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Apoptose, Pyroptosis e necrose: descrio mecanicista dos mortos e moribundos Clulas Eucariticas

Introduo
Uma grande variedade de microorganismos patognicos tm sido demonstradas para causar a morte de clulas eucariticas, ou como conseqncia de infectar clulas do hospedeiro ou pela produo de produtos txicos. Patgeno-hospedeiro morte celular induzida tem sido caracterizada como apoptose em muitos desses sistemas. cada vez mais sendo reconhecido que a morte celular, com algumas das caractersticas da apoptose pode resultar de uma variedade de percursos moleculares e que as tcnicas experimentais utilizadas para identificar a morte celular muitas vezes no fazem a distino entre esses mecanismos. Propomos que uma clara compreenso da diversidade dos processos de mediao de morte celular foi obscurecida pela simplicidade do sistema de nomenclatura comumente utilizado para descrever a morte de clulas eucariticas. Esta reviso apresenta uma perspectiva sobre a morte das clulas eucariticas e discute tcnicas experimentais usadas para estudar estes processos.

Significado da morte da clula hospedeira na infeco


Talvez o resultado mais bvio potencial de interaes patgeno-hospedeiro a morte de clulas do hospedeiro, e este tem sido conhecida a resultar de infeco (49). O estudo do patgeno-hospedeiro morte celular induzida ganhou ateno com o reconhecimento de que este fenmeno no pode ser meramente um achado acidental durante a infeco, mas sim um processo controlado e modificveis com implicaes significativas para a patognese da doena (37). Host morte celular pode prejudicar a funo normal dos rgos e levar a sinais e sintomas associados da doena. patgenos microbianos podem melhorar a sua capacidade de persistir em hospedeiros infectados, causando a morte das clulas necessrias para a defesa do hospedeiro (147). Apesar de alguns patgenos intracelulares podem empregar estratgias para prevenir a morte celular durante a replicao do patgeno, escape e disseminao de novas clulas do hospedeiro podem, eventualmente, exigir a lise celular. Patgeno morte celular induzida por um resultado aparentemente simples, pode ocorrer por uma variedade de mecanismos complexos. Elucidar os fatores requeridos por um patgeno de matar clulas do hospedeiro , portanto, fundamental para revelar os mecanismos de patognese. Compreender o processo de morrer pode revelar por que algumas clulas podem ser mais ou menos suscetvel morte celular induzida pelo patgeno e revelar novos alvos teraputicos. Alm disso, o mecanismo de morte celular podem ter consequncias importantes em termos da resposta que se seguiu morte celular, modulando a inflamao ou influenciar a resposta imune (1, 112). Alm disso, estudos sobre os processos que conduzem morte celular induzida pelo patgeno so susceptveis de lanar luz sobre os mecanismos de morte celular que ocorre durante a outros processos fisiolgicos e patolgicos

NECROSE e o paradigma APOPTOSE


A morte celular normalmente discutido dichotomously como apoptose ou necrose. A apoptose descrito como um processo ativo e autnomo desmantelamento programado de celulares que evita provocando inflamao. Necrose foi caracterizada como passiva, a morte celular acidental resultante de perturbaes ambientais com a emisso descontrolada de contedo celular inflamatrio. Como a apoptose considerada como um processo regulado e controlado, a ocorrncia de processos infecciosos durante particular tem recebido grande ateno. Uma srie de agentes patognicos tm sido descritas para causar a morte da clula hospedeira com caractersticas de apoptose (para revises, ver referncias 37, 42, 92 e 138). Algumas bactrias patognicas secretam toxinas formadoras de poros ou inibidores da sntese de protenas, que tm sido associados a apoptose das clulas do hospedeiro (92). Vrias protenas virais so relatadas para induzir a apoptose (42). Alm disso, diversos parasitos e leveduras foram identificados como mediadores da apoptose (39, 55, 92). Essas observaes no so simplesmente limitar-se a cultura de clulas. Patgeno apoptose induzida tambm tem sido descrita em tecidos de animais infectados com patgenos como Listeria monocytogenes (104), o Mycobacterium tuberculosis (137), e Yersinia pseudotuberculosis (90). Apesar de se supor que todos os agentes patognicos induzida mortes que tm sido caracterizadas como apoptose realmente convergir final caminhos comuns que resultam em resultados ps-morte equivalente, como a remoo de corpos apoptticos e inibio da inflamao, esta hiptese permanece inexplorada. Apesar da ampla utilizao do paradigma de apoptose versus necrose, existe uma crescente conscincia da complexidade dos processos que ocorrem na morte de clulas que levam ao resultado de morte. A seguir, destacamos os avanos no estudo da morte celular e sugerir abordagens de interpretao experimental. Como a biologia no necessariamente conformar-se os paradigmas criados pela nossa simples terminologia existente, outra meta o desenvolvimento de nomenclatura para descrever com preciso e distinguir as vias de morte celular. Ser til comear traando os principais acontecimentos que nos levaram at onde estamos agora.

