INMUNOGLOBULINAS: Estructura funcional.

Inmunoglobulinas: Estructura functional.

Los anticuerpos (Ac), el sistema principal de histocompatibilidad (MHC) y el receptor de antgenos de las clulas T (TCR) son las tres clases de molculas usadas por la inmunidad adaptativa para el reconocimiento de antgenos.
Inmunoglobulinas Conformado por tres CDR en V ligera y tres CDR en V pesadas TCR Conformado por tres CDR en V y tres CDR en V . MHC Hendidura de unin al pptido conformada por los dominios 1 y 2 en las molculas de clase I y dominios 1 y 1 en las de clase II. Pptidos.

Sitio de unin al Ag

Naturaleza de los Ag que se unen

Naturaleza de los determinantes reconocidos

Macromolculas (protenas, lpidos, poliscridos, cidos nuclicos) y algunas sustancias qumicas de pequeo tamao. Determinantes lineales y conformacionales.

Complejos pptido-MHC.

Determinantes lineales de pptidos (varios residuos de aminocidos) unidos a una molcula de MHC.

Determinantes lineales(varios residuos de aminocidos).

Los anticuerpos pueden existir en dos formas: Los anticuerpos unidos a la membrana de los linfocitos B que funcionan como receptores de antgenos, y los anticuerpos secretados que se encuentran en la circulacin, los tejidos y las mucosas y que se unen a antgenos, neutralizan toxinas y previenen la penetracin y diseminacin de patgenos. El reconocimiento del antgeno por los anticuerpos unidos a la membrana de los linfocitos B vrgenes activa dichos linfocitos e inicia la respuesta inmune humoral. Los anticuerpos secretados por las clulas B estimuladas por el antgeno en la fase efectora de la inmunidad humoral se unen al mismo antgeno e inician diversos mecanismos efectores que culminan con la eliminacin de dicho antgeno. La eliminacin del antgeno requiere de la interaccin del anticuerpo con otros componentes del sistema inmune, incluidas molculas como las protenas del complemento y clulas. Las funciones efectoras mediadas por los anticuerpos incluye la neutralizacin de microorganismos o de productos txicos secretados por ellos, la activacin del sistema del complemento, la opsonizacin de patgenos para facilitar la fagocitosis, la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) mediante la cual los microorganismos son fijados por los anticuerpos para ser lisados por la clulas del sistema inmune innato y la hipersensibilidad inmediata en la cual los anticuerpos inician la activacin de los mastocitos.

Funciones efectoras de los anticuerpos.

Los anticuerpos estn distribuidos en los fluidos biolgicos a lo largo de todo el cuerpo y en la superficie de un nmero limitado de tipos celulares. Los linfocitos B son las nicas clulas capaces de sintetizar molculas de anticuerpos. Estas clulas inicialmente expresan una forma integral de membrana de molcula de anticuerpo en la superficie celular, que funciona como receptor de antgenos de las clulas B. Tras la exposicin al antgeno gran parte de la respuesta inicial de anticuerpos ocurre en los tejidos linfoides, principalmente en el bazo, los ganglios linfticos y el tejido linfoide asociado a mucosas (MALT) pero clulas plasmticas de larga vida productoras de anticuerpos pueden persistir en otros tejidos, especialmente en la mdula sea. Las formas secretadas de anticuerpos se acumulan en el plasma, las secreciones mucosas y el tejido intersticial. En ocasiones estos anticuerpos se unen a la superficie de otras clulas efectoras inmunocompetentes como los fagocitos mononucleares, las clulas asesinas naturales (NK) y los mastocitos, que tienen receptores especficos para unirse a las molculas de anticuerpos. Un adulto humano sano de 70 Kg produce entre 2 y 3 gramos de anticuerpos cada da. Aproximadamente las dos terceras partes de los mismos corresponde a un anticuerpo llamado IgA que es producido por las clulas B activadas y las clulas plasmticas en las paredes de los tractos respiratorio y digestivo y son transportados activamente hacia la luz del rgano. La gran cantidad de IgA producida refleja la enorme superficie de estos rganos. Los anticuerpos que entran a la circulacin tienen una vida media limitada y son fundamentalmente del tipo IgG. Aunque estos anticuerpos se encuentren primariamente en el suero, algunas IgG pueden ser tambin transportadas a las mucosas. Su vida media suele ser de unas tres semanas.

