BIOLOGA CELULAR: TEMA 1: INTRODUCCIN: La teora celular Clulas procariticas y clulas eucariticas Estructura general de las clulas eucariticas

Medidas utilizadas en Biologa Celular Instrumentos y tcnicas de estudio de las clulas: microscopa ptica, microscopa electrnica y fraccionamiento celular. Las clulas del organismo se originan a partir de una sola (cigoto). Las diferencias que existen entre las clulas de dicho organismo se consiguen mediante diferencias en la expresin gentica. 1.4. MEDIDAS UTILIZADAS EN BIOLOGA CELULAR. Puesto que las clulas son pequeas para poder hablar de sus diferencias son necesarias unas unidades especficas. UNIDADES DE LONGITUD: m (micra o micrmetro) !es 10 3 mm (milsima parte del milmetro) nm (nanmetro) !10 6 mm (ngstrom) ! 10 7 mm UNIDADES DE PESO: mg (miligramo) ! 10 3 g g (microgramo) ! 10 6 g d (dalton) ! peso de un tomo de hidrgeno ng (nanogramo) ! 10 9 g Ej: H2O !18 d pg (picogramo) ! 10 12 g Kd (kilodalton)! 10 3 d. Ej: Hemoglobina:64'5 Kd 1.5. INSTRUMENTOS Y TCINCAS PARA EL ESTUDIO DE LAS CLULAS. Al ser las clulas muy pequeas y notablemente complejas. Su estudio siempre depende de una serie de herramientas que se han desarrollado en tiempos relativamente recientes. Los microscopios sirven para el estudio de la clula en su conjunto. Microscopio ptico. Es un microscopio de luz transmitida (atraviesa la muestra) y se observa en campo claro. Consta de los siguientes elementos. En primer lugar hay una fuente de iluminacin en la parte inferior del microscopio, en su esqueleto (estativo). La luz pasa a travs de un condensador, formado por una o ms lentes, que centra la luz condensando la iluminacin. Por encima est la platina portapiezas con un agujero en el centro a travs del cual pasa la luz. La platina se puede desplazar con una serie de mandos. 1

Sobre la platina se dispone la muestra en una lmina denominada portaobjetos. Despus la luz pasa por el objetivo, el ocular y llega al ojo. El microscopio tiene una limitacin fundamental que recibe el nombre de lmite de resolucin: es la distancia mnima a la cual dos puntos u objetos se pueden observar separados. Se ajusta a la siguiente ecuacin: L r = 0'61 / AN : longitud de onda AN: apertura numrica. Caracterstica del objetivo que se est empleando. AN= N sen N: ndice de refraccin entre la muestra y el objetivo. Los mejores objetivos que existen en la actualidad tienen un ngulo =70, sen 70=0'94. El objetivo puede tener como mximo una apertura numrica de 1'4 en el medio ACEITE. La luz empleada es la luz visible y su longitud de onda est entre 0'40'7 m. 0'4 zona del violeta 0'7 rojo lejano L r= 0'61 0'4 /1'4 = 0'2 m !lmite de resolucin Terico del microscopio ptico Podemos ver partculas que tengan como dimetro 0'2 m o ms, pero esto en la prctica es imposible. El L r real del microscopio ptico es de 0'5 m, y ese tamao lo tiene una bacteria (procariota) o una mitocondria (orgnulo de eucariota). Son las estructuras ms pequeas que se pueden observar. En la mayora de los organismos las clulas forman tejidos y rganos (pluricelulares) y no pueden observarse directamente, sino que deben sufrir un tratamiento hasta poder observarlos al microscopio !PROCESO DE FIJACIN. Durante este proceso se inmoviliza a las clulas matndolas pero preservndolas y la sustancia utilizada es el fijador. En trminos qumicos la fijacin consiste en establecer puentes entre las diferentes macromolculas que constituyen la clula, de forma que quedan situadas fijas en su posicin original. Por otra parte el fijador prepara a las clulas para la tincin (hace permeable a las clulas a los colorantes). Hay que realizar rebanadas finas para poder observar los tejidos y rganos al microscopio. Se utilizan los microtomos. Existen diversos tipos, pero el ms corriente es el microtomo de rotacin. En el brazo que sube y baja tenemos el tejido que queremos cortar, y para ello hay una manivela. Cada vuelta de la manivela, el brazo se mueve un nmero determinado de m. Abajo hay una cuchilla que puede ser de acero, vidrio e incluso de diamante y el material depende del grosor de la seccin que queramos obtener. Cada vez que el brazo baja se corta una seccin que se dispone en el portaobjetos. El grosor de las secciones para microscopa ptica es de 110 m. Para microscopa electrnica las secciones tienen un grosor siempre por debajo de 0'1 m. Los tejidos y rganos son estructuras muy frgiles y no pueden cortarse directamente con el microtomo (son 2

blandos). Antes hay que realizar el proceso de INCLUSIN. La inclusin consiste en sumergir los tejidos y rganos en una sustancia que se denomina medio de inclusin que cuando est en forma lquida penetra en el interior de un tejido. Ese medio de inclusin se puede volver slido y al volverse slido se obtiene un bloque duro y rgido que se puede cortar en el microtomo. Existen dos tipos principales de medios de inclusin: Las parafinas que a una temperatura mayor a 5560c son lquidas, y a T ambiente son slidas. Las resinas sintticas, que a T ambiente son lquidas y a ms de 70C se lleva a cabo un proceso de polimeriazacin irreversible de forma que el bloque es imposible que vuelva a disolverse. Hay un mtodo alternativo a la INCLUSIN. La pieza puede volverse dura mediante la congelacin, q2ue normalmente se realiza en nitrgeno lquido que est a temperatura baja o a nieve carbnica, es decir, T de 70C. El seccionamiento de la pieza congelada se lleva a cabo en un microtomo con una cmara fra de 20C que recibe el nombre de microtomo criosttico o criostato. Cuando observamos una seccin con el microscopio de campo claro no vemos prcticamente nada, pues las clulas suelen ser invisibles y hay que llevar a cabo el proceso de tincin, para el que se utilizan una serie de colorantes orgnicos. Cada colorante se une a un componente especfico de la clula. El ms utilizado es la hematoxilina que es de color azulado y se une a molculas con carga negativa y pone de manifiesto la distribucin del ADN, ARN y protenas cidas de la clula, ya que tie mucho y adems, regiones como ribosomas abundantes. Para marcar las muestras se pueden utilizar sustancias fluorescentes que se caracterizan porque absorben luz de una determinada longitud de onda y posteriormente emiten otra luz de longitud de onda ms grande, y por lo tanto, una luz de menor energa. Por lo tanto, si iluminamos una muestra con fluorescente con una luz de longitud de onda a la que absorbe y lo visualizamos con unos filtros que slo deja pasar la luz de longitud de onda resultante, lo que da lugar a fluorescente sobre azul. En el microscopio de fluorescencia la fuente de luz es una lmpara de mercurio sometida a mucha presin, localizada en un lateral del microscopio. Esta luz es cribada por una serie de filtros. Filtro de corte: deja pasar la luz de una determinada longitud de onda. Esa luz (banda de 10 nm) llega a un espejo constituido por una serie de ranuras ordenadas (espejo dicnico), el cual tiene un valor. Por ejemplo, posee un valor de 510 nm, y hace que la luz de longitud de onda menor a 510 nm la refleja, y la de longitud de onda mayor la atraviesa y pasa a un segundo filtro. Segundo filtro de corte: Elimina las seales de fluorescencia, aunque deja tambin pasar la luz de una determinada longitud de onda. La microscopa puede utilizar diferentes tipos de colorantes: Fluorescina: Absorbe luz de color azul (=485 nm) y refleja una luz de =520 nm o superior, la cual es de color verdosoamarillento. Rodamina: Absorbe luz verde de =546 nm y emite por encima de 590 nm, luz roja. DAPI: Absorbe =365 nm (ultravioleta) y emite luz de 420 nm o ms. Esa luz es de color azul. Para diferenciar cada colorante hay que utilizar una serie de filtros especiales. Gracias a este tipo de microscopa, se pueden observar varias estructuras en tres tejidos diferentes. 3

Para llevar a cabo ciertos estudios hay que hacerlo en clulas vivas. Para ello hay que utilizar microscopios con sistemas pticos especiales. ****ITI TIPOS DE MICROSCOPA: De contraste de fases. De contraste interdiferencial de Nomarski. Existe otra tcnica que es la microscopa de campo oscuro que permite estudiar clulas vivas y la base de este tipo es iluminar la muestra desde los laterales y slo la luz reflejada es la que se utiliza. Con este tipo de microscopa de campo oscuro, la clula aparece brillante sobre un fondo azul. Otras variantes de microscopa ptica desarrollada gracias al avance de los programas de procesamiento de imgenes: Microscopa confocal. Es una variante de la microscopa de fluorescencia. Con este tipo se realizan secciones pticas sin tener que cortar la muestra. Microscopa para estudiar microtbulos: Microscopa de contraste interdiferencial intensificado por vdeo. Los microtbulos tienen un dimetro de 0'025 m. MICROSCOPA ELECTRNICA: La frmula L r = 0'6 /AN sirve tambin para la microscopa electrnica, pero se utiliza un haz de electrones como fuente luminosa, por lo que el ndice de resolucin es ms pequeo que con el ptico. Los electrones tienen una que depende inversamente de su velocidad (a menor longitud de onda, mayor velocidad). Para que funcione, el microscopio necesita vaco para que los electrones tengan velocidad y longitud de onda. La velocidad depende del voltaje del microscopio. Por ejemplo: Voltaje: 100.000 voltios = 0'004 nm El lmite de resolucin sera 0'002 nm. L r = 0'6 / AN Utiliza lentes electromagnticas porque tienen ms defectos que las del microscopio ptico. Por lo tanto, en la realidad la resolucin del microscopio electrnico es de 2 nm. Microscopio electrnico de transmisin: Semejante a un microscopio ptico. Aunque es ms grande y est invertido, pero tiene los mismos elementos. La fuente de electrones que est situada arribe se denomina filamento o ctodo. Los electrones procedentes son acelerados por un nodo que est en las cercanas del ctodo. Los electrones atraviesan el nodo y pasan por una lente electromagntica que hace de condensador y por debajo de este se sita la muestra. Los electrones atraviesan la muestra y paran a modo de objetivo. Posteriormente llegan a otra lente que acta como ocular y finalmente los electrones llegan del todo del microscopio, la cual se puede quitar de la zona de paso de los electrones, entonces los electrones pasan a unas cmaras donde hay unas placas de aproximadamente 10 cm de lado, donde obtenemos un negativo que 4

se puede procesar en un ampliador. *mirar dibujo. En el contraste de la muestra no se utilizan los mismos colorantes que en la microscopa ptica y las secciones son muy finas (el grosor adecuado oscila entre 50100 nm). Se utiliza un microtomo especial que utiliza cuchillas de vidrio, sobre las que se monta una estructura que es una balsa donde se deposita agua. Al bajar el brazo de ultramicrotomo que contienen la muestra, Los cortes quedan flotando en esa balsa, los cuales hay que cogerlos con una especie de red (rejilla, de 3 mm de dimetro).