APOPTOSE

A apoptose foi proposto por Kerr e seus colegas em 1972 para descrever um determinado padro morfolgico de morte celular observado que as clulas foram eliminados durante o desenvolvimento embrionrio, o volume de clulas normais em tecidos adultos saudveis, e atrofia a retirada hormonal (57). A morfologia associada a este fenmeno foi caracterizado pela condensao nuclear e citoplasmtica e fragmentao celular em fragmentos por membrana. Esses fragmentos ou corpos apoptticos foram ocupados por outras clulas e degradadas no interior phagosomes. Os autores sugeriram que a eliminao de clulas com rompimento do tecido pequena e no permite que a inflamao reutilizao de componentes celulares. As caractersticas morfolgicas de apoptose foram propostos como resultado de um mecanismo geral de excluso clula controlada, que desempenha um papel complementar a mitose e citocinese em manter estvel a populao de clulas nos tecidos. O conceito de apoptose promoveu a hiptese (76, 78) que as clulas vivas so geneticamente programados para conter componentes de uma cascata metablica que, quando ativado, pode levar morte celular. A apoptose palavra era usada no grego para designar a "cair", como as folhas de uma rvore (57). O termo denota um processo fisiolgico controlado de remover os componentes individuais de um organismo sem destruio ou danos ao organismo. Para mostrar a derivao de forma clara, os autores propuseram que o estresse deve ser na penltima slaba, com a segunda metade da palavra a ser pronunciada como "ptose" com um "p" silenciosa ", que vem da mesma raiz" cair "e utilizada na medicina para designar a flacidez da plpebra superior. Este documento de referncia proposto pela primeira vez que a morte de clulas resultantes de processos celulares intrnseco devem ser consideradas distintamente diferente de morte celular causada por graves perturbaes ambientais. O ltimo processo foi associada com a morfologia de necrose de coagulao que " provavelmente o resultado de um distrbio irreversvel de mecanismos homeostticos celulares" (57). O timing de desenvolvimento e padro morfolgico consistente associada a apoptose sugerida a base gentica do programa de morte celular. Caracterizao de Caenorhabditis elegans ced (morte de clulas anormais) mutantes revelou produtos de genes envolvidos em morte celular durante o desenvolvimento embrionrio (43). A seqncia de aminocidos de CED-3 apresenta similaridade com uma protease de mamfero conhecido como interleucina-1 (IL-1) da enzima conversora (2, 144). A investigao subseqente revelou a existncia de uma famlia destas proteases, agora conhecido como caspases ou cistena-dependente aspartato proteases especficas, e IL-1 enzima conversora passou a chamar caspase-1 (2). Caspases existir como zimognios latente que contm um prodomnio N-terminal, seguido pela regio que constitui um domnio efetor dois subunidade cataltica (135, 140). Apesar de todos os membros da famlia caspase semelhanas partes na sequncia de aminocidos e estrutura, diferem significativamente em seus papis fisiolgicos (fig. 1). As caspases podem ser amplamente divididos em dois grupos: aqueles que esto centralmente envolvidos na apoptose (caspase-2, -3, -6, -7, -8, -9 e -10) e aquelas relacionadas a caspase-1 (caspase -1, -4, -5, -13, e -14, bem como murine caspase-11 e -12), cujo principal papel parece estar em processamento de citocinas durante a resposta inflamatria (20). As caspases envolvidas na apoptose pode ser dividido em dois subgrupos com base em sua estrutura e os aspectos temporais de sua ativao durante a morte celular (79). Iniciador caspases (caspase-2, -8, -9 e -10) tm prodomains longa e so os principais responsveis por iniciar as cascatas de ativao da caspase. Caspases efetoras (caspase-3, -6 e -7) geralmente contm apenas uma pequena prodomnio e so responsveis pelo desmantelamento da clula real, aderindo substratos celulares. Ativao de caspases iniciadoras exige dimerizao, que mediada pela ligao do seu adaptador prodomains s molculas atravs do domnio de recrutamento da caspase ou motivos domnio efetor de morte (6). Aps a ativao, caspases iniciadoras propagar sinais de morte por ativar caspases efetoras a jusante de uma forma em cascata, como (120). caspases efetoras so convertidos em suas formas ativas atravs de protelise em resduos Asp interno, permitindo a montagem de heterotetramers ativo composta de duas subunidades grandes e duas subunidades pequenas (6). patgenos infecciosos podem cooptar domnios de ativao da caspase para induzir a morte da clula hospedeira. Por exemplo, Chlamydia trachomatis produz uma protena, chamada Chlamydia associando protena com domnios de morte, que interage com os domnios da morte de necrose tumoral receptores da famlia do fator de ativar caspases (123).

