UFRRJ INSTITUTO DE VETERINRIA PS-GRADUAO EM CINCIAS VETERINRIAS REA DE CONCENTRAO SANIDADE ANIMAL

TESE

Distribuio Espacial, em Microescala, e Sazonal das Microalgas Potencialmente Toxgenas Dinophysis spp. (Ehremberg 1839) na ilha Guaba (Mangaratiba, RJ) e suas Possveis Implicaes no Cultivo de Moluscos Bivalvos

Vanessa de Magalhes Ferreira

2009

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO INSTITUTO DE VETERINRIA PS-GRADUAO EM CINCIAS VETERINRIAS REA DE CONCENTRAO SANIDADE ANIMAL

TESE

Distribuio Espacial, em microescala, e Sazonal das Microalgas Potencialmente Toxgenas Dinophysis spp. (Ehremberg 1839) na ilha Guaba (Mangaratiba, RJ) e suas Possveis Implicaes no Cultivo de Moluscos Bivalvos

Oceangrafa Vanessa de Magalhes Ferreira, MSc.

Sob a Orientao: Prof. Dr. Hlcio Resende Borba e Co-orientao: Prof. Dr. Pedro Paulo de Oliveira Silva

Tese submetida como requisito parcial para a obteno de grau de Doutora em Cincias, no curso de Ps-Graduao em Cincias Veterinrias, rea de concentrao Sanidade Animal.

Seropdica, 04 Maro de 2009

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UFRRJ / Biblioteca Central / Diviso de Processamentos Tcnicos

639.429815 3 F383d T

Ferreira, Vanessa de Magalhes, 1973Distribuio espacial, em microescala, e sazonal das microalgas potencialmente toxgenas Dinophysis ssp. (Ehremberg 1839) na ilha Guaba (Mangaratiba, RJ) e suas possveis implicaes no cultivo de Moluscos Bivalvos / Vanessa de Magalhes Ferreira 2009. 107 f. : il. Orientador: Hlcio Resende Borba. Tese (doutorado) Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Curso de Ps-Graduao em Cincias Veterinrias. Bibliografia: f. 72-92 1. Mexilho criao Mangaratiba (RJ) Teses. 2. Bivalve (molusco) Criao Mangaratiba (RJ) Teses. 3. Toxinas marinhas Mangaratiba (RJ) -Teses. I. Borba, Hlcio Resende, 1954-. II. Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Curso de Ps-Graduao em Cincias Veterinrias. III. Ttulo.

Bibliotecrio: _______________________________Data: ___/___/_____

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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO INSTITUTO DE VETERINRIA CURSO DE PS-GRADUAO EM CINCIAS VETERINRIAS VANESSA DE MAGALHES FERREIRA

Tese submetida como requisito parcial para a obteno do grau de Doutora em Cincias, no curso de Ps-Graduao em Cincias Veterinrias, rea de concentrao em Sanidade Animal.

Tese aprovada em: 04 de Maro de 2009

________________________________________________________________ Hlcio Resende Borba, Dr., Professor Associado (DBA/IB/UFRRJ) Orientador

________________________________________________________________ Pedro Paulo de O. Silva, Dr., Professor Associado (DTA/IT/UFRRJ) Co-Orientador

________________________________________________________________ Jairo Pinheiro da Silva, Dr., Professor Associado (DBA/IB/UFRRJ)

________________________________________________________________ Gleyci A. O. Moser, Dr., Professora Adjunta (FAOC/IGEO/UERJ)

________________________________________________________________ Marcos Bastos Pereira, Dr., Professor Adjunto (FAOC/IGEO/UERJ)

________________________________________________________________ Alexandre de Gusmo Pedrini, Dr., Professor Adjunto (IB/UERJ)

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DEDICATRIA

Dedico este trabalho ao Amor. Sentimento que me move e inspira. E que sinto por minha famlia, meus amigos, pelo mar, pela minha profisso, pela Vida...

AGRADECIMENTO Primeiramente energia suprema que move o universo, que a humanidade chama Deus (e eu prefiro chamar de Natureza...), cuja Presena sinto no movimento dos astros e das guas do mar, fonte de minha vocao e inspirao. Agradeo pela minha vida, pela fora frente adversidade, pelos anjos que pe no meu caminho (disfarados de amigos) e pela alegria de viver, sempre! Minha famlia... Agradeo a meus pais pela honra de terem me aceito como filha e feito de mim o que sou: razes fortes e profundas, tendo ao mesmo tempo asas que me possibilitam alar vo em busca do meu horizonte. Amo vocs... Meus avs (in memorian), minha madrinha, meus tios e tias, primos e primas, minha pequena Nicolle. Obrigada por encher minha vida de alegria e esperana... Aos meus queridos orientadores, Dr. Hlcio Resende Borba (DBA/IB/UFRRJ) e Dr. Pedro Paulo de Oliveira Silva (DTA/IT/UFRRJ). Vocs tm sido como farol para um navegante: indicam com segurana o caminho, me permitindo trilh- lo com liberdade. Um referencial de competncia, seriedade e firmeza, ms sin perder la ternura jams... Aos meus mestres... Todos que contriburam na minha formao, desde minha primeira professora no jardim (a querida tia Ins); minha professora de filosofia (ngela Alhanati que me ensinou a questionar); professores da Oceanografia (em especial meu primeiro orientador Marcos Bastos, que me apresentou maricultura); professores da Microbiologia Veterinria (em especial Carlos Alberto da Rocha Rosa Shalako e Glria Direito) e das Cincias Veterinrias (Akiko Santos, Ana Cristina S. dos Santos e Gonzalo Efraim Moya, por ensinarem e viverem o que realmente docncia e pesquisa); aos professores que me iniciaram no fantstico universo fitoplanctnico (Alexandre de Gusmo Pedrini, Denise Tenenbaum e Srgio Loureno). Vocs enriqueceram minha vida e me auxiliaram a obter a nica coisa que no pode ser tirada de uma pessoa: o saber! Em especial pesquisadora Beatriz Reguera (Centro Oceanogrfico de Vigo, Espanha) pela imensurvel oportunidade a mim proporcionada de conhecer um centro de referncia internacional de pesquisa em microalgas nocivas. E, por amavelmente ter-me recebido e generosamente ter compartilhado seu conhecimento. A experincia foi um divisor de guas em minha vida, tanto profissional quanto pessoalmente. minha ToxFamlia... Pelo companheirismo e afeto, ajuda, boas idias e conselhos, risadas e lgrimas... E pelos puxes de orelha tambm! Gesilene, minha irm; Aderbson, meu porto seguro; Milena, minha caulinha; Luizo, nosso anjo da guarda; Robertinho, nosso piloto e oceangrafo honorrio, e tambm Ana Lcia, Elizete, Tatiani, Patrcia, Helena, Bruno, Geisi... Cardume: Eu no seria nada sem vocs! Prefeitura Municipal de Mangaratiba, na pessoa do Secretrio Giovanni Kede pela parceria fundamental que assegurou a realizao desta tese. E tambm agradeo Associao de Maricultures de Mangaratiba, representados por Marquinhos e Maria, Sr. Expedito e Guacyra pela cesso do long- line, dos animais, e do inestimvel conhecimento de mar. Em especial agradeo ao nosso brao- forte-no- leme Lcio, sempre companheiro e pronto a nos ajudar. Ao meu sempre presente irmo, Luiz Eduardo, por sua amizade incondicional ao longo de todos esses anos... Por me ouvir, pelas discusses oceanogrficas e pela anlise estatstica dos dados da tese. Amigos at (e sobretudo) embaixo dgua! CAPES pela concesso da bolsa. Comisso Oceanogrfica Intergovernamental pelo patrocnio da minha viagem para Vigo.