+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN. Lo podemos equiparar al microscopio ptico (tiene prcticamente sus mismos componentes), pero es mucho ms grande y est invertido. La fuente de electrones que est situada arribe, recibe el nombre de filamento o ctodo. Los electrones son acelerados por un nodo que se encuentra en las cercanas del ctodo. El nodo es como un anillo y es atravesado por los electrones. Despus pasan por una lente electromagntica que hace la funcin de condensador. Debajo se sita la muestra que es atravesada por los electrones. La luz pasa a travs de otra lente electromagntica que funciona a modo de objetivo. Los electrones llegan a otra lente que acta como ocular y finalmente llegan a una pantalla situada abajo que es fluorescente. Esta pantalla se puede quitar y entonces llegan a otro compartimento (cmaras fotogrficas) que tiene placas que actan como los negativos. El contraste de las muestras no se lleva a cabo con los mismos colorantes y las secciones son muy finas (entre 50100 nm). Se utiliza un microtomo especial con cuchillas de vidrio en forma de tringulo sobre las que se monta una estructura que es como una balsa con agua y al bajar el microtomo los cortes queda flotando en ella. Los cortes se pescan con una red (rejilla) de 3 mm de dimetro. Los electrones tienen poco poder de penetracin, no son capaces de atravesar secciones muy gordas, por eso son de 50100 nm. La FIJACIN de las muestras es doble (es especfica para microscopa electrnica). La primera solucin fijadora es Glutaraldeido al 3% ! tampn fosfato. El ph " 7'4 y la concentracin es fisiolgica 0'1M. La segunda fijacin (postfijacin) se lleva a cabo con tetraxido de osmio (Os O4) que inmoviliza a los lpidos aunque tambin en un cierto grado a las protenas. En el caso concreto de la microscopa de transmisin el contraste se lleva a cabo con soluciones de determinados metales pesados. Por ejemplo: Acetato de Uranilo. Aparecen tonos grises de diferente intensidad. Con este tipo de microscopio se pueden alcanzar 100.000 aumentos.

+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ MICROSCOPA ELECTRNICA DE BARRIDO. Se emplean los electrones que son reflejados por la muestra. Primero pasan por una lente electromagntica que funciona ms o menos como el condensador del microscopio ptico. A continuacin tenemos otra lente que es el deflector y despus otra que acta como objetivo. Luego hay un cilindro de latn o de cobre donde 5

est la muestra y al llegar los electrones a la misma chocan sobre su superficie y se reflejan. El deflector controla el barrido del haz de electrones. En las cercanas de la muestra hay una estructura que se denomina detector, que lleva la seal a una pantalla de televisin y podemos ver en ella la superficie de la muestra. A la pantalla le podemos hacer fotos. El proceso que sufren las muestras es el siguiente: Fijacin igual que en el M.E.T. Secado de la muestra en un aparato de punta crtico y queda completamente seca. Sombreado con un metal, normalmente oro. El L r del M.C.B. es de 10 nm mayor del M.E.T. Por lo tanto, los aumentos que se consiguen son menores aproximadamente 20.000 veces. TECNICAS ESPECIALES PARA MICROSCOPA ELECTRNICA (PARA M.E.B.) Tcnica del sombreado metlico: El MET se puede utilizar para estudiar la superficie de una muestra a grandes aumentos. La muestra se coloca sobre un soporte y se evapora un metal pesado sobre la misma desde un lateral. El metal se deposita sobre la muestra con un cierto ngulo y la muestra queda cubierta de forma irregular. Despus se evapora sobre ella una pelcula de carbono que es transparente y que refuerza la muestra. Queda una capa que es la rplica de la superficie de la muestra y eliminamos la muestra con un disolvente. Cogemos la rplica y la situamos sobre la rejilla (en la que antes hemos depositado una pelcula de material transparente a los electrones de carbono). Ahora ya podemos observarla en el MET. Podemos observar estructuras tan pequeas como macromolculas. Por ejemplo: miosina. ++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ MICROSCOPA ELECTRNICA DE CRIOFRACTURA: Partimos de una clula y congelamos la muestra con nitrgeno lquido a 200C. Utilizamos una cuchilla para fracturar el bloque de hielo. El plano de fractura pasa por la mitad de la bicapa lipdica de la membrana. A partir de los dos fragmentos que hemos obtenido podemos obtener una rplica y observarla con el MET. Fundamentalmente se observa el interior de las membranas de las clulas. Por ejemplo: membrana tilacoide.

+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ MICROSCOPA ELECTRNICA DE GRABADO PROFUNDO: Partimos de una muestra congelada con nitrgeno lquido y posteriormente se fractura igual que antes. Ahora se sublima una capa superficial de hielo y as vemos lo que hay en el interior del citoplasma de la clula adems de la membrana. Realizamos el sombreado metlico, obtenemos la rplica y la observamos con MET. Tincin negativa: La muestra que queremos observar se coloca sobre una rejilla en la que hemos 6

puesto una pelcula de carbono transparente. La muestra puede ser desde una seccin a una solucin con macromolculas. Procedemos a meter la rejilla en una solucin de un metal pesado como el acetato de uranilo. La sacamos y la dejamos secar. La solucin ha formado una pelcula bastante opaca y homognea sobre la rejilla y la zona donde se encuentra la muestra se observa ms clara ! fondo oscuro. Es til para observar estructuras del citoesqueleto (por ejemplo: filamentos de actina) y ribosomas. Fraccionamiento celular: Hay tcnicas que permiten separar los diferentes orgnulos que constituyen la clula. Son tcnicas complejas donde el utensilio fundamental es una ultracentrifugacin que se combina con otros tratamientos. Para separar los orgnulos de una clula hay que iniciar el fraccionamiento por un rgano (Ej: hgado). Hacemos una TRITURACIN del mismo y obtenemos lo que se denomina homogeneizado. En ste hay: clulas enteras, ncleos enteros, otros orgnulos que se rompen en pequeos fragmentos que se reorganizan y formas pequeas vesculas que reciben el nombre de microsomas. Se FILTRA el homogeneizado a travs de un tamiz y se procede a la centrifugacin a baja velocidad (1000 g ). A los 10 minutos obtenemos: Precipitado. Sobrenadante (fundamentalmente clulas enteras y ncleos) El sobrenadante se vuelve a centrifugar a 20000 g durante 20 minutos y volvemos a obtener: Precipitado (recibe el nombre de F. Microsomal porque contiene fragmentos de orgnulos en vesculas, microsomas). Sobrenadante De nuevo centrifugamos el sobrenadante a 150000g durante 3 horas, y obtenemos: Precipitado (ribosomas, virus y grandes molculas). Sobrenadante Nos han quedado fracciones que son mezclas de muchos elementos (NO PURAS). Supongamos que volvemos a coger la fraccin mitocondrial y la metemos en una solucin (tampn) para someterla a una centrifugacin en gradiente. En el tubo de gradiente tenemos sacarosa cuya concentracin vara a lo largo de l. Aumenta a medida que nos acercamos a la base. Realizamos la centrifugacin y los orgnulos se sitan en el nivel de su densidad en el tubo de centrifugacin. A partir de los resultados se pueden ir obteniendo fracciones puras que podemos observar en el MET. Teniendo ya la fraccin de la mitocondria pura, se trata con un detergente (digitonina). Este tratamiento rompe la membrana externa, formndose fragmentos de sta, que se disponen en pequeas vesculas, por lo que el contenido des espacio intermembranoso queda disuelto y la membrana interna queda intacta. El contenido de la matriz rodeado por la membrana interna se denomina mitoplastos. Despus realizamos una centrifugacin, obteniendo: Precipitado (que contiene los mitoplastos) Sobrenadante (que contiene el contenido del espacio intermembranoso y las vesculitas) 7

Los mitoplastos se suspenden en un tampn denominado lubrn, que rompe la membrana interna. Se procede a una centrifugacin posterior, obteniendo: Precipitado (contiene la membrana interna) Sobrenadante (Contiene el contenido de la matriz mitocondrial) Con la otra parte de la primera centrifugacin se obtiene: Precipitado (contiene la membrana interna) Sobrenadante (contiene el espacio intermembranoso). Se lleva a acabo un anlisis qumico. TEMA 2: LA MEMBRANA PLASMTICA: ASPECTOS ESTRUCTURALES. 2.1. CONCEPTO Y COMPOSICIN QUMICA. La membrana plasmtica engloba a la clula, define sus lmites o mantiene las diferencias esenciales entre el contenido interno de la clula y el medio extracelular. Est constituida ppor lpidos y protenas, que se mantienen juntos por interacciones de tipo hidrofbico. Es una estructura dinmica y fluida, donde tanto lpidos como protenas se desplazan continuamente en el plano de la membrana. Los lpidos se disponen formando una bicapa, que tiene un grosor aproximado de 5 mm (50 ). Es impermeable a la mayora de las molculas solubles en agua. Las protenas "disueltas" en la bicapa lipdica tienen como funciones: El transporte de molculas y la catalizacin de reacciones enzimticas y receptoras. La composicin qumica depende de donde la mambrana plasmtica se asle. Composicin qumica de la membrana plasmtica de los eritrocitos: 49% del peso seco: PROTENAS { Enzimticas, Catalizadoras, Receptoras; Estructurales } 43% del peso seco: LPIDO 8% del peso seco: HIDRATOS DE CARBONO Los LPIDOS: 1. Los ms abundantes son los fosfolpidos (anfipticos). Representan el 60% del total de los lpidos y se dividen en: FOSFOGLICRIDOS: Compuestos por un alcohol (GLICEROL), dos molculas de cidos grasos, una de cido fosfrico y una molcula R. Los ms importantes son: Fosfatidiletanolamina (FEA) que representa el 18% del total de lpidos. 8

Fosfatidilcolina (17%) y la Fosfatidilserina (7%) ESFINGOLPIDOS: Tienen una molcula que es la esfingosina, una molcula de cido fosfrico y un radical variable. El componente mayoritario es la esfingomielina, que representa el 18% del total de lpidos de la membrana. 2. GLUCOLPIDOS: Anfipticos. Presentan molculas de azcar (15%). GLUCOSILDIACILGLICRICOS: Glicerol + 2 molculas de cidos grasos + 1 azcar. CEREBRSIDOS: Esfingosina + 1 cido graso + 1 azcar simple (monosacrido) GANGLISIDOS: Esfingosina + 1 cido graso + 1 azcar complejo. 3. COLESTEROL: representa el 23% del total de lpidos. Posee un OH en un extremo que le da carga negativa. Es una molcula anfiptica (una porcin cargada (cabeza) y otra sin carga (cola)). Influye (disminuye) en la permeabilidad de la membrana. 4. GRASAS NEUTRAS: 2% del total de lpidos. Molculas no anfipticas, son no cargadas. Son steres de 1 alcohol (glicerol) y 3 cadenas de cidos grasos. Los HIDRATOS DE CARBONO se localizan hacia el exterior de la membrana plasmtica, o sea, hacia el espacio extracelular. ESTRUCTURA: Dimensiones pequeas. Las primeras observaciones fueron con el microscopio electrnico y a grandes aumentos, observando que la estructura s trilaminar. De esas tres lminas, dos son densas y una es clara. La clara est en el centro de la MP (lmina osmifoba) con un grosor de 2530 A. Las otras dos lminas se denominan lminas osmifilas, con un grosor de 2025 A. La MP tiene un grosor medio de 75. 2.2. EL MODELO DE MOSAICO FLUIDO: Explica la disposicin (organizacin molecular) de la MP. Fue creado en 1972 por Singer y Nicholson. Segn este modelo, los lpidos de la membrana se organizan formando una bicapa, de tal manera que las colas no polares se sitan hacia el interior y las cabezas hacia el citosol (exterior de la bicapa). Las protenas pueden ser de muchos tipos: Protenas integrales: Incluidas dentro de la bicapa. Lo ms normal es que la atraviesen, aunque puede estar slo en la mitad de la bicapa. Interaccionan con los lpidos por relacin hidrofbica. Protenas perifricas: relacionadas con las protenas integrales o con los lpidos. Se pueden localizar en la cara de la membrana que da hacia el citosol o la que da hacia el medio extracelular. Estn cargadas, por lo que establecen relacin con las partes cargadas de los lpidos. INTERACCIN DE PRTENAS CON LA BICAPA LIPDICA. Las protenas integrales estn ancladas mediante enlace covalente entre molculas de cidos grasos y protenas.