FIG. 1. Caspases so classificadas em subgrupos funcionais. Caspases so proteases de cistena, que so expressas como as enzimas do precursor inativo com um prodomnio Nterminal, seguido por um domnio efetor de duas subunidades. Os membros da famlia caspase podem ser classificadas com base em seus papis fisiolgicos e as especificidades de substrato. Eles so divididos em dois grupos principais: os envolvidos na apoptose (caspase-2, -3, -6, -7, -8, -9 e -10) e aquelas relacionadas a caspase-1 (caspase-1, -4 , -5, -13 e -14, bem como murine caspase-11 e -12), cujo principal papel parece ser o processamento de citocinas pr-inflamatrias e morte celular. As caspases envolvidas na apoptose pode ser dividido em subgrupos e iniciador de ao. Iniciador caspases (caspase-2, -8, -9 e -10) tm prodomains tempo e funo para ativar caspases efetoras (caspase-3, -6 e -7), que prodomains pequenas e pegar uma variedade de substratos celulares . CARD, domnio de recrutamento da caspase; DED, domnio efetor de morte.

caspases efetoras ativado seletivamente unir um conjunto restrito de protenas-alvo para produzir as caractersticas morfolgicas e bioqumicas associadas com apoptose (Fig. 2). Um freqentemente usado marcador de apoptose a escada de DNA produzida pela clivagem do DNA genmico entre nucleosomes para gerar fragmentos com comprimentos correspondentes a nmeros inteiros mltiplos de aproximadamente 180 pares de base (141). O nuclease responsvel por esta caracterstica, DNase caspase-activated (CAD, tambm chamado DFF-40) est presente em clulas vivas ligado ao seu inibidor (inibidor de CAD [ICAD], tambm chamado de DFF-45). A ativao do CAD ocorre atravs de clivagem de ICAD mediada pela caspase-3 e caspase-7, resultando na liberao e ativao de CAD (29, 74, 106).

FIG. 2. Vias que levam morte celular. Clulas saudveis respondem a estmulos deinduo, iniciando uma srie de vias moleculares que levam morte celular. A concluso da via adequada uma funo crtica celular para garantir que o resultado disso finalmente conseguida em um organismo multicelular. Falta de morrer, em resposta a certos estmulos podem resultar na embriognese abortivo e disfuno orgnica e contribui para a iniciao do cncer. morte de pr-inflamatrio vital para desencadear respostas imunes adequadas ou, em casos extremos, pode causar patologia tecidual e disfuno de rgos. Portanto, a utilizao da via pode influenciar drasticamente os sistemas biolgicos. A apoptose um caminho que conduz morte celular que caracteriza a ativao de caspases iniciadoras que ativam caspases efetoras para clivar substratos celulares. clulas apoptticas demonstrar condensao citoplasmtica e nuclear, de danos ao DNA, a formao de corpos apoptticos, a

manuteno de uma membrana plasmtica intacta, e exposio de molculas de superfcie de clulas alvo cadveres intactos para a fagocitose. Na ausncia de fagocitose, corpos apoptticos pode proceder lise e necrose ou apoptose secundria. Autofagia caractersticas de degradao de componentes celulares dentro da clula intacto morrendo em vacolos autofgicos. As caractersticas morfolgicas de autofagia incluem vacuolizao, a degradao do contedo do citoplasma, condensao da cromatina e leve. Autophagic clulas tambm podem ser tomadas por fagocitose. Oncose o caminho prelethal levando morte celular acompanhado de repartio organela celular e inchao e de membrana, com a eventual libertao de contedo celular inflamatrio. Pyroptosis um caminho para a morte celular mediada pela ativao da caspase-1, a protease, que tambm ativa as citocinas inflamatrias, IL-1 e IL-18. Este caminho , portanto, intrinsecamente pr-inflamatrias. Pyroptosis tambm possui lise celular e liberao de contedo celular inflamatrio. Sem dvida, existem outros caminhos que ainda no foram descritas. Caspase protelise de substratos adicionais explica a outras alteraes morfolgicas, inicialmente utilizado para descrever a apoptose. Laminas, as protenas do andaime do envelope nuclear, so clivadas por caspases efetoras, levando retrao e fragmentao nuclear (10, 64, 103). Perda da forma celular global causado provavelmente pela clivagem de protenas do citoesqueleto, tais como fodrin (62). Clivagem dos componentes do complexo de adeso focal leva perda de clulas em apoptose de seus vizinhos e da membrana basal (21, 139). membrana plasmtica resultados blebbing da ativao da caspase-mediada gelsolina, um actina depolymerizing enzima (62). clivagem caspase-mediada PAK2, um membro da famlia kinase p21 ativada, participa na formao de corpos apoptticos (105). Outro processo caspase-dependente fosfatidilserina (PS exposio). PS est ativamente localizada no folheto interno da membrana plasmtica em clulas saudveis. A assimetria da sua distribuio se perde nas clulas apoptticas. PS exposio no folheto externo da membrana plasmtica pode ser reconhecida por fagcitos como um sinal de imerso (32, 131). PS exposio tem sido relatada a caspase dependente (13, 83), mas seu mecanismo no foi totalmente esclarecido. Um efeito combinado de regulao de uma atividade translocase phospholipid e ativao de um scramblase lipdios, que so observados em linfcitos apoptticos, pode contribuir para a exposio de PS (91). Originalmente, o termo apoptose foi definida puramente por razes morfolgicas, e, portanto, este nome foi aplicado a qualquer coisa que se parece com a apoptose (51, 130). No entanto, como os mecanismos bioqumicos que conduzem a alteraes na morfologia celular foram descobertos, a apoptose tem sido associadas com uma variedade de significados. Para simplificar, Samali et al. (107) e outros (5) propuseram que a apoptose definida como a morte de clulas caspase-mediada com as seguintes caractersticas morfolgicas: a condensao citoplasmtica e nuclear, clivagem da cromatina, formao de corpos apoptticos, a manuteno de uma membrana plasmtica intacta, e exposio da superfcie molculas alvo cadveres clulas para a fagocitose. Mais especificamente, a definio molecular de apoptose pode ser logicamente com base na atividade proteoltica das caspases certo (caspase-2, -3, -6, -7, -8, -9 e -10), pois estas enzimas mediar o processo de morte celular por apoptose.