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BIOGRAFIA Quero, um dia, dizer s pessoas que nada foi em vo... Que o amor existe, que vale a pena se doar s amizades e s pessoas, que a vida bela sim e que eu sempre dei o melhor de mim... e que valeu a pena. Mrio Quintana Norteada por esse pensamento sou a resultante de um processo criativo conjunto, iniciado em 28 de agosto de 1973, por Heleno Nunes Ferreira e Zelinda de Magalhes Ferreira. Ao longo da minha caminhada tenho recebido a colaborao de amigos, mestres, e at mesmos de contratempos, para a construo de quem eu sou. Conclu o ensino fundamental na Escola Alberto Santos Dumont em Santa Cruz, RJ. Aos nove anos ocorreu uma mudana que seria fundamental para o afloramento da minha vocao: minha famlia mudou-se para Mambucaba, municpio de Paraty. Nascia a minha paixo pelo mar... Nesse mesmo municpio terminei o ensino fundamental na Escola Estadual Almirante lvaro Alberto e posteriormente o mdio no Colgio Estadual Roberto Montenegro fazendo o curso de Formao de Professores. Formei- me bacharel em Oceanografia em 2000 pela Universidade do Estado do Rio de Janeiro, sendo orientada pelo Professor Marcos Bastos. Minha monografia foi sobre o desenvolvimento do mexilho Perna perna na regio da Ilha Grande (Angra dos Reis, RJ). Fui bolsista de extenso na UERJ trabalhando com maricultura e educao ambiental. Iniciei minha histria na Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro no final de 2000 como estagiria responsvel pela extrao da glndula digestiva do mexilho para o trabalho da dissertao de Gesilene Mendona de Oliveira. Que consistia da deteco da ficotoxina diarrica cido okadaico em mexilhes da baa de Sepetiba (RJ). Dediquei- me durante um ano e o trabalho rendeu- me um convite do Professor Carlos Alberto da Rocha Rosa para ingressar, em 2002, no Mestrado em Microbiologia Veterinria. Minha dissertao tomou o rumo do mar e comeamos a realizar trabalhos prticos de coleta de fitoplncton para identificao das microalgas toxgenas e das toxinas nos moluscos coletados na baa de Sepetiba (RJ). Fui orientada pelo Professor Pedro Paulo de Oliveira Silva e fui bolsista da CAPES. Ao concluir minha dissertao em 2004 permaneci na linha de pesquisa auxiliando meus companheiros em seus trabalhos de dissertao e tese. Em 2005 fui selecionada para o doutorado em Cincias Veterinrias (Sanidade Animal) da UFRRJ, permanecendo na mesma linha de pesquisa em toxinas marinhas, tambm como bolsista da CAPES, sendo orientada pelos professores Hlcio Resende Borba e Pedro Paulo O. Silva. A linha de pesquisa foi ganhando novos integrantes, cresceu e tornou-se o Laboratrio de Toxinas Marinhas (ToxMar). O carter multidisciplinar da linha de pesquisa onde atuo reflete-se em vrios congressos onde apresentamos trabalhos: ficologia, biologia marinha, higienistas de alimentos, entre outros. No final de 2005 iniciei meus trabalhos como docente ministrando a discip lina Biologia Marinha, no Instituto de Biologia da UFRRJ, funo que desempenhei por dois anos como professora substituta e mais um semestre como professora convidada. Em 2006 fui selecionada para um curso pr-congresso de ficologia com a pesquisadora Beatriz Reguera do Centro Oceanogrfico de Vigo, referncia mundial na pesquisa de microalgas nocivas. O bom desempenho apresentado nesse curso rendeu- me convite para realizar um aperfeioamento neste centro de pesquisa em 2007. Atualmente sou responsvel pela disciplina de Fundamentos de Aquacultura da Faculdade de Oceanografia (UERJ). E atuo em prol do desenvolvimento da malacocultura, sob os enfoques de sustentabilidade, sanidade animal e segurana alimentar.

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RESUMO FERREIRA, Vanessa de Magalhes. Distri buio espacial, em microescala, e sazonal das microalgas potencialmente toxgenas Dinophysis spp. (Ehremberg 1839) na ilha Guaba (Mangaratiba, RJ) e suas possveis implicaes no cultivo de moluscos bivalvos. 2009. 107f. Tese (Doutorado em Cincias Veterinrias, Sanidade Animal). Instituto de Veterinria, Departamento de Parasitologia, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropdica, RJ, 2009. Na ilha Guaba (municpio de Mangaratiba, litoral sul do Rio de Janeiro) localiza-se a fazenda marinha da Associao de Maricultores de Mangaratiba. O principal molusco cultivado o mexilho Perna perna, que se alimenta principalmente de organismos fitoplanctnicos (microalgas). No entanto, na comunidade fitoplanctnica podem estar presentes microalgas nocivas, como os dinoflagelados Dinophysis spp. que podem produzir toxinas diarricas. A principal ficotoxina diarrica produzida por essas microalgas o cido okadaico (AO), j anteriormente detectado na regio e associado D. acuminata. Tal ficotoxina encontra-se implicada na sndrome Envenenamento Diarrico por Moluscos, que acomete humanos, apresentando como efeito agudo sintomatologia gastrintestinal (vmito, dor abdominal e diarria) e crnico promoo de carcinognese no estmago e intestino. Em relao sanidade animal o AO afeta o sistema imune dos mexilhes tornando-os susceptveis patgenos e poluentes. Alm disso, genotxico e pode levar perda de biodiversidade gentica de P. perna. Dinophysis, como todo organismo planctnico, apresenta uma restrita capacidade de natao. No entanto, sob condies de estabilidade da coluna dgua o dinoflagelado pode agregar-se em determinadas profundidades, o que pode vir a se tornar um agravante na contaminao de moluscos se houver produo de AO. Tal dis tribuio em microescala resulta da interao entre fatores biticos e abiticos. Dessa forma o presente trabalho buscou identificar e quantificar as espcies de Dinophysis presentes na ilha Guaba, bem como verificar se houve a formao de adensamentos ao longo da coluna dgua ao longo de um ano. Foram realizadas coletas mensais, ao longo de um perfil vertical de 8 metros de profundidade, sempre na preamar. As microalgas foram coletadas com garrafa VanDorn e fixadas com formaldedo para posterior realizao de microscopia em campo claro e contraste de fase. Foram mensuradas: temperatura, salinidade, profundidade Secchi. Dados climatolgicos de pluviosidade, intensidade e direo dos ventos foram cedidos pela Cia. Vale. Foram identificadas 6 espcies de Dinophysis: D. acuminata, D. caudata, D. fortii, D. cf ovum, D. tripos e D. rotundata. A anlise de classificao revelou que D. acuminata foi dominante (Fitopac v1.6, p<0,001), alm de ser a espcie mais frequente e abundante ao longo de todo o ano. Apenas durante o vero a espcie apresentou maior densidade celular (mdia de 297 clulas.l-1 , uma abundncia relativa considerada baixa pela literatura) no estrato de 0-4 metros de profundidade, do que no estrato > 4 metros (160 clulas.l-1 ), significativamente diferente do resto do ano (ANOVA, p<0.0001). D. fortii e D. rotundata foram co-dominantes no vero e outono/inverno, respectivamente. As demais espcies ocorreram como acessrias. D. ovum apenas ocorreu no vero e o presente trabalho o primeiro relato da espcie em guas brasileiras. Anlise de redundncia revelou que dos parmetros hidrolgicos e climatolgicos analisados apenas salinidade e vento (selecionadas pelo Teste de Monte Carlo) explicaram 11% da varincia dos dados de distribuio de Dinophysis. Embora no tenha sido realizada anlise para a presena do cido okadaico salienta-se que todas as espcies identificadas so relatadas como potenciais produtoras de toxinas diarricas. Dessa forma faz-se necessrio a realizao de uma avaliao de risco em relao s toxinas diarricas com vistas sanidade animal e segurana para a sade pblica. Palavras-chave: Toxinas diarricas. Monitoramento. Malacocultura. VIII

ABSTRACT FERREIRA, Vanessa de Magalhes. Spacial, in microscale, and sazonal distribution of toxic microalgae Dinophysis spp. (Ehremberg 1839) at Guaba island (Mangaratiba, RJ) and yours probably implications in bivalves culture . 2009. 107f. Tese (Doutorado em Cincias Veterinrias, Sanidade Animal). Instituto de Veterinria, Departamento de Parasitologia, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropdica, RJ, 2009. At Guaiba island (Mangaratiba municipality, south coast of Rio de Janeiro) is located the Association of Marine Maricultores of Mangaratibas farm. The region has excellent conditions for growth of molluscs bivalves: mild water temperatures, mesotrophic and with good sanitary conditions (under bacteriological aspects). The crop is the main shellfish mussel Perna perna, which feeds mainly phytoplanktonic organisms (microalgae). However, the phytoplankton community may be present harmful microalgae such as dinoflagellates Dinophysis spp. that can produce diarrhoetic toxins. The main diarrhoetic phycotoxin produced by these microalgae is okadaic acid (OA), previously detected in the region and associated with D. acuminata. This phycotoxin is implicated in the syndrome Diarrhoetic Shellfish Poisoning, which affects humans, showing the acute effect gastrointestinal symptoms (vomiting, abdominal pain and diarrhea) and chronic promotion of carcinogenesis in the stomach and intestine. Regarding the animal sanity OA affects the immune system of mussels making them susceptible to pathogens and pollutants. In addition is genotoxic and can lead to loss of genetic biodiversity of P. perna. This effect can generate mutations that compromise the future generations of shellfish can lead to disastrous consequences for the mitiliculture. Dinophysis as planktonic organism, has a limited ability to swim. However, under conditions of stability of the water column the dinoflagellate may attach to certain depths, which may become an aggravating factor in the contamination of shellfish if production of OA. This distribution on the microscale is from the interaction between biotic and abiotic factors. Thus the present work to identify and quantify the Dinophysis species present at Guaiba island and verify whether the formation of density along the water column over a year. Were collected monthly, in high tide, over a vertical profile of 8 meters deep. The microalgae were collected with Van-Dorn bottle and fixed with formaldedo for further work on microscopy. We measured temperature, salinity, Secchi depth. Climatological data of rainfall, intensity and direction of winds were released by Vale. We identified 6 species of Dinophysis: D. acuminata, D. caudata, D. fortii, D. ovum, D. tripos and D. rotundata. The Cluster analysis revealed D. acuminata was dominant (Fitopac v1.6, p <0001), besides being the most frequent and abundant throughout the year. Only the species during summer showed higher cell density (average of 297 clulas.l-1 , a low relative abundance according literature) in the stratum of 0-4 meters deep, than in the stratum > 4 meters (160 clulas.l-1 ), significantly different from the rest of the year (ANOVA, p <0.0001). D. fortii and D. rotundata were codominant in summer and autumn/winter, respectively. The remaining species occurred as incidental. D. ovum only occurred in summer and this work is the first report of this species in Brazilian waters. Redundancy analysis showed that the hydrological and climatological parameters analyzed only salinity and wind (selected by the Monte Carlo test) explained 11% of the variance of the data distribution of Dinophysis. Although no analysis has been performed for the presence of okadaic acid that all identified species are reported as potential producers of toxins diarrhea. Thus it is necessary for an evaluation of risk for diarrhoetic toxins aimed at animal health and safety to public health in the region. Key words: Diarrhoetic toxins. Monitoring. Malacoculture.

