaMEDIA
Figura 1.- Representacin grfica de la recta de calibracin del Rojo Fenol.
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Estudio Farmacocintico del Rojo Fenol en la rata. Administracin I.V.
ESTUDIO FARMACOCINETICO DEL ROJO FENOL EN LA RATA. ADMINISTRACION INTRAVENOSA.

MATERIAL Y METODOS Procedimiento
El estudio farmacocintico se realiza en la rata anestesiada. La anestesia se practica por va intraperitoneal y se utiliza para este fin el pentobarbital sdico que se administra a la dosis de 60 mg/Kg. Una vez anestesiado el animal (lo que se confirma al comprobar la prdida del reflejo parpebral), se ajusta al tablero quirrgico con el auxilio de unas tiras de esparadrapo. Se practica a continuacin unas incisiones a nivel pectoral con el fin de poner al descubierto los msculos pectorales y las dos venas yugulares. Una vez puestas al descubierto las dos venas yugulares, se toma una muestra de 0.5 mL de sangre con la ayuda de una jeringuilla de 1 mL de capacidad, esta sangre nos permitir obtener una muestra de plasma blanco. Se administra por una de las venas yugulares la solucin de rojo fenol de 6 mg/mL a una dosis de 10 mg/Kg y se pone en marcha el cronmetro. Se toman muestras de sangre de 0.5 mL, a los diversos tiempos prefijados, por la otra vena yugular. Las tomas de muestra se iniciarn 15 segundos antes del tiempo prefijado y se finalizar 15 segundos despus del mismo. Las tomas de muestra se realizarn a los siguientes tiempos: 1, 3, 5, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120 y 150 minutos.
Mtodo analtico
Las muestras de sangre, rotuladas con sus tiempos de toma correspondientes se procesarn como se indic en el apartado correspondiente de material y mtodos de la pgina 4.
RESULTADOS - Tabla 3.- Lecturas observadas a 558 nm Tiempo (h/min/s) 2 min 24 s 4 min 5 s 9 min 58 s 15 min 36 s 30 min 52 min 48 s 1h 0 min 3 s 1h 27 min 1h 57 min 36 s 2h 30 min Tiempo (horas) Absorbancia 0,761 0,674 0,530 0,468 0,323 0,210 0,198 0,158 0,115 0,084 Conc. (g/ml) Log Conc.
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Figura 2.- Representacin grfica de los niveles plasmticos/tiempo de RF administrado I.V.
Figura 3.- Representacin grfica del logaritmo del nivel plasmticos/tiempo de RF por va I.V.
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Figura 4.- Esquema del modelo farmacocintico. Ecuacin representativa
CLCULOS - Tabla 4.- Tratamiento de los datos.

Tiempo(h) Conc (Cp) (g/mL) Log. Cp Log C(extrap) extrapolada C(extrap) Cp-C(extrap) Residuales Log.Residuales
Clculo de las macroconstantes farmacocinticas: Fase de disposicin rpida: log A = log Ao / 2,303 t y = ................ - ............ t log Ao = ................. pendiente = ............... Fase de disposicin lenta: log B = log Bo / 2,303 t y = ................ - ............ t log Bo = ................. pendiente = ............... r = ................. Ao = ...................
= ...................
r = ................. Bo = ...................
= ....................
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Cculo de los parmetros farmacocinticos del modelo
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Calculo de cantidades de frmaco en las diferentes zonas Tabla 5.- Cantidades de farmaco a los distintos tiempos Areas Parciales Conc. Tiempo Area(AUCot) (h) acumulada plasma (AUCt1t2)
Cantidad en el Compartimento Central
Cantidad en el Compartimento Perifrico
Cantidad Eliminada
Cantidad en C. Central: Cantidad Eliminada: Cantidad en C. Perifrico:
QCC = Cp x Vc.= D x (Ct/Co) Qe = Ke x Vc x AUCot = D x (AUCot / AUCo) QCP = D (QCC + Qe)
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Figura 5.- Representacin grfica de las cantidades de RF en el organismo administrado I.V.
Explica por qu tienen esa forma las grficas cantidad de frmaco en C.C. y C.P /tiempo. (Ten en cuenta el valor del volumen de distribucin y la relacin entre las microconstantes).
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Administracin I.P. de Rofo Fenol. Clculo de la constante de absorcin
ADMINISTRACION INTRAPERITONEAL DE ROJO FENOL EN LA RATA CLCULO DE LA CONSTANTE DE ABSORCION.

MATERIAL Y METODOS
El material y mtodos utilizados para la realizacin de esta prctica son los mismos que los empleados en el estudio farmacocintico del rojo fenol tras su administracin intravenosa por lo que no se resea en este protocolo. La administracin del rojo fenol se realizar por via intraperitoneal para lo que se utilizar una jeringuilla desechable de 1 ml de capacidad provista de aguja 16/5. Se utilizar una solucin de rojo fenol de concentracin 6 mg/ml y se administrar a la dosis de 10 mg/Kg. Las tomas de muestra se realizarn a los siguientes tiempos prefijados: 2, 5, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120 y 150 minutos.
RESULTADOS - Tabla 6.- Lecturas observadas a 558 nm. y concentraciones de RF en plasma. Tiempo (h/min/s) 3 min 6 min 9 min 57 s 15 min 30 min 45 min 60 min 1h 30 min 2h 2h 30 min Absorbancia 0,378 0,447 0,486 0,491 0,412 0,335 0,279 0,205 0,153 0,115 Tiempo (horas) Conc. (g/ml) log. Conc
Figura 6.- Esquema del modelo farmacocintico. Sobre la base de la grfica de la pgina siguiente dibuja y explica el esquema del modelo farmacocintico que mejor explica estos datos y la ecuacin matemtica que lo representa.
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Figura 7.- Representacin grfica de las curvas de nivel plasmtico de RF/tiempo por va I.P.
Figura 8.- Representacin grfica del logaritmo de la concentracin de RF/tiempo por va I.P.
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CLCULOS Tabla 7.- Tratamiento de los datos plasmticos del RF administrado por va intraperitoneal. Tiempo (h) CPLASMA Log. Cp LogC(extr) C(extr ) Cp-C(extr ) = Residuales R1 Log.R1 Log C(extrp ) C(extrp ) C(extrp )R1 = Residuales R2 Log. R2
Clculo de las macroconstantes farmacocinticas: Fase de disposicin lenta log B = log Bo / 2,303 t y = ................ - ............ t log Bo = ................. pendiente = ............... r = ................. Bo = ...................
Fase de disposicin rpida log A = log Ao / 2,303 t y = ................ - ............ t log Ao = ................. pendiente = ............... r = ................. Ao = ..............
Fase de absorcin log R = log Ro ka/ 2,303 t y = ................ - ............ t log Ro = ................. pendiente = ............... r = ...................... Ro = ................... ka= .......................
= ...................
= ...................
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Clculo de las constantes farmacocinticas:
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Aplicacin del mtodo de Doluisio: Absorcin de Sulfonamidas
APLICACIN DEL MTODO DE DOLUISIO: ABSORCION DE SULFONAMIDAS.

OBJETIVO
Una vez que ha sido liberado el frmaco de su correspondiente forma farmacutica, el siguiente paso que se produce en su trnsito por el organismo es el de la absorcin. En esta prctica se expone la aplicacin del mtodo de Doluisio en rata al estudio de la absorcin por va oral de dos sulfonamidas: la sulfadiacina y la sulfametoxidiacina. Comprende la tcnica quirrgica, la disposicin de montaje, as como el procedimiento de valoracin de estos frmacos. A partir de los resultados experimentales obtenidos se determinar la cintica de desaparicin del frmaco del lquido introducido en el intestino y la constante de velocidad que rige dicho proceso. Doluisio J.T. et al. Pharmaceutical Sciences 58, 1196, (1969)
MATERIAL Y METODOS Animal de experimentacin

Ratas Wistar a las que 24 h antes del ensayo se les retira el alimento y mantiene con agua "ad libitum"
Material * Material quirrgico

Tijeras Agujas e hilo de sutura Guantes desechables Pinzas rectas Esparadrapo Tablero de operaciones Cnula Algodn hidrfilo
* Material fungible de tipo especfico

Jeringa de plstico de 50 cc 2 jeringuillas de vidrio de 50 cc 2 llaves de paso de tres vias adaptables a las jeringas 2 tubitos de polietileno 2 cnulas de vidrio, de bordes romos, forma de L y una escotadura prxima a sus extremos
* Material fungible de tipo general

Vasos de precipitados Soportes y pinzas Tubos de vidrio Pipetas Cpsula de porcelana
Soluciones y reactivos
* Lquido de lavado compuesto de PO4H2Na, ClNa, ClK y Cl2Ca. * Solucin reguladora de pH 6,23 de PO4H2Na/PO4HNa2 0,067M. * Solucin medicamentosa de sulfonamida en medio isotnico de pH regulado. * Solucin de nitrito sdico al 0,1%. * Cloruro sdico 0,9%. * Acido clorhdrico 3N. * Solucin de sulfamato amnico 0,5%. * Solucin acuosa de N-1 naftiletilendiamida 0,1%.
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Mtodo de valoracin
El procedimiento empleado se basa en el propuesto por Bratton y Marshall y consiste en la formacin de un azoderivado que presenta un mximo de absorcin a 540 nm.
- Preparacin de la recta de calibracin

