Вы находитесь на странице: 1из 9

PRCTICA No.

3 PROTENAS I: PRUEBAS DE IDENTIFICACIN DE AMINOCIDOS

OBJETIVOS: Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de: 1.- Esquematizar la evolucin del concepto de protena. 2.- Clasificar los diferentes tipos de aminocidos que se conocen . 3.- Realizar pruebas de identificacin de aminocidos. 4.- Explicar el fundamento para las reacciones de identificacin.

INTRODUCCIN: Las protenas son biomolculas formadas por cadenas lineales de aminocidos. El nombre protena proviene de la palabra griega ("proteios"), que significa "primario" o del dios Proteo, por la cantidad de formas que pueden tomar. Atendiendo a sus funciones y propiedades fsico-qumicas, las protenas se pueden clasificar en protenas simples (holoproteidos), que por hidrlisis dan solo aminocidos o sus derivados; protenas conjugadas (heteroproteidos), que por hidrlisis dan aminocidos acompaados de sustancias diversas, y protenas derivadas, sustancias formadas por desnaturalizacin y desdoblamiento de las anteriores. Las protenas son indispensables para la vida, sobre todo por su funcin plstica (constituyen el 80% del protoplasma deshidratado de toda clula), pero tambin por sus funciones biorreguladora (forma parte de las enzimas) y de defensa (los anticuerpos son protenas)1 . Las protenas desempean un papel fundamental para la vida y son las biomolculas ms verstiles y ms diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:

Estructural. sta es la funcin ms importante de una protena Inmunolgica (anticuerpos), Enzimtica (sacarasa y pepsina), Contrctil (actina y miosina).

Homeosttica: colaboran en el mantenimiento del pH, Transduccin de seales (rodopsina) Protectora o defensiva (trombina y fibringeno)

Los pptidos son un tipo de molculas formadas por la unin de varios aminocidos mediante enlaces peptdicos, o enlace triple con una conjugacion de ADN (cido desoxirribonucleico) Los pptidos, al igual que las protenas, estn presentes en la naturaleza y son responsables por un gran nmero de funciones, muchas de las cuales todava no se conocen. La unin de un bajo nmero de aminocidos da lugar a un pptido:

Oligopptido: menos de 10 aminocidos. Polipptido: ms de 10 aminocidos. Protena: ms de 100 aminocidos. Los pptidos se diferencian de las protenas en que son ms pequeos (tienen menos de diez mil o doce mil Daltons) y que las protenas pueden estr formadas por la nin de varios polipptidos y a veces grupos prostticos. Un ejemplo de polipptido es la insulina, compuesta de 55 aminocidos y conocida como una hormona de acuerdo a la funcin que tiene en elorganismo de los seres humanos.

Los aminocidos componentes de las protenas son alfa-aminocidos. Por lo tanto, estn formados por un carbono alfa unido a un grupo carboxilo, a un grupo amino, a unhidrgeno y a una cadena (habitualmente denominada Radical) de estructura variable, que determina la identidad y las propiedades de los diferentes aminocidos; existen cientos de cadenas R por lo que se conocen cientos de aminocidos diferentes, pero slo 20 forman parte de las protenas y tienen codones especficos en el cdigo gentico. La unin de varios aminocidos da lugar a cadenas llamadas polipptidos o simplemente pptidos, que se denominan protenas cuando la cadena polipeptdica supera los 50 aminocidos

La estructura primaria depende del nmero y secuencia de aminocidos que se unen entre s por el enlace peptdico (-CO-NH) covalente.

MATERIAL Y REACTIVOS 1 gradilla 24 tubos de ensayo 1 perilla reactivo de Biuret reactivo del milln reactivo de Hopkins-cole HNO3 concentrado NH4OH concentrado Pb(CH3-COO)2 (acetato de plomo) H2SO4 NaOH al 10% ninhidrina en butanol al 0.1% papel filtro Whatman No. 1 gelatina peptona casena albmina

PARTE EXPERIMENTAL I .ALGUNAS PROPIEDADES QUMICAS DE LAS PROTENAS Como ya se explic, las protenas estn formadas por aminocidos, unidos por enlaces peptdicos y aunque presentan propiedades fisicoqumicas y biolgicas caractersticas stas son reflejo de las de los aminocidos que las constituyen. Muchas de las reacciones coloridas que se utilizan para el anlisis de las protenas en realidad se deben a la presencia de un aminocido especfico. EXPERIMENTO 1: REACCIN DE MILLN La reaccin de Milln es especfica para el grupo fenlico y por lo tanto, la dan positiva todas las sustancias que poseen esta funcin, como el fenol, cido saliclico, timol, tirosina y todas aquellas protenas que contengan tirosina. 1.- Prepare una serie de 4 tubos de ensaye numerados, coloque en cada uno 2 ml de una de las soluciones siguientes: TUBO No 1 PROTEINA Peptona