NECROSE A importncia biolgica e uma maior valorizao da mquina enzimticos envolvidos na apoptose indicam a importncia de distinguir este processo de morte das clulas que ocorre por outros mecanismos. A necessidade de clareza na comunicao cientfica e da meta de construo de hipteses testveis informativo traz um grande problema em relao a nomenclatura de morte celular, que a falta de nomes adequados ou classificaes para a morte celular que no ocorre por apoptose. Necrose o termo usado atualmente para nonapoptotic morte celular acidental. No entanto, uma questo fundamental que tem sido muitas vezes negligenciado na literatura a morte celular a distino entre os processos estruturais e bioqumicas que ocorrem em uma clula a morrer eo desfecho da prpria morte (34, 56). A necrose um termo utilizado por patologistas para designar a presena de tecidos mortos ou clulas e a soma das mudanas que ocorreram nas clulas aps terem morrido, independentemente dos processos prelethal (68, 69, 81). Necrose, portanto, refere-se a estigmas morfolgicas observadas aps uma clula j morreu e atingiu equilbrio com seu entorno (Fig. 2) (115). Assim, na ausncia de fagocitose, corpos apoptticos podem perder a sua integridade e proceder necrose ou apoptose secundria. Aqui, o termo necrose apopttica descreve as clulas mortas que atingiram este estado atravs do programa de apoptose (81). A presena de necrose nos diz que uma clula tenha morrido, mas no necessariamente como ocorreu a morte (115).

ONCOSE O oncose termo foi aceito por muitos pesquisadores de morte celular como um contraponto apoptose (68, 81, 96). Oncose (de "onkos", que significa inchao) definido como uma via prelethal levando morte celular acompanhado por edema celular, inchao organela, blebbing, e aumento da permeabilidade da membrana (Fig. 2) (81). O processo de oncose acaba por conduzir a depleo dos estoques de energia celular ea falha das bombas inicas na membrana plasmtica. Oncose pode resultar de agentes txicos que interferem com a gerao de ATP ou processos que causam o consumo de energia descontrolada celular (81). Ela agora est sendo reconhecido que as alteraes oncose acompanhamento pode resultar de ativos processos bioqumicos catalisadas por enzimas (128). Por exemplo, poli (ADP-ribose) polimerase (PARP) uma enzima nuclear que ativado por quebras no DNA, para catalisar a adio de poli (ADP-ribose) para uma variedade de protenas nucleares (102). Em situaes de danos no DNA moderada, esta atividade de PARP participam no reparo do DNA (44). No entanto, com a destruio macia de DNA, a atividade excessiva PARP esgota seu substrato NAD. Ressntese de ATP NAD esgota, ea eventual perda de reservas de energia leva morte

celular onctica (134). Desta forma, o esgotamento da energia e oncose ocorrer como uma resposta regulamentada a ferimentos graves DNA (4). Durante a apoptose, caspases clivam e inativam PARP, que mantm o ATP celular, apesar de danos ao DNA significativa (102). Alteraes nos nveis de clcio intracelular tambm pode regular a morte celular onctica (127). concentraes elevadas de clcio citoplasmtico pode ativar proteases de cistena da famlia calpain que medeiam repartio membrana plasmtica atravs da protelise de protenas do citoesqueleto e da membrana plasmtica (72, 73). Aumento de clcio intracelular tambm inicia a translocao de A2s citoslica fosfolipase s membranas celulares, onde a hidrlise de fosfolipdios de membrana diminui a integridade da membrana (22, 109). Oncose induzida pela infeco do patgeno tem sido sugerida em diversos modelos experimentais. Rotavirus infeco de clulas MA104 induz a morte das clulas morfologicamente compatveis com oncose, que tambm requer um aumento de clcio intracelular (99). Alm disso, a infeco por Pseudomonas aeruginosa induz oncose nos macrfagos infectados e neutrfilos (23). Estas clulas demonstrar inchao, ruptura da membrana plasmtica rpido e ncleos inchado, sem fragmentao do DNA internucleossmica.