La parte hidrofbica forma una hlice (HLICE ). Esta hlice atraviesa una sola vez la bicapa (protenas integrales de un solo paso). Si se atraviesa varias veces (Protenas integrales multipaso). Las protenas perifricas pueden establecer enlaces con la bicapa lipdica. Pueden establecer enlaces covalentes con cidos grasos o bien a otras cadenas lipdicas denominadas GRUPOS PREHILO. Otras protenas perifricas pueden establecer interacciones no covalentes con protenas integrales. Protenas perifricas que estn en la cara externa de la MP se unen a fosfolpidos de la membrana a travs de un oligosacrido determinado denominado FOSFATIDIL INOSITOL. 2.3. PROPIEDADES DE LA MEMBRANA PLASMTICA: Asimetra y fluidez Asimetra: Se cumple tanto por lpidos como por protenas e hidratos de carbono. Quiere decir que la composicin qumica de una mitad de la MP no es igual a la otra mitad. Aunque halla el mismo % de lpidos en ambas lminas (citoplasmtica y exterior) al analizarlas detalladamente, se observa que su distribucin es irregular. Por ejemplo: la esfingomielina y fosfatidilcolina son ms abundantes en la exoplasmtica. Con la fosfatidiletanolamina y fosfatidilserina ocurre lo contrario, son ms abundantes en la lmina citoplasmtica. ASIMETRA DE LAS PROTENAS: Al igual que con los lpidos, ocurre con las protenas (estn distribuidas asimtricamente, lo cual se observa en las rplicas de las protenas) Ej: La quinasa C se localiza exclusivamente en la lmina exoplasmtica de la MP asociados a lpidos y protenas. ASIMETRA DE LOS HIDRATOS DE CARBONO: Los hidratos de carbono se localizan unidos a lpidos o protenas siempre en la cara exoplasmtica de la MP. Fluidez: Las diferentes molculas que integran la MP sufren movimientos que dependen de la T y de la composicin qumica de la MP: Ej: Los fosfolpidos y glucolpidos pueden rotar sobre s mismos, sobre un eje y son capaces de desplazarse sobre el plano de la MP. La difusin lateral es tremendamente rpida. Los fosfolpidos giran sobre s mismos en plano longitudinal y tambin de forma lateral en la membrana, de forma muy rpida (10.000.000 de veces por seg.). Se desplaza 1 micra por seg. a 37 C. Tarda 20 seg. en recorrer una clula humana. A 37 C una molcula de fosfolpidos se desplaza a 1 micra por seg.a esto se llama MOVIMIENTO DE DIFUSIN. Hay otro movimiento que no es espontneo, est catalizado por una enzima y requiere energa, y consiste en el sello de una molcula de fosfolpido de una lmina a otra. Este movimiento es el responsable de la asimetra de los lpidos en la bicapa, pues son capaces de transportarlos. Estas enzimas reciben el nombre de FLIPASAS. Uno de los factores que influyen en la fluidez es la T, tambin influye la longitud de la cadena de los cidos 10

grasos y el grado de saturacin de esos cido grasos (si tienen o no dobles enlaces insaturados o saturados). FLUIDEZ= funcin (T / longitud de cadena + grado de saturacin) El colesterol influye sobre la fluidez de la membrana. Ese efecto depende de la T a la que se encuentre la membrana. A 37 C el colesterol tiende a hacer a la membrana plasmtica menos fluida. A temperaturas bajas, el colesterol hace a la membrana ms fluida que si no existiera ese colesterol. A bajas temperaturas, el colesterol evita que la membrana plasmtica se congele. Las protenas se desplazan rpidamente en el plano de la MP. Observado por Frye Edidin en 1970. Utilizaron la fusin de clulas de varias especies (de ratn + clulas humanas). LA clula que crearon recibe el nombre de HETEROCARIONTE. Tambin utilizaron la tincin con anticuerpos. Se basaron en que la clula de ratn posee una protena que la humana no contiene. Los investigadores tenan un cido que se una a la protena de ratn. Ese cido iba unido a una molcula fluorescente. Tambin contaban con otro cido que se una especficamente a la protena humana, unido tambin a una molcula fluorescente. Fusionaron las clulas y obtuvieron heterocarionte. Lo congelan y tien con anticuerpos. Al observar, se dieron cuenta que la mitad de la clula presentaba fluorescencia del color de la molcula fluorescente del ratn y la otra mitad de la humana. El otro experimento: esperan 40 minutos tras obtener heterocarionte. Vuelven a observar: la fluorescencia del ratn y la humana estn repartidas por heterocarionte. Las protenas se han difundido lateralmente en el plano de la membrana; se distribuyen de forma homognea. As descubrieron que las protenas pueden moverse en el plano de la membrana. Al aplicar una descarga elctrica las protenas tambin se mueven en la membrana plasmtica. Sin embargo, la nocin de que la membrana es un mar de lpidos en el que navegan protenas es muy simple. La clula tiene mecanismos para decidir donde colocar cada protena y ordenar la estructura de la membrana. Al igual ocurre con los lpidos; pueden ser ms abundantes por una cara que por otra. Existen protenas que slo se localizan en una cara. Existen otras que se localizan en las caras laterales y basales. Por ej. : Transportador de gluasa. TEMA 3. ASPECTOS FUNCIONALES DE LA MEMBRANA PLASMTICA: 3.1. Introduccin: Debido a su interior hidrofbico, la bicapa lipdica es impermeable o sirve de barrera al paso de la mayora de las molculas polares. Esta caracterstica es fundamental para permitir a la clula mantener en el citoplasma una concentracin de solutos diferente a la que existe en el fluido del medio extracelular. Sin embargo, la clula ha desarrollado vas para transportar molculas solubles en agua a travs de la membrana plasmtica 11

que le son necesarias (como nutrientes esenciales). Gracias a estos mecanismos, la clula excreta sustancias de desecho y regula la concentracin intracelular de iones. El transporte de iones inorgnicos y pequeas molculas orgnicas solubles en agua es llevado a acabo por protenas transportadoras (protenas transmembranosas). Cada una de ellas regula el paso de un tipo determinado de molculas relacionadas entre s o de una determinada molcula. Son muy especficas. La clula es capaz de transportar macromolculas e incluso partculas a travs de la MP. En este caso, el mecanismo es bastante diferente e implica cambios que son observables con el microscopio electrnico. 3.2. Transporte de pequeas molculas: Las molculas pequeas pueden atravesar la membrana mediante tres mecanismos, uno de los cuales est dividido en dos. 1. Difusin simple 2. Difusin facilitada: a. Por canales b. Permeasas o transportadoras 3. Transporte activo DIFUSIN SIMPLE: Implica el paso de sustancias a travs de la bicapa lipdica. Se lleva a cabo a favor de gradiente electroqumico o gradiente de concentracin. Las sustancias del sitio ms concentrado pasan al sitio menos concentrado. Molculas hidrofbicas como el oxgeno, nitrgeno y benceno atraviesan rpidamente la BL. Otro grupo de pequeas molculas polares sin carga (como el agua, urea, glicerol, CO2) son tambin capaces de atravesar la BL pero con menor rapidez. Las grandes molculas polares no cargadas (glucosa y sacarosa) son casi incapaces de atravesar la BL. Existe para cada sustancia un coeficiente de permeabilidad de la bicapa, el cual se expresa en cm/seg. La BL es 10 9 veces ms permeable al agua que al sodio. Podemos determinar el flujo con el que se mueve una sustancia a travs de la BL. FLUJO= P d {} Flujo: moles/ segcm 2 de superficie de bicapa P: coeficiente de permeabilidad cm/seg. D { } : Diferencial de concentracin a los dos lados de la BL para esa sustancia. Moles/ cm 3 Ej: La glucosa tiene un coeficiente de permeabilidad de 10 7 cm/seg. y la d { } = 10 4 moles/cm 3. Flujo = 10 11 moles/ seg. cm 2 de membrana, o sea, 60.000 molculas de glucosa por segundo en un cm 2 de 12

membrana. Se puede expresar la velocidad de transporte de una determinada sustancia en relacin con la concentracin de la molcula transportada en ambos lados de la membrana y se obtiene en este caso que la velocidad de transporte es directamente proporcional a la diferencia de concentracin entre un lado y otro de la bicapa lipdica. El agua tiende a atravesar la BL desde el sitio con menor concentracin de solutos hacia el de mayor concentracin de solutos, o sea, desde el sitio con mayor concentracin de agua al de menor concentracin de agua. Medio isotnico: Cuando ponemos la clula en un medio cuya concentracin de soluto es similar a la concentracin del interior de la clula, la cantidad de agua que entra es aproximadamente igual a la cantidad de agua que sale. Medio hipotnico: La concentracin de soluto del medio es menor que la del interior de la clula, entonces entra agua en la clula. Clula animal: La clula estalla (lisis osmtica) Clula vegetal: La clula se hincha pero no estalla porque est protegida por la pared celular. Este proceso se denomina Turgencia. Medio hipertnico: La concentracin del medio es superior a la del interior de la clula, por lo que el agua sale de la clula y sta se arruga. Proceso denominado plasmlisis. DIFUSIN FACILITADA: Implica el paso de molculas a travs de estructuras especializadas de tipo proteico. Se lleva a cabo a favor de gradiente, del ms al menos concentrado. Se lleva a cabo a travs de CANALES que hay en el centro de las protenas transmembranosas. Una protena o varias se unen dejando un canal en medio. A pesar de que la BL es impermeable a los iones, la MP es muy permeable a ello, debido a la existencia en la MP de protenas especficas que permiten el paso de los iones a travs de la membrana. El movimiento de estos a travs de la MP tienen un papel muy importante en determinadas actividades celulares: propagacin del impulso nervioso, contraccin muscular, cierre y apertura de los estomas en las plantas. Las protenas integrales se asocian formando canales, a travs de los cuales los iones atraviesan la membrana. Los canales pueden ser: Canales permanentemente abiertos: Las sustancias pasan a favor de gradiente de concentracin. Cuando se analiza la velocidad en funcin de la diferencia de concentracin es directamente proporcional a la diferencia de concentracin. Canales regulados: Pueden estar en dos conformaciones: abiertos y cerrados, lo cual est regulado por dos mecanismos diferentes: por ligando y por voltaje. Por ligando: Canales con dos conformaciones (abiertos y cerrados) y se pueden abrir o cerrar por induccin de una determinada molcula denominada ligando, que es una molcula diferente a la que pasa el canal, y se sitan en un sitio especfico del canal y esa unin da lugar a la apertura del canal y gracias a ella, una determinada molcula atraviesa el canal (similar a llavecerradura). Paso a favor de 13

