Microbiologa de Agua: Coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli

Laboratorio Microbiologa Aplicada Spring 2007

Microbiologa de Agua Qu es un coliforme?

Grupo de especies de varios gneros

Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli

Citrobacter freundaii Enterobacter aerogenes

Microbiologa de Agua Qu es un coliforme?

Caractersticas en comn
Gram-negativos Bacilos no formadores de esporas Algunos son mtiles Anaerbos fermentativos Fermentadores de lactosa produciendo gas y cido luego de 48 hrs a 32 o 35oC

Coliformes
Pueden estar presentes en:
heces fecales de animales de sangre caliente pjaros tierra

Coliformes fecales
Incluye E. coli y algunos Klebsiella y Enterobacter spp.
Temperaturas de incubacin: 44.5 o 45oC por 24 hrs.

Tipos de E. coli
Cuatro tipos de E. coli enterovirulentos (EEC) E. coli
enterotoxignico (ETEC)

E. coli E. coli

enteropatognico (EPEC) enterohemorrgico (EHEC) E. coli enteroinvasivo (EIEC)

E. coli enterotoxignico (ETEC)

Causante de la diarrea del viajero Dosis infecciosas altas Vehculo: agua o alimento contaminado con aguas usadas

E. coli enteropatognico (EPEC)

Mecanismo de virulencia probablemente por la produccin de una verotoxina (Shiga-like toxin) Alimentos implicados son carne molida y pollo

E. coli enterohemorrgico
(EHEC)
normal de los intestinos de todos animales incluyendo los humanos Produccin de una verotoxina Dosis tan bajas como 10 organismos No fermenta sorbitol, MUG negative

E. coli O157:H7 es habitante

(EHEC)- Alimentos implicados

E. coli enterohemorrgico

E. coli enteroinvasivo (EIEC)

Parte de la flora intestinal normal de los humanos y otros primates Dosis infecciosa ~ 10 organismos Produce bacillary dysentery Se confunde con shigellosis Vehculos: hamberguer, leche no pausterizada

Infecciones E. coli O157:H7

Septiembre-Octubre 2006 199 personas afectadas;3 muertos

Taco Bell Dic 2006 71 personas afectadas

Mtodos para Detectar Coliformes

MPN
Basado en probabilidad estadistica NO es contaje directo Tcnica lquida

Slido
Contaje directo en medio

Coliformes

MPN - Continuacin
El objetivo es diluir el organismo Seleccione la muestra ms diluda con todos los tubos positivos y los prximos dos
3,2,1 Nuestra combinacin

Determine el MPN utilizando la tabla de MPN

Coliformes

Se asume en MPN
Distribucin al azar de la bacteria Los organismos no se aglutinan Si hay un microorganismo presente, crecer Existen las condiciones apropiadas para crecer

Ventajas sobre el uso de placas

El tamao de la muestra puede ser mayor Mejor para nmeros bajos de organismos El medio lquido es ms suave para el organismo porque no se expone al calor Requiere preparacin de medio con antelacin

Medios - LST
Lauryl Sulfate Tryptose Broth Prueba PRESUMPTIVA para coliformes Se informa como presumptive coliforms/g Ingredientes Lauryl Sulfate Algunas bacterias no pueden crecer - Selectivo Lactosa Produccin de gas Diferencial w/durham tubo NaCl Aumenta razn de reproduccin Tryptona Fuente de Nitrgeno Incube a 35oC por 48 horas

Medio - BGLB
Brilliant Green Lactose Bile Incube a 35oC por 48 horas Produccin de gas Positivo Ingredientes

Resultados son coliformes confirmados No utilize BGLB directamente Altamente inhibitorio

Oxgall forma de bilis Brilliant Green Dye Inhibe Gram +

Medio EMB Agar

Eosine Methylene Blue Agar Placas ya servidas Estriado para aislar del MPN Ingredientes - Diferencial Peptona Protena Lactosa Produccin de cido Tinte Eosine Inhibitorio Azul de metileno Indicador de pH E. coli and Enterobacer Nucleated, dark centered, with or without a metallic green sheen CONFIRMED COLIFORMS

Coliformes

Coliformes

Mtodo Slido
VRBA
Violet Red Bile Agar
Peptona Fuente de nitrgeno Lactosa Produccin de cido Rojo neutral Indicador (6.8 rojo, 8.0 amarillo) Cristal Violeta Inhibe Gram + NaCl Aumenta razn de crecimiento Sales biliares

VRBA
Tpica Rojo-prpura, Colonias Elpticas, puede ser una zona de precipitacin Se recomiendan placas con 10100 colonias Colonias ms grandes Ponga una capa de agar luego que la primera solidifique Resultados Presumptiva Coliformes

Coliformes