1.- Se prepara una bateria de soluciones de la correspondiente sulfonamida en medio isotnico de pH 6,23, de concentraciones comprendidas entre 5 y 60 g/ml, a partir de una solucin patrn de 100 g/ml. 2.- En doce tubos adecuadamente rotulados se depositan 0,2 ml de cada una de las anteriores soluciones de sulfonamida y en otro tubo 0,2 ml de medio isotnico de pH 6,23. 3.- Seguidamente se adiciona 1 ml de cada uno de los siguientes reactivos: -cido clorhdrico -nitrito sdico 0.1% para formar el diazoderivado en la funcin amina primaria de la sulfonamida -sulfamato amnico al 0,5% con el fin de eliminar el exceso de nitrito sdico no reaccionante en la etapa anterior; en esta reaccin se libera nitrgeno molecular, cuyas burbujas desaparecen al agitar los tubos, y - N-1-naftiletilendiamida para dar un azoderivado por copulacin con la sal de diazonio. 4.- El color que se produce en el proceso de diazotacin se determina cuantitativamente por espectrofotometra a 540 nm de longitud de onda, frente a un blanco sin medicamento.
PARTE EXPERIMENTAL Fase quirrgica

Una vez anestesiada la rata, primeramente con eter etlico y a continuacin con pentobarbital sdico administrado intraperitonealmente a razn de 60 mg/Kg de peso, se procede a fijarla sobre el tablero quirrgico en posicin de decbito supino. Seguidamente se hace una incisin en la piel del abdomen a la altura de la pelvis. Con ayuda de una cnula se corta sta, as como los msculos abdominales, hasta el esternn. En los extremos de la abertura se practican cuatro incisiones laterales que permiten poner al descubierto toda la cavidad abdominal. A continuacin se procede a aislar de la continuidad digestiva todo el intestino delgado; desde unos 2-3 cm del estmago hasta la porcin final del leon en las proximidades del tracto inicial del intestino grueso. Se hace un pequeo corte a estos dos niveles, por donde se introducen, las cnulas de cristal (1 cm), que se fijan por medio de sendas ligaduras con hilo de sutura.
Fase de lavado
El siguiente paso consiste en el lavado de la porcin intestinal aislada. A la cnula duodenal se acopla un tubo de polietileno que se conecta por el otro extremo con una jeringa de plstico. Con el lquido de lavado se arrastra la suciedad que sale por la cnula ileal, repitindose la operacin hasta que el lquido sale limpio de restos de la digestin. Finalmente se expulsa todo el lquido introducido en el intestino.
Fase de disposicin y montaje

Luego, las dos cnulas, se unen cada una a una jeringa de vidrio, a travs de una llave de tres vias y del tubo de polietileno. Las jeringas se sujetan, entonces, a un soporte por medio de pinzas. Esta disposicin de jeringa/llave/cnula permite el acoplamiento lateral de otra jeringa de plstico de 1 ml de capacidad para realizar la toma de muestras. Variando la posicin de la llave se pueden conseguir las siguientes conexiones: jeringa/intestino; jeringa/exterior; exterior/intestino y jeringa/exterior/intestino.
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Fase de absorcin propiamente de la sulfonamida

En la jeringa duodenal se colocan 10 ml de solucin medicamentosa, que es aproximadamente la capacidad intestinal de los animales empleados. Presionando con el mbolo duodenal y aspirando con el ileal se obliga a pasar a la solucin a travs del intestino hasta la segunda jeringa, de la que se toma una muestra de 0,25 ml con una jeringa de plstico pequea que se adapta a la llave lateralmente. Su contenido se transfiere al correspondiente tubo y corresponde a la muestra a tiempo cero. Colocadas las llaves en posicin jeringa/intestino se introduce, de nuevo, la solucin medicamentosa. A partir de este momento se comienza a tomar el tiempo y a intervalos de 5 minutos durante media hora se extrae el contenido intestinal con ayuda delos mbolos y se obtiene una muestra de 0,25 ml de lquido.
Fase de valoracin
La valoracin de las muestras se lleva a cabo siguiendo el procedimiento analtico expuesto anteriormente en el apartado de materiales y mtodos.
Jeringa duodenal
Jeringa ileal Ileon Intestino grueso
Duodeno
Estomago Intestino delgado
Figura 9.- Tcnica de Doluisio para el estudio de la absorcin gastrointestinal de frmacos.
CENTRADA
CSALIDA
(CENTRADA - CSALIDA)
CENTRADA - CSALIDA = Concentracin de frmaco que se considera que se ha absorbido en el intestino delgado
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RESULTADOS - Preparacin de soluciones patrn de sulfonamida para la recta de calibracin:

Se prepara una bateria de soluciones patrn para cada una de las sulfonamidas objeto de estudio. Seguidamente se sigue el mtodo de valoracin indicado y se lee la absorbancia a 540 nm.
Tabla 8.- Recta de calibracin de sulfonamidas Vol.sol.madre (100 g/ml) Vol. agua (mL) Conc. final (g/mL) 5 10 15 20 25 30 40 50 60 Absorbancia Sulfadiacina 0,056 0,110 0,160 0,220 0,280 0,324 0,430 0,550 0,667 Absorbancia Sulfametoxidiacina 0,063 0,119 0,172 0,230 0,285 0,340 0,450 0,595 0,714
Figura 10.- Representacin grfica de las rectas de calibracin de las sulfonamidas.
SULFADIACINA
A = .................. + ................. C
r =........................
SULFAMETOXIDIACINA
A = .................. + ................. C
r =........................
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RESULTADOS de la absorcin intestinal de SULFAMIDAS -Tabla 9.- Valoracin de la cantidad de sulfonamida remanente en la solucin medicamentosa prefundida en el intestino y no absorbidaa (Lecturas obtenidas a 540 nm.). SULFAMETOXIDIACINA SULFADIACINA Conc. Tiempo Conc. Absorbancia Log. Conc. Absorbancia Log. Conc. (min) (g/mL) (g/mL) 0 0,550 0,586 5 0,421 0,390 10 0,360 0,283 15 0,320 0,239 20 0,281 0,180 25 0,248 0,153 30 0,220 0,126 Figura 11.- Representacin grfica de las cinticas de desaparicin de las dos SULFAMIDAS a).- Concentracin remanente/tiempo
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b).- Logaritmo Concentracin remanente/tiempo
PARAMETROS Ecuacin de velocidad Cintica del proceso Ka t1/2
SULFADIACINA
SULFAMETOXIDIACINA
Explica porqu presentan distinta velocidad de absorcin estas dos sulfonamidas.
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Simulacin in vitro del modelo farmacocintico Monocompartimental
SIMULACIN "in vitro" DEL MODELO FARMACOCINETICO MONOCOMPARTIMENTAL

Los modelos farmacocinticos describen el organismo de forma simplificada, permitiendo cuantificar la velocidad con que se producen los procesos de la serie LADME mediante la utilizacin de funciones matemticas sencillas. En estos modelos el sistema biolgico esta representado como una serie de zonas o compartimentos que se encuentran conectados entre si de forma reversible. Un compartimento no es una regin fisiolgica o anatmica real, sino que representa un tejido o conjunto e tejidos con flujo sanguneo similar y con la misma afinidad por el frmaco. Dentro de cada uno de los compartimentos se asume distribucin uniforme e instantnea, y todas las molculas del principio activo gozan de anlogas propiedades cinticas. En un compartimento siempre se puede establecer que la cantidad de frmaco, Q, viene dada por:
Q = C. Vd
donde C es la concentracin y Vd el volumen del compartimento que puede ser un valor real o ficticio. Los modelos son sistemas abiertos, existiendo transferencia de frmaco entre dicho compartimento y el exterior. Si bien con estas premisas el numero de compartimientos necesarios para representar el organismo puede parecer elevado en principio, se ha comprobado que una inmensa mayora de los frmacos se pueden ajustar adecuadamente a modelos con uno o dos compartimentos. Incluso cuando se administran dosis mltiples y se alcanza el equilibrio dinmico, salvo contadas excepciones se utiliza el tratamiento monocompartimental.
PARTE EXPERIMENTAL
En esta practica el organismo est representado por un dispositivo hidrulico que permite regular la renovacin del fluido, y en cual existe una buena agitacin interior, lo que permite simular un modelo farmacocintico de un compartimento nico. El dispositivo consta de: un matraz kitasato de 500 c.c., un recipiente de plstico de 1L de capacidad, una bomba peristtica, un soporte metlico y una pinza, un tubo de goma de silicona, un agitador magntico y una barrita magntica. Para montar el dispositivo se opera de la siguiente forma: El matraz kitasato se coloca sobre la plataforma del agitador magntico y se sujeta mediante la pinza al soporte metlico vertical de forma que tenga una pequea inclinacin para facilitar la salida de lquido. Se introduce la barrita magntica y se llena con agua destilada hasta que rebose por la salida lateral. A continuacin, se acopla el tubo de goma de silicona a la bomba peristtica, se fija y seguidamente se introduce uno de sus extremos en el recipiente de plastico, lleno de agua destilada; y el otro en el kitasato. Se pone en marcha la bomba y se regula su velocidad de forma que el flujo a la salida del kitasato se mantenga constante entre 15 y 30 ml/min. (comprobarlo con una probeta). Periodicamente se debe rellenar el recipiente de plastico con agua.
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Simulacin in vitro del modelo farmacocintico Monocompartimental
Figura 12.- Model hidrulico de compartiment nico: Monocompartimental. Mtodo analtico