gradiente. Por voltaje: Entre ambos lados de la MP hay una diferencia de voltaje. En la parte exterior predominan las molculas cargadas positivamente. En el interior de la clula predominan molculas cargadas negativamente. En estado normal hay una diferencia de potencial igual a 70 mv denominado POTENCIAL DE REPOSO DE LA MP, el cual se puede alterar de alguna manera; esa alteracin da lugar a la apertura del canal. Cuando esta alteracin desaparece, el canal se cierra. Los dos estado alternan entre s. Las PERMEASAS no tienen canales. La sustancia pasa de un lado a otro de la MP mediante un cambio conformacional de esa permeasa o transportador. La sustancia que va a atravesar la MP se une selectivamente a una protena transportadora o permeasa. La unin de dichas conlleva un cambio en la conformacin de la permeasa, lo que da lugar a una traslocacin de la sustancia al otro lado de la MP. Es un transporte pasivo, es decir, tambin a favor del gradiente electroqumico. Pasos del proceso: 1. Fijacin del soluto a transportar a un sitio especfico de la permeasa denominado CENTRO ACTIVO. Esa unin se lleva a cabo mediante interacciones no covalentes. 2. Cambio de conformacin de la permeasa que determina la liberacin del soluto hacia el otro lado de la membrana. Este proceso se denomina PROCESO PING_PONG. El nmero de permeasas que hay en la MP es limitado, por o que la velocidad de paso sigue una grfica diferente a la anterior; aparece en forma de curva porque en los primeros momentos la velocidad es directamente proporcional a la diferencia de concentracin, pero llega un momento en que todas las permeasa trabajan al 100% y por mucho que la concentracin aumente, la velocidad contina constante. TRANSPORTE ACTIVO: En condiciones normales la concentracin de iones es diferente en el interior de la clula con respecto al exterior. Ej: Bomba de Na+K Na+: { } intracelular de 515 milimolar. { } extracelular de 145 milimolar. K: { } intracelular de 140 milimolar. { } extracelular de 5 milimolar. El mantenimiento de la diferencia de las concentraciones se logran gracias al TRANSPORTE ACTIVO, en contra de gradiente electroqumico y requiere un gasto energtico. Este transporte es llevado a cabo por protenas integrales de la MP, las cuales pueden unirse selectivamente a uno o varios sustratos o sustancias, y pueden desplazarlos al otro lado de la MP mediante cambios de conformacin. Cuando slo se transporta una sustancia hablamos de uniporte.

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Cuando slo se transporta ms de una sustancia hablamos de transporte acoplado: SIMPORTE: Implica que dos sustancias son transportadas en el mismo sentido. ANTIPORTE: Una sustancia es transportada en un sentido y la otra en sentido contrario. Hay varias modalidades de TRANSPORTE ACTIVO: 1) BOMBA DE Na+K+: Tiene en la zona que mira al exterior de la clula un sitio activo que se une especficamente al K+. En la parte de la bomba que da hacia el citoplasma presenta un sitio especfico de unin al Na+. En cada ciclo de esta bomba pasan tres tomos de Na+ hacia el exterior de la clula y simultneamente transporta dos tomos de K+ hacia el interior. Utiliza el ATP para suministrar la energa necesaria, el cual se hidroliza a la parte cataltica de la bomba de Na+K en la regin que da hacia el citoplasma. MODELO PROPUESTO PARA LA BOMBA Na+K: Se une un tomo de Na+ al CENTRO ACTIVO. Hidrlisis de ATP a ADP. El fosfato inorgnico proveniente de la hidrlisis se une a una regin de la bomba que da al citoplasma, lo cual determina un cambio de conformacin de la bomba, la que determina la salida del Na+ al exterior. Entrada de un tomo de K+. La entrada del K+ determina la hidrlisis del fosfato inorgnico. La liberacin del fosfato determina un nuevo cambio de conformacin de la bomba que permite la liberacin del K+ en el interior de la bomba y permite la entrada de Na+. El transporte se lleva a cabo en sentido opuesto, es un ANTIPORTE. Bomba de glucosa: La energa necesaria para llevar a cabo el transporte activo de glucosa la suministra el transporte a favor del gradiente de Na+. Esta bomba es muy abundante en las clulas epiteliales del intestino (en su interior est la LUZ o CAVIDAD que est recubierta de un tejido epitelial monoestratificado y cilndrico). Funciona con el sistema pingpong. La bomba est abierta mirando hacia la luz del intestino. En esta bomba puede entrar tanto glucosa como Na+. Entraran 2 molculas de glucosa y 2 de Na+, lo que determina el cambio conformacional de la bomba, y las molculas pasan al interior de la clula. Mediante este mecanismo, la glucosa se va concentrando en el interior del citoplasma celular. Funciona mediante el mecanismo de simporte. La glucosa pasa en contra del gradiente y el Na+ a favor del gradiente. La glucosa puede salir mediante difusin facilitada por permeasas a favor del gradiente. El Na+ se va concentrando en el interior de la clula, y para que la concentracin de Na+ sea siempre pequea en el interior, ste sale por la otra parte de la membrana. Esto lo hace mediante la bomba de Na+K+. El destino final de la glucosa es el torrente sanguneo. El primer paso consiste en atravesar la membrana plasmtica de la superficie de la clula. Se realiza mediante transporte activo: hay un bombeo continuo de glucosa hacia la clula y eso origina una elevada concentracin de glucosa en el citoplasma que puede pasar a los vasos sanguneos mediante difusin facilitada ! TRANSPORTE ACTIVO (permeasas). Para ello es necesario el transporte simultneo de Na+, y tiene que haber una disminucin de concentracin en el citoplasma. Por eso existe el mecanismo de las bombas de Na+ K+ en la zona basal de la clula. 3.3. Mecanismos de ENDOCITOSIS:

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Paso de macromolculas, partculas y lquidos a travs de la MP. Las protenas transportadoras de la MP son incapaces de transportar macromolculas y partculas a travs de la MP (no puede transportar protenas, carbohidratos...) Sin embargo, la clula ha desarrollado mecanismos que permiten ingerir y secretar macromolculas e incluso grandes partculas. Este tipo de paso supone mecanismos que implican la formacin de vesculas ms o menos grandes que estn rodeadas de membranas (de tamao variable). El paso puede ser en los dos sentidos y entonces se habla de dos tipos: Endocitosis en sentido amplio: Implica el paso de sustancias desde el exterior de la clula hasta el interior. Exocitosis: Implica el paso de sustancias desde dentro hacia fuera de la clula. La ENDOCITOSIS EN SENTIDO AMPLIO la podemos subdividir en: Endocitosis en sentido estricto: Implica que las sustancias que pasan al interior de la clula quedan englobadas en vesculas de dimetro relativamente pequeo (50150 m). Esas vesculas se denominan endosomas. La endocitosis en sentido estricto se subdivide en dos clases: Endocitosis en fase lquida o PINOCITOSIS: I plica el paso de pequeas porciones de lquido situado en un primer momento en el medio extracelular. El primer paso consiste en que la MP sufre una pequea invaginacin donde se sitan los solutos. La invaginacin contina y finalmente fusionan los bordes, alcanzando de nuevo la posicin inicial. Aparece pues, una pequea vescula en el interior del citoplasma. Este proceso es llamativo en clulas que constituyen los vasos sanguneos, llamadas CLULAS ENDOTELIALES. Una nica clula es capaz de formar toda la pared. El ncleo tiene forma de barriga orientado hacia la luz del capilar. Presentan una estructura denominada lmina basal. Dichas clulas se encuentran incluidas en un tejido especfico: el tejido conectivo. En el lmite entre la clula y el tejido conectivo est la lmina basal. Ocurren procesos de pinocitosis cuando se forman vesculas que viajan por el citoplasma, se fusionan con la membrana y se asocian a los capilares sanguneos. Los procesos que combinan la endocitosis y exocitosis se denominan TRANSCITOSIS. Endocitosis mediada por receptor o receptores: Este tipo de endocitosis comprende aquellos procesos endocticos en los que las molculas a ingerir se unen primero a receptores especficos y se forman vesculas normalmente revestidas en el interior de la clula que inicialmente estn recubiertas por una estructura, se llaman vesculas revestidas o forradas. En la zona en la que tiene lugar el proceso existen protenas que reconocen a la molcula que se va a transportar (RECEPTORES). Esta primera etapa recibe el nombre de CONCENTRACIN. Aqu ya aparece una cubierta. La segunda fase consiste en una INVAGINACIN. En la etapa final de la invaginacin acta una protena que forma na especie de anillo que va estrangulando 16

paulatinamente los bordes. Se denomina dinamina. La dinamina termina por dar lugar a la SEPARACIN; la vescula formada se libera. Poco despus la cubierta se pierde. La cubierta est formada por una protena llamada CLATRINA. Despus de la separacin, la vescula se mueve por el citoplasma. La superficie de las vesculas est formada por hexgonos y pentgonos en proporcin (por cada dos hexgonos hay tres pentgonos). Esa estructura la forma la CLATRINA. LA molcula de clatrina que forma esa red tiene una composicin de 3 cadenas pesadas y 3 cadenas ligeras, y recibe el nombre TRISQUELIN, donde se asocian de forma espontnea y al final se forma la estructura de hexgonos y pentgonos. Fagocitosis: Implica el paso de grandes partculas al interior de la clula que dan lugar a la formacin de grandes vesculas llamadas fagosomas con dimetro que oscila entre (0'52 m). La clula emite unas prolongaciones llamadas pseudpodos que van engullendo a la partcula hasta que sus bordes se fusionan y la partcula queda en el interior del citoplasma en una vescula rodeada de membranas. La exocitosis supone la formacin de unas pequeas vesculas (vesculas de secrecin) a partir del Ap. de Golgi. Para liberar su contenido al exterior las vesculas viajan por el citoplasma hasta que establecen contacto con la MP y el contenido pasa al exterior de la clula. Implica la entrada en la clula de partculas grandes (ej: bacterias) y para que pasen es necesario que tengan una serie de DETERMINANTES que son reconocidos por la clula que va a realizar la fagocitosis: Receptores en la membrana para esos determinantes. Se lleva a cabo mediante la formacin de pseudpodos. En una primera etapa, el citoplasma de los pseudpodos son abundantes una serie de filamentos de ACTINA. Despus los pseudpodos crecen y abrazan a la partcula. Este proceso contina hasta que llega un momento en que se establece contacto entre los extremos de los pseudpodos y acaban englobando la partcula. Queda en el interior de una vescula rodeada de membranas que recibe el nombre de FAGOSOMA. Este tipo de proceso lo llevan a cabo clulas especializadas en esa funcin que se llaman FAGOCITOS. Dentro de los fagocitos podemos destacar: Macrfogos: Clulas del tejido conectivo o conjuntivo. Leucocitus neutrfilos: Clulas sanguneas. Clulas micogliales: Clulas del tejido nervioso. No obstante, este proceso puede ser llevado a cabo por clulas no especializadas en la fagocitosis. 3.4. La EXOCITOSIS: Es el proceso contrario a la endocitosis, es decir, implica la salida al exterior de material de la clula. Este material puede ser de diferente naturaleza, puede tener diferentes significados: Sustancias de desecho: que la clula excreta. 17