Estructura molecular de los anticuerpos. Comnmente a los anticuerpos tambin se les llama inmunoglobulinas (Ig) en referencia a la porcin con funcin inmunolgica de la fraccin gamma de la globulinas (en una electroforesis la mayora de los anticuerpos migra en la porcin ms rpida de las globulinas llamada fraccin gamma).

Estructura de una molcula de anticuerpo. A. Diagrama esquemtico de una molcula de IgG secretada. Los sitios de unin al antgeno estn formados por la yuxtaposicin de los dominios VL y VH. En la porcin constante de las cadenas pesadas se localizan los sitios de unin del complemento (C) y los receptores de Fc. B. Diagrama esquemtico de una molcula de IgM en la membrana de un linfocito B. La molcula de IgM tiene un dominio constante de cadena pesada (CH) ms que las IgG. La forma unida a membrana de los anticuerpos tiene una porcin C- terminal transmembranal y una intracitoplasmtica que anclan la inmunoglobulina a la membrana plasmtica.

Todas las molculas de anticuerpos comparten las mismas caractersticas estructurales bsicas pero presentan una marcada variabilidad en las regiones de unin al antgeno. Esta variabilidad de las regiones de unin al antgeno determinan la capacidad de los diferentes anticuerpos de unirse a una enorme cantidad de antgenos estructuralmente diferentes. Tericamente el repertorio de anticuerpos se conforma por aproximadamente 109 especificidades diferentes, cada una con una secuencia de aminocidos exclusiva conformando el sitio de unin al antgeno. Las funciones efectoras y las propiedades fisicoqumicas comunes de los anticuerpos estn asociadas con las porciones de la molcula que no se unen al antgeno y que exhiben, relativamente, menos variabilidad entre los diferentes anticuerpos. La molcula de inmunoglobulina posee una estructura simtrica compuesta por dos cadenas ligeras idnticas y dos cadenas pesadas tambin idnticas. Ambas, ligeras y pesadas, contienen una serie de unidades homlogas

repetitivas, de 110 aminocidos cada una, que se pliegan independientemente formando un motivo globular llamado dominio de inmunoglobulina. Un dominio de inmunoglobulina est formado por dos capas en hoja beta-plegadas, cada una de las cuales est compuesta por tres a cinco hebras de cadenas polipeptdicas antiparalelas. Ambas capas se mantienen unidas por puentes disulfuro y las hebras adyacentes de cada capa estn conectadas en forma de lazos cortos. Lo aminocidos que conforman estos lazos son crticos para el reconocimiento antignico. Muchas otras protenas importantes del sistema inmune contienen tambin dominios con esos mismos motivos plegados y secuencias de aminocidos semejantes a las de las inmunoglobulinas. Todas las molculas que poseen este tipo de dominio se consideran que pertenecen a la superfamilia de las inmunoglobulinas y todos los segmentos de gen que codifican los dominios de inmunoglobulinas se cree derivan de un mismo gen ancestral.

Superfamilia de las inmunoglobulinas.

Tanto las cadenas pesadas como las cadenas ligeras estn compuestas por regiones variables amino-terminales (V) que participan en el reconocimiento antignico y regiones constantes carboxilo-terminales (C). Las regiones constantes de las cadenas pesadas median las funciones efectoras. En las cadenas pesadas la regin variable est compuesta por un dominio de inmunoglobulinas (VH) y la regin constante por tres o cuatro dominios (CH) segn el isotipo de que se trate. Cada cadena ligera consta de una regin variable y una constante compuestas por un solo dominio cada una (VL y CL). A las regiones variables se les llama as porque contienen