Como princicpio activo se utiliza una sustancia coloreada de fcil valorarin: la carboxifluoresceina sdica (CF). El mtodo de anlsis es espectrofotomtrico, midiendose directamente la absorbancia de las soluciones en un espectrofotmetro a 493,5 nm. de longitud de onda. Previamente se ha puesto a punto el mtodo de valoracin, con el que se han obtenido los datos siguientes para la curva de calibracin:
Tabla 11.- Recta de calibracin de la carboxifluoresceina sdica. Conc. CF Na 0,495 0,99 1,98 3 3,96 5,04 (g /mL) Absorbancia 0,052 0,106 0,212 0,427 0,463 0,652 2 Ecuacin de la recta Y(Abs)= 0,1269 X(conc) - 0,0093 (R = 0,9895)
6 0,738
Figura 13.- Representacin grfica de la recta de calibracion de la carboxifluoresceina sdica.
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Simulacin in vitro: Administracin I.V. Ensayo 1, Niveles plasmticos
ADMINISTRACIN INTRAVENOSA RPIDA. SIMULACIN "in vitro"

Este ensayo tiene por objeto simular una administracin intravenosa rpida y el procedimiento de recogida de muestras sanguneas y urinarias mediante el dispositivo hidrulico expuesto en las pginas anteriores, en el que el organismo est representado por un nico compartimento. La solucin de CF se inyecta con una jeringa en el lquido del interior del kitasato que simula la circulacin sangunea. A los tiempos preestablecidos se extraen 3 mL del interior del matraz (equivale a la muestra de sangre/plasma) y todo el volumen que ha fluido por la salida lateral desde la anterior toma de muestra (equivale a lo excretado en orina).Por ello en la misma prctica se realizan los Ensayos 1 y 2.
ENSAYO N 1. Niveles plasmticos 1.- PROTOCOLO DE TRABAJO: Datos simulados de concentracin plasmtica.
Una vez montado el dispositivo anterior y comprobado que la "orina " fluye de forma contnua y a ritmo constante (utilizar una probeta), se administra una dosis "endovenosa" rpida (bolus) del frmaco, la carboxifluoresceina sdica (CF). Se administran 0.5 mL de una solucin acuosa de CF de 6 mg/mL de concentracin. El deposito debe efectuarse rpidamente y en este momento se pone en marcha el cronmetro. A los 2.5, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 y 50 minutos de comenzado el ensayo se toman muestras de la parte media del kitasato, que coresponderan a "plasma". Para ello se utilizan pipetas de 5 mL, recogindose un volumen de 3 mL. Si no se pudiese recoger alguna muestra al tiempo establecido, se deber anotar el nuevo tiempo de recogida con la mayor exactitud y coincidiendo con el inicio de la toma. Las muestras se depositan en tubos de ensayo adecuadamente numerados y se mide su absorbancia directamente en un espectrofotmetro a una longitud de onda de 493,5 nm. La concentracin se obtiene a partir de la recta de calibracin.
2.- RECOGIDA DE DATOS EXIPERIMENTALES: Anotar los siguientes datos:

Volumen del kitasato = ........................ Velocidad de flujo Dosis administrada = ............................. 1.- Al comienzo de la prctica = ........... 2.- A los 30 min. = ............................. Los datos de la prctica anotarlos en la tabla 12, cuyos encabezados coresponden a: N = nmero de la muestra. Ti. previsto = tiempo terico de recogida de muestra. Treal = tiempo al que se recoge la muestra. Abs(problema) = absorbancia de la muestra diluida. Dilucin realizada en la muestra para su valoracin si fuese necesario. C plasmtica = concentracin de CF en la muestra "plasmtica", teniendo en cuenta la dilucin.
Representar grficamente el logaritmo de los niveles plasmticos frente al tiempo en la pgina siguiente.
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Tabla 12.- Recogida de datos del Ensayo1. Niveles plasmticos Dilucin N Ti.previsto Treal Abs(prroblema) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 2,5 5 10 15 20 25 30 35 40 50
C(plasmtica)
log.Cp
Figura 14.- Representacin grfica de niveles plasmticos de CF/tiempo. Simulacin I.V.
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3.- TRATAMIENTO DE DATOS:

Se realizara la representacin grfica de los logaritmos de las concentraciones plasmticas frente al tiempo en papel milimetrado. El clculo de los parmetros cinticos del modelo se realizan mediante regresin lineal de los datos de logaritmo de concentracin (y) frente al tiempo de recogida de muestra (x): y = m x + b. La constante de velocidad de eliminacin se obtiene de la pendiente de la recta: Kel = m 2,303. La semivida plasmtica se calcula por la expresin: t1/2 = 0,693/ Kel. La concentracin inicial Co se obtiene a partir de la ordenada al origen: Co = antilog b y a partir de Co se determina el volumen de distribucin: Vd = Dosis/ Co. El aclaramiento sistemico se puede determinar por dos mtodos distintos: Cl = Kel . Vd (modelo dependiente) y Cl = Dosis / AUCo (modelo independiente) siendo AUCo el area bajo la curva de niveles plasmaticos determinada por el metodo de los trapecios y extrapolada hasta infinito().
:
4- CALCULOS: Tabla 13.- Concentraciones plasmticas Ensayo 1. Treal C(plasmtica) log.Cplasma
AUC
Fase de eliminacin
y =................ - ............ t log C = log Co ke/ 2,303 t
r =................. Co =................... ke=...................
log Co =................. pendiente =...............
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Clculo de parmetros farmacocinticos y de la ecuacin representativa del modelo
Figura 15.- Esquema del modelo farmacocintico del Ensayo 1.
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Simulacin in vitro: Administracin I.V. Ensayo 2, Niveles en orina
ENSAYO N 2. Niveles en orina 1.- PROTOCOLO DE TRABAJO: Datos simulados de excreccin urinaria.
Este ensayo se realiza conjuntamente con el anterior (Ensayo 1), recogiendose a la vez muestras del interior del kitasato (que equivale al contenido plasmtico) y ,en un vaso de precipitados, todo el volumen de lquido que sale por el orificio lateral (que equivale a lo excretado en orina). A continuacin se mide con ayuda de una probreta el volumen de lquido excretado a los 2.5, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 y 50 minutos de comenzado el ensayo y se anota en el cuadro de datos de la pgina siguiente. Si no se pudiese recoger alguna muestra al tiempo establecido, se deber anotar el nuevo tiempo de recogida con la mayor exactitud y coincidiendo con el inicio de la toma. De la probeta se toman 5 mL que se depositan en tubos de ensayo adecuadamente numerados e identificados (diferenciarlos de los correspondientes a las muestras de plasma). La absorbancia se lee directamente en un espectrofotmetro a una longitud de onda de 493,5 nm. Finalizada la prctica medir con la probeta el volumen de fluido contenido en el kitasato, desmontar el dispositivo, lavar el material y guardarlo convenientemente.
2.- RECOGIDA DE DATOS EXPERIMENTALES: Tabla14.- Recogida de datos urinarios. Ensayo 2. Vol. Orina N Ti.previsto T real Dilucin (mL) 1 2,5 2 3 4 5 6 7 8 9 10 5 10 15 20 25 30 35 40 50
Abs (problema)
C (orina) (g/mL)
N = nmero de la muestra. Ti. previsto = tiempo terico de recogida de muestra. Treal = tiempo de recogida de muestra. Vol. Orina = volumen de la muestra. Dilucin = dilucin de la muestra para su valoracin. Abs (problema) = lectura de absorbancia. C orina = concentracin de la muestra de "orina" teniendo en cuenta la dilucin. La velocidad media de flujo de orina se calcula al dividir el volumen total de liquido recogido entre los 2,5 y los 50 minutos entre 50 (minutos en los que se recoge este volumen).
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3.-TRATAMIENTO DE DATOS:
Cuando se trabaja con muestras de orina se pueden hacer dos tipos de tratamientos de los datos: 1.-Acumulativo: se calculan las cantidades totales de CF excretadas (Ut) hasta cada uno de los tiempos de muestreo (Ti) y 2.- Distributivo: se calculan las velocidades de excrecin (U/t) en el tiempo medio de cada uno de los intervalos de recogida de orina (t). Para ello es necesario realizar los siguientes clculos :
t =intervalo de recogida, corresponde al tiempo que dur la toma de muestra (tn - tn-1 ). U = cantidad de soluto eliminado en el intervalo considerado. Se calcula: U = C orina V orina U/t = velocidad de eliminacin. Corresponde al cociente entre la 2 y 4 columnas. log (U/t) = logaritmo de la velocidad de eliminacin.
Tmedio = tiempo medio del intervalo de recogida considerado. Se calcula t i = (tn + tn-1 )/2 Se realizar la representacin grfica de los logaritmos de las "velocidades de eliminacin" en funcin de los tiempos medios de intervalo, y se calculara la recta de regresin por mnimos cuadrados: y=mx+b La constante de velocidad de eliminacin se obtiene a partir de la pendiente: Kel = m 2,303. La semivida plasmatica se clcula por la expresin: t1/2 = 0,693/ Kel La ordenada en el origen es el logaritmo de la velocidad de eliminacin a tiempo cero, es decir el logaritmo del producto de la dosis por la Ku. Calcula Ku y comparalacon Kel. Calcula la cantidad mxima eliminada. Calcula la cantidad que falta por eliminarse en el kitasato por diferencia entre la dosis administrada y la cantidad mxima eliminada. Compara sta ltima con la determinada experimentalmente a partir de la concentracin en el kitasato. Extrapolar el AUC desde t hasta infinito () utilizando la siguiente expresin: AUC t final = (U/t) t final / Kel dU/dt = Ku De-Ket
Razonar por qu es otra forma de calcular el soluto que queda por eliminar.
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Tabla 15.- Niveles urinarios Ensayo 2. Datos acumulativos y distributivos. T(min) Ut (mg) U(mg) t (min) T medio U/t Previsto/Real (mg/min) intervalo intervalo Cu x Vu Acumulado 0 2,5 5 10 15 20 25 30 35 40 50 Figura 16.- Excreccin urinaria acumulada de CF. Simulacin I.V.
Cantidades acumuladas de CF (Ut) en cada uno de los tiempos de muestreo (Treal).
Log(U/t)
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Figura 17.- Grfica del Logaritmo deVelocidad de excreccin urinaria de CF. Simulacin I.V.
Log Velocidades de excrecin (U/t) en el tiempo medio del intervalo de recogida.
Clculo de los parmetros farmacocinticos del modelo.y =................ - ............ t log U/t = log (U/t)o ke/ 2,303 t r =................. log (U/t)o =................. pendiente =............... (U/t)o=................... ke =...................
(U/t)o = ku x D.................
ku =...................
Compara los valores de las constante ke y ku
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Simulacin in vitro: Administracin E.V. Ensayo 3, Niveles plasmticos
SIMULACIN "in vitro" DEL MODELO FARMACOCINETICO MONOCOMPARTIMENTAL. Administracin Extravascular.