 Sustancias de secrecin: tienen efectos en las cercanas o en regiones muy alejadas de la clula. La exocitosis se puede dividir en: Migracin intracelular de la vescula: Requiere energa, y por otra parte requiere que los microtbulos de la clula permanezcan intactos; estos actan como guas a lo largo de las cuales las vesculas se desplazan. El responsable de ese desplazamiento son unas protenas denominadas PROTENAS MOTORAS DE MICROTBULOS. Estas, por un extremo, se unen a los microtbulos, y por el otro, a la vescula; son capaces de andar por la pared de los microtbulos. Ese caminar requiere ATP. Adhesin de las MBS (membrana de la vescula con la membrana plasmtica): Momento en el que ambas membranas establecen contacto. Fusin de las MBS. Liberacin del material al medio extracelular. TEMA 4. DIFERENCIACIONES DE LA MEMBRANA PLASMTICA 4.1. Conceptos y tipos: Las diferenciaciones son regiones especiales de la MP que presentan caractersticas peculiares que las distinguen de otras regiones. Atendiendo a su perodo de existencia podemos dividir a las diferenciaciones en dos tipos: Transitorias: Tienen un perodo de vida corto y estn relacionadas con procesos metablicos de la clula. Ej: vesculas de endocitosis y de exocitosis. Estables: Son aquellas que duran toda la vida de la clula o por lo menos un perodo de tiempo relativamente largo. Este grupo es especialmente abundante en las clulas epiteliales. Una clula epitelial tpica es prismtica o cilndrica, son clula ms altas que anchas (ej: intestinos). Se pueden distinguir una serie de caras: una que da al medio extracelular, denominada CARA APICAL; la cara opuesta que est en las cercanas del tejido conectivo recibe el nombre de cara basal; las caras laterales que tienen relacin con clulas vecinas. Podemos dividir las diferenciaciones estables en varios tipos segn su forma, posicin y funcin... Los REPLIEGUES se pueden dividir en varios tipos dependiendo de su localizacin: APICALES (microvesllosidades) LATERALES (interdigitaciones) BASALES (laberinto basal) Las estructuras de contacto celular se pueden dividir atendiendo a su extensin y a su naturaleza. Extensin: * ZNULAS b) Naturaleza: * OCLUYENTES * MCULAS * ADHERENTES * FASCIAS Las estructuras de comunicacin intracelular se dividen fundamentalmente en:

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 Uniones abiertas (GAP) Plasmodesmos 4.2. Repliegues de la MP: Microvellosidades: Son invaginaciones de la MP en forma de dicho de guante que existen en determinados tipos celulares (ej: intestino). Normalmente tienen una altura de 1 m y un dimetro aproximado de 0'1 m. Por cada clulas epitelial del intestino hay 3000 microvellosidades. Esto supone una superficie 30 veces mayor que si no existieran. En el interior de las microvellosidades existe un paquete o haz de filamentos de ACTINA, y en l todos los filamentos tienen la misma polaridad. Esos filamentos estn unidos entre s por una serie de protenas y a su vez unas protenas diferentes a la MP. En concreto, las protenas que unen a los filamentos son la FIMBRINA y la VILLINA. Cada paquete est unido entre s por otra protena: FODRINA. Donde terminan los filamentos de actina hay filamentos intermedios. La protena que une los filamentos de actina con la MP se llama PROTENA DE UNIN (se desconoce su naturaleza). El aumento de superficie que se consigue con las microvellosidades aumenta la absorcin de nutrientes de la clula. Interdigitaciones: Son entrantes y salientes que aparecen en las caras laterales de las clulas epiteliales. Los entrantes y salientes de una clula se acoplan con las de las clulas vecinas y su profundidad es variable. La funcin es aumentar la cohesin celular entre clulas vecinas. Laberinto basal: Se observa en la regin basal de las clulas epiteliales. En esta zona la MP sufre profundas invaginaciones que pueden ramificarse, de tal forma que el citoplasma est formado por numerosas lengetas; en ese citoplasma son abundantes las mitocondrias. Este tipo de estructuras consistentes en numerosos pliegues llenos de mitocondrias son caractersticos de ciertas clulas epiteliales. Ej: tbulos renales (contorneados), conductos excretores (conductos estriados de las glndulas salivales). La funcin del laberinto basal es aumentar la superficie de MP, lo cual sirve para el transporte activo de determinadas sustancias hacia los capilares sanguneos. Es necesario aporte de energa, suministrado por las mitocondrias presentes en esas regiones. 4.3. Estructuras de contacto celular: Atendiendo a su extensin pueden ser de varios tipos: ZNULAS son aquellas estructuras de contacto celular que forman una especie de cinturn alrededor de la clula. MCULAS: (Procede de mancha). Son estructuras con una extensin puntual, muy limitada. FASCIAS: Son estructuras notablemente ms grandes que las molculas, pero su extensin tampoco es muy 19

grande. Atendiendo a su naturaleza encontramos estructuras de contacto celular: OCLUYENTES: Son aquellos en las que el espacio intracelular desaparece. Se establece contacto entre las lminas osmfilas de las MP de las clulas vecinas. ADHERENTES: El espacio intracelular es mayor de lo normal (normalmente es de 150200 ) llega a ser de 300 . Las lminas osmfilas internas aparecen engrasadas y el espacio intracelular aparece denso al observarse el microscopio electrnico de transmisin. Combinando estos dos criterios, los tipos ms comunes de estas estructuras son: ZONAS OCLUYENTES: Son estructuras que rodean a la clula, znulas en las cuales el espacio intracelular est obliterado (no existe). Normalmente aparecen en la mitad apical de la clula. Facilitan la cohesin estrecha entre clulas vecinas, de tal forma que impiden la difusin o filtracin de fluidos entre esas clulas vecinas. Se observ inyectando a animales hidrxido de lantano que es denso y no puede pasar a travs de estas estructuras. En el mbito de la zona de unin hay protenas integrales en estrecho contacto, las de una clula con las de la clula vecina, formando hileras. Al observarlo con MET se observa que las uniones estrechas forman una especie de red que rodea a toda la clula. ZONAS ADHERENTES: Son estructuras de contacto celular que forman un cinturn alrededor de la clula situndose en las cercanas de las znulas ocluyentes y en ellas el espacio intracelular est engrosado. En contacto con la zona engrosada hay filamentos de actina y en el espacio intracelular son abundantes las protenas del tipo cadherinas. MCULAS ADHERENTES O DESMOSOMAS: Son estructuras puntuales en las que el espacio intercelular es ms amplio de lo normal, cercano a los 300 . En el espacio intercelular que aparece denso hay protenas filamentosas, que fundamentalmente son: desmoglenas, desmocolinas y cadmerina E: permiten la conexin entre las clulas adyacentes. En la cara de la MP que da hacia el citoplasma aparece un engrosamiento o PLACA DE MATERIAL DENSO con un grosor aproximado de 150 . No es una placa homognea, est formada por dos protenas: PLACOGLOBINA: Es aquella que est en contacto con la MP. DESMOPLAQUINA: Ms alejada de la membrana. A partir de estas placas irradian unas estructuras filamentosas, en concreto, FILAMENTOS INTERMEDIOS, 20

que en el caso de las clulas epiteliales estn constituidos por la protena QUERATINA. Los desmosomas facilitan la cohesin entre clulas vecinas. Todas estas estructuras se asocian para formar el complejo de unin. Segn este orden: Znula ocluyente Znula adherente Desmosomas HEMIDESMOSOMAS: Son la mitad de un desmosoma. Aparecen en la regin basal de la clula. Permiten la unin entre la MP de la regin basal y la lmina basal. 4.4. Estructuras de comunicacin intercelular: Son aquellas que permiten el paso de molculas desde una clula a las clulas vecinas. Existen dos tipos principales: UNIONES ABIERTAS; GAP o de FISURA: El espacio intercelular es notablemente fino en concreto, las membranas plasmticas estn separadas 20 . Estas estructuras son de tipo fascias (ms grandes que las mculas). Hay numerosas partculas intermembranosas y cuando se observan con la tcnica de tincin negativa se observan una serie de unidades, y en cada una de ellas aparece una especie de poro. Se ha determinado que existen estructuras que forman canales que conectan una clula con la adyacente. stos tienen forma cilndrica con un hueco en su interior. Cada uno de ellos lo podemos subdividir en dos partes: una que pertenece a una clula y la otra perteneciente a la clula adyacente. Cada porcin recibe el nombre de CONEXIN y cada uno de ellos est constituido por 6 cadenas polipeptdicas, por lo tanto, cada cilindro tiene 12 cadenas. El dimetro mayor del cilindro es de 60 y el dimetro del poro interno oscila entre 2030 . Las diferentes conexiones pueden estar en estado abierto o cerrado y ello se consigue mediante cambios de conformacin de las protenas que los integran. PLASMODESMOS: Son estructuras de comunicacin intercelular caractersticas de los vegetales con un dimetro que oscila 200400 . en el mbito de esta abertura existe una vescula de R. Endoplasmtico que recibe el nombre de DESMOTBULO. Se observa como a nivel de los plasmodesmos la MP de una clula se contina con la MP de la clula adyacente. 4.5. Cubiertas celulares, matriz extracelular y lmina basal: La cubierta celular est constituida por un conjunto de materia de tipo polisacrido que se encuentran en el medio extracelular de la MP. Se encuentran ntimamente unidos a la MP mediante enlaces covalentes. La cubierta recibe el nombre de glucoclix o glicoclix. La matriz extracelular es un conjunto de materia que rodea a la clula que es secretada por la propia clula. Forman una compleja red (Ej: la existente en el tejido conectivo). Est constituida por dos partes bien diferenciadas: 21

 SUSTANCIA FUNDAMENTAL: Compuesta por una serie de molculas, fundamentalmente los PROTEOGLICANOS (molculas con eje proteico del que surgen cadenas de azcares). FIBRAS: Inmersas en la sustancia fundamental. Pueden ser de varios tipos: de colgeno, f. Reticulares y f. Elsticas. Una matriz extracelular caractersticas de los vegetales es la pared celular en la que el elemento principal es la celulosa. La lmina basal se puede considerar como una matriz extracelular especial. Normalmente aparece en la cara basal de las clulas epiteliales. Tiene dos partes, una que aparece clara y otra densa. La que aparece clara se denomina LCIDA y la otra DENSA. La lmina LCIDA es la ms cercana a la clula. El grosor de este conjunto es relativamente variable. Suele estar comprendido entre 200800 . Por debajo, normalmente hay cmulos de fibras fibras reticulares (constituidas por colgeno). Esta zona recibe el nombre de lmina reticular. El conjunto de la L. Basal y la L. Reticular recibe el nombre de MEMBRANA BASAL, trmino introducido gracias a la microscopa ptica. La lmina basal est constituida por diversos tipos de molculas: colgeno tipo 4, laminina y PROTEOGLICANOS. TEMA 5 EL NCLEO INTERFSICO: estructura general y envoltura. 5.1. Concepto de ncleo: El ncleo contiene la informacin gentica en forma de ADN. Controla la actividad celular. En la mayora de las clulas el ADN est organizado en una serie de unidades llamadas CROMOSOMAS. El nmero de cromosomas es caracterstico de cada especie. Esas unidades pueden estar en dos estados: Cromatina interfsica: En este estado el ADN est bastante desorganizado, muy laxa y sin condensar. Est desarrollado. Cromatina metafsica (o en divisin): El ADN se enrolla formando mltiples niveles de organizacin de forma que cada cromosoma aparece muy condensado en varios niveles hasta lograr un cromosoma de dimensiones pequeas. El ncleo es imprescindible para la vida de la clula. Comprobado con experimentos de Merotomia: Se divide a un organismo unicelular (ameba) en dos porciones, una de ellas contena el ncleo + citoplasma, y en otra slo citoplasma. La porcin con slo citoplasma mora; mientras que la otra vive. Adems si a la porcin citoplasmtica se le aade ncleo de otra ameba, sta vivir. 22