2 3 4

Casena Gelatina Albmina

2.- Posteriormente aada 5 gotas del reactivo de Milln. Caliente ligeramente hasta que la solucin hierva. PRECAUCION! la presencia de tirosina se pone de manifiesto por la aparicin de un precipitado blanco el cual por accin del calor se vuelve rojo. La presencia de sales as como soluciones muy alcalinas pueden interferir en esta reaccin. a. Anote sus resultados en la tabla que se encuentra al final del capitulo. b. Explique en qu consiste el reactivo de Milln y cual es el mecanismo que se ha propuesto para esta reaccin. _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ __________________________________________________ EXPERIMENTO 2: REACCIN DE BIURET Todas las molculas que contengan dos o ms uniones peptdicas, por lo tanto todas las protenas y todos los pptidos no menores de 3 unidades, dan positiva la reaccin de Biuret. El nombre se debe al compuesto biurea ( NH 2CO-NH-CO-NH2) el cual da positiva la prueba. Cuando una protena o un polipptido se hacen reaccionar con sulfato de cobre en solucin alcalina se produce un color caracterstico prpura o violeta. El color se debe a un complejo que resulta al unirse el Cu con los tomos de nitrgeno de los enlaces peptdicos. Esta reaccin nos sirve para diferenciar las protenas y pptidos de los aminocidos y su utilidad principal es la de seguir el proceso de hidrlisis proteica, la reaccin ser negativa cuando la hidrlisis sea completa. 1.- Prepare una serie de 4 tubos de ensaye numerados coloque en cada uno 1ml de una de las siguientes: TUBO No 1 2 3 4 PROTENA Peptona Casena Gelatina Albmina

2.- Aada 2ml de solucin de Biuret, agite los tubos y observe la reaccin que se produce en cada caso. La aparicin de una coloracin violeta o rosa, en no ms de 20 minutos, debe considerarse como prueba positiva.

3.- Esta reaccin tambin puede llevarse a cabo en base slida, colocando unas gotas de cada solucin de prueba sobre unos cuadros de papel filtro que previamente se han tratado con una mezcla formada por 25 ml de una solucin de sulfato de cobre al 3% en un litro de solucin de hidrxido de potasio al 10%. a. Anote los resultados en la tabla que se encuentra al final del capitulo. b. Se puede considerar al reactivo de Biuret como una prueba caracterstica para todas las protenas? Por qu? _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ ______________________________ c. Escriba la reaccin.

EXPERIMENTO 3: REACCIN XANTOPROTEICA Esta reaccin se debe a la formacin de nitroderivados aromticos por reaccin del cido ntrico sobre grupos bencnicos que poseen algunos aminocidos como la fenilalanina, la tirosina y el triptfano. Por lo tanto, la dan positiva todas aquellas protenas que tengan aminocidos aromticos en su molcula. 1.- Prepare una serie de 4 tubos de ensaye, numerados, agregue en cada uno 2 ml de una de las siguientes soluciones: TUBO No 1 2 3 4 PROTENA Peptona Casena Gelatina Albmina

2.- Aada 1 ml de cido ntrico concentrado (HNO3), caliente ligeramente y observe una coloracin amarilla caracterstica. Se deja enfriar esta solucin y se aaden cuidadosamente 3 a 5 gotas de hidrxido de amonio (NH 4OH) concentrado para estratificar. En la interfase se observar un anillo naranja. a. Anote su resultado en la tabla que se encuentra al final del capitulo. b. Se puede considerar esta reaccin general para todas las protenas? _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ ______________________________ c. Explique por qu se tie de amarillo la piel al contacto con el HNO 3.