En esta prctica el organismo esta representado por el mismo dispositivo que el utilizado en la prctica anterior: un sistema hidrulico con renovacin controlada del fluido y una buena agitacin interior, por lo que simula un modelo de un solo compartimento. Se realiza el montaje del dispositivo como se indic anteriormente y se regula la velocidad de la bomba peristltica para el flujo se mantenga constante entre 10 y 15 ml/min. El ENSAYO N 3 tiene por objeto simular datos de concentracin plasmtica y el ENSAYO N 4 de datos urinarios. Ambos ensayos se realizan simultneamente en el mismo experimento.
ENSAYO N 3. Niveles plasmticos. 1.- PROTOCOLO DE TRABAJO: Datos simulados de concentracin plasmtica.
Se prepara una cpsula con 2-3 perdigones en su interior a la que se practican tres agujeros con una aguja y en la que se introducen 0,5 mL de la solucin acuosa de CF con una concentracin de 6 mg/mL. Montado el dispositivo segn se indic anteriormente y una vez comprobado que la "orina " fluye adecuadamente, se introduce la cpsula de CF en el matraz kitasato y se pone en marcha el cronmetro. Se toman muestras de "plasma" , siempre del centro del matraz, a los 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 y 50 minutos de comenzado el ensayo. Para ello se utilizan pipetas de 5 mL, recogindose un volumen de 3 mL. Si no se pudiese recoger alguna muestra al tiempo establecido, se deber anotar el nuevo tiempo de recogida con la mayor exactitud y coincidiendo con el inicio de la toma. Las muestras se depositan en tubos de ensayo adecuadamente numerados. Se mide su absorbancia en un espectrofotmetro a = 493,5 nm. Si la absorbancia fuese superior a la mxima obtenida en la recta de calibracin diluir con agua (1:1). La concentracin se obtiene a partir de la ecuacin siguiente (pg. 25):
Y(Abs)= 0,1269 X(conc) - 0,0093 (R2 = 0,9895).

Finalizada la prctica lavar el material y guardarlo convenientemente.

Medir con probeta el volumen de fluido contenido en el kitasato y la velocidad de flujo al comenzar el ensayo (tiempo inicial) y a los 30 minutos. Anotar los datos en la tabla. Concentracin de la solucin de CF = ................ Concentracin final en el kitasato = ............................. Dosis administrada = ............................. Volumen del kitasato = ................................... Velocidad de flujo de orina 1.- Al comienzo de la prctica = ............................. 2.- A los 30 min. = ............................. Ti. previsto = tiempo terico de recogida de muestra. Ti. real = tiempo al que se recoge la muestra. Dilucin = dilucin realizada en la muestra para su valoracin. Abs (problema) = lectura de absorbancia de la muestra diluida. C plasmtica = concentracin de fluoresceina en la muestra "plasmtica", teniendo en cuenta la dilucin.
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Tabla 16.- Recogida de datos de niveles plasmticos. Simulacin E.V. (Ensayo 3). Dilucin C(plasmtica) Log. C(plasmtica) N Ti.previsto Ti.real Abs (problema) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 2,5 5 10 15 20 25 30 35 40 50
Figura 18.- Grfica del logaritmo de niveles plasmticos/tiempo Simulacin E.V.
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El clculo de los parmetros cinticos del modelo se realiza mediante regresin lineal de los datos de logaritmo de concentracin/ tiempo, que, comenzando desde el ltimo tiempo estn alineados. Mediante el tratamiento denominado de residuales o Retroproyeccin se analiza la fase de absorcin.
Tabla 17.- Tratamiento de datos pasmticos. Ensayo 3. Ti REAL CPLASMA log.Cp log.CEXTRAP CEXTRAP CEXTRAP-Cp Residuales log Resid. AUC
CLCULOS
Fase de eliminacin: log C = log Co ke/ 2,303 t y =................ - ............ t log Co =................. pendiente =............... y =................ - ............ t log Ao =................. pendiente =............... r =................. Co =................... ke =................... r =................. Ao =................... ka =...................
Fase de absorcin: log A = log Ao ka / 2,303 t
Co = (D/Vd) F (ka/ka-ke) Co = tmax =
to = (ln (A/C))/(Ka-Ke)
Cmax =
Clp=
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Simulacin in vitro: Administracin E.V. Ensayo 4, Niveles en orina
ENSAYO N 4. Niveles en orina 1.- PROTOCOLO DE TRABAJO: Datos simulados de excreccin urinaria.
Este ensayo se realiza simultneamente con el anterior, recogiendose a la vez muestras del interior del kitasato (que equivale al contenido plasmtico) y el volumen que fluye lateralmente (lo excretado en orina). As pues, se recoge todo el lquido excretado a los 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 y 50 minutos de comenzado el ensayo. A continuacin se mide el volumen de lquido, a cada tiempo, en una probeta y se anota en el cuadro de datos de la pgina siguiente. Si no se pudiese recoger alguna muestra al tiempo establecido, se deber anotar el nuevo tiempo de recogida con la mayor exactitud y coincidiendo con el inicio de la toma. De la probeta se toman 5 mL que se depositan en tubos de ensayo adecuadamente numerados e identificados (diferenciarlos de los correspondientes a las muestras de plasma). La absorbancia se lee directamente en un espectrofotmetro a una longitud de onda de 493,5 nm. Si fuese necesario diluir con agua. Anotar todos los resultados en la tabla siguiente. Finalizada la prctica desmontar el sistema, lavar el material y guardarlo convenientemente.
2.- RECOGIDA DE DATOS EXPERIMENTALES: Tabla 18.- Recogida de datos urinarios. Ensayo 4. N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Ti.previsto 2,5 5 10 15 20 25 30 35 40 50 Ti. real Vol. Orina (mL) Dilucin Abs (problema) C (orina) (g/mL)
Velocidad de flujo de orina
1.- inicial = ........................ 2.- a los 30 min. = ............. Velocidad media de flujo de orina = (Volumen total de lquido recogido/ 50 minutos) = ..............
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3.-TRATAMIENTO DE DATOS:
Se calculan las cantidades acumuladas de CF (Ut) en cada uno de los tiempos de muestreo (Ti) y las velocidades de excrecin (U/t) en el tiempo medio del intervalo de recogida (t). (Ver Ensayo 2).
Tabla 19.- Niveles urinarios Ensayo 4. Datos acumulativos y distributivos. T(min) Ut (mg) U(mg) t (min) T medio U/t Previsto/Real (mg/min) intervalo intervalo Cu x Vu Acumulado 0 2,5 5 10 15 20 25 30 35 40 50
Log(U/t)
Figura 19.- Representacin grfica de la excreccin urinaria acumulada. Simulacin E.V.
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Tabla 20.- Tratamiento de los datos en forma distributiva Ti medio intervalo (mg/min)
U/t
log(U/t) Velextrapolada
log(U/t)Ext
(U/t)Ext
VelEXT Vel
(U/t)Extr -(U/t)
Residuales
Figura 20.- Grfica del logaritmo Velocidad excreccin urinaria de CF. Simulacion E.V.
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Clculo de los parmetros farmacocinticos