El ncleo es un componente de las clulas eucariticas que alberga el ADN. Este ADN controla la actividad celular. El ncleo est limitado por una envoltura membranosa constituida por dos membranas. 5.2. caracteres morfolgicos y organizacin general del ncleo: Caracteres morfolgicos: Con relacin al nmero de ncleos, no todos presentan uno, pueden presentar 0, 1, 2... ncleos. Clulas sin ncleo: ERITROCITOS DE MAMFEROS: Son clulas que durante su proceso de diferenciacin llegan a una etapa en la que expulsan el ncleo, quedando una bolsa citoplasmtica cargada de hemoglobina. Como no tiene ncleo, su vida es muy corta. CLULAS CONDUCTORAS DEL FLOEMA: Transporta savia elaborada. No se mueven porque su actividad est controlada por clulas acompaantes a travs de los plasmodesmos. No tienen ncleo por estar muy especializadas. Clulas con un ncleo: La mayora. Clulas con dos ncleos: CONDROCITOS (clulas del cartlago) y HEPATOCITOS. Clulas multinucleadas: FIBRAS DEL TEJIDO MUSCULAR ESTRIADO ESQUELTICO (componen fibras musculares cercanas al hueso). Son muy largas y suelen presentar unos 100 ncleos por cm de longitud. Los ncleos se sitan en la periferia de la clula. Forma: Est relacionada con la forma de la clula. Ej: Clulas epiteliales. Clulas Isodeamtricas: El ncleo suele ser esfrico. Clulas Prismticas: Son ms altas que hondas, el ncleo est alargado segn el eje mayor de la clula. Clulas Aplanadas: El ncleo aparece alargado en el estado del eje mayor de la clula. Hay casos en los que el ncleo no guarda relacin con la forma de la clula. Ej: Leucocito neutrfilos o leucocitos polimorfonucleares. Su ncleo est constituido por lculos interfonectados entre s por puentes finos de cromatina. Ej: Clulas adiposas de grasa blanca (la mayor parte del volumen celular est ocupado por una gran gota lipdica, y sta desplaza el resto de los componentes celulares a la periferia. Ocurre lo mismo en la mayora de las clulas vegetales (hay vacuolas que desplazan el ncleo hacia la periferia de la clula) Tamao: Es variable en funcin de aspectos: Depende del tipo celular que consideremos. Ej: los adipocitos tienen un ncleo cuyo dimetro mayor es de 34 micras, y los vulos tienen un ncleo de 4050 micras. En general, el tamao depende de la masa citoplasmtica que tiene que controlar y esa relacin conoce como ndice ncleocitoplasmtico. Y este= v. Ncleo / v.clula v. Nuclear En cada tipo celular este ndice debe estar dentro de unos lmites determinados y esos son caractersticos para 23

cada tipo celular. Cuando la clula se encuentra al principio de interfase, este ndice ncleocitoplasmtico muestra unos valores notablemente alto, a lo largo de la interfase, tanto el ncleo como el citoplasma van creciendo pero hay un momento en el que el ncleo deja de crecer, pero el citoplasma contina aumentando el volumen, debido a esto, el ndice de ncleo citoplasmtico va disminuyendo progresivamente y hay un momento en el que alcanza valores pequeos o que estn en los lmites (la clula entra en difusin). El tamao del ncleo depende de la actividad metablica. Cuando es alta, el ncleo tiende a ser ms grande y poco condensado. Si la actividad metablica es baja, el ncleo tiende a ser pequeo y condensado. El tamao depende de la cantidad de ADN y protenas que presenta el ncleo = Grado de Ploidia. Esto fue descubierto por Boveri (1901): analizaba las larvas de erizo de mar en funcin de su ploidia y vio que el volumen del ncleo era dos veces menor. Por lo tanto, el volumen nuclear depende del Grado de Ploidia. 5.3. Estructura general del ncleo: El ncleo est rodeado por una envoltura que representa dos membranas (una externa y otra interna), cada cierta distancia la membrana externa y la interna se unen y dejan un hueco que conecta el interior del ncleo con el citoplasma, esos huecos redondeados se llaman poros nucleares y gracias a ellos se establece conexin entre el citoplasma de la clula y el interior del ncleo. Dentro del ncleo existe una lmina fibrosa de naturaleza proteica que queda justo por debajo de la envoltura, adems de estos componentes tenemos la cromatina y una masa densa llamada nucleolos. La cromatina y el nucleolo estn inmersos en una sustancia que se llama nucleoplasma. Est constituido por dos membranas, entre ellas se encuentra el espacio perinuclear, que tiene un grosor de 200 . La membrana nuclear externa se caracteriza por presentar ribosomas adosados a ella, la envoltura nuclear se contina con el R. Endoplasmtico rugosa. Hay continuidad entre el espacio perinuclear y la luz de R. Endoplasmtico rugoso, la envoltura nuclear se puede considerar como una pared del R. E. rugoso. La envoltura nuclear al final de la mitosis se forma a partir de cisternas del R.E. rugoso. Los poros nucleares tiene un dimetro medio de 700 . El nmero de poros es variable entre unos tipos celulares y otros, su nmero oscila entre un centenar y hasta millones. En los linfocitos (clulas de la sangre), los poros ocupan el 1'5 % de la superficie de envoltura; sin embargo, en los ovocitos (vulos), los poros nucleares pueden alcanzar el 25% de la superficie de la clula. El trmino medio es el 10%. Cuando la clula es muy activa, el nmero de poros es mayor. El espacio que queda entre las membranas es de 700, pero en el poro hacia el interior del poro hay unas estructuras proteicas que se organizan formando una estructura ortogonal donde hay una serie de protenas: Desde el citosol hasta el ncleo, ordenados perpendicularmente al plano de la membrana. Las protenas cruzan el poro y se les llama: subunidades columnares En el centro hay otras subunidades que en tres dimensiones forman un anillo y se les llama subunidades anulares. Filamentos que van hacia el interior del ncleo: cesta nuclear. Hay otras protenas: Subunidades luminales 24

Este conjunto de unidades proteicas se le llama Complejos de poro (dispuesto de forma octogonal) El complejo de poro tiene un dimetro exterior de 1000 y dimetro interno de 500 . En teora aquellas partculas con un dimetro inferior a 500 deberan atravesar los poros nucleares. Para completar la estructura, tenemos en estrecho contacto con la MI la lmina fibrosa (3001000 ): est constituida por 3 protenas diferentes (lm A, lm B, lm C); las lminas son de tipo fibroso y tienen un dimetro de 10 nm y se organizan formando una red que tiene una malla cuadrada. La cromatina que est en contacto con la lmina nuclear y esa lmina fibrosa est anclada a travs de protenas de membrana a la MNI. 5.4. Funciones de la envoltura: 1) Compartimentar la clula y proporcionar el ambiente adecuado para que la cromatina desarrolle correctamente sus funciones. 2) Regular el intercambio de sustancias entre el citoplasma y el ncleo a travs de los poros nucleares. En el ncleo se sintetiza molculas de ADN y ARN que necesitan la llegada de nucletidos que se forman en el citoplasma. Por otra parte, la sntesis de protenas en los ribosomas en los ribosomas del citoplasma, requiere primeramente que se formen los ribosomas que tienen como parte integrante, molculas de ARN ribosmico que se sintetizan en el ncleo y que tienen que pasar al citoplasma. Adems se necesitan molculas de ARN mensajero que sirve de molde para sintetizar protenas y los aminocidos entran unidos al ARN transferente. Todas las molculas de ARN se sintetizan en el ncleo y tienen que pasar al citoplasma donde realizan su funcin. El complejo de poro deja un dimetro interno de 500 por lo tanto, poda suponerse que molculas menores a ese dimetro pasen, pero eso no es cierto, ya que se ha visto que partculas de ms de 90 pasan con dificultad el poro. Esto fue realizado por Feldher (1965) que inyect en el citoplasma de amebas, partculas de oro coloidal que tenan un dimetro entre 20170 . Analiz como las partculas pasaban al ncleo. Comprob que partculas de menos de 90 atravesaban rpidamente. Las partculas de dimetro entre 90 y 120 pasaban difcilmente los poros nucleares y partculas de oro de dimetro mayor a 120 eran incapaces de atravesar los poros. Sin embargo, hay partculas mayores de 120 que pueden atravesar los poros. Por ejemplo, hay partculas ribonucleoproteicas de 1000 que atraviesan los poros ya que estas partculas sufren un proceso de deformacin mediante el cual pueden traspasar el poro nuclear. El ncleo es capaz de importar de manera selectiva, protenas a travs de los poros, y una protena es la nucleoplasmina de dimetro de 120 grados y el paso es mediante mecanismo de deformacin. Funcin similar a la del RER. 5.5. Biognesis y renovacin de la envoltura nuclear: La envoltura nuclear est durante la interfase y desaparece durante la mitosis. Por lo tanto, podemos decir que la envoltura nuclear se forma en las ltimas etapas de la mitosis, concretamente en TELOFASE. A medida que la cromatina se va condensando, aparece la envoltura nuclear, la cual se origina a partir de cisternas del RER. Al principio hay pocas cisternas, pero en una etapa ligeramente posterior, la envoltura est ya formada. Este proceso de llegada de cisternas del RER y su unin con la cromatina, hay un proceso intermedio en el cual se forma la lmina fibrosa y una vez que se ha depositado la lmina fibrosa sobre la 25

cromatina aparecen o se adosan las cisternas. Durante la interfase, los componentes integrantes de la envoltura se estn renovando continuamente. Las protenas que se sintetizan en el RER pueden moverse en el plano de la membrana y pasar a la envoltura (tambin los lidos). 5.6. Nucleoplasma: Tambin conocido como cariplasma. Es el lquido en el cual se encuentra sumergido la cromatina y por lo tanto rellena el interior del ncleo. Est constituido por diferentes sustancias como metabolitos (carbohidratos, lpidos y protenas). TEMA 6. EL NCLEO INTERFSICO. CROMATINA: 6.1. Cromatina: CONCEPTO. 6.2. Composicin qumica de la cromatina. 6.3. Arquitectura molecular y niveles de organizacin de la cromatina. 6.4. Funciones de la cromatina. 6.1. Cromatina: CONCEPTO: El trmino cromatina fue acuado para definir la sustancia que estaba contenida en el ncleo. Cuando se empez a comprender el ciclo celular, se comprob que la cromatina durante la divisin celular se transformaba en otras unidades que eran los cromosomas. Cuando la clula acababa de dividirse, los cromosomas se iban transformando en cromatina. Por lo tanto, los cromosomas y la cromatina son dos estados morfolgicos y funcionales de una misma entidad. Tanto los cromosomas como la cromatina estn constituidos por varios tipos de molculas: ADN, protenas y molculas de ARN que se originan a partir del ADN. Al observar el ncleo con MET vemos que la cromatina presenta dos estados: Muy densa. En este caso se denomina HETEROCROMATINA: Empaquetada notablemente. Clara. Denominada EUCROMATINA: No muy empaquetada. Ambos estados estn relacionados con el grado de empaquetamiento del material gentico. Normalmente, la heterocromatina es una cromatina inactiva, que puede ser permanente (constitutiva) o temporal (facultativa); en este ltimo caso, puede volverse activa en un momento posterior. Los ncleos de las clulas pueden aparecer ms o menos densos. Un ncleo que sea denso est relativamente inactivo. Por ej: ncleo de espermatozoides.