regiones de variabilidad en su secuencia de aminocidos que permite distinguir entre los anticuerpos producidos por un clon de clulas B de los producidos por otro clon. La regin variable de una cadena pesada (VH) se coloca en yuxtaposicin con la regin variable de una cadena ligera (VL) para conformar el sitio de unin al antgeno. Debido a que las molculas de anticuerpo se componen de dos cadenas pesadas y dos ligeras en cada molcula habr dos sitios de unin al antgeno. Los dominios de la regin constante estn separados del sitio de unin al antgeno y no participan en el reconocimiento de este. Las regiones constantes interactan con otras molculas y clulas efectoras del sistema inmune y de este modo median las funciones biolgicas de los anticuerpos. Tambin en las secuencias carboxiterminales de las cadenas pesadas se encuentran las secuencias de anclaje de las inmunoglobulinas a las membranas de los linfocitos B (en la forma unida a membrana de las inmunoglobulinas existe en el extremo carboxiterminal una secuencia hidrofbica seguida de una de aminocidos cargados positivamente que conforman el sistema de anclaje a la membrana). Las regiones constantes de las cadenas ligeras no participan en las funciones efectoras ni en el anclaje a membrana. Las cadenas ligeras y pesadas se encuentran unidas covalentemente mediante puentes disulfuro que se extienden entre residuos de cistena localizados en la regin carboxiterminal de la cadena ligera y adyacentes al primer dominio constante de la cadena pesada (CH 1). Aunque tambin interacciones no covalentes entre los dominios variables de ambas cadenas y entre CL y CH 1 pueden contribuir en esta unin. Ambas cadenas pesadas tambin se encuentran unidas mediante puentes disulfuro. En los anticuerpos IgG estos puentes se extienden entre residuos de cistena localizados en los dominios CH2, muy cerca de una regin llamada hinge o bisagra. En otros isotipos pueden tener otras localizaciones. Tambin interacciones no covalentes entre los dominios CH 3 pueden contribuir a la unin entre cadenas pesadas. Las molculas de anticuerpos son relativamente flexibles, lo cual les permite adaptarse a la situacin de los Ag en diferentes circunstancias. Esta flexibilidad les es conferida, en gran parte, por la capacidad movilidad de la regin de la bisagra entre los dominios CH1 and CH2 y que puede llegar incluso a un movimiento de rotacin entre los dominios VH y CH1.

En las molculas de IgG la regin de bisagra, localizada entre los dominios CH1 y CH2 de las cadenas pesadas, es la ms susceptible de digestin proteoltica. Si se trata con papana en condiciones controladas, la enzima acta sobre esta regin y corta la molcula en tres fragmentos. Dos de estos fragmentos son idnticos y se componen de la cadena ligera y los dominios VH-CH1 de la cadena pesada. Se les denomina Fab (fragmentos de unin al antgeno). El tercer fragmento est compuesto por los dominios CH2 and CH3 de las cadenas pesadas unidos por los puentes disulfuros. Dada su capacidad de asociarse entre ellos y cristalizar se les ha denominado fragmento cristalizable (Fc). Si en lugar de papana se utiliza pepsina, la proteolisis ocurre un poco ms distalmente a la regin de bisagra generando un F(ab')2, o sea se conservan intactos los puentes disulfuro de la zona bisagra y en el fragmento se conservan los dos sitios de unin al antgeno. La regin Fc queda fragmentada en varios trozos de los cuales el mayor se denomina pFc. Tras este tratamiento con enzimas se puede comprobar que la capacidad de unin al Ag del anticuerpo radica en los Fab y las funciones efectoras en el Fc y que ambas estn separadas en la estructura de la inmunoglobulina.

Fragmentacin proteoltica de una molcula de IgG. (A) La digestin con papana fragmenta la molcula en dos sitios de unin al Ag (fragmentos Fab) y un fragmento Fc con capacidad de unirse al complemento y a los receptores de Fc. (B). La digestin con pepsina genera un nico fragmento con capacidad bivalente de unin al Ag (fragmento F(ab')2) y fragmentos de pptidos derivados de las cadenas pesadas. Los sitios de corte sealados por flechas.