El clculo de los parmetros cinticos del modelo se realiza mediante regresin lineal de los datos de logaritmo de Velocidad de excrecin/ tiempo medio de intervalo, que comenzando desde el ltimo tiempo estn alineados. Luego, mediante el tratamiento denominado de residuales o Retroproyeccin se analiza la fase de absorcin. Fase de eliminacin:
y =................ - ............ t
r =................. (U/t)o=................... ke =................... (U/t)o=...................

ka =...................
log U/t = log (U/t)o ke/ 2,303 t
log (U/t)o =................. pendiente =...............

r =.................
Fase de absorcin:
y =................ - ............ t
log U/t = log (U/t)o ka/ 2,303 t (U/t)o = ku F D ka/(ka-ke)
log (U/t)o =.................

pendiente =...............
ku =...................
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Compara los valores de las constantes ke y ku obtenidas en la prctica anterior (Ensayos 1 y 2) con los obtenidos en sta (Ensayos 3 y 4) Escribe las ecuaciones matemticas correspondientes en cada caso.
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Simulacin in vitro: Administracin Perfusin I.V. Ensayo 5, Niveles plasmticos
SIMULACIN "in vitro" DEL MODELO FARMACOCINETICO MONOCOMPARTIMENTAL. Administracin en Perfusion Intravascular
Este ensayo tiene por objeto simular una administracin intravenosa en forma de infusin o perfusin y el procedimiento de recogida de muestras sanguneas, utilizando el dispositivo hidrulico expuesto en las pginas anteriores, en el que el organismo est representado por un nico compartimento. La solucin de CF se coloca en una jeringa a la que se acopla un tubo de goma, el cual se introduce directamente el el matraz kitasato que simula el compartimento del organismo. Mediante un regulador de flujo la solucin de CF perfunde continuamente en el lquido del interior del kitasato que simula la circulacin sangunea. A los tiempos preestablecidos se extraen 3 mL del interior del matraz (equivale a la muestra de sangre/plasma).
Figura 21.- Model hidrulico de compartiment nico: Monocompartimental. ENSAYO N 5. Niveles plasmticos 1.- PROTOCOLO DE TRABAJO: Datos simulados de concentracin plasmtica.
Montaje del dispositivo de la figura 21 que simula una perfusin iv. : 1.- Sujetar la jeringa de perfusin de 60 cc con las pinzas del soporte vertical y cerrar el regulador de flujo del tubo que lleva acoplado a su salida. Graduar la altura para que el tubo de goma se pueda disponer verticalmente sobre un vaso de precipitados. 2.- Llenar la jeringa con agua hasta el nivel de 60 cc. A continuacin ajustar la rueda del regulador de flujo del tubo para que el agua fluya a unas 35 gotas por minuto. 3.- Sin mover la rueda del regulador, vaciar la jeringa volcando su contenido en el vaso de precipitados y a continuacin colocarla, vaca, en su posicin anterior en el soporte de sujecin.
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4.- Montar el dispositivo de las prcticas anteriores (recipiente de plstico, bomba peristltica, kitasato con agitador magntico y vaso colector) sin acoplar todava la jeringa de perfusin. 5.- Poner en marcah la bomba peristltica y comprobar que el fljo de lquido que sale por el kitasato es contnuo y a ritmo constante de unos 15 ml/min (comprobar con una probeta). 6.- Colocal el soporte que sujeta la jeringa de perfusin, todava vaca, de tal forma que sta se site en la vertical del matraz kitasato. A continuacin introducir el tubo de goma, acoplado la jeringa, en el interior del kitasato de manera que casi llegue hasta el fondo del matraz. 7.- Sin modificar el regulador de flujo del tubo de goma, llenar la jeringa con la solucin de CF de concentracin 250 g/ml hasta el nivel de 60 cc. La solucin de CF descender por el tubo de goma. 8.-. Cuando la solucion de CF est a punto de llegar al extremo del tubo de goma situado en el interior del kitasato, completar el nivel de la jeringa de perfusin a 60 cc. 9.- El ensayo comienza en el momento en que la solucin de CF empiece a perfundir en lquido del kitasato, que simula la sangre. En ese momento poner en marcha el cronmetro y empezar a contar el tiempo. 10.- A los tiempos indicados en la tabla, 5, 10, 20, 30, 40 y 50 minutos, se extraen con una jeringa 3 ml de lquido del interior del kitasato y se colocan en tubos de ensayo rotulados. 11.- Para mantener constante la presin hidrosttica , reponer con solucin de CF de 250 g/ml el nivel de la jeringa de perfusin a 60 cc, en cada uno de los tiempos de recogidade muestra. 12.- La simulacin de la perfusin finaliza a los 50 min. Para ello, sin deterner la bomba peristaltica, cerrar completamente el regulador de flujo, extraer el tubo de goma del interior del kitasato y continuar con el experimento. 13.- Se continan recogiendo muestras de 3ml del interior del kitasato a los 60, 70, 80 y 90 minutos. Perido post-perfusin. 14.- A los 90 min detener la bomba peristltica y valorar la concentracin de CF en los tubos. Si no se pudiese recoger alguna muestra al tiempo establecido, se deber anotar el nuevo tiempo de recogida con la mayor exactitud y coincidiendo con el inicio de la toma. La absorbancia de las muestras se mide directamente en un espectrofotmetro a una longitud de onda de 493,5 nm. La concentracin se obtiene a partir de la recta de calibracin.

Velocidad de flujo de la bomba peristltica Volumen del kitasato = ........................ Flujo jeringa de perfusin: .. Conc. Solucin de perfusin = ............................. 1.- Al comienzo de la prctica = ............... 2.- A los 30 min. = .............................
Los datos de la prctica anotarlos en la tabla 21, cuyos encabezados coresponden a: N = nmero de la muestra. Ti. previsto = tiempo terico de recogida de muestra. Treal = tiempo al que se recoge la muestra. Abs(problema) = absorbancia de la muestra diluida. Dilucin realizada en la muestra para su valoracin si fuese necesario. C plasmtica = concentracin de CF en la muestra "plasmtica", teniendo en cuenta la dilucin. Representar grficamente el logaritmo de los niveles plasmticos frente al tiempo en la pgina siguiente.
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Tabla 21.- Recogida de datos del Ensayo1. Niveles plasmticos Dilucin N Ti.previsto Treal Abs(prroblema) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 5 10 20 30 40 50 60 75 80 90
C(plasmtica)
log.Cp
Figura 22.- Representacin grfica de niveles plasmticos de CF/tiempo. Perfusin I.V.
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Se realizara la representacin grfica de los logaritmos de las concentraciones plasmticas frente al tiempo en papel milimetrado. En ella se distinguen dos fases diferenciadas: Perido de perfusin (incorporacin y disposicin del frmaco) y Periodo post-perfusin (disposicin). A partir de esta representacin gafica se puede observar si se ha alcanzado la meseta teraputica. El clculo de los parmetros cinticos del modelo se realiza analizando, en primer lugar, los niveles de frmaco en la fase post-perfusin. A partir de ellos se calcula la Kel , mediante regresin lineal de los datos de logaritmo de la concentracin, una vez finalizada la perfusin, frente al tiempo post-perfusin que corresponde al tiempo de toma de muestra menos el tiempo que ha durado la perfusin (TREAL TPERFUSION ), en esta caso 50 minutos. y = m x + b. La constante de velocidad de eliminacin se obtiene de la pendiente de la recta: ke = m 2,303. La semivida plasmtica se calcula por la expresin: t1/2 = 0,693/ ke. La concentracin cuando finalizala perfusin CT se obtiene a partir de la ordenada al origen: CT= antilog b Conocida esta concentracin y la constante de eliminacin se puede calcular la constante de velocidad de incorporacin a sangre ko La concentracin en la meseta teraputica C o Cee es el cociente entre la constante de velocidad de incorporacin a sangre y la constante de eliminacin La constante de velocidad de incorporacin a sangre es igual al cociente entre el ritmo o velocidad de perfusin y el volumen de distribucin
C =
ko ke
ko =
Ko Vd
El aclaramiento sistemico se puede determinar por dos mtodos distintos: Cl = ke . Vd (modelo dependiente) y Cl = Dosis / AUCo (modelo independiente)
4- CALCULOS: Tabla 23.- Concentraciones plasmticas Ensayo5. Post-perfusin C(plasmtica) TREAL t = TREAL-50min ---------------5 10 20 30 40 50 60 70 80 90
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log.Cplasma
AUC
-------------------------------------------------------------
Figura 23.- Representacin grfica de log niveles plasmticos de CF/tiempo. Perfusin I.V.
- Esquema del modelo farmacocintico del Ensayo 5.
Clculo de parmetros farmacocinticas Fase de disposicin

- ke t C t = C f . e y =................ - ............ t
r =................. CT =................... t1/2 = ..
log Ct = log CT ke/ 2,303 t pendiente =............... Fase de incorporacin
log CT =................. ke=...................
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Ct =
ko . ( 1 - e - ke. t ) ke
ko =
ke .C f 1 - e - k e .T
ko = C .ke =
o
Vd
ko =...................
Vd = ..
Ko=...................
C =.................
Dosis administrada=
Clp =...............
Contesta a las siguientes cuestione justificando tus respuestas: 1.- Por qu con este tipo de administracin se consigue llegar a una concentracin constante en sangre? En este caso se ha alcanzado la meseta teraputica?. En cuanto tiempo se alcanza? 2.- Si se aumentase el ritmo de perfusin se alcanzara antes la meseta?. 3.-De qu parmetro farmacocintico depende el tiempo que se necesita para que la concentracin sangunea se mantenga constante?.
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Estudio comparativo de cesin in vitro
ESTUDIO COMPARATIVO DE CESIN "in vitro".