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LISTA DE FIGURAS
Figuras Figura 01. Valva direita do mexilho Mytilus edulis. A) Aspecto externo, mostrando linhas de crescimento e umbo; B) Aspecto interno, mostrando borda interna do peristraco, cicatriz do msculo adutor posterior e umbo (em destaque). Adaptado de documento da Internet FAO (2008) e disponvel em http://www.fao.org/fishery/culturedspecies/Medulis/en Figura 02. Valva direita da ostra do Pacfico Crassostrea gigas. A) Aspecto externo irregular e spero, umbo em destaque. B) Aspecto interno, liso e nacarado, cicatriz do msculo adutor visvel, umbo em destaque. Adaptado de documento da Internet FAO (2008) e disponvel em http://www.fao.org/fishery/culturedspecies/Cgigas/en Figura 03. Valvas da vieira Patinopecten yessoensis. A) Valva esquerda, em viso externa, exibindo costelas radiais e umbo em destaque; B) Valva direita em viso interna, exibindo cicatriz nica do msculo adutor, umbo em destaque. Adaptado de documento da Internet FAO (2008) e disponvel em http://www.fao.org/fishery/culturedspecies/Pyesso/en Figura 04. Anatomia interna de um pectindeo Argopecten gibbus. Mostrando sistemas digestivo, muscular, reprodutivo e respiratrio. Adaptado de Helm; Bourn, 2006. Figura 05. Anatomia interna de um mitildeo Perna perna. Corte em seo longitudinal. Viso em meia valva. Adaptado de http://www.glf.dfo-mpo.gc.ca/pe/profil/musselmoule/mussel-moule-e.php Figura 06. Anatomia interna de uma ostra, Ostrea edulis. Tubo digestivo completo, sistema respiratrio (brnquias) e fluxo de gua. Adaptada de content.cdlib.org/xtf/data/13030/n3/kt629004n3/figures/caljsiol_sio1ca175_123_012.gif Figura 07. Distribuio geogrfica de mexilhes do gnero Perna. Extrada de Wood et alli (2007). Setas indicam local de amostragem do trabalho referenciado. Figura 08. Distribuio geogrfica da ostra Crassostrea gigas. Adaptado de documento da Internet FAO (2008) e disponvel em http://www.fao.org/fishery/culturedspecies/Cgigas/en Figura 09. Fazenda Marinha da Associao de Maricultores de Mangaratiba, RJ. A) Sistema de cultivo suspenso, denominado espinhel, em vista panormica. Bombonas brancas e azuis constituem o sistema de flutuao do espinhel. Ao longo do cabo mestre (submerso assinalado com seta) ficam dispostas as cordas de mexilhes (B) e as lanternas com vieiras e ostras (C). Fotos da autora, exceto item c) FIPERJ. Figura 10. Percentual dos grandes grupos da produo aqucola mundial. A) Por quantidade dos 60 milhes de toneladas produzidos; B) Por valor dos U$$ 70 bilhes gerados. Modificado de FAO (2006a). Figura 11. Toxinas lipossolveis envolvidas no Envenenamento Diarrico por Moluscos. A) Ocadaiatos; B) Pectenotoxinas e C) Yessotoxinas. Adaptado de Suzuki et alli (2005). Figura 12. Ordem Dinophysiales (Lindemann 1928). Composta por trs famlias: a) Amphisoleniaceae, representada por Amphysolenia bidentata escala 100 m; b) Dinophysiaceae, representada por Dinophysis acuta, escala 10 m; c) Oxyphysiaceae representada por Oxyphysis oxytoxoides, escala 10m. Adaptado de Steidinger; Tangen (1997). Figura 13. Representao esquemtica de Dinophysis. A) Clula em viso lateral, valva direita: aca aleta cingular anterior; acp aleta cingular posterior; a aleta sulcal direita; baleta sulcal esquerda; epiteca oculta pela aleta cingular anterior. B) Clula em viso ventral: c cngulo; s sulcus; vd valva direita; ve valva esquerda; h - hipoteca. Adaptada de Balech (2002). Pgina 04

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Figura 14. Fotomicrografia de D. tripos clulas recm divididas. Notar a diviso da aleta sulcal esquerda em a e b. A clula filha da esquerda herdou a poro inicial a e os dois primeiros raios (R1 e R2 ). A clula filha da direita permaneceu com a poro final da aleta b, com o ltimo raio R3 e com a aleta sulcal direita (asd). O processo de diviso termina com a completa regenerao das aletas sulcais. Foto da autora, enseada de Maciis, Angra do Reis, RJ. Figura 15. Esquema da tabulao da teca de Dinophysis em viso ventral, sem as aletas cingulares e sulcais. A 1 e A 2 : placas do poro apical; Po : poro apical; E1-4 : placas da epiteca; C14 : placas cingulares; H : placas da hipoteca; S : sulcal anterior; S : sulcal sinister, i.e. 1-4 a s esquerda; S : sulcal dexter, i.e. direita; S : sulcal posterior; P: poro flagelar. Adaptada de d p f Taylor (1980) apud Taylor (1987). Figura 16. Janela de tempo da distribuio de Dinophysis, em amostragem semanal, ao longo de 12 anos (1989-2000) na baia de Vilaine, Frana. Adaptado de Xie et alii, 2007. Figura 17. Baa de Sepetiba, litoral sul do estado do Rio de Janeiro, onde se localiza a Ilha Guaba, municpio de Mangaratiba. Assinalada com seta no mapa a ponta da Passagem onde localiza-se a fazenda marinha da AMAR.

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Figura 18. Dinophysis acuminata exemplares de vero (dezembro de 2007), fotomicrografias em aumento de 400x. A) Variedade acuminata em microscopia de contrastes de fase, em evidncia os trs raios da aleta sulcal esquerda (R1 , R2 e R3 ); B) Variedade lachmani em microscopia de campo claro, em detalhe vacolos alimentares e n (ncleo); C) Variedade lachmani, teca vazia evidenciando a ornamentao regular da hipoteca com aurolas, microscopia de campo claro; D) Variedade lachmani, detalhe da regio antapical retilnea na poro ventral. Figura 19. Dinophysis acuminata variedade lachmani, exe mplares de inverno (julho de 2007), fotomicrografias em aumento de 400x. A) Clula em contraste de fase; B) Microscopia de campo claro evidenciando os trs raios (R1 , R2 e R3 ) da aleta sulcal esquerda; C) e D) a mesma clula em campo claro e contraste de fase, em evidncia vacolos alimentares. Figura 20. Dinophysis caudata. Clula em viso lateral (valva esquerda), microscopia de campo claro aumento de 200x. Detalhes taxonmicos: aca, aleta cingular anterior em forma de funil; seta, projeo antapical ventral. Figura 21. Dinophysis fortii exemplares de vero, fotomicrografias em aumento de 400x. A) clulas pareadas, recm divididas em contraste de fase, de fevereiro, no detalhe poro final da aleta sulcal esquerda herdada pela clula filha; B) as mesmas clulas pareadas, recm divididas em microscopia de campo claro; C) exemplar de fevereiro; D) exemplar de dezembro, no detalhe regio ventral retilnea. Figura 22. Dinophysis ovum, setas indicam reas de convexidade na regio ventral e antapical, linhas tracejadas a parte mais larga da clula na altura de R3 . Exemplares de vero. A) Fotomicrografia em contraste de fase no aumento de 400x; B) Fotomicrografia em campo claro no aumento de 200x; C) Fotomicrografia em contraste de fase no aumento de 400x; D) Microscopias em campo claro, aumento de 400x. Figura 23. Dinophysis tripos, exemplares de primavera, fotomicrografias em aumento de 200x. A) Clula recm-dividida, microscopia de campo claro, em detalhe a pequena aleta sulcal direita, notar que a microalga possui apenas a poro final da aleta sulcal esquerda; B) Clula recm-dividida, poro final da aleta sulcal esquerda regenerada, porm ainda sem reticulao, assinalados os trs grandes espinhos que sustentam a aleta, seta assinala a aleta cingular anterior, com seus raios. Figura 24. Dinophysis tripos exemplares de vero, fotomicrografias em campo claro, aumento de 200x.