La mayor parte de la diferencia en la secuencia de aminocidos existente entre los diferentes anticuerpos se encuentra confinada a tres zonas cortas en las regiones variables de las cadenas ligeras y pesadas. Estas zonas de mxima diversidad se denominan segmentos hipervariables y coinciden con los lazos protruyentes que conectan las hebras adyacentes de las hojas beta-plegadas que conforman los dominios variables de las cadenas pesadas y ligeras. Estas zonas hipervariables, que se extienden aproximadamente 10 residuos de aminocidos, estn flanquedas por secuencias mucho ms conservadas denominadas zonas framework que le aportan la conformacin a los dominios variables. En la molcula de Ig los tres sitios hipervariables del dominio VL y los tres del dominio VH conforman la superficie de unin al antgeno, que es estructuralmente complementaria a la forma del antgeno. Por esta causa a los segmentos hipervariables se les denomina regiones determinantes de la complementariedad (CDRs) y se denotan, a partir del extremo amino, CDR1, CDR2, y CDR3. De todos ellos el segmento CDR3 es el ms variable de todos debido a mecanismos genticos especiales. La diferencia entre las secuencias de los CDRs conforma diferentes superficies de interaccin con el Ag y por tanto confiere diferente especificidad a cada anticuerpo. Las inmunoglobulinas pueden clasificarse en distintas clases y subclases en base a las diferencias en la estructura de las regiones constantes de sus cadenas pesadas. A estas clases se les llama tambin isotipos y se denominan IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM. En los humanos los isotipos IgA e IgG pueden a su vez ser subdivididos en subclases o subtipos llamados IgA1 e IgA2; e IgG1, IgG2, IgG3, e IgG4, lo que produce un total de 9 isotipos de Ig

en la especie. La secuencia de aminocidos de las regiones constantes de las cadenas pesadas de un mismo isotipo de anticuerpo son prcticamente iguales y solo se encuentran diferencias entre los diferentes isotipos. Las cadenas pesadas se denotan por la letra del alfabeto griego correspondiente al isotipo del anticuerpo: IgA1, cadenas pesadas 1; IgA2, 2; IgD, ; IgE, IgG1, 1; IgG2, 2; IgG3, 3; IgG4, 4; e IgM, . En los humanos los anticuerpos IgM e IgE presentan en su regin constante cuatro dominios, mientras que IgG, IgA, e IgD slo tres. Dichos dominios se denominan CH y se numeran secuencialmente desde el extremo aminoterminal hacia el carboxiterminal (e.j., CH1, CH2, etc.). Las formas secretadas de IgG e IgE y todas las formas de membrana, independientemente del isotipo, son monomricas (una molcula con la estructura bsica de Ig: dos cadenas pesadas y dos ligeras). En contraste, las formas secretadas de IgM e IgA forman complejos multimricos en los cuales dos o ms molculas bsicas de cuatro cadenas estn unidas covalentemente. La IgM puede ser secretada como pentmeros o hexmeros, mientras que la IgA suele ser secretada como dmero. Estos complejos se conforman por interacciones entre regiones llamadas colas, localizadas en los extremos carboxiterminales de las formas secretadas de las cadenas y , y un polipptido adicional de 15-kD, llamado cadena de unin (J), mediante puentes disulfuro. Esta cadena adicional, adems de estabilizar las formas multimricas, sirve para facilitar el transporte de estas Ig a travs de los epitelios.

Existen dos clases o isotipos de cadenas ligeras llamados y , que se distinguen entre s por las caractersticas de sus regiones constantes. Cada molcula de inmunoglobulina posee dos cadenas ligeras o dos , pero nunca una de cada. En los humanos sanos alrededor del 60% de los anticuerpos presenta cadenas ligeras y un 40% cadenas . (de hecho la relacin / se utiliza en el diagnstico de linfomas de clulas B). No obstante, no se conoce que existan diferencias funcionales entre los anticuerpos con uno u otro tipo de cadenas ligeras.

Los diferentes isotipos de inmunoglobulina presentan diferentes funciones efectoras. Esto se debe a que las funciones efectoras de los anticuerpos son mediadas por la unin de las regiones constantes de las cadenas pesadas a los receptores Fc de diferentes clulas como los fagocitos, las clulas NK y los mastocitos, y a protenas plasmticas como el sistema del complemento. Los diferentes isotipos difieren en sus regiones constantes y por tanto tambin en las clulas a las que pueden unirse y las funciones efectoras que pueden realizar.

