Estrutura quaternria E t t t i Hemoglobina

A. S. Tanaka (Bioqumica 2008)

Nveis d O N i de Organizao Estrutural das Protenas i E t t ld P t

Transporte de Oxignio (O2)

O2 apresenta solubilidade extremamente baixa no sangue Os vertebrados desenvolveram protenas que garantem o suprimento de O2:

Mioglobina: localizada nos msculos msculos,

O2

reserva de

aumenta 70 vezes a capacidade de transporte de O2. Participa do transporte de CO2 p p

Hemoglobina: l li d nas h i , localizada hemcias

Formas d t F de transporte de O2 t d

Dissolvido no sangue: 2%

Oxihemoglobina: 98%

Mioglobina (Mb)
Em 1957, John Kendrew apresentou a estrutura tridimensional da Mb t idi i ld (primeira protena cristalizada!!)
Protena globular solvel : uma nica cadeia polipeptdica de 151 resduos (17600 Da) Grupo heme: liga O2 Molcula compacta: alta proporo de -helices: 75% dos aminocidos associados em 8 -helices (A-H)

Formao do grupo Heme

A capacidade da Mb e da Hb fixar O2 depende do grupo prosttico HEME

Estrutura bsica das porfirinas

Protoporfirina IX+Fe2+=Heme

Heme
O Ferro no Heme pode estar como F 2+ ou F 3+ F H d t Fe Fe Somente o Fe2+ pode ligar-se ao O2 ligarligao reversvel g Oxihemoglobina ou Oximioglobina cor vermelha lh O Fe3+ no permite a ligao do O2 meta-hemoglobina, cor castanha

Ligao do O2 ao Fe2 Li d

Histidina

Plano do anel da porfirina

Mioglobina x Heme: um ambiente protegido

His distal

His proximal i l Modificado de Watson HC, Prog. Stereochem, 1969

Hemoglobina
Heme

2
Molcula de Hb quase esfrica:

quatro cadeias (parecidas com a mioglobina) formando arranjo tetradrico (68000 Da) Duas regies tem seqncias altamente conservadas: bolses do heme e as interfaces /.
Mutaes nestas regies interferem na ligao normal do O2

2
Contatos entre as unidades

Mioglobina e cadeia da Hemoglobina

HEME

Mioglobina

Cadeia da hemoglobina

Modificado de Perutz, Sci. Amer. 239: 6, 1978

Cadeias de Hemoglobina Humana

Cadeias = 141 resduos Cadeia = 146 resduos Hb A: predominante nos adultos, 22 A: Hb F: hemoglobina fetal , 22 F:

Ligaes 1-1 e 2-2

Cada cadeia est em contato com 2 cadeias . H pouca interao entre duas cadeias ou 2

Foras que mantm unidas as cadeias:

interaes hidrofbicas, pontes de hidrognio e pontes salinas hidrognio pontes

Estrutura tridimensional da Hemoglobina

Qumico e bilogo austraco austraco, elucidou a estrutura tridimensional da hemoglobina por dif difrao do raio-X d i X Iniciou a determinao da estrutura em 1936 e concluiu
em 1959

Max Ferdinand Perutz M F di dP t (1914-2002)

Ganhou o Prmio Nobel de Qumica (1962), por essa descoberta.

Estrutura da HbH (T) e da HbO2 (R) ( ) ( )

Desoxihemoglobina Oxihemoglobina

Conformao T

Conformao R

Interao do O2 com o heme

Hlice F Conformao T Conformao R

A HisF8 proximal desloca a Hlice F

Hlice F

HbO2 HbH
Plano da porfirina

Adaptado de Baldwin e Chothia J. Mol. Biol. 129:192, 1979

Mudanas na Estrutura Quaternria da HbH HbO2

rotao de 15o de 11 em relao ao 22

Adaptado de Baldwin e Chothia J. Mol. Biol. 129:192, 1979

Propriedades Alostricas da Hb
A ligao de um O2 facilita a ligao de s (e e o coope vo) mais O2 (efeito cooperativo) A afinidade da Hb por O2 depende do pH e da pCO2 ( f it Bohr) d CO (efeito B h ) A afinidade da Hb por O2 regulada p p g por fosfatos orgnicos (BPG) IMPORTANTE: a Mioglobina no apresenta nenhuma destas propriedades