OBJETO
Este ensayo tiene por objeto evaluar "in vitro" la influencia que tiene la viscosidad de una formulacin sobre la liberacin del principio activo incorporado en ella. En esta prctica se compara la cesin de una substancia trazadora, fluoresceina disdica, a un medio receptor acuoso, que se halla separado de la formulacin por una membrana semipermeable.
PARTE EXPERIMENTAL
El dispositivo empleado en ste estudio consta de un tubo de vidrio de 22 mm de dimetro interno (26 mm externo) y 98 mm de altura (compartimento donor), en uno de cuyos extremos se fija una membrana semipermeable (Visking 2-18/32``, Medicell Int. Ltd.) y de un vaso de precipitados de 5 cm de dimetro y 10 cm de altura (compartimento receptor), que contiene 75 mL de agua destilada (lquido receptor) sometida a una agitacin magntica suave. En el compartimento donor se deposita la formulacin objeto de estudio: la solucin con el marcador o el gel; seguidamente se pone en contacto el tubo con el lquido receptor evitando la formacin de burbujas sobre la superficie de la membrana. Se pone en marcha el cronmetro y a los tiempos preestablecidos se retiran 3 mL del medio receptor para su valoracin, reponiendo el volumen con tampn fosfato a la misma temperatura.
Compartimento donor
Formulacin Compartimento receptor
Membrana Agitador magntico
Figura 24.- Dispositivo para la evaluacin de la liberacin "in vitro" Preparacin de las formulaciones de fluoresceina Solucin del trazador
Como trazador se utiliza fluoresceina disdica, preparndose una solucin acuosa de concentracin 6 mg/mL. Para el ensayo se toma 1 mL de dicha solucin y se diluye con 1 mL de agua destilada.
Gel de gelatina
Se prepara un gel a la concentracin del 10% (p/v), para lo cual la cantidad necesaria de gelatina se dej en reposo en 10 mL de agua destilada a 37 C durante 24 horas, hasta completa disolucin. La dispersin obtenida presenta un aspecto transparente, coloracin amarillenta y consistencia viscosa a temperatura ambiente (25 C). Para realizar el estudio de liberacin se aade 1 mL de solucin de fluoresceina disdica (6 mg/mL) a 1 mL del gel de gelatina.
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Estudio comparativo de cesin in vitro
Tabla24.- Resultados de cesin de la solucin de CF

N Tiempo Absorbancia Solucin C(receptor) Solucin log.C(receptor) Solucin Absorbancia Gel C(receptor) Gel log.C(receptor) Gel
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
0 5 10 15 20 25 30 40 50 60 70 80 90
Determinar la cintica del proceso de cesin que ms se ajusta en cada caso, analizando la correlacin entre la Concentracin y el tiempo o el log Concentracin y el tiempo, mediante mnimos cuadrados
Figura 24.- Representacin grfica de la cesin de CF en solucin y en gel.
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Enseanza Asistidad por Ordenador.- Introducin a la Farmacocintica
ENSEANZA ASISTIDA POR ORDENADOR. Introductory Pharmacokinetics Workshop.

El programa muestra al alumno cmo realizar representaciones en papel semilogartmico, cmo calcular el rea bajo la curva concentracin /tiempo usando el procedimiento Trapezoidal, y cmo calcular la constante de absorcin usando el Mtodo de los Residuales. Estos conceptos se muestran primeramente con ejemplos y posteriormente se comprueba el aprendizaje del alumno planteando questiones que requieren el empleo de cada mtodo. El avance del alumno se monitoriza obteniendo una puntuacin general al final de cada modulo. Est dividido en 4 partes: 1.- Methods Logarithmic Plot Method of Residuals
Trapezoidal Rule 2.- I.V. Dosing General Information Test Question 3.- I.V. Infusion General Information Test Question 4.- Oral Dosing General Information Test Question
Methods
Este apartado expone tres importantes procedimientos bsicos: representacin logartmica, mtodo de los residuales y mtodo trapezoidal, utilizados para tratar los datos grficos con el fin de obtener la informacin necesaria para calcular los parmetros farmacocinticos.
Intravenous Bolus Dosing

Esta seccin proporciona informacin sobre varios parmetros farmacocinticos incluyendo la semivida y la constante de velocidad de eliminacin y cmo calcularlos a partir de los datos correspondientes a una administracin iv rpida (en bolus).
Intravenous Infusion
Aqu se muestran las grficas que se obtienen cuando el frmaco se administra en infusin intravenosa. Los datos se utilizan para estimar la constante de velocidad de eliminacin, la semivida, el aclaramiento y el volumen de distribucin una vez que ha finalizado la infusin.
Oral Dosing
Con los datos recogidos tras administracin oral del frmaco se expone el procedimiento para calcular la constante de velocidad de eliminacin, la semivida, el aclaramiento y el volumen de distribucin, la biodisponibilidad absoluta y relativa, la constante de velocidad de absorcin y la semivida de absorcin. Al hacer CLIC en una de estas opciones y comenzar la aplicacin se muestra una primera pgina donde se indica el CONTENIDO de esa actividad y los CONOCIMIENTOS PREVIOS que se necesitan. A la derecha, abajo, se indican las pginas que contiene; haciendo CLIC en ellas se pasa a esa pgina. En la parte inferior izquierda aparece Return to Menu, que te lleva al Menu Principal. En todas las pginas aparece en la parte superior una barra de tareas con las palabras: File, Edit, Tools, Help. Para salir del programa: Desplegar File y seguidamente Exit Package.
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Enseanza Asistidad por Ordenador.- Introducin a la Farmacocintica
RESULTADOS Y COMENTARIOS
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Enseanza Asistidad por Ordenador.- Curso de Biofarmacia
CURSO DE BIOFARMACIA
Biofarmacia Moderna.- Curso de enseanza asistida por ordenador El programa se divide en los siguientes captulos: *Fundamentos: analiza los conceptos generales de biofarmacia, biodisponibilidad, farmacocintica, aclaramiento, metabolismo y criterios de bioequivalencia. Se muestran, as mismo, las ideas bsicas sobre los fenmenos de transporte; finalizando con una exposicin de las diferentes vas de administracin. *Tracto GI: en l se describen la influencia de la anatoma y morfologa del tracto gastrointestinal en la administracin oral de medicamentos, se analiza la importancia de las secreciones a lo largo del mismo, se pone de manifiesto la influencia del vaciado gstrico y de la motilidad GI en la absorcin y se finaliza exponiendo los mecanismos de digestin y absorcin de diversoso nutrientes. *Sistemas de Administracin Oral: donde se describen los tipos de excipientes usados para la elaboracin de comprimidos y cpsulas de liberacin inmediata y los ensayos de uniformidad, disgregacin y disolucin. A continuacin se exponen los diferentes tipos de formas de cesin controlada, sus mecanismos y cinticas de liberacion. Por ltimo se comentan los estudios de biodisponibilidad y bioequivalencia de las formas de administracin oral. *Prediccin de Fa: captulo que analiza los parmetros que resultan crticos para la absorcin de los frmacos y muestra cmo estimar la permeabilidad, la magnitud de la absorcin, la biodisponibilidad y la fraccin de dosis absorbida. En l se exponen tambin los conceptos de la correlacin in vitro/in vivo y del Sistema de Calsificacin Biofarmacutica BCS.
Fundamentos Introduccin Biodisponibilidad Farmacocintica Aclaramiento Metabolismo Bioequivalencia Transporte Administracin
Sigue los distintos apartados del programa anotando en tu cuaderno los conceptos ms importantes que van apareciendo y al final realiza los ejercicios de test que te propone el propio programa.
RESULTADOS Y COMENTARIOS
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RESULTADOS Y COMENTARIOS (continuacin)
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Enseanza Asistidad por Ordenador.- Simulacin Farmacocintica
SIMULACIN DE DATOS FARMACOCINTICOS

Introduction El principal objetivo de este programa es el de ensear los principios bsicos de la farmacocintica a travs de simulaciones informticas de los perfiles concentracin plasmtica de frmaco/tiempo. Estas simulaciones son una herramienta de gran valor para su comprensin y para apreciar la interrelacin de los diferentes parmetros farmacacocinticos. El programa permite al estudiante evaluar el impacto del cambio de uno o ms parmetros en los perfiles de las curvas concentracin plasmtica/tiempo. Aabarca: la administracin iv rpida (bolus) y oral, la infusin iv a velocidad constante e intermitente, la administracin nica y mltiple, y la eliminacin con cintica lineal y no leneal en los modelos monocompartimental y bicompartimental. Seguir los siguientes apartados * Simulation Examples Single Oral Dose Constant Rate IV Infusion Two Compartment Model * Simulations: Introduction to Pharmacokinetic Parameters IV Bolus Administration Oral Administration Constant Rate IV Infusion
Pharmacokinetics Simulations.- Curso de enseanza asistida por ordenador
Simulation Examples 1.- Single Oral Dose: Qu ocurre cuando se producen cambios en la ..
a)Dosis
b)Biodisponibilidad
c)Constante de eliminacin
d)Constante de absorcin
2.- Constant Rate IV Infusion: Qu ocurre cuando se producen cambios en la ..