FcR Fc RI (CD64) Fc RIIA (CD32) Fc RIIB (CD32) Fc RIIIA (CD16) Fc RIIIB (CD16) Fc RI Fc RII (CD23) Fc R (CD89)

Distribucin celular Macrfagos, neutrfilos, eosinfilos. Macrfagos, neutrfilos, eosinfilos, plaquetas. Linfocitos B Clulas NK Neutrfilos, otras. Mastocitos, basfilos, eosinfilos. Linfocitos B, eosinfilos, clulas de Langerhans Neutrfilos, eosinfilos, monocitos.

Funcin Activacin de fagocitos, fagocitosis. Activacin celular, fagocitosis. Retroalimentacin negativa de clulas B. ADCC. Fagocitosis. Activacin celular, degranulacin. Desconocida. Activacin celular.

Isotipo IgG

IgM IgA IgE IgD

Funciones Opsonizacin de Ag para la fagocitosis por macrfagos y neutrfilos. Activacin de la va clsica del complemento (IgG3, IgGl e IgG2 ). Citotoxicidad mediadad por clulas dependiente de Ac (ADCC) por las clulas NK. Transferencia de Ac maternos a travs de la placenta. Regulacin de la actividad celular de las clulas B. Activacin de la va clsica del complemento. Receptor de Ag de los linfocitos B vrgenes. Inmunidad de mucosas. Activacin del complemento por la va alternativa y de las lectinas. Degranulacin de mastocitos (reacciones de hipersensibilidad inmediata). Receptor de Ag de los linfocitos B vrgenes.

Los defectos en la produccin de anticuerpos conllevan a un incremento de la susceptibilidad a las infecciones por patgenos, incluidos bacterias, hongos y viruses. Adems, en los individuos alrgicos y en las enfermedades autoinmunes algunos anticuerpos especficos pueden mediar el dao tisular.

Alotipos e idiotipos. Lo anticuerpos son protenas y como tales tambin son inmunognicas (pueden comportarse como antgenos). Si se inyectan en otro individuo la respuesta inmune de ste se desarrolla frente a los eptopes presentes en estas inmunoglobulinas pero que estn ausentes o son muy raros en sus propias inmunoglobulinas. En base a esta respuesta dos tipos de eptopes pueden ser definidos: Primero aquellos localizados en las porciones conservadas de la Ig pero que provocan diferencias estructurales menores y a los que se llama alotopes. Todos

los anticuerpos que comparten un alotope concreto se dice pertenecen al mismo alotipo. Un alotipo puede considerarse el producto de una forma allica distinta de un gen de inmunoglobulina. La mayora de los alotopes se localizan en las regiones constantes de las cadenas ligeras y algunos en las regiones framework de los dominios variables. El segundo tipo de determinante que marca diferencias entre las inmunoglobulinas de los individuos de la misma especie se localiza en los dominios hipervariables y son los responsables de la conformacin complementaria a la estructura de cada antgeno. Se les reconoce como extraos porque estn presentes slo en muy pequea cantidad en un individuo determinado. Estos determinantes nicos de cada clon de anticuerpos se les llama idiotopes y a todas las molculas de inmunoglobulinas que lo poseen se les considera pertenecientes al mismo idiotipo. Los idiotipos parecen estar involucrados en la regulacin de las funciones celulares de los linfocitos B (hiptesis de las redes idiotipo-antiidiotipo). Los eventos moleculares y celulares de la gentica, sntesis, ensamblaje y expresin de las inmunoglobulinas en relacin con los diferentes estadios de maduracin y activacin de las clulas B se explican detalladamente en otras secciones.

Este tema forma parte del Manual de Inmunologa para uso docente. Todas las ilustraciones han sido tomadas de: Abbas, AK; Lichtman, AH and Pillai,S. Inmunologa celular y molecular. Sexta edicin. Editorial Elsuier, 2008.