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Figura 25. Dinophysis rotundata fotomicrografias em aumento de 400x. A) exemplar de outono, clula plena de vacolos alimentares; B) exemplar de inverno; C) exemplar de primavera; D) exemplar de vero, presena de vacolos alimentares porm menos evidentes. Todas as fotomicrografias em campo claro exceto B) contraste de fase. Notar em todas as fotos a epiteca convexa. Figura 26. Variao da densidade celular de Dinophysis acuminata em relao profundidade e s estaes do ano. Figura 27. Somatrio das densidades celulares de cada espcie de Dinophysis identificada para a ilha Guaba, durante o perodo analisado (ao longo de uma coluna dgua de 8 metros de profundidade). Figura 28. Dendrograma com as relaes existentes entre as espcies dominantes e acessrias nos dois grupos determinados por anlise de classificao no modo R, para a comunidade de Dinophysis na ilha Guaba, 2007/2008. Figura 29. Dendrograma anlise de classificao no modo Q das coletas em funo da ocorrncia de Dinophysis spp. a um nvel de corte de 2,5. Figura 30. Variao da temperatura ao longo da coluna dgua durante os meses de vero, na ilha Guaba. Figura 31. Variao da temperatura ao longo da coluna dgua durante os meses de outono, na ilha Guaba. Figura 32. Variao da temperatura ao longo da coluna dgua durante os meses de inverno, na ilha Guaba. Figura 33. Variao da temperatura ao longo da coluna dgua durante os meses de primavera, na ilha Guaba. Figura 34. Variao da profundidade Secchi ao longo do perodo analisado, na ilha Guaba. Figura 35. Variao da salinidade ao longo da coluna dgua durante os meses de vero, na ilha Guaba. Figura 36. Variao da salinidade ao longo da coluna dgua durante os meses de outono, na ilha Guaba. Figura 37. Variao da salinidade ao longo da coluna dgua durante os meses de inverno, na ilha Guaba. Figura 38. Variao da salinidade ao longo da coluna dgua durante os meses de primavera, na ilha Guaba. Figura 39. Plano cannico da Anlise de Redundncia (RDA) utilizando a matriz de abundncias de dinoflagelados (espcies de Dinophysis) e a matriz de variveis ambientais significativas salinidade (modo principal de variao, eixo I e velocidade do vento (modo ) secundrio de variao, eixo II). Grupo 1 Dominncia de D. acuminata e D. fortii, em abundncias relativas maiores, com presena de todas as espcies de Dinophysis em pelo menos uma amostra. Grupo 2 - Presena de todas as espcies, exceto D. caudata. Dominncia de D. acuminata e Dinophysis spp.; Grupo 3 - Dominncia de D. acuminata e D. rotundata, com baixas abundncias relativas; Grupo 4 Dominncia de D. fortii e D. rotundata em baixas abundncias relativas; Grupo 5 - Amostras onde ocorreu apenas D. acuminata.

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LISTA DE TABELAS

Tabela 01. Distribuio e abundncia de Dinophysis acuminata. Comparao entre resultados encontrados pelo presente trabalho (FERREIRA, 2009) e dados da literatura consultada. Tabela 02. Densidades celulares de Dinophysis acuminata ao longo da coluna dgua e dos meses amostrados. Valores em clulas.l-1 . Tabela 03. Grupos da anlise no Modo Q. Teste de significncia dos grupos executado pelo Modelo de permutaes de Monte Carlo. Todos os grupos foram significativamente diferentes (p<<0,0001). Tabela 04. Parmetros climatolgicos (mdios mensais) da estao meteorolgica localizada na ilha Guaba. Fornecidos gentilmente pela Cia. Vale. Tabela 05. Autovalores e inrcia total obtidos atravs da anlise de redundncia partir dos parmetros abiticos fornecidos. Modelo original: primeira anlise antes do teste de significncia com todas as variveis abiticas; Modelo final: contendo apenas as variveis significativamente relacionadas distribuio de Dinophysis spp. selecionadas pela Anlise de Monte Carlo. Tabela 06. Resultado do teste de Monte Carlo para significncia das relaes entre variveis ambientais e distribuio de Dinoflagelados (p=0,05).

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LISTA DE QUADROS

Quadro 01. Listas das microalgas potencialmente txicas e suas substncias bioativas. Quadro 02. Dados utilizados no Clculo da Dose Aguda de Referncia para a toxina diarrica cido okadaico (e equivalentes) por pesquisadores Ad hoc da FAO/IOC/WHO para Biotoxinas Marinhas (UNESCO, 2005) comparado ao recomendado pela European Food Safety Authority (ALEXANDER et alii, 2008).

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XIV

SUMRIO
1. INTRODUO 2. REVISO DE LITERATURA 2.1 Moluscos Bivalvos 2.1.1 Taxonomia e aspectos gerais 2.1.2 Morfologia externa 2.1.3. Morfofisiologia 2.1.4 Bioecologia 2.1.4.1 Perna perna (Linnaeus 1758) 2.1.4.2 Crassostrea gigas (Thunberg 1793) 2.1.4.3 Nodipecten nodosus (Linnaeus 1758) 2.1.5 Uso de bivalvos como bioindicadores ambientais e sanitrios 2.2. Malacocultura 2.3. Ficotoxinas Diarricas 2.3.1 Ficotoxinas: produtos naturais marinhos 2.3.2 Ocadaiatos 2.3.3 Implicaes na sade pblica: envenenamento diarrico por moluscos 2.3.4 Efeitos adversos na sanidade de moluscos bivalvos 2.4 Dinoflagelados do Gnero Dinophysis (Ehremberg 1839) 2.4.1 Classificao 2.4.2 Aspectos morfomtricos: taxonomia 2.4.3 Bioecologia 2.4.4 Fatores que interferem na sua distribuio 3. MATERIAIS E MTODOS 3.1 rea de Estudos 3.2 Coleta 3.2.1 Das microalgas 3.2.2 Das variveis oceanogrficas 3.3 Identificao e Quantificao de Dinophysis 3.4 Anlise Estatstica 4. RESULTADOS E DISCUSSO 4.1 Identificao das Espcies 4.1.1 Dinophysis acuminata (Claparde & Lachmann 1859) 4.1.2 Dinophysis caudata (Saville -Kent 1881) 4.1.3 Dinophysis fortii (Pavillard 1923) 4.1.4 Dinophysis ovum (Schtt 1895) 4.1.5 Dinophysis tripos (Gourret 1883) 4.1.6 Dinophysis rotundata (Claparde & Lachmann 1859) 4.2 Distribuio Espacial e Temporal de D. acuminata 4.3 Distribuio Espacial e Temporal de Dinophysis spp. 4.4 Dominncia na Comunidade de Dinophysis spp. 4.5 Influncia dos Fatores Abiticos na Distribuio de Dinophysis spp. 5. CONCLUSES 6. RECOMENDAES 7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 01 04 04 04 04 06 09 10 11 11 12 14 16 16 20 24 26 28 28 29 32 34 37 37 39 39 40 40 40 41 41 41 43 44 45 46 47 48 53 55 59 71 72 73

XV

1. INTRODUO O conceito de sanidade animal tem sido amplamente aplicado a vertebrados criados com fins de produo. Dessa forma sanidade diz respeito sade geral do animal, contemplando aspectos microbiolgicos, parasitrios e toxicolgicos, abarcando enfermidades zoonticas ou no. Aspectos e prticas ligados manuteno da sanidade refletem-se no aumento da produtividade e na qualidade dos produtos de origem animal gerados, quando destinados alimentao humana. Tais prticas podem atuar de diversas maneiras: a) preve ntivamente no estabelecimento de um bom ambiente na criao contribuindo para a promoo da sade animal; b) rotineiramente na deteco de quaisquer anomalias que possam trazer dano aos animais cultivados; c) na forma de medidas que venham reestabelecer as condies normais de criao aps um episdio de enfermidade e/ou situao potencialmente nociva. Embora sejam organismos invertebrados, moluscos aquticos cultivados so animais de produo destinados exclusivamente alimentao. O cultivo de tais orga nismos denominado malacocultura, tambm havendo denominaes especficas como mitilicultura, ostreicultura e pectinicultura (cultivo de mexilhes, ostras e vieiras, respectivamente). No Brasil a criao acontece em ambiente marinho costeiro, utilizando-se de estrutura flutuante denominada espinhel onde os animais ficam dispostos em cordas (mexilhes) ou em lanternas (vieiras e ostras). Segundo recente reviso do cenrio mundial da aquicultura realizado pelas Organizaes para Alimentao e Agricultura (Food and Agriculture Organization FAO) moluscos aquticos ocupam a terceira colocao tanto em volume de produo (22,31% dos 60 milhes de toneladas produzidos) quanto em valores (14,18% dos U$$ 70 bilhes gerados). A China lidera a produo mundial de moluscos e o Brasil o segundo produtor na Amrica Latina. A produo nacional liderada por Santa Catarina (em fase de industrializao da cadeia produtiva), seguido por So Paulo, Esprito Santo e Rio de Janeiro. No Brasil so cultivadas principalmente trs espcies: o mexilho Perna perna (Linnaeus 1758), a vieira Nodipecten nodosus (Linnaeus 1758) e a ostra do pacfico Crassostrea gigas (Thunberg 1793), sendo as duas primeiras espcies nativas de nosso litoral. No ano 2000 75% dos bivalvos disponveis para o consumo foram fornecidos por cultivos. A produo de organismos aquticos vem crescendo no Brasil a taxas maiores que encontradas no cenrio internacional. Enquanto a aquicultura mundial cresce cerca de 8% ao ano, em 2004 o Brasil apresentou crescimento de 15,5%. Esse incremento foi maior que o apresentado na criao de aves (5%), sunos (3%) e bovinos (5,2%) para o mesmo perodo. Alm disso, com um litoral de mais de 8000km, o Brasil apresenta grande potencial para a malacocultura, podendo expandir a produo de alimento sem que haja o tradicional conflito com fronteiras florestais, agrcolas ou para habitao. No entanto a FAO aponta como grande entrave ao desenvolvimento da atividade malacocultora, entre outros problemas de ordem tcnica, a questo sanitria dos moluscos produzidos no Brasil. Moluscos bivalves so filtradores, ou seja, alimentam-se de organismos fitoplanctnicos e de matria orgnica particulada presentes em suspenso na coluna dgua onde so cultivados. Podem filtrar muitos litros de gua do mar por hora dependendo da espcie (por exemplo, 3 litros para um mexilho adulto em condies ambientais ideais) e reter at 90% do material particulado presente. Dessa forma podem bioacumular de 100 1000 vezes patgenos ou substncias nocivas presentes na gua de cultivo, e dessa forma podem vir a atuar como veculo de diversas enfermidades para humanos consumidores. At o presente momento o fomento malacocultura tem sido focado na busca de sustentabilidade para a atividade: fornecimento regular de sementes, otimizao de sistemas de cultivo, por exemplo. No entanto, conforme j alertado pela FAO, urge quebrar esse 1