a)Velocidad de infusin
b)Constante de eliminacin
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c)Dosis de carga
3.- Two Compartment Model: Qu ocurre cuando se producen cambios en la ..

a)Dosis
b)Constante
c)Constante
Simulations: 1.- Introduction to Pharmacokinetic Parameters: Simular curvas Cp/t con los siguientes datos
a)Constante de eliminacin: Ke= 0.1 - 0.5 1 2 (escala de Y= 100 unidades)
b)Volumen de distribucin: Vd= 5 10 15 40 (escala de Y= 25 unidades)
c)Semivida : T1/2 = 5 10 15 20 (escala de Y= 100 unidades)
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d)Aclaramiento total (TBC): (escala de Y= 250 unidades) d.1.-Vd = 5 y Ke = 0,25 0,5 0,75
d.2.-Ke = 0,5 y Vd = 10 y 25
e)AUC : (escala de Y= 25 unidades) e.1.- D = 500 y Cl = 1 y 5
e.2.-Cl = 5 y D = 1000 y 250 f)Biodisponibilidad (F) : (escala de Y= 25 unidades) F= 0,5 0,75 - 1
g)Constante de absorcin: (escala de Y= 25 unidades) Ka= 0,1 0,25 0,5 - 1
h)Dosis: (escala de Y= 25 unidades) D= 250 500 750 - 1000
2.- IV Bolus Administration a) One Compartment Model Single IV Bolus Doses: Simular curvas Cp/t y log Cp/t con los siguientes datos
D 500 500 500 Vd 12 40 30 Ke 0,5 0,2 0,2 (escala de Y= 100 unidades)
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b) Two Compartment Model Single IV Bolus Doses: Simular curvas Cp/t y log Cp/t con los siguientes datos
D= 2000 K12 1 2 2 Vc = 12 (escala de X= 20 unidades e Y = 200 unidades)) K21 K13 2 0,5 1 0,5 0,5 1
3.- Oral Administration a) One Compartment Model Single Oral Doses: Simular curvas Cp/t y log Cp/t con los siguientes datos
D 1000 1000 1000 1000 F 0,6 0,9 0,9 0,9 Vd 10 10 10 10 Ka 0,5 0,5 1,5 1,5 Ke (escala de Y= 100 unidades y X = 10 unidades)) 0,1 0,1 0,1 0,3
b) Two Compartment Model Single Oral Doses: Simular curvas Cp/t y log Cp/t con los siguientes datos D 2000 2000 2000 2000 Ka 1 2 2 2 Vc 12 12 12 12 K12 1,5 1,5 1,5 1,5 K21 0,75 0,75 0,75 0,75 K13 2 2 1 3 (escala de X= 8 e Y = 75 unidades))
4.- Constant Rate IV Infusion
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Ajuste de datos farmacocinticos mediante regresin no lineal. Programa JANA
AJUSTE DE DATOS FARMACOCINTICOS MEDIANTE REGRESIN NO LINEAL. PROGRAMA "JANA".

INSTRUCCIONES PARA EJECUTAR EL PROGRAMA JANA PARA WINDOWS
0.Si es necesario cambiar configuracin regional a Ingles de E.U., en configuracin, panel de control
1.- Para comenzar el programa: con el raton posicionarse sobre "Inicio" y pulsar el botn izquierdo del ratn, con lo que se delplegar una ventana. Sin dejar de apretar el botn izquierdo, arrastrar el ratn a "Programas" y al desplegarse, colocarse sobre "Jana para Windows" y luego sobre "Jana para Windows" otra vez 2.- Aparecer una ventana en rojo con el nombre de la firma editora del programa SCI. Esperar unos instantes y, al final, se muestra en pantalla una nueva ventana con el titulo Jana en la parte superior izquierda, sobre fondo rojo, debajo aprecen unas palabras, iconos y una tabla X Y. 3.- Situarse en la parte superior derecha de esta ventana Jana; hacer clic sobre la figura de en medio " " para que ocupen toda la pantalla las ventanas del programa. 4.Para introducir los datos en la tabla X(tiempo) Y(concentracin), es preciso previamente crear en una tabla con el nmero de casillas apropiado: Situarse en la palabra "Edit", hacer CLIC y seleccionar "Add rows"; aparecer una nueva ventana donde se debern indicar cuantas filas se quieren aadir a la ya existente en la tabla de datos tiempo/concentracin. El nmero de filas a aadir es igual al nmero de observaciones menos una, aceptar con OK . Introducir los datos tiempo/concentracin en su correspondiente casilla. Separar los decimales con punto y pulsar para que se acepte el dato. Para moverse de una casilla a otra hacerlo con el ratn o con las flechas . 6.Nuevamente hacer CLIC sobre "File" y situarse sobre "Save data as" para archivar los datos. Aparece una ventana, en cuya parte superior se escribe el nombre de archivo elegido con la extension ".DAT" (Ej.: ENSAYO-1.DAT). A continuacin Aceptar. Situarse sobre el icono hacer CLIC para que represente grficamente los datos. Situarse sobre la palabra "Window" de la ventana del programa Jana y desplegarla con 1 CLIC, elegir "Tile" haciendo tambin CLIC para que las ventanas se coloquen de forma que se puedan ver la tabla de datos y la grfica. Situarse sobre el icono hacer CLIC, aparecer una ventana con las siguientes instrucciones, que permiten establecer las condiciones del estudio.
5.-
7.8.-
9.-
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10.Situarse sobre el icono que representa "una calculadora" y hacer CLIC para que el ordenador realice el ajuste de datos segn las condiciones establecidas en el punto anterior (condiciones del estudio). 11.Para que las ventanas se coloquen de forma que se puedan ver la tabla de datos, la grfica y los resultados hacer lo siguiente: Situarse sobre la palabra "Window" y desplegarla con 1 CLIC, elegir "Tile" haciendo tambin CLIC.
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12.Cuando en las condiciones del estudio se ha establecido en la casilla de "Maximun exponents" un nmero superior a 1, hay hacer CLICK en el icono de "calculadora" tantas veces como indique dicho nemro, para que el programa contine realizando las operaciones de ajuste como se hizo en el apartado 10. 13.Para IMPRIMIR los resultados situarse sobre el icono que representa "una impresora" y hacer CLIC. 14.Para ARCHIVAR el resultado del ajuste realizado situarse en la barra superior, elegir "File" hacer CLIC, elegir "Save Output" y, en la parte superior izquierda de la ventana que se despliega, dar nombre al archivo: el mismo que se dio a la tabla de datos, PERO AHORA CON LA EXTENSION "JAN" (Ej.: ENSAYO-1.JAN). A continuacin "Aceptar". 15.Para realizar un NUEVO AJUSTE situarse nuevamente en la barra superior, elegir "File" hacer CLIC, elegir "New" y aparece una nueca tabla de datos con dos casillas vacas. Realizar las mismas operaciones que anteriormente desde el apartado 4. 16.Para salir del programa hacer CLIC sobre el icono "EXIT".
Ajuste de datos farmacocinticos mediante un programa de regresin no lineal.