AUTOFAGIA corpos apoptticos e os restos celulares liberados durante a lise de clulas onctica tanto pode ser fagocitados e degradados por clulas vizinhas vivel in vivo (128). Outra forma de morte celular, autofagia ou morte celular tipo II, apresenta a degradao de componentes celulares dentro da clula morrer em vacolos autofgicos (16). As caractersticas morfolgicas de autofagia incluem vacuolizao de degradao do contedo do citoplasma e condensao de cromatina ligeira (Fig. 2) (11). Autofagia tem sido bem descrita durante o desenvolvimento de vertebrados e pode ser um processo filogeneticamente antiga (12). Estudos sobre a autofagia sugerem que prossegue atravs de uma seqncia de alteraes morfolgicas em um processo altamente regulado (40, 59). Resumidamente, o caminho comea com autophagic a apreenso de material citoplasmtico em vesculas de dupla membrana conhecida como autophagosomes (59). O processo de seqestro est sob o controle de GTPases (100) e quinase fosfatidilinositol (95) e envolve novos sistemas de conjugao de ubiquitina-like (97). Autophagosomes fusvel, em seguida, com lisossomos em um processo de acordo com os microtbulos, e os contedos so degradados (59). In vivo, clulas em autofagia pode ser fagocitadas por clulas vizinhas (16, 116). CONSEQUENCIAS DA MORTE CELULAR

A histria de morte celular in vivo no termina com a concluso da srie de eventos moleculares que do origem a morte celular. Intrnseca ao processo de morte celular podem ser mecanismos que permitem corpos celulares para se comunicar com as clulas vivas em torno rgos e tecidos. clulas apoptticas pode exibir uma variedade de sinais de reconhecimento para os fagcitos (112) que levam sua rpida eliminao. A evidncia recente sugere ainda que algumas clulas apoptticas podem secretar fatores quimiotticos que causam a acumulao local de macrfagos (63, 114). Clulas em autofagia tambm esto ocupados por fagocitose (16, 116). clulas onctica, no entanto, proceder necrose com lise e derrame do contedo celular das clulas antes de morrer pode ser reconhecido pelos fagcitos (111). O contedo liberado das clulas necrticas incluem molculas que atuam como sinais para promover a inflamao (113, 118). Em contraste, a captao de corpos apoptticos suprime a secreo de mediadores inflamatrios dos macrfagos ativados (31). Portanto, um componente crtico das definies de apoptose e autofagia o seu resultado anti-inflamatrio. Alm disso, um elemento essencial da oncose a sua natureza inflamatria. Apreciando estes potenciais consequncias do patgeno morte celular induzida por host pode ser fundamental tanto para a concepo de uma vacina ideal e compreenso da patognese e persistncia das infeces e doenas inflamatrias.

PIROPTOSE Junto com outros pesquisadores, que comearam a caracterizar uma nova forma de morte celular induzida pela infeco por Salmonella e Shigella espcie que inerentemente pr-inflamatrias (7, 19, 82, 94, 108, 146). Este caminho de morte celular exclusivamente dependente da caspase-1 (Fig. 2) (9, 15, 46-48). Caspase-1 no est envolvido na morte celular por apoptose e clulas caspase-1-deficient responder normalmente a maioria dos sinais apoptticos (71). Uma funo importante da caspase-1 o processo proforms das citocinas inflamatrias IL-1 e IL-18, a sua forma ativa (33). Ativao da caspase-1 em macrfagos infectados com Salmonella ou Shigella resultados no tratamento dessas citocinas e morte da clula do hospedeiro (46, 88, 94, 146). O mecanismo e os resultados desta forma de morte celular so muito diferentes estes aspectos da apoptose, que inibe a inflamao ativa. Propusemos a pyroptosis termo vem do grego razes "pyro", relativo ao fogo ou febre, e "ptose" (pronuncia-se "a-sis"), denotando queda, ao descrever a morte programada de clulas prinflamatrias (19). Observada a ativao da caspase-1 ou de dependncia durante a morte de clulas no sistema imunitrio (117) os sistemas nervoso central (75, 145) e cardiovasculares (36, 60) indica que pyroptosis joga um papel significativo em uma variedade de sistemas biolgicos.

MORTE CELULAR PROGRAMADA A apoptose ou morte celular programada so frequentemente utilizadas como sinnimos. No entanto, como j vimos, uma variedade de outras vias de morte celular molecular tm sido caracterizados. A morte celular programada pode ser mais bem definida como morte celular que dependente de sinais codificados geneticamente ou atividades dentro da clula morrer (Tabela 1) (54, 78). Portanto, a designao "programado" refere-se ao caminho fixo seguido de morte de clulas, independentemente do mecanismo (Fig. 2) ou se as caractersticas da apoptose acompanhar o processo. Aguda de clulas devido a avaria da ao direta de um estmulo nocivo o inverso conceptual da morte celular programada, uma vez que no exige nenhuma atividade celular e s impedida pela falta de estmulo prejudicial (54). Autofagia tem sido bem documentado como um mecanismo de morte celular programada que ocorre durante o processo de desenvolvimento embrionrio normal (16, 70). A dependncia da pyroptosis na ativao de caspase-1 tambm indica que um programa de morte celular (7, 19). Alm disso, o aumento de dados genticos indicam que oncose requer um programa intrnseca molecular (80, 87).