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Un ncleo en el que predomine la eucromatina es activo. Por ej: ncleo de neuronas. Con relacin a la cantidad de ADN que presenta una clula: El ADN est constituido por cromosomas, y el nmero de stos depende de la especie. En la especie humana, la mayora de las clulas somticas tienen una cantidad de ADN de 1.000 millones de pares de bases, de pares de nucleones. 6.2. Composicin qumica de la cromatina: La cromatina est formada por: ADN: Molculas constituidas por unidades (nucletidos), cada nucletido est formado por un azcar (desoxirribosa), una molcula de fosfato y una base nitrogenada. En l existen cuatro bases nitrogenadas, clasificadas en: Bases pricas: A (Adenina) y G (Guanina). Bases pirimidnicas: T (Timina) y C (Citosina). Los nucletidos se organizan formando dos hebras que constituyen la molcula de ADN. Esas hebras: Se disponen con orientacin antiparalela. En cada hebra se puede determinar un extremo 3' y otro 5'. Las bases de una hebra pueden establecer enlaces con las bases de la hebra complementaria. Se establece: CG y AT. Este tipo de emparejamiento se da mediante puentes de hidrgeno. En el espacio se organizan formando una doble hlice. Cada vuelta tiene una longitud de 3,4 nm e incluye 10 pares de bases. El esqueleto formado por azcares y los fosfatos siempre queda por fuera de la hlice, y las bases nitrogenadas siempre se disponen hacia el interior de la hlice. Las bases nitrogenadas se disponen con su plano perpendicular al eje mayor de la hlice. La informacin contenida en el ADN viene dada por una parte por el tipo de bases y por el orden en el que se disponen las bases nitrogenadas. El ADN presente en el ncleo puede ser de varios tipos: Hay secuencias altamente repetitivas: Cortas, constituidas por una unidad que se repite numerosas veces (incluso hasta un milln de veces). Son bastante abundantes. Su importancia relativa oscila entre 1025 % de la molcula de ADN. Constituyen lo que se denomina como ADN SATLITE, que es sinnimo de HETEROCROMATINA CONSTITUTIVA. Secuencias moderadamente repetitivas: Secuencias que se codifican para los ARNr, ARNt y para las histonas. Se encuentran del orden de varias decenas para cada molcula de ARNt, ARNr o histonas para el hombre, en otras especies, como en anfibios, puede ser de 1000 copias. Los genes de las histonas se disponen siempre en la misma orientacin: La parte que codifica para la H4 La parte que codifica para la H2b La parte que codifica para la H3 La parte que codifica para la H2a La parte que codifica para la H1 27

 Secuencias nicas: Son la mayora de las secuencias que codifican para protenas. Ocupan el 50% del ADN. Un gen est constituido por un mosaico de secuencias que son de dos tipos: Exones: Secuencias que se transcriben y se conservan en la molcula de ARNm madura. Intrones: Secuencias que se transcriben y durante el proceso de maduracin del ARNm, se pierden. ARN: Hay tres tipos diferentes de ARN: ARNm : Molculas que son traducidas para formar protenas. ARNr: Molculas de ARN que forman parte de los ribosomas. ARNt: Molculas que se encargan de transportar los aminocidos hasta los ribosomas. Sntesis: Sntesis de una molcula de ARN precursora (es ms grande que la molcula madura) Degradar parte de la molcula precursora que se transforma en la molcula de ARN madura. ARNt: 3 Protenas: Forman parte de la cromatina: Protenas bsicas: Estn cargadas positivamente: HISTONAS. Representan el 50% del peso del cromosoma. Existen 5 tipos de histonas y cada uno de ellos est constituido por un ncleo apolar, del cual normalmente sale un brazo cargado positivamente. En algn tipo de histonas en vez de un brazo existen 2 brazos polares. La zona del ncleo apolar establece interaccin de tipo hidrofbico apolares de otras histonas. La zona polar establece interaccin con la molcula de ADN cargada negativamente, debido a los iones fosfato. Protenas cidas: Estn cargadas negativamente. Pueden ser de 2 tipos: Estructurales: Forman el esqueleto de los cromosomas. Enzimticas: Intervienen fundamentalmente en la replicacin y transcripcin del ADN. 6.3. Arquitectura molecular y niveles de organizacin de la cromatina: Cuando se observa con el ME el ncleo, la doble hlice no aparece en condiciones normales. La doble hlice de ADN sufre diversos grados de empaquetamiento cada vez ms compactos, en distintos niveles de organizacin: Cadena de ADN (doble hlice) con dimetro de 2nm. Nucleofilamento. Dimetro de 10 nm. Filamento de 2530 nm de dimetro. Dominio en bucle. 300 nm de dimetro de anchura. NIVEL 1: Doble hlice: 2 nm de dimetro y longitud indefinida, que depende del tamao de cada cromosoma. NIVEL 2: Nucleofilamento: Cuando observamos ncleos que han sido tratados, se han hecho estallar con 28

soluciones de baja fuerza inica, podemos ver extensiones de vomatina, y se aprecia que sta est constituida por un filamento que tiene el aspecto de un rosario y 10 nm. El filamento recibe el nombre de nucleofilamento: consiste en la molcula de ADN que se va enrollando en ncleos de protenas histnicas, las cuales estn separadas una cierta distancia. Si tratamos el nucleofilamento con unas enzimas especficas que son endonucleasas, estas rompen de forma especfica a un determinado nivel a la molcula de ADN. Empleando este tipo de enzimas, el ADN fragmentado a electroforesis, estos fragmentos se van moviendo en funcin de su tamao y de su carga, y as podemos separarlos. Daban como resultado fragmento mltiplos de 200 pares de bases, 400 pares de bases, 800 pares de bases... En funcin de esto, Kornberg (1974) concluy que la cromatina est organizada en unidades de 200 pares de bases que se repiten unas a continuacin de otras y esas unidades reciben el nombre de nucleosomas. Cada nucleosoma est constituido por dos porciones: * Ncleo nucleosmico: est constituido por una estructura histnica que s un octmero (cadena polipeptdica) y sobre ella se enrolla una estructura de 140 pares de bases, lo que significa una vuelta y tres cuartos. Cada vuelta est formada por 80 pares de bases. Estas 8 cadenas polipeptdicas son las siguientes: 2 cadenas de la histona H2a, otras 2 de la H2b, otras 2 de la H3 y otras 2 de la H4. Las 2 de cada tipo estn una al lado de la otra, formando pares. Se cree que la histona H1 establece contacto con los dos extremos de la molcula de ADN que est enrollada sobre el octmero. El eje mayor de la histona H1 parece disponerse de acuerdo con el eje mayor del nucleofilamento. De esta manera, la longitud de la molcula de ADN queda reducida 7 veces, con este tipo de enrollamiento. Lazo internucleosmico: Tiene una longitud que equivale a 60 pares de bases y est constituido por el ncleo nucleosmico y dos mitades de lazo internucleosmico. NIVEL 3: Filamentos de 2530 nm. Cuando analizamos el ncleo con MET ya sea la heterocromatina o la eucromatina observamos en ambas unos orgnulos de entre 2530 nm. Esa especie de grnulos corresponden a un filamento de 2530 nm cortado transversalmente, lo nico que vara entre ambas es a densidad de esos grnulos. (heterocromatina: juntos; eucromatina: separados). El nucleofilamento se enrolla sobre s mismo formando otro filamento de 2530 nm de dimetro, pero no sabemos muy bien cmo se enrolla, existen varios modelos: Modelo en superbolas: El nucleofilamento forma pequeas bolitas una a continuacin de otra. Modelo de solenoide (el + aceptado): El nucleofilamento se enrolla sobre s mismo formando una especie de hlice o muelle. Se aprecia que los octmeros se disponen en la periferia, y la H1 interviene en la unin de nucleosomas vecinos, encontrndose en el centro. NIVEL 4: Dominios en bucle (microcnvulas). El filamento de 2530 nm es capaz de empaquetar todava ms formando una serie de bucles, una especie de lazos cuya base queda unida a protenas no histnicas (esqueleto). Los bucles tienen una altura aproximada con respecto al eje proteico de 300 nm.

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Aparece cuando la cromatina est condensada formando los cromosomas. Cada cromtida tiene un grosor de unos 700 nm, puesto que tienen un eje no histnico del que salen los bucles. 6.4. Funciones de la cromatina: Transmisin de la I gentica, que implica dos procesos: Duplicacin de la I gentica de forma que a partir de un cromosoma se forman dos copias idnticas. Reparto de esa I gentica entre las clulas hijas. La duplicacin ocurre en la fase S de la interfase y el reparto durante la divisin mittica. Expresin de la I gentica: Consiste en que la I del ADN pasa a molculas de ARN mediante un proceso denominado TRANSCRIPCIN. Estas molculas pasan al citoplasma y mediante el proceso de la TRADUCCIN se sintetizan las protenas. Duplicacin o replicacin del ADN: Cuando se observa en fase S en determinadas condiciones se puede ver que el nucleofilamento se abre en dos cadenas en una serie de puntos. Este proceso ocurre a lo largo del nucleofilamento en varios puntos de forma simultnea. Cada punto donde se inicia el proceso recibe el nombre de punto de inicio de replicacin o punto de iniciacin. A partir de cada punto, el proceso se va extendiendo a lo largo del nucleofilamento y aquellas regiones donde ya se ha duplicado recibe el nombre de ojos de replicaciones. El proceso puede ser uni o bidireccional. La replicacin unidireccional ocurre nicamente en un sentido y bidireccional cuando a partir del punto de inicio se extiende en ambos sentidos. La duplicacin siempre tiene lugar en el sentido 5'3', pero como las dos cadenas se van replicando a la vez, una se va replicando de forma continua y la otra se va fragmentando, fragmentos que reciben el nombre de fragmentos de OKAZAKI. En la unidireccional una cadena sintetiza de forma continua y la otra discontinua. En la bidireccional ambas cadenas presentan ambos tipos de replicain. Independientemente del tipo de replicain, los ojos de replicacin se van haciendo progresivamente ms grandes y llega un momento en que todos confluyen, se unen y al unirse quedan las dos cadenas de ADN hijas separadas. LA enzima encargada de este proceso es el ADN polimerasa en un proceso semiconservativa: cada molcula recin formada: una cadena de ADN antigua y una cadena de ADN nueva. Transcripcin: Proceso mediante el cual a partir del ADN se forman molculas de ARN, la formacin de dichas la lleva a cabo la ARN polimerasa y de las dos cadenas que forman la molcula de ADN slo se copia una. Cada porcin de ADN puede ser leda a la vez por numerosas molculas de ARN polimerasa. Cuando se observa con el ME el ADN que se transcribe aparece como una serie de rboles de Navidad. Entre dos porciones de ADN hay una zona que no se transcribe, denominada PARTE MUERTA. 30