Efeito cooperativo

A ligao de uma molcula de O2 com o grupamento H Heme da Hb facilita a ligao d f ili li das outras molculas de O2

Efeito cooperativo
Hb4 + O2 Hb4(O2) + O2 Hb4(O2)2 + O2 Hb4(O2)3 + O2
V1 V2 V3 V4

Hb4(O2) Hb4(O2)2 Hb4(O2)3 Hb4(O2)4

V 1 < V2 < V3 < V4

Curva de saturao da Mb e da Hb
Para qualquer pO2, Y maior para a Mb Sa atura o do que para a Hb

Mioglobina

Hemoglobina g

P50 Mb= 2.8 torr P50 Hb =26 torr

pO2presso (torr) P50= presso parcial de O2 na qual 50% dos stios esto ocupados

Interao Alostrica
Aumento de H+ ou CO2 e aumento de temperatura diminuem a afinidade da Hb pelo O2

Fatores que afetam a afinidade da Hb pelo O2

Diminuem a afinidade f

temperatura H+ ( pH) p )

CO2

2,3 BPG

Efeito Bohr
Relaes alostricas entre H+, CO2 e O2

Nos tecidos, o p mais baixo e o tec dos, pH a s ba o pCO2 mais alta resulta na converso da forma R para T Isto causa a liberao do O2 porque a forma T tem menor afinidade por O2 do que a R.

pulmes

tecidos

Mecanismo do efeito Bohr

O O2 e H+ no se ligam no mesmo stio na Hb O resduo que mais contribui para efeito Bohr a His 146 () que forma um par inico com o Asp94 () estabiliza a conformao T A forma T tem mais afinidade por ions H+ q que a forma R pK mais alto p

Efeito alostrico do BPG

SabiaSabia-se que o 2,3-BPG estava presente nas 2,3e c s es su u o se co ec d hemcias antes de sua funo ser conhecida Em 1967, Ruth and Reinhold Benesch q g descobriram que o BPG se liga a Hb e reduz sua afinidade por O2

Stio de interao do BPG na desoxihemoglobina

HbHb-BPG+4O2

Hb(O2)4+ BPG

(cargas positivas em azul)

A HbO2 perdeu seu stio para BPG

Efeito alostrico BPG

Altitudes HbF

Hemoglobina Fetal
Hb Fetal (2 2) (
Menor afinidade pelo BPG His Ser
O2 flui da Hb materna para a Hb fetal Hemoglobina fetal

Hb materna

Transporte de CO2

CO2 + Prot-H2NProt-

H+ + Prot-NHCOOProtCarbamino compostos

Contribui para o efeito Bohr

CO2 + H2O H2CO3 H+ + HCO3HbO2 + H+ HbH + O2

Os ions H+ so tamponados pela Hb

AC

Transporte de O2
1. O2 se difunde dos alveolos pulmonares para os capilares chegando na circulacao 2. Nas hemcias, o O2 se liga a hemoglobina. 3. Em paralelo, o CO2 se difunde do sangue para os alveolos. 4. A menor concentacao de CO2 dissolvido no sangue faz com que o pH (~7.6) seja mais alto no pulmao do que nos tecidos perifericos (~pH 7.2) onde a pCO2 alta. CO2 lt

5. As hemcias contendo HbO2 chegam nos tecidos perifricos pO2 baixa baixa. O pH do sangue diminui porque o CO2 liberado. A combinao de uma baixa pO2 e um pH baixo nos tecidos perifericos provoca uma diminuio na saturao de O2 O2 liberado pela hemoglobina!!!!

Doenas moleculares
O conceito de doena molecular veio dos estudos das Hb mutantes MUTAO PROTENA ALTERADA FUNO ANORMAL DOENA So conhecidas cerca de 1500 doenas cujas bases bioqumicas esto determinadas. H um grande nmero de doenas cujas bases bioqumicas no so conhecidas.

Efeitos da Mutao
DNA com alterao estrutural

mRNA com cdon(s) alterado(s) ( ) ( )

Protena com seqncia de aminocidos anormal

Anemia Falciforme
Primeira doena molecular documentada: James Herrick descreveu o primeiro caso de anemia falciforme (1910)
Paciente negro, anmico g , Reduo do O2 hemcias em forma de foice.