TABLE 1. Relevant terms for describing dead and dying cells Term Characteristic(s) Dependent on genetically encoded signals or activities Programmed within the dying cell; a sequence of potentially cell death modifiable events leading to the death of the cell Mediated by a subset of caspases (Fig. 1); morphology includes nuclear and cytoplasmic condensation and Apoptosis formation of membrane-bound cellular fragments or apoptotic bodies; not inflammatory Degradation of cellular components within the dying Autophagy cell in autophagic vacuoles; not inflammatory Prelethal pathway leading to cell death accompanied Oncosis by cellular and organelle swelling and increased membrane permeability; proinflammatory Proinflammatory pathway resulting from caspase-1 Pyroptosis activity leading to membrane breakdown and proinflammatory cytokine processing Postmortem observation of dead cells that have come Necrosis into equilibrium with their environment
COMPLEXIDADE DA MORTE CELULAR At agora, ns descrevemos os modos de morte celular como entidades discretas e independentes. No entanto, observaes recentes no suportam a estrita distino paradigmtica entre essas denominaes em alguns sistemas biolgicos, mas, ao contrrio, sugerem a natureza de sobreposio dos processos que ocorrem na morte de clulas (Fig. 3). Vrios tipos de morte podem ser observadas simultaneamente em tecidos ou culturas de clulas expostas ao mesmo estmulo (3, 61, 119). A intensidade local de um insulto inicial particular pode influenciar o mecanismo de morte tomada por clulas individuais em uma populao (8, 27, 35, 148). Por exemplo, um pequeno nmero de Escherichia coli foram mostrados para inibir a apoptose de neutrfilos polimorfonucleares, enquanto que um maior nmero de E. coli promover a morte de neutrfilos polimorfonucleares (84). Alm disso, o estado de ativao ou estado de diferenciao das clulas individuais podem determinar o caminho da morte dominante invocado por um estmulo particular. Shigella flexneri induz a morte celular com caractersticas de apoptose de interferon-gama diferenciada de clulas U937, enquanto que a morte de clulas indiferenciadas ou cido retinico diferenciadas clulas U937 possui caractersticas mais compatveis com oncose (93). FIG. 3. entrada Biolgicas diferencialmente influncias utilizao das vias de morte celular. Fatores que influenciam a morte celular incluem o estmulo, tipo de clula, e do meio circundante da clula e, portanto, seu estado fisiolgico durante a recepo do estmulo, que juntos ditam o caminho de morte celular. Na coluna A1, um estmulo (1) entregue a um tipo de clula de interesse em seu estado de base fisiolgica () determina a morte celular pela via principal (P). Alterando a magnitude do estmulo (1), por exemplo, a multiplicidade de infeco, concentrao ou concentrao por unidade de tempo, pode alterar o caminho para a morte celular (A2, levando a caminho Q), assim como o estado fisiolgico (SS) da durante a estimulao de clulas (A3, levando a via R) e do tipo de clula a ser estudada (A4, levando a via S). Um nico estmulo pode desencadear simultaneamente mltiplos caminhos (coluna B), e bloqueio da via principal para um dado tipo de clula (coluna C versus coluna A1) pode resultar no uso de via alternativa (s) (coluna C). Finalmente, mltiplos estmulos (2,3 ou 4), que podem utilizar uma variedade de cascatas de sinalizao upstream, podem convergir para a utilizao de vias conservadas efetoras biologicamente e resultar em morte da clula (coluna D).