paradigma, buscando integrar aspectos ligados sanidade dos animais e segurana alimentar. Para que se logre em atingir o desenvolvimento social e econnico pretendido pela malcocultura. Na comunidade fitoplanctnica, principal fonte nutricional para moluscos cultivados e base da teia trfica marinha, pode-se encontrar microalgas nocivas, potencialmente produtoras de substncias naturais bioativas, denominadas ficotoxinas. Essas espcies de microalgas so ditas potencialmente produtoras pois sua presena na coluna dgua per se no implica na obrigatoriedade da produo das ficotoxinas. Atualmente o contexto oceanogrfico e ecolgico da produo de tais bioativos naturais um tema muito estudado, mas ainda no elucidado. Vrias sndromes de envenenamento por molusco j foram formalmente definidas: agente etiolgico, substncias txicas envolvidas, sintomatologia, normatizao de limites, metodologias de deteco validadas. Internacionalmente j existem programas de monitoramento (das microalgas nocivas e das ficotoxinas na carne dos moluscos) e legislao adequados que regulamentam o consumo de moluscos bivalvos com vistas sanidade e segurana alimentar. E as linhas de pesquisa envolvidas no seu estudo caracterizam-se pela multidisciplinaridade abarcando a oceanografia, a veterinria, a biologia, a medicina, a qumica, entre outras reas de conhecimento. Ficotoxinas representam um dos maiores problemas de sade pblica, em nvel mundial, associado ao consumo de moluscos. A sndrome Envenenamento Diarrico por Moluscos (EDM) uma das mais amplamente distribudas e tem como principal toxina o cido okadaico (AO). Como o EDM possui vmitos e diarria como principais sintomas pode facilmente ser confundido com uma toxinose bacteriana ou uma infeco viral. Alm disso, a maior parte do sistema de sade brasileiro desconhece a sndrome, que provavelmente encontra-se sujeita a subnotificao considerando-se o contexto brasileiro. A sintomatologia gastrintestinal o resultado da exposio aos efeitos agudos da ficotoxina AO. No entanto os consumidores expostos constantemente baixas concentraes da toxina podem desenvolver seu efeito crnico: carcinognese no estmago ou intestino. Alm das implicaes na sade pblica a sanidade dos moluscos tambm afetada pela toxina diarrica. Mexilhes P. perna apresentam formao de microncleos em seus hemcitos quando expostos baixas concentraes do AO. Isso significa que a genotoxicidade do AO pode levar perda de biodiversidade gentica nos animais expostos, levando mutaes indesejveis nas prximas geraes. E isso pode trazer prejuzos imprevisveis mitilicultura. A resposta imune tambm afetada tornando-os mais susceptveis patgenos e poluentes. Ainda h poucos e esparsos registros da ocorrncia e abundncia de microalgas nocivas em nosso litoral, como por exemplo, os gneros de dinoflagelados envolvidos na produo de toxinas diarricas Prorocentrum e Dinophysis. Segundo dados disponveis na Plataforma Lattes o incio da pesquisa nessa linha muito recente, datando da dcada de 90. Portanto encontra-se ainda em fase descritiva, sendo principalmente documentado para o litoral catarinense. Santa Catarina o nico estado brasileiro a contar com um programa de monitoramento e legislao que aborde o assunto, torna ndo notificao obrigatria ocorrncia de casos diarricos associados ao consumo de moluscos. O gnero Dinophysis caracterstico de guas ocenicas e nerticas, e so encontradas em todas as latitudes. Dinophysis acuminata a espcie que apresenta distribuio mais ampla, ocorrendo em todos os oceanos e a maior implicada na produo de toxinas diarricas. No Brasil j foi associada produo de AO nas baas de Sepetiba e Ilha Grande, e recentemente no primeiro surto de EDM relatado em Santa Catarina. Dinoflagelados, como todo organismo planctnico, possuem restrita capacidade de natao sendo as espcies caracterscticas de uma determinada massa dgua. Em macroescala 2

as espcies se distribuem latitudinalmente, principalmente em funo da temperatura; embora haja espcies que possuam ampla distribuio, como D. acuminata. Em mesoescala o movimento e as misturas de diferentes massas dgua influenciam diretamente na composio de uma comunidade fitoplanctnica contribuindo ora para a entrada de espcies, ora para sua disperso. Assim o movimento das mars, o vento, vrtices, exercem influncia direta sobre a dinmica das comunidades de microalgas. A maioria das espcies de Dinophysis tem como habitat preferencial guas nerticas, ou seja, aquelas localizadas acima da plataforma continental. Em microescala (de metros decmetros) a distribuio das microalgas a resultante de um balano entre variveis biticas e abiticas na busca pelo timo de desenvolvimento para cada espcie de microalga. Dessa forma condies de estabilidade de uma coluna dgua podem propiciar um acmulo de dinoflagelados em uma determinada profundidade, principalmente onde haja formao de barreiras de densidade. Tal acmulo de Dinophysis pode contribuir para uma maior probabilidade de contaminao para os moluscos cultivados, se ficotoxinas estiverem sendo produzidas. E, segundo a Comisso Ocenogrfica Intergovernamental, todo ambiente onde haja extrao ou cultivo de moluscos sem o devido monitoramento higinico-sanitrio deve ser considerado um risco para a sade pblica. A fazenda marinha da Associao de Maricultores de Mangaratiba localiza-se na baa de Sepetiba (litoral sul do estado do Rio de Janeiro), corpo dgua considerado um esturio parcialmente misturado. A ilha encontra-se na boca da baa, poro mais exposta influncia do oceano Atlntico onde encontram-se menores variaes de salinidade. um ambiente abrigado, raso, de excelente condio sanitria (do ponto de vista bacteriolgico), com temperaturas amenas, pouca variao de salinidade e sujeito forte influncia das correntes de mar. Como a baa um ambiente mesotrfico h grande oferta de alimento para os moluscos. A principal espcie cultivada o mexilho Perna perna, mas experimentalmente o crescimento da vieira N. nodosus foi considerado muito satisfatrio (dados no apresentados nessa tese). Dessa forma o ambiente apresenta grande potencial ao desenvolvimento da malacocultura. mister salientar que neste municpio a malacocultura tem forte contexto social ao representar uma possibilidade de melhoria de qualidade de vida comunidades que anteriormente viviam de atividades extrativistas. O presente trabalho teve por objetivos estudar a composio da comunidade de Dinophysis ao longo da coluna dgua e dentro do perodo de um ano. Foram identificadas e quantificadas as espcies presentes, bem como avaliados os perfis de salinidade, temperatura, e verificados a profundidade Secchi, a intensidade e direo dos ventos e a pluviosidade. Buscou-se correlacionar fatores biticos referentes s Dinophysis s variveis hidrolgicas e parmetros climatolgicos (fatores abiticos) visando estabelecer uma relao que evidenciasse o contexto oceanogrfico que modulasse sua distribuio temporal e espacial.