En las paginas siguientes se proponen ejemplos con la finalidad de que el alumno analice cmo se modifica el perfil de las curvas de niveles plasmticos/tiempo al cambiar el valor de las constantes farmacocinticas. 1.- Siguiendo las instrucciones de las pginas anteriores, utilizar el programa de regresin no lineal JANA para establecer el modelo farmacocintica compartimental y la ecuacin que mejor se ajusta a los datos de cada uno de los ejemplos. 2.- Completar la tabla, que acompaa a cada grupo de jemplos, con los parmetros farmacocinticas obtenidos en el ajuste, indicando en cada caso el modelo compartimental y calculando las constantes de velocidad de transferencia, el AUC, Cmax y tmax. 3.- Representa en papel milimetrado y en una misma grfica los ejemplos propuesto en cada uno de los grupos de simulaciones. 4.- Indica las ecuaciones Cp=f(t) para cada ejemplo y explica como influye el valor de las constantes farmacocinticas en la forma de las curvas.
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo I
Realizar el ajuste de los datos de la prctica Estudio farmacocintico del Rojo Fenol 1.- Datos relativos a la administracin intravenosa (pg. 7). - Tabla 3.- Niveles de Rojo Fenol en sangre Tiempo (h/min/s) 2 min 24 s 4 min 5 s 9 min 58 s 15 min 36 s 30 min 52 min 48 s 1h 0 min 3 s 1h 27 min 1h 57 min 36 s 2h 30 min - Resultados : Tiempo (h) Conc. (g/ml)
2.- Datos relativos a la administracin intraperitoneal (pg. 13). - Tabla 6.- Niveles de Rojo Fenol en plasma. Tiempo (h/min/s) 3 min 6 min 9 min 57 s 15 min 30 min 45 min 60 min 1h 30 min 2h 2h 30 min - Resultados
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Tiempo (horas)
Conc. (g/ml)
3.- Comentarios
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Ajuste de datos farmacocinticos mediante el programa informtico "jana". SIMULACIN GRUPO I TIEMPO 0,1 0,2 0,3 0,5 0,75 1 1,5 2 3 4 5 7 Tabla 25.- Concentraciones plasmticas g/mL EJ-1 EJ-2 EJ-3 48,77 47,56 46,39 47,56 45,24 43,04 46,39 43,04 39,93 44,12 38,94 34,36 41,45 34,36 28,49 38,94 30,33 23,62 34,36 23,62 16,23 30,33 18,39 11,16 23,62 11,16 5,27 18,39 6,77 2,49 14,33 4,10 1,18 8,69 1,51 0,26 Tabla 26- Rsultados del GRUPO I EJ -1 Modelo r Co C A Ke T1/2 Ka Ro K21 K13 K12 AUC Tmx Cmx EJ -2 EJ -3 EJ -4 EJ-4 45,24 40,94 37,04 30,33 23,62 18,39 11,16 6,77 2,49 0,92 0,34 0,05
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Figura 25.- Representacin grfica de los datos de los ejemplo del GUPO I.
Comenta la foma de las curvas y compara entre si los parmetros farmacocinticos Ejemplo EJ-1 Ecuacin Ejemplo EJ-2 Ejemplo EJ-3 Ejemplo EJ-4 Ecuacin Ecuacin Ecuacin
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo II
Ajuste de datos farmacocinticos mediante el programa informtico "jana". SIMULACIN GRUPO II Tabla 27.- Concentraciones plasmticas g/mL Ti (h) EJ-5 EJ-6 EJ-7 0,1 37,70 42,87 46,65 0,2 30,06 37,22 43,59 0,3 25,25 32,73 40,78 0,5 20,11 26,25 35,85 0,7 17,70 22,00 31,69 0,9 16,30 19,13 28,17 1 15,78 18,04 26,61 1,4 14,12 15,00 21,49 2 12,13 12,33 16,19 3 9,45 9,46 10,94 4 7,36 7,36 7,91 5 5,73 5,73 5,93 Tabla 28- Rsultados del GRUPO II EJ -5 Modelo r Co C A Ke T1/2 Ka Ro K21 K13 K12 AUC Tmx Cmx EJ -6 EJ -7
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo II
Figura 26.- Representacin grfica de los datos de los ejemplo del GUPO II
Comenta la foma de las curvas y compara entre si los parmetros farmacocinticos Ejemplo EJ-5 Ecuacin Ejemplo EJ-6 Ejemplo EJ-7 Ecuacin Ecuacin
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo III
Ajuste de datos farmacocinticos mediante el programa informtico "jana". SIMULACIN GRUPO III Tabla 29.- Concentraciones plasmticas g/mL Ti (h) EJ-8 EJ-9 EJ-10 0,1 44,07 43,59 42,66 0,2 39,13 38,21 36,48 0,3 35,02 33,68 31,28 0,5 28,69 26,61 23,17 0,7 24,19 21,49 17,33 0,9 20,93 17,71 13,09 1 19,64 16,19 11,42 1,4 15,92 11,76 6,76 2 12,68 7,91 3,26 3 9,52 4,54 1,07 4 7,37 2,72 0,38 5 5,73 1,64 0,14 Tabla 30.- Rsultados del GRUPO III EJ -8 Modelo r Co C A Ke T1/2 Ka Ro K21 K13 K12 AUC Tmx Cmx EJ -9 EJ -10
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo III
Figura 27.- Representacin grfica de los datos de los ejemplo del GUPO III.
Comenta la foma de las curvas y compara entre si los parmetros farmacocinticos Ejemplo EJ-8 Ejemplo EJ-9 Ejemplo EJ-10 Ecuacin Ecuacin Ecuacin
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo IV
Ajuste de datos farmacocinticos mediante el programa informtico "jana". SIMULACIN GRUPO IV Tabla 31.- Concentraciones plasmticas g/mL Tiempo EJ-11 EJ-12 EJ-13 0,1 4,6066 8,7702 19,0066 0,2 8,4893 15,4069 29,3563 0,3 11,7345 20,3305 34,5285 0,5 16,6137 26,3434 36,9303 0,75 20,3357 29,0921 34,1322 1 22,1407 28,8204 29,8483 1,5 22,1893 24,4931 21,9232 2 19,8197 19,0972 15,9399 3 13,4472 10,5977 8,4063 4 8,1929 5,6595 4,4326 5 4,7256 2,9939 2,3373 7 1,4474 0,8333 0,6499 Tabla 32.- Rsultados del GRUPO IV EJ -11 Modelo r Co C A Ke T1/2 Ka Ro K21 K13 K12 AUC Tmx Cmx EJ -12 EJ -13 EJ -14 EJ-14 46,9002 43,9927 41,2653 36,3075 30,9392 26,3646 19,1446 13,9019 7,3303 3,8652 2,0381 0,5667
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo IV
Figura 28.- Representacin grfica de los datos de los ejemplo del GUPO IV.
Comenta la foma de las curvas y compara entre si los parmetros farmacocinticos Ejemplo EJ-11 Ejemplo EJ-12 Ejemplo EJ-13 Ejemplo EJ-14 Ecuacin Ecuacin Ecuacin Ecuacin
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo V
Ajuste de datos farmacocinticos mediante el programa informtico "jana". SIMULACIN GRUPO V Tabla 33.- Concentraciones plasmticas g/mL Tiempo EJ-15 EJ-16 EJ-17 0,1 8,9244 8,7702 8,6107 0,2 15,9673 15,4069 14,8411 0,3 21,4776 20,3305 19,2007 0,5 28,9899 26,3434 23,8651 0,75 33,8462 29,0921 24,9236 1 35,6166 28,8204 23,2544 1,5 34,5789 24,4931 17,3343 2 31,2056 19,0972 11,7020 3 23,7701 10,5977 4,7308 4 17,6976 5,6595 1,7980 5 13,1226 2,9939 0,6693 7 7,2033 0,8333 0,0911 Tabla 34.- Rsultados del GRUPO V EJ -15 Modelo r Co C A Ke T1/2 Ka Ro K21 K13 K12 AUC Tmx Cmx EJ -16 EJ -17
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo V
Figura 29.- Representacin grfica de los datos de los ejemplo del GUPO V.
Comenta la foma de las curvas y compara entre si los parmetros farmacocinticos Ejemplo EJ-15 Ejemplo EJ-16 Ejemplo EJ-17 Ecuacin Ecuacin Ecuacin
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo VI
Ajuste de datos farmacocinticos mediante el programa informtico "jana". SIMULACIN GRUPO VI Ti (h) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 1,4 2 2,4 3 5 Tabla 35.- Concentraciones plasmticas g/mL EJ-18 EJ-19 EJ-20 59,20 34,309 24,586 53,20 46,087 36,885 48,36 48,449 42,240 44,41 47,133 43,780 41,17 44,598 43,319 38,49 41,853 41,887 36,24 39,282 40,058 34,33 36,999 38,140 32,70 35,010 36,286 31,28 33,285 34,565 26,99 28,242 29,173 22,66 23,479 24,041 20,40 21,089 21,542 17,51 18,083 18,449 10,61 10,954 11,170 Tabla 36.- Rsultados del GRUPO VI EJ -18 Modelo r Co C A Ke T1/2 Ka Ro K21 K13 K12 AUC Tmx Cmx EJ -19 EJ -20 EJ -21 EJ-21 16,227 26,520 32,755 36,245 37,908 38,378 38,093 37,347 36,338 35,197 30,569 25,163 22,452 19,157 11,577
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo VI
Figura 30.- Representacin grfica de los datos de los ejemplo del GUPO VI.
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo VII
Ajuste de datos farmacocinticos mediante el programa informtico "jana". SIMULACIN GRUPO VII Ti (h) 0 0,5 1 2 3 4 5 7,5 8 9 10 12 14 20 Tabla 37.- Concentraciones plasmticas g/mL EJ-22 EJ-23 EJ-24 EJ-25 0 0 0 0 0,9400 0,8848 0,7869 0,6321 1,7696 1,5739 1,2642 0,8647 3,1478 2,5285 1,7293 0,9817 4,2211 3,1075 1,9004 0,9975 5,0570 3,4587 1,9634 0,9997 5,7080 3,6717 1,9865 1,0000 6,7732 3,9059 1,9989 1,0000 5,2749 3,0419 1,5567 0,7788 3,1994 1,8450 0,9442 0,4724 1,9405 1,1191 0,5727 0,2865 0,7139 0,4117 0,2107 0,1054 0,2626 0,1514 0,0775 0,0388 0,0131 0,0075 0,0039 0,0019 Tabla 38.- Rsultados del GRUPO VII EJ -22 Modelo r Co C A Ke T1/2 Ka Ro K21 K13 K12 AUC Tmx Cmx EJ -23 EJ -24 EJ -25
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Aplicacin del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo VII
Figura 31.- Representacin grfica de los datos de los ejemplo del GUPO VII.
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Cuaderno de Precticas de Cia y Farmacocinetica

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