Evidncias recentes sugerem que mltiplas vias podem ser ativadas em um nico clulas que morrem e conversas cruzadas entre os programas de morte celular pode permitir o controle fino sobre o resultado final (67, 77). Inibindo a rota dominante molecular de morte celular no pode resultar na sobrevivncia, mas sim permitir a ocorrncia de programas alternativos levando a diferentes tipos de morte celular. Por exemplo, infeco por Salmonella de macrfagos caspase-1deficient pyroptosis ignora, mas os resultados em uma forma de morte celular tardia com caractersticas de autofagia (45, 52). Tambm tem sido demonstrada em uma variedade de sistemas que os estmulos iniciar apoptose caspase-dependente causar a morte celular, embora por um mecanismo diferente, mesmo na presena de inibidores de caspase (54, 66). Caspase inibio in vivo pode resultar S nitrosylation-endogenamente produzidos causada por xido ntrico (25, 58, 86) ou inibidores da caspase viral, como a cowpox inibidor CRMA (124). As caractersticas de morte celular observada em tais situaes, muitas vezes apresentam homologia limitada apoptose e ao invs parecem semelhantes aos da oncose (50, 110, 142). Por exemplo, a inibio das caspases em clulas de Staphylococcus aureus alfa-toxina tratada ou vrus da imunodeficincia humana tipo 1 as clulas infectadas evita a fragmentao do DNA internucleossmica mas no a eventual perda da integridade da membrana (30, 101). Estes resultados sugerem que um nico estmulo pode iniciar vrios modos distintos de morte das clulas e que celulares estados fisiolgicos determinar o resultado final, em resposta a um estmulo particular. Como j discutimos, os processos moleculares que medeiam a morte celular mais complicado do que pode ter sido inicialmente apreciado. Os avanos recentes tm melhorado nossa compreenso das sutilezas subjacentes a morte celular, mas muitas formas de morte celular pode permanecer incompleta caracterizada. Alm desses j discutimos aqui, os programas de outra clula, incluindo a morte paraptosis esto sendo descritas (14, 121, 122). Propomos que novos caminhos fisiolgicos e patolgicos relevantes de morte celular com caractersticas nicas e as implicaes esperam a descoberta e delimitao. Estudos de interaes patgeno-hospedeiro, revelaram muitos aspectos fundamentais da biologia dos eucariotas bsicos, tais como fatores mediadores os aspectos da dinmica do citoesqueleto. Examinando os caminhos da morte evocados por patgenos pode levar caracterizao de novas formas de morte celular e elucidao das vias de execuo no identificado morte celular. Nossa classificao final dessas mortes, espera-se, ser determinada pelas vias moleculares que so ativados na clula morre e as consequncias ps-morte que resultam de determinados tipos de morte celular. Isso exigir experincias e interpretaes como objetivo caracterizar as caractersticas originais de novas formas de morte celular.

METODOS EXPERIMENTAIS USADOS NO ESTUDO DA MORTE CELULAR


Uma variedade de tcnicas e reagentes foram desenvolvidos para estudar a morte celular, cada um com vantagens e limitaes. Muitos mtodos tm o propsito de identificar a apoptose, no entanto, a maioria destas tcnicas no so suficientes para provar que a apoptose, mas no outra forma de morte celular, ocorreu. Deve tambm ser enfatizado que experimentalmente que definem a morte da clula com base em medies de caractersticas particulares associadas a morte celular. Para maior clareza, o que representa os dados experimentais em termos da funcionalidade de morte prefervel medida simplesmente relatando a apoptose ou morte por cento por cento. caractersticas diferentes de morte pode no ser necessariamente relacionadas funcionalmente e pode ocorrer atravs de mecanismos distintos provocada por um nico estmulo inicial. Por exemplo, a fragmentao do DNA e formao de corpo de apoptose ocorre atravs de processos distintos, mas ambos dependem caspases (105, 106). Apesar de inibir determinados aspectos da morte celular no pode impedir que o eventual desaparecimento de clulas, as caractersticas especficas de morte celular pode conferir a morrer clulas com importantes conseqncias funcionais. Por exemplo, a exposio PS no pode ser uma etapa necessria no caminho para a morte, mas pode ser necessria para o desfecho adequado noninflammatory de morte celular por apoptose. O estudo da apoptose foi inicialmente baseado na morfologia celular por microscopia de luz e microscopia eletrnica para identificar condensao nuclear e citoplasmtica e fragmentao celular (57). A identificao de alteraes morfolgicas que ocorrem na morte de clulas por microscopia eletrnica de luz ou certamente til para a caracterizao do patgeno, a morte celular induzida. Uma variedade de manchas padro histolgico ou corantes fluorescentes podem ser usadas para demonstrar cromatina condensada (85). No entanto, as clulas tambm podem ter onctica cromatina condensada (18) e, assim, uma ressalva de inspeco visual a dificuldade em distinguir apoptose das clulas onctica (85). Alm disso, a visualizao de caractersticas morfolgicas sugere particular, mas est longe de demonstrar, os processos bioqumicos subjacentes. Deteco de fragmentao do DNA atualmente uma das tcnicas mais utilizadas no estudo da morte celular. Internucleossmica fragmentao do DNA pode ser visualizado por eletroforese em gel como a escada de ADN caracterstico e j foi considerado o marcador bioqumico da apoptose. tcnicas citoqumicas altamente sensveis tm sido desenvolvidos para visualizar a fragmentao do DNA em ncleos individuais. O terminal final nick deoxynucleotidyl transferase mediada dUTP rotulagem (TUNEL) mtodo utiliza a atividade da enzima terminal transferase deoxynucleotidyl para rotular as extremidades 3 'de quebras no DNA, que pode ento ser identificado em ncleos individuais por microscopia. No entanto, as clulas podem exibir necrose tanto DNA laddering (17, 136) e os ncleos TUNEL-positivos (24, 26, 41). Assim, enquanto a degradao do DNA um evento importante na morte celular (Fig. 2), a deteco de clulas mortas no indicar especificamente o mecanismo da morte. A perda da integridade estrutural da membrana plasmtica uma caracterstica da necrose e representa o desfecho final comum na qual uma clula no pode mais manter sua identidade discreta do ambiente. Por definio, este se manifesta bioquimicamente como a liberao de enzimas citoslicas incluindo lactato desidrogenase e absoro dos corantes membrana impermeant como azul de tripan, iodeto de propdio e D 7 aminoactinomycin (85). Embora a destruio da membrana uma indicao universal de morte celular, que no implica o antecedente mecanismos que conduzem morte. Translocao de PS na superfcie externa da membrana plasmtica serve como um sinal de reconhecimento para a fagocitose de clulas morrer (32). Perda de assimetria fosfolipdio detectada experimentalmente com o uso de anexina V, que se liga