2. REVISO DE LITERATURA 2.1 Moluscos Bivalvos 2.1.1 Taxonomia e aspectos gerais So animais aquticos pertencentes ao Filo Mollusca, Classe Bivalvia (tambm denominada Pelecypoda ou Lamellibranchiata). Caracterizam-se pela presena de duas estruturas rgidas, constitudas de carbonato de clcio denominadas valvas, que protegem a massa corporal mole, sem segmentao, comprimida lateralmente (LEAL, 2008). Domnio Eukaria Filo Molusca Classe Bivalvia Ordem Mytiloida Famlia Mytilidae Gneros Mytilus, Mytella e Perna Ordem Ostreoida Famlia Ostreidae Gneros Crassostrea, Ostrea Ordem Pteroida Famlia Pectinidae Gneros Pecten, Nodipecten, Argopecten Todos os moluscos bivalves adultos habitam o domnio bentnico, principalmente em substratos consolidados. Fixam-se ao fundo atravs de filamento protico chamado bisso (Mytiloida) ou atravs da cimentao da valva esquerda (Ostreoida). Pteroida possui gneros que podem ocorrer sobre substratos consolidados ou inconsolidados e que apresentam capacidade de natao (embora possam produzir pequena quantidade de bisso). Indivduos de vrias ordens de bivalvos podem viver enterrados em sedimento inconsolidado, como infauna. 2.1.2 Morfologia externa (HELM; BOURNE, 2006). As valvas destes moluscos dividem-se sempre em direita e esquerda. Em Mytiloida as valvas so equivalves, lisas tanto externa quanto internamente, com presena de umbo na regio anterior (Figura 01). Peristraco produzido pelo manto e recobre externamente as valvas dando- lhes colorao: azulada (M. edulis), amarronzada (P. perna) ou esverdeada (P. viridis). Internamente as valvas so nacaradas iridescentes e marcadas com a cicatriz do msculo adutor posterior.
Regio dorsal

A)

B)

Regio ventral

Figura 01. Valva direita do mexilho Mytilus edulis. A) Aspecto externo, mostrando linhas de crescimento e umbo; B) Aspecto interno, mostrando borda interna do peristraco, cicatriz do msculo adutor posterior e umbo (em destaque). Adaptado de documento da Internet FAO (2008) e disponvel em http://www.fao.org/fishery/culturedspecies/Medulis/en

Regio posterior

Regio anterior

Em Ostreoida as valvas so inequivalves, a esquerda encontra-se cimentada em substrato consolidado e acentuadamente cncava como uma xcara; a valva direita suavemente convexa (Figura 02). Externamente a valva direita muito spera com aspecto laminar. Internamente as valvas so lisas, branco nacaradas, com uma nica cicatriz muscular.
Regio dorsal A)

B)

Regio ventral

Figura 02. Valva direita da ostra do Pacfico Crassostrea gigas. A) Aspecto ext erno irregular e spero, umbo em destaque. B) Aspecto interno, liso e nacarado, cicatriz do msculo adutor visvel, umbo em destaque. Adaptado de documento da Internet FAO (2008) e disponvel em http://www.fao.org/fishery/culturedspecies/Cgigas/en

Em Pteroida o animal apia-se no fundo sobre a valva direita, que pode ser acentuadamente convexa dependendo da espcie, a esquerda apresenta ornamentaes na forma de costelas radiais, com presena de ns bulbosos dependendo da espcie; o umbo ladeado por um par de aurcolas, que podem ser desiguais dependendo da espcie (Figura 03).
Aurcola B)

A)

Costela

Figura 03. Valvas da vieira Patinopecten yessoensis. A) Valva esquerda, em viso externa, exibindo costelas radiais e umbo em destaque; B) Valva direita em viso interna, exibindo cicatriz nica do msculo adutor, umbo em destaque. Adaptado de documento da Internet FAO (2008) e disponvel em http://www.fao.org/fishery/culturedspecies/Pyesso/en

Regio posterior

Regio anterior

2.1.3 Morfofisiologia. Bivalvos no apresentam cabea como os demais moluscos, perderam rdula, tentculos e olhos provavelmente em funo do estilo de vida sssil ou sedentrio (LEAL, 2006). Toda sua massa corprea fica compreendida, e protegida, no interior das valvas, exceto expanses tteis do manto em pectindeos e ostras. O manto um tecido que reveste toda a valva internamente (exceto nas regies onde o msculo adere concha); tambm responsvel pela segregao de carbonato de clcio que compe a valva. Nos pectindeos os tentculos formados a partir de expanses do manto possuem pequenos ocelos azuis, estruturas capazes de detectar luz e movimento (importantes para localizar a zona ftica e possveis predadores). Nos mitildeos os bordos do manto se unem para formar os sifes inalante (por onde a gua entra com oxignio e alimento) e exalante (sada de gua com fezes e pseudofezes).
Glndula digestiva Aurcola Esfago Ventrculo Palpos labiais Boca P Msculo de fechamento Msculo rpido Sulco do bisso Testculo Intestino

Tentculos

nus

Ovrio

Ocelos

Brnquia

Manto

Figura 04. Anatomia interna de um pectindeo Argopecten gibbus. Mostrando sistemas digestivo, muscular, reprodutivo e respiratrio. Adaptado de Helm; Bourn (2006).

A respirao realizada por um par de brnquias de estrutura laminar (cada par de demibrnquias faz uma lamela branquial) que possuem clulas ciliadas. Localizam-se dentro das valvas logo aps o manto e entre elas encontra-se a massa visceral. O batimento dos clios gera uma corrente de gua dentro do animal enquanto revestem de muco partculas de alimento (microalgas e matria orgnica particulada). Na poro anterior das brnquias localizam-se dois pares de palpos labiais. Assim que o alimento filtrado nas brnquias chega at a boca do animal os palpos labiais selecionam por tamanho o que pode ser ingerido. O que for grande demais ser eliminado como pseudofezes (BENINGER; ST-JAMES, 1997). Possuem trato digestivo completo com boca, esfago curto, glndula digestiva, estilete cristalino, intestino e nus (Figuras 04, 05 e 06). No estilete h uma camada de mucoprotenas que liberam enzimas para a digesto dos alimentos, reduzindo amido acares.

Figura 05. Anatomia interna de um mitildeo Perna perna. Corte em seo longitudinal. Viso em meia valva. Adaptado de http://www.glf.dfompo.gc.ca/pe/profil/mussel-moule/mussel-moule-e.php

A fecundao externa, com indivduos apresentando sexos separados em Mytiloida: machos apresentam gnadas com colorao branca ou creme e as fmeas vermelhoalaranjado. Ostreoida tambm possui sexos separados, a gnada somente pode ser vista durante o perodo de reproduo e no se distingue visualmente entre os sexos; os indivduos so hermafroditas seqenciais em Crassostrea, ou seja, sua primeira desova como macho e na prxima como fmea (protandria). Em Ostrea os animais so larvparos. Os principais pectindeos de interesse comercial, como Nodipecten nodosus, so hermafroditas verdadeiros apresentando em um mesmo indivduo gnada feminina (de cor alaranjada) e masculina (de colorao branca) (Figura 04).

Figura 06. Anatomia interna de uma ostra, Ostrea edulis. Tubo digestivo completo, sistema respiratrio (brnquias) e fluxo de gua. Adaptada de content.cdlib.org/xtf/data/13030/n3/kt629004n3/figures/caljsiol_sio1c a175_123_012.gif

A desova geralmente induzida por temperatura ou estresse ambiental. A gametogne se em bivalvos depende de vrios fatores: tamanho do animal, temperatura da gua e do alimento (HELM; BOURN, 2006). Vrias espcies de pectindeos podem acumular reservas no msculo e na glndula digestiva e posteriormente utiliz- la na maturao dos gametas (LODEIROS et alli, 2001). Durante a maturao dos gametas algumas espcies apresentam maior necessidade de uma dieta alimentar rica em lipdeos polinsaturados, fundamentais para uma boa produo de gametas e de larvas de qualidade (DUINKER et alli, 2004), pois o tecido gondico essencialmente lipdico. O sistema muscular controla batimentos cardacos, movimento de fechamento das valvas (a abertura mediada por ligamento, em mexilhes e ostras, ou pelo resilium em vieiras) e pequenos deslocamentos (em mexilhes e vieiras). Encontramos espcies monomirias (um nico msculo adutor localizado no centro da valva) em Ostreoida e Pteroida, e dimirias em Mytiloida (msculo adutor, retrator do p, retrator anterior, retrator mediano e retrator posterior do bisso). O p tambm possui natureza muscular, apresentando um sulco longitudinal ao longo do qual escorre a protena que se solidifica e d origem aos filamentos do bisso (produzido por uma glndula bissognica localizada na base do p). Essa estrutura se forma durante o final da fase larvar (pedivliger) e atua fundamentalmente quando a larva sofre a metamorfose abandonando a vida livre planctnica para procurar um substrato bentnico. Ostras possuem p rudimentar, ativo apenas no final da fase larvar: assim que sofrem metamorfose cimentamse definitivamente ao substrato e o rgo perde sua funo (POLI, 2004). Arrastando-se por intermdio do p o plantgrado (spat) busca o ambiente com melhores condies para se fixar: inicialmente em um substrato macio (biofilme de microalgas filamentosas fixao primria) e posteriormente sobre substrato consolidado (fixao definitiva, no caso dos mexilhes) (FERREIRA; MAGALHES, 2004). O sistema circulatrio dos bivalvos constitudo pelo corao (pericrdio, composto por duas aurcolas e um ventrculo) localizado dorsalmente, um conjunto de artrias e veias por onde circula o sangue, denominado hemolinfa. O pigmento responsvel pelo transporte dos gases a hemocianina, protena cujo centro ativo uma molcula de cobre, fazendo com que a hemolinfa no apresente colorao. O pericrdio impulsiona a hemolinfa rica em oxignio, em batimentos irregulares, partir do ventrculo atravs dos sistemas de artrias at a cavidade denominada seios. Nessa cavidade a hemolinfa se espalha para toda a massa corprea dos animais, constituindo assim um sistema circulatrio aberto. Ao retornar dos rgos a hemolinfa volta ao seio, flui pelas veias passando pelo rim e pelas brnquias (para a retirada dos excretas celulares e do CO2 ) e finalmente penetra no corao atravs das duas aurcolas (BARRACCO; DA SILVA, 2008). A hemolinfa constituda basicamente por hemcitos de diferente natureza, com presena de grnulos citoplasmticos (granulcitos) e sem grnulos (hialincitos). Tais clulas desempenham variadas funes: reparo das valvas, transporte e digesto de nutrientes e tambm o fundamental papel de atuar na defesa imunolgica do bivalvo frente micropatgenos (bactrias, fungos, protozorios e microalgas) e substncias nocivas presentes na gua. Pectindeos no apresentam granulcitos (CARBALLAL et alli, 1997). Assim como os demais invertebrados, bivalvos possuem apenas o sistema imune inato e natural, no apresentando o sistema adaptativo como os vertebrados. As clulas presentes na hemolinfa e/ou variadas substncias por elas produzidas (PAMs -peptdeos de ao antimicrobiana, como defensinas, mitilinas e miticinas; EROs - espcies reativas de oxignio, como superxidos, perxido de hidrognio) constituem as principais defesas do organismo e atuam modulando respostas inflamatrias, citotxicas e fagocticas. A atividade dos hemcitos pode ser verificada pela presena de enzimas hidrolticas (principalmente lisozima) ou variadas molculas txicas transitrias (EROs) que atuam sobre o patgeno, aps este ter 8