_______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ ______________________________ EXPERIMENTO 4: REACCION DE HOPKINS COLE La reaccin de Hopkins - Cole es especfica para el aminocido triptfano y el color violeta que se produce se debe a la condensacin del anillo indlico del triptfano con el aldehdo presente en el reactivo de Hopkins - Cole. Esta reaccin la darn positiva los pptidos y protenas que contengan triptfano en su molcula. 1.- Prepare una serie de 4 tubos de ensaye numerados, coloque en cada uno 2 ml de una de las siguientes soluciones: TUBO No 1 2 3 4 PROTENA Peptona Casena Gelatina Albmina

2.- Agregue 3 ml del reactivo de Hopkins-Cole y mezcle vigorosamente. Aada cuidadosamente resbalndose por las paredes 1ml de cido sulfrico (H 2SO4) concentrado PRECAUCION!. Procurando que se formen dos capas. 3.- Introduzca los tubos en un vaso con agua caliente y si la reaccin es positiva a los dos minutos aparecer un anillo violeta en la interfase. a. Anote sus resultados en la tabla que se encuentra al final del capitulo. b. Escriba la reaccin que se ha producido. EXPERIMENTO 5: REACCION DE AMINOCIDOS AZUFRADOS Los aminocidos cistina y cisteina y las protenas que los contengan cuando se tratan con lcalis concentrados desprenden cido sulfhdrico, el cual se puede reconocer por su olor fuertemente desagradable y caracterstico, o bien, por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de plomo ( PbS ). 1.- Prepare una serie de 4 tubos de ensaye numerados, coloque en cada uno 2 ml de una de las siguientes soluciones: TUBO No 1 2 3 4 PROTENA Peptona Casena Gelatina Albmina

2.- Agregue 2 ml de solucin de hidrxido de sodio (NaOH) al 10% PRECAUCION!. 3.- Caliente ligeramente. 4.- Aada a todos 0.5ml de solucin de acetato de plomo (Pb(CH3-COO)2). 5.- Coloque los tubos en bao mara a ebullicin por 5 min. El oscurecimiento de la solucin o la formacin de un precipitado negro indica la presencia de aminocidos azufrados. a. Anote sus resultados en la tabla que se encuentra al final del capitulo. b. Escriba la reaccin qumica que se ha efectuado. c. Qu sustancia pueden interferir en esta reaccin? ___________________________________________________________

EXPERIMENTO 6: REACCIN DE NIHIDRINA Esta es una de las reacciones ms sensibles que se conocen para identificar aminocidos en general (se puede detectar una parte de alanina en 1 500 000 partes de agua). Por su sensibilidad de aminocidos en orina, por ejemplo, tiene importancia en medicina ya que en algunas enfermedades como hepatopatas, infecciones agudas o Diabetes mellitus en las que se presenta hiperaminoacidemia se ve acompaada por hiperaminoaciduria paralela. Algunas enfermedades metablicas congnitas tambin dan lugar a eliminacin anormal de algunos aminocidos en la orina. Los aminocidos y muchas aminas primarias dan un color violeta caracterstico. La prolina da coloracin amarilla. 1.- Se utilizarn rectngulos de papel filtro Whatman No. 1, de 2x2 cm, sobre los cuales se colocarn gotas de una de las siguientes soluciones: CUADRO DE PAPEL 1 2 3 4 5 SUSTANCIA Glicina Peptona Gelatina Casena Albmina

2.- PRECAUCIN! Use guantes o pinzas para manipular el papel.

3.- Anote debajo de cada muestra el nombre del compuesto y adale una gota de solucin de ninhidrina en butanol al 0.1%. 4.- Coloque el papel en el horno a 110C durante 5 minutos. a. Anote sus resultados en la tabla que se encuentra al final del capitulo. b. Escriba la reaccin qumica que se ha efectuado.

TABLA DE RESULTADOS DE ALGUNAS PROPIEDADES QUMICAS DE LAS PROTENAS REACCION SUSTANCI A GELATINA PEPTONA CASEINA ALBUMINA XANTOPROT HOPKINS AMINOACID NINHIDRIN EICA -COLE OS A AZUFRADO S

MILLON

BIURET

CUESTIONARIO 1.- Escriba cuales son los aminocidos esenciales. _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ ______________________________ 2.- Describa que es un enlace peptdico. _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ ______________________________ 3.- Describa que es un pptido. _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________

CONCLUSIONES: Durante el experimento en el que utilizamos el reactivo de Nihidrina, pudimos observar que todos los contenidos de los tubos de ensayocambiaban su color a uno violeta debido a que stos son -aminocidos. Gracias a la presencia de la fenolftalena y anaranjado de metilo pudimos confirmar la capacidad anftera que tienen los aminocidos,ya que con la fenolftalena se comport como base y con elanaranjado de metilo como cido. Confirmamos que el reactivo de milln detecta restos fenlicos en aminocidos, el reactivo de cido Gliclico detecta a los restos indlicos y el acetato de plomo, a los restos azufrados. En el experimento de solubilidad de los lpidos, se podr observar que el aceite se ha disuelto en el ter y no en el agua ya que ste subir debido a su menor densidad.