especificamente PS e pode ser detectada por citometria de fluxo fluorescente quando conjugados (129). A externalizao de PS um evento precoce de apoptose, que ocorre quando a membrana plasmtica permanece intacto e as clulas excluir corantes membrana impermeant. Exemplos de exposio PS antes da membrana de compromisso tambm foram observadas em clulas onctica, e isso pode no ser necessariamente uma caracterstica nica apoptose (65). clulas necrticas mostrar anexina V colorao simultaneamente com absoro do corante vital, indicando que a anexina V obrigatrio o resultado de dano membrana. Portanto, um controle crtico que deve ser includo o de demonstrar a integridade da membrana das clulas PS-positivo, a excluso, ou seja, de corantes membrana impermeant. Uma compreenso mais especfica e abrangente dos mecanismos responsveis pela morte celular exige delimitao do indivduo enzimticos e bioqumicos etapas de execuo. atividade das caspases pode ser demonstrado por Western blot utilizando anticorpos especficos contra caspase substratos tais como o PARP e laminas (85, 125). Alm disso, a clivagem proteoltica e ativao de caspases efetoras podem ser observados por Western blotting usando soros contra caspases-se (53). Caspase atividade tambm pode ser medido por meio de ensaios colorimtricos e fluorometric base protelise do tetrapeptdeo conjugado de substratos simulando stios de clivagem caspase (98). Estas tcnicas tm a desvantagem de medir a atividade enzimtica em uma populao de clulas e no em clulas individuais. Essa limitao superada pela colorao das clulas com anticorpos especficos para caspases processados e por citometria de fluxo para interrogar as pilhas individuais (132). inibidores da caspase-Peptide conjugado pode ser usado para determinar a exigncia de caspases particular nos processos de morte celular. Enquanto estes inibidores peptide-based foram projetados para imitar os motivos clivagem caspase ideal, algum grau de sobreposio na atividade de caspase (126) pode levar inibio no especfica (28, 133). No entanto, os inibidores especficos tm um grande especificidade para as suas metas (38). Por exemplo, Ac-YVAD-CHO exibe um Ki mais de 200 vezes menor para caspase-1 do que para qualquer outro caspase testados, e esse grau de seletividade faz com que este inibidor um reagente muito til (38). Abordagens genticas tambm proporcionar um meio de gerao de informaes especficas sobre o mecanismo de via, tendo em mente as possveis complicaes experimental apresentado na fig. 3 (coluna C). Knock-out ratos com defeitos alvo facilitar a demonstrao de que os caminhos esto subjacentes as caractersticas morfolgicas das clulas associados a morrer (71), o significado potencial de percursos particular durante a infeco in vivo (89), ea elucidao de um mecanismo alternativo utilizado quando o modo primrio bloqueado (45). Da mesma forma, em sistemas que utilizam clulas transfectable, a interferncia do RNA pode ser uma ferramenta para identificar os principais intervenientes em vias que levam morte celular (143).

CONCLUSO
Apesar do uso difundido da apoptose e necrose de paradigma, um conjunto substancial de literatura indica que o espectro biolgico verdadeiro das mortes clula muito mais diversificada. A apoptose uma forma de morte celular mediada por caspase particular com caractersticas morfolgicas e um resultado anti-inflamatrio. Necrose descreve a observao psmorte de clulas mortas que vieram para o equilbrio com o meio ambiente. Oncose prelethal o processo que ocorre no ATP esto esgotados clulas que se manifestam as alteraes morfolgicas da permeabilidade da membrana inchao e eventual. Autofagia envolve a degradao de componentes intracelulares dentro dos vacolos autofgicos. Pyroptosis um caminho de morte celular que, inerentemente, resulta em inflamao. Muitas tcnicas tm sido usadas para medir as caractersticas especficas associadas a morte celular. Relatrio dos resultados experimentais em termos das tcnicas usadas em vez de por cento como apoptose ou morte celular, dever indicar claramente a particularidade de morte que est sendo medido. Ao examinar cuidadosamente os processos moleculares que ocorrem na morte de clulas e que tenha em conta os resultados de morte celular que influenciam a inflamao e para o desenvolvimento de respostas imunes, ser melhor caracterizar novas vias de morte celular e mais a nossa compreenso das patologias subjacentes a uma variedade de problemas de sade humana.