sido fagocitado ou encapsulado. A ao conjugada destes fatores objetiva levar o patgeno morte por processo oxidativo, denominado choque respiratrio (ROCH, 1999. BARRACCO; DA SILVA, op cit.). 2.1.4 Bioecologia. Moluscos bivalves adultos so animais que vivem no domnio bentnico, estendendo sua ocorrncia desde a regio entremars at o infralitoral dependendo da espcie. Podem ser ssseis, ou seja, viver fixados ao fundo (como mexilhes e ostras) ou vgeis, como as vieiras que podem se deslocar (HELM; BOURN, 2006). Durante a fase de desenvolvimento larvar bivalvos habitam o domnio planctnico como organismos meroplanctnicos. Esse estdio geralmente dura cerca de um ms, podendo ser abreviado ou estendido em funo da temperatura do meio ambiente. Aps a fertilizao em poucas horas o zigoto torna-se uma larva trocfora, livre natante; em seguida desenvolvese o vlum (estrutura responsvel pela respirao e alimentao da larva) e a concha rudimentar (sem umbo) - a larva vliger. Posteriormente desenvolvem-se as brnquias, o p larva pedivliger. O ltimo passo relaciona-se metamorfose para que o animal possa habitar o domnio bentnico e relaciona-se procura pelo substrato mais adequado para a fixao (HELM; BOURN, op cit.). Habitam guas costeiras, desde ambientes estuarinos, como a ostra Crassostrea rhizophorae, at tipicamente ocenicos como o mexilho Perna perna. Em relao distibuio biogeogrfica o gnero Mytilus encontra-se em zonas temperadas em todo o globo e Perna em ambientes tropicais, principalmente no hemisfrio sul (WOOD et alli, 2007). Vieiras tambm podem ser encontradas desde regies polares ambientes tropicais, da zona intermars profundidades de 7000 metros (MINCHIN, 2003). Todos os bivalves alimentam-se de organismos planctnicos disponveis em suspenso na coluna dgua : microalgas (OGILVIE et alli, 2000), bactrias, mesozooplncton (ZELDIS et alli, 2004); mas tambm de matria orgnica particulada (MOP). Podem filtrar muitos litros de gua do mar por hora dependendo de fatores biticos (espcie de molusco, tamanho, estado fisiolgico, quantidade de alimento disponvel, presena de toxinas) e abiticos (principalmente temperatura e salinidade) (RESGALLA-JR. et alli, 2007). Moluscos bivalves relacionam-se ecologicamente com organismos bentnicos, planctnicos e nectnicos. Predam principalmente organismos fitoplanctnicos (herbivoria) e competem por esse recurso com os demais animais filtradores: cracas, ascdeas, outros bivalvos, briozorios, esponjas, entre outros. Porm Alfaro (2006) relata evidncia de canibalismo para Perna viridis, onde animais adultos em ambiente natural continham em seu contedo estomacal estdios larvais de sua prpria espcie (relao ecolgica negativa intraespecfica). No bentos, bancos naturais de mexilhes fornecem substrato para fixao de inmeros invertebrados e macroalgas (espao secundrio). No entanto, cracas e macroalgas so os principais competidores por espao (ERLANDSSON et alli, 2005). Bivalvos frequentemente so predados por equinodermos (NORBERG; TEDENGREN, 1995), peixes, polvos e platelmintos (OCONNOR; NEWMANN, 2003). Outro importante predador so os moluscos gastrpodos Thais haemastoma e Cymatium parthenopeum principalmente em cultivos de mexilhes (FERREIRA; MASGALHES, 2004).

2.1.4.1 Perna perna (Linnaeus 1758) O gnero Perna (Philipsson 1788) possui apenas trs espcies, todas amplamente utilizadas na alimentao humana, quer extradas de bancos naturais ou cultivadas: P. perna (no oceano Atlntico), P. viridis (Indopacfico) e P. cannaliculus (Nova Zelndia). Uma quarta espcie P. picta demonstrou, quando submetida anlise filogentica, ser uma variao intraespecfica de P. perna e no uma espcie distinta (WOOD et alli, 2007).

Figura 07. Distribuio geogrfica de mexilhes do gnero Perna. Extrada de WOOD et alli, 2007. Setas indicam local de amostragem do trabalho referenciado.

o mitildeo que atinge o maior tamanho no litoral brasileiro, o maior espcime relatado foi encontrado no litoral de Santa Catarina e media 18,2cm de comprimento, as demais espcies do gnero medem de 10-15cm. Mitildeos podem viver at 9 anos em ambientes naturais, mas aps o sexto ano a taxa de crescimento reduz-se drasticamente e aumenta o percentual de mortalidade (SUKHOTIN; PRTNER, 2001). Encontra-se amplamente distribudo no Oceano Atlntico sul, nas costas da frica Ocidental (penetrando um pouco ao sul do Mar Mediterrneo) e leste da Amrica do Sul. Fixa-se exclusivamente em substratos duros, naturais ou no, horizontais ou levemente inclinados em rea sujeita moderada ao hidrodinmica. Ocorre desde a regio do mdiolitoral at a isbata de 10 metros. Por ser bem adaptado para sobreviver s oscilaes da mar (suas valvas fechadas retm gua com oxignio suficiente at a subida da mar), forma populaes muito densas nessa regio, com at 20000 animais.m2 (FERREIRA; MAGALHES, 2004). Devido, via de regra, ser abundante P. perna considerada uma espcie importante na riqueza de comunidades bentnicas, pois atua modificando a natureza e a complexidade do substrato. Sua abundncia apresentou correlao positiva com a riqueza de macrofauna bentnica, conforme relatado por Borthagaray; Carranza (2007). Considera-se P. perna como organismo euribionte: tolera salinidade com amplitudes de 19 49 e temperaturas de 5-30C. Porm, o timo para seu desenvolvimento encontra-se entre 34-36 de salinidade e 21-28C de temperatura. Em experimentos laboratoriais (inteiramente controlados) Resgalla-Jr. et alli (2007) testaram a influncia de variveis biticas e abiticas na fisioecologia de para P. perna. Concluram que o principal fator a afetar diretamente a capacidade respiratria foi a temperatura e para a eficincia na absoro de alimento foi a concentrao de seston (total de material orgnico particulado vivo e no vivo). Dessa forma as menores taxas de crescimento

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foram encontradas no vero, onde ocorria grande desgaste metablico devido s temperaturas mais altas. 2.1.4.2 Crassostrea gigas (Thunberg 1793) (FAO, 2008) Espcie nativa da regio do oceano Pacfico, que atualmente apresenta ampla distribuio geogrfica (Figura 08). Em ambiente natural pode ser encontrada da regio intertidal 40 metros de profundidade, preferencialmente cimentada em substratos consolidados (rochas ou sobre outros bivalvos). Foi introduzida na costa oeste da Amrica do Norte (do Alaska Califrnia), na Europa e tambm na Amrica do Sul (Brasil, Equador, Argentina, Chile). Por seu crescimento rpido era a espcie de ostra eleita para cultivo quando uma espcie nativa apresentava declnio na produo; por exemplo, na costa da Frana veio substituir a produo da nativa Ostrea edulis, dizimada por doenas (POLI, 2004).

Figura 08. Distribuio geogrfica da ostra Crassostrea gigas. Adaptado de documento da Internet FAO (2008) e disponvel em http://www.fao.org/fis hery/culturedspecies/Cgigas/en

Apresentam comprimento mdio de 8-15cm, com tamanho mximo de 30cm. A espcie apresenta grande plasticidade ambiental, tornando possvel seu cultivo em diversos ambientes. Seu cultivo secular originou-se no Japo e comeou a se espalhar na dcada de 20 (Amrica do Norte) e 60 (Europa). As condies timas para seu desenvolvimento encontram-se entre 20-25 de salinidade e 15-22C de temperatura. Pode atingir o tamanho comercial entre 18-30 meses de cultivo, dependendo da disponibilidade de alimento da regio. 2.1.4.3 Nodipecten nodosus (Linnaeus 1758) Dentre as espcies de bivalvos cultivados as vieiras so as que atingem maiores preos no mercado (aproximadamente U$$ 2 bilhes gerados em 2004), embora em volume de produo apresentem menor expresso, 12 famlia mais cultivada (FAO, 2006). As espcies mais cultivadas so: Argopecten irradians, A. purpuratus, Patinopecten yessoensis e Pecten maximus. No Brasil cultiva-se a espcie nativa Nodipecten n odosus, que endmica do Oceano Atlntico e ocorre do mar do Caribe at o litoral de Santa Catarina (MINCHIN, 2003). Rupp e Parsons (2004) relatam que a espcie moderadamente euritrmica (suporta entre 16-28C) e estenoalina, no suportando salinidades inferiores 30. O indivduo adulto menos tolerante s variaes de temperatura e salinidade que as larvas e juvenis.

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Pode ser encontrada de 10-100 metros de profundidade habitando substratos consolidados. Atinge comprimento mximo de 15cm, sendo o tamanho comercial de 5-6cm. Essa espcie no suporta uma atividade extrativa intensa, pois naturalmente no forma populaes numerosas. Em funo dessa caracterstica biolgica houve a necessidade de realizar a reproduo da espcie em laboratrio (larvicultura), com desenvolvimento de tecnologia para produo em massa de sementes, e assim suprir a demanda por estes animais em cultivo (VELASCO et alli, 2007). N. nodosus reproduz-se naturalmente uma vez ao ano (geralmente entre outubro e maro), atingindo a maturidade sexual aos 6 meses. Mas, para a produo de sementes em escala industrial h a necessidade de induzir a desova: por temperatura, estresse fsico ou com uso de hormnios (VELASCO; BARROS, 2007). Em laboratrio as matrizes (animais adultos maturos sexualmente, mas com gnadas vazias) so submetidos gradual elevao na temperatura e recebem alimentao rica em cidos graxos (composio de variadas microalgas ou microalgas mais emulso). Sob essas condies o animal pode tornar-se maturo em 77 dias. No entanto em ambiente natural o desenvolvimento gonadal acontece mais rapidamente, embora as condies nutricionais sejam adversas (VELASCO; BARROS, op cit.). Tal fato aparentemente contraditrio, uma vez que a formao de gametas requer gasto energtico. Porm N. nodosus apresenta a capacidade de utilizar estoques energticos localizados em sua glndula digestiva e em seu msculo adutor, redirecionando as substncias de reserva (carboidratos) para a gametognese (LODEIROS et alli, 2001). No litoral do Rio de Janeiro a espcie teve sua populao extremamente reduzida, devido captura indiscriminada. Atualmente o Projeto POMAR, do Instituto de Ecodesenvolvimento da Baa de Ilha Grande, alm de produzir sementes para a maricultura, abastecendo vrios estados brasileiros, tambm atua no repovoamento de N. nodosus no litoral sul- fluminense (ZAGANELLI comunicao pessoal1 ). O projeto POMAR tambm desempenha a importante funo de fomento pesquisa ao doar sementes para experimentos, por exemplo, para o laboratrio ToxMar da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. 2.1.5 Uso de bivalvos como bioindicadores ambientais e sanitrios Vrias caractersticas so necessrias em um organismo para permitir seu uso como bioindicador: ser sssil e apresentar ampla distribuio (BARRACCO; DA SILVA, 2008), ser abundante na regio estudada e ser capaz de bioacumular o toxicante em questo (SHEEHAM; POWER, 1999), alm de no ser sensvel aos efeitos agudos da substncia que se quer estudar. Seu hbito filtrador faz com que bivalvos sejam excelentes bioindicadores, ou organismos sentinelas, para a presena de patgenos ou de substncias txicas (em fase dissolvida ou adsorvida em partculas orgnicas) presentes na coluna dgua (DUCHEMIN et alli, 2008). Mexilhes, por exemplo, podem bioacumular em sua massa corprea tais substncias e micropatgenos de 100 1000 vezes a concentrao presente na gua de cultivo (SHEEHAM; POWER op cit. FERREIRA; MAGALHES, 2004). Por exemplo, bactrias colonizam MOP e a se multiplicam; alm disso, a constituio bioqumica dos tecidos dos moluscos atua como um verdadeiro meio de cultura apresentando substratos necessrios ao desenvolvimento microbiano. Na utilizao de moluscos como bioindicadores tanto se pode utilizar o animal como um todo (massa corprea) ou um determinado tecido ou rgo. Por exemplo, para a deteco de toxinas paralisantes utiliza-se toda a massa corprea do animal e para toxinas diarricas apenas a glndula digestiva (VAN EGMOND et alii, 2004). Essa escolha deve ser realizada
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Jos Luiz Zaganelli. Coordenador do projeto POMAR (Instituto de Ecodesenvolvimento da Baa de Ilha Grande). Em 06 de outubro de 2008.

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em funo da composio bioqumica do tecido do animal e das caractersticas fsicoqumicas da substncia que se quer detectar, principalmente a solubilidade do toxicante em questo (AZEVEDO; LIMA, 2003): substncias lipossolveis bioacumulam-se principalmente em glndula digestiva e gnadas e as hidrossolveis por todos os tecidos. A composio bioqumica dos tecidos do animal varia principalmente segundo a disponibilidade de alimento e a poca do ano (por causa da temperatura). Mesmo assim a glndula digestiva o rgo com maior percentual de lipdeos, seguido pelas gnadas; os maiores percentuais de protenas encontram-se no tecido muscular. As gnadas apresentam maior variao sazonal na sua composio bioqumica, em funo do ciclo reprodutivo dos animais. J os tecidos musculares no apresentam variao, sempre mantendo altos percentuais de protenas. Porm N. nodosus apresenta estoque de carboidratos no msculo adutor no perodo que antecede a gametognese (LODEIROS et alli, 2001). Realiza-se a escolha do tecido para anlise do toxicante em funo das caractersticas da toxicocintica da substncia em questo no animal. Por exemplo, Yap et alli (2006) recomendam a utilizao do estilete cristalino de mitildeos para o estudo da concentrao de cobre e chumbo, uma vez que estes metais possuem alta afinidade por esse rgo. J para o zinco no houve diferena na concentrao para os diferentes tecidos em P. viridis. No caso das ficotoxinas as lipossolveis (toxinas diarricas, neurotxicas, azaspircidas e ciguatricas) apresentam maior afinidade por tecidos com maiores percentuais lipdicos: glndula digestiva e gnadas. As hidrossolveis (toxinas paralisantes e amnsicas) podero estar presentes em todos os tecidos (VAN EGMOND et alii, 2004). Em experimento com vieiras (Argopecten irradians), alimentados com cepas toxgenas de Prorocentrum lima, o AO foi a principal toxina produzida e 76% do total das toxinas diarricas presentes foram encontradas na glndula digestiva do molusco (BAUDER et alli, 1996), certificando assim o uso deste rgo para o processo de extrao da toxina. Tambm para o mexilho Mytilus galloprovincialis as toxinas diarricas cido okadaico e dinophysistoxina-1 no apresentaram acmulo significativos em tecidos no viscerais (BLANCO et alli, 2007a). Para as espcies de bivalvos nativas (P. perna e N. nodosus) ainda no h dados disponveis acerca da toxicocintica de ficotoxinas. A bioacumulao da ficotoxina cido okadaico em diferentes moluscos bivalvos e em outros organismos filtradores (como ascdeas e poliquetos) foi estudada por Reizoupoulou et alli (2008) durante dois surtos de DSP na Grcia. Foi reiterado que mitildeos apresentam maior taxa de bioacumulao do AO, frente outras espcies de bivalvos, ratificando sua utilizao como bioindicador desta ficotoxina. Em relao s toxinas diarricas em moluscos outros fatores deve m ser levados em considerao: mecanismos naturais de biotransformao, que tanto podem reduzir (detoxificao) ou aumentar a toxicidade de uma substncia. A ao de enzimas digestivas em muitas espcies de molusco ao invs de inativarem o cido okadaico e as dinophysistoxinas 1 e 2 acabam por biotransform- las em uma outra toxina, a dinophysistoxina-3. Por exemplo, na vieira Patinopecten yessoensis e no mexilho Mytilus galloprovincialis foi detectada a presena de DTX-3 durante uma florao de Dinophysis fortii que expressava apenas a produo de DTX-1 (SUZUKI; MITSUYA, 2001). Tal ficotoxina at o presente momento no foi detectada em amostra de fitoplncton e o mecanismo de sua biossntese j foi parcialmente elucidado (FAO, 2004). A distribuio anatmica das ficotoxinas nos diferentes tecidos/rgos dos bivalvos tambm apresenta implicao direta na capacidade de depurao apresentada pelos animais. Toxinas bioacumuladas na glndula digestiva so mais facilmente eliminadas que as encontradas nos demais tecidos, por exemplo, como encontrado por Suzuki et alli (2005) para diferentes toxinas diarricas na vieira Patinopecten yessoensis.

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Dessa forma o conhecimento da cintica das ficotoxinas nas diferentes espcies de bivalvos