La enzima ARN polimerasa siempre funciona en el mismo sentido: direccin 5'3'. Este proceso NO CONLLEVA la eliminacin de los NCLEOS NUCLEOSMICOS (permanecen unidos a la cadena de ADN). Durante el proceso, las histonas permanecen en su sitio. Sucede cuando la clula est en interfase. TEMA 7. CROMOSOMAS METAFSICOS: 7.1. Concepto, morfologa y clasificacin. 7.2. Tamao y nmero de los cromosomas. 7.3. Arquitectura molecular de los cromosomas metafsicos. 7.4. Ultraestructura de los cinetocromos. 7.1. Concepto, morfologa y clasificacin: Representan el estado mximo de condensacin de los cromosomas en la vida de la clula Esta condensacin tiene lugar en la divisin celular. En este estado, el ADN del cromosoma presenta una longitud entre 800015000 veces menor que si estuviera completamente desenrollado. El cromosoma. PARTES: Cromtida: Con dos brazos que pueden ser iguales o desiguales en longitud. Hay regiones con grosor menor: Constricciones: primaria: Las dos cromtida permanecen unidas. Secundaria Existe una zona en cada cromtida donde se localiza el ADN satlite. En el otro extremo: Telmeros. En la constriccon primaria hay otras estructuras : Cinetocoros, asociados uno a cada cromtida. La constriccin primaria recibe el nombre de centrmero. La posicin en la constriccin primaria. Los cromosomas se pueden dividir en: METACNTRIOS: La constriccin primaria se localiza en la mitad del cromosoma, de tal forma que los brazos tienden a tener una longitud equivalente. SUBMETACNTRICOS: La constriccin primaria est ligeramente desplazada de la mitad. La longitud de los brazos varan ligeramente (los de abajo + grandes que los de arriba). ACROCNTRICOS: la constriccin primaria est muy desplazada hacia un extremo. Unos brazos son muy pequeos, mientras que los otros dos restantes son muy largos. 7.2. Tamao y nmero de los cromosomas: El tamao es ligeramente variable. Su longitud oscila entre 0'2 50 m. El dimetro entre 0'22 m.

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El nmero de cromosomas depende de la especie. Entre especies alejadas evolutivamente, el nmero de cromosomas depende de si hablamos de clulas somticas o germinales. Somticas: Tienen una notacin de 2n. Presentan dos juegos de cada cromosoma. 2n = 6 : Esa clula presenta tres parejas de cromosomas, y cada pareja se llama cromosomas homlogos. Germinales (gametos): Notacin n. n=3 Ej: la especie humana. 2n = 46 n = 23 ! vulos y espermatozoides. 7.3. Arquitectura molecular de los cromosomas metafsicos: Cuando los cromosomas se observan intactos en el M.E. de barrido como con MET, la superficie es completamente lisa. En cada cromosoma, las cromtidas presentan una cadena nucleohistnica (ADN + histonas) muy larga y que est notablemente empaquetada. Este modelo se consigui en 1977 gracias a LAEMMLI, propuesto en base a los siguientes experimentos: Cuando se eliminan las protenas no histnicas (tratando a los cromosomas de baja fuerza histnica), la cromatina apareca constituida por un filamento de dimetro de 2530 nm de grosor. Si se eliminaban las protenas histnicas el cromosoma apareca constituido por un eje proteico del cual aparecan numerosos bucles. En funciones de estos dos experimentos propuso que el cromosoma metafsico est constituido por un esqueleto formado por protenas no histnicas y sobre todo ese esqueleto, el filamento de dimetro 2530 nm se dispone en espiral y formando una serie de bucles, que forman micromolculas que adoptan una disposicin en hlice. 7.4. Ultraestructura de los cinetocoros: A nivel de la constriccin primaria existen una serie de plaquitas, asociadas a cada cromtida. Cuando se observa la estructura a mayor aumento, vemos que estn formados por una serie de lminas (3): 2 densas y una clara. 1. Una densa asociada al cromosoma: LMINA LINTERNA. Grosor 4060 nm. ADN + protenas. 2. Lmina clara: LMINA MEDIAL. El grosor oscila entre 2530 nm. Formada por protena fundamental. Sobre los cinetocoros, los cromosomas inciden los MICROTBULOS DEL USO MITTICO (responsables del movimiento de los cromosomas durante la mitosis). 3. Lmina densa: LMINA EXTERNA. Grosor 4060 nm. ADN + protenas. TEMA 8. NUCLEOLO Y RIBOSOMAS.

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 Composicin qumica y estructura del nucleolo. Concepto y tipos de ribosomas. Estructura y composicin qumica de los ribosomas. Biognesis de los ribosomas. Sntesis proteica o funciones de los ribosomas. 8.1. Composicin y estructura del nucleolo. Es la estructura que est presente en el ncleo de la clula (durante la interfase) y durante la profase de la divisin celular. Se le puede considerar como una estructura especializada por diferenciacin, que se encarga de la formacin de los ribosomas. A nivel del nucleolo existe una porcin del ADN que se denomina organizador nucleolar que es donde se generan las molculas de ARNr pesadas. Composicin qumica: Fundamentalmente compuesto por una pequea porcin de ADN, ARN y protenas que se sintetizan en el citoplasma y son transportadas al nucleolo y protenas ribosmicas. ADN: 13 % del total del peso seco del nucleolo. ARN: 1030 % Protenas: elementos ms abundantes en el nucleolo. Descubierto en 1781 por Fontana: se dio cuenta de q2ue el nucleolo sigue un ciclo caracterstico a lo largo del ciclo celular. Est presente en la interfase y durante casi toda la profase de la divisin celular. Al final de la profase, el nucleolo desaparece. Durante el resto de la divisin, el nucleolo est ausente y se comienza a ver de nuevo en la interfase. El n de nucleolos vara entre los distintos tipos celualres. La mayoe parte de las clulas poseen 1 2 nucleolos. En los vulos puede haber hasta 1.000 nucleolos. En 3 dimensiones tiene forma esfrica y en seccin, redondeada. Morfologa irregular. Posicin: Normalmente central o ligeramente desplazado hacia la periferia. Tamao: depende del tipo celular. Como trmino medio. 12 de dimetro.Existen una serie de trabajos ms o menos irregulares entre los que quedan secciones con material diferente. Componentes: Parte amorfa: Huecos claros con el MET. Parte densa: Oscura al MET. Podemos distinguir 2 regiones: Centros fibrilares: Regiones fundamentalmente con ADN (corresponde a los centros organizadores nucleolares) y diversas enzimas encargadas de la transcripcin. Constituidos por fibras de dimettro 79 . Regin fibrilar: Compuesta pr fibrillas de 810 nm de dimettro. Regiones muy densas (las ms del nucleolo). Las fibrillas estn constituidas por ADN y por molculas de ARNr que se estn sintetizando y protenas asociadas. 33

 Regin granular: Constituida por grnulos de un dimetro aprximado de 25 nm; los cuales corresponden a las subunidades ribosmicas que se estn formando. Aparece menos densa que la regin fibrilar. A veces, asociada a nucleolos aparece una zona de cormatina densa: Heterocromatina. Asociada al nuceolo. 8.2. Concepto y tipos de ribosomas. TEMA 9. RETCULO ENDOPLASMTICO: 9.1. Concepto y estructura del retculo endoplasmtico. 9.2. Composicin qumica. 9.3. Funciones del retculo endoplasmtico. 9.4. Biognesis. 9.1. Concepto y estructura: El R.E. se puede considerar como un conjunto de membranas que limitan cavidades cerradas o cisternas. Este orgnulo tiene un papel importante en la biosntesis de protenas y lpidos que forman parte del R.E., del AG, de lisosomas, plastos y mitocondrias y MP. Pero tambin sintetiza las protenas que se encuentran en la luz del RE, del AG, de lisosomas y de las vesculas de secrecin. Este orgnulo se puede dividir en 2 tipos: RE Rugoso: Presenta ribosomas adosados a sus membranas. Est constituido por cisternas que estn interconectadas entre s. Las cisternas en seccin muestran un contorno alargado. Se conectan a su vez con la envoltura nuclear. Los ribosomas estn adosados a sus membranas y estn en forma de polisomas y estn sintetizado protenas. Las cisternas tienen un grosor que oscila entre 800 1 m. En lo que se refiere a la mb del RER tiene un grosor de 70 : el de las lminas osmfilas 15 y la lmina osmfoba 30. La mb tiene 2 caras, una citoplasmtica que mira del citoplasma y una lmina que mira hacia la luz del RER. Los ribosomas se adosan a la cara citoplasmtica. El contenido de las cavidades del RER, aparece claro cuando se observa con el ME. En algunos casos se pueden observar en l, cristales e inclusiones densos. RE Liso: no tiene ribosomas adosados. Est constituido por cisternas con morfologa tubular, sin ribosomas. Cuando se analiza la distribucin del RE en la clula con tcnicas inmunocitoqumicas (utilizacin de anticuerpos que se unen a una determinada molcula especficamente queremos ver), vemos que se organiza de tal manera que aparece una red fluorescente que se distribuye por todo el citoplasma. * En rganos del sistema vivo, la disposicin del RE vara del tipo celular que consideremos y tambin vara la abundancia relativa entre el RER y el REL

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* Una clula donde el RE es abundante, son las clulas de los acinos pancreticos, donde el RE es rugoso y se sita fundamentalmente en la regin basal de la clula. * En los hepatocitos (clulas del hgado) 1/3 de REL y 2/3 de RER. En este caso se sita disperso por todo el citoplasma. * En clulas productoras de hormonas esteroideas, la mayor parte es de REL y tambin se distribuye de forma homognea por toda la red. 9.2. Composicin qumica: El estudio de la composicin qumica se puede llevar a cabo de dos formas: Sobre clulas intactas: Existen varias tcnicas. a.1.) Tcnicas citoqumicas: se utilizan para detectar actividades enzimticas y se basan en la adiccin de un sustrato a las secciones de clulas el cual es especfico de la enzima que queremos estudiar y adems un segundo compuesto que modifica el anterior dando un precipitado que se puede observar por el micro. Con estas tcnicas se ha puesto de manifiesto en el RE la actividad enzimtica Glucosa 6 fosfatasa, la cual acta sobre la glucosa 6 fosfato, dando glucosa + fosfato. Lo que se hizo fue incubar clulas fijadas con glucosa 6P ms Nitrato de plomo. En aquellos lugares donde existe la enzima se genera glucosa + cido fosfrico, el cual reacciona con el nitrato de plomo y se forma el fosfato de plomo que resulta que aparece muy denso cuando se observa por el micro, lo que indica que en estas zonas existe la enzima glucosa 6 fosfatasa, la cual es exclusiva del RE, no existe en otro lugar de la clula (excepto la envoltura nuclear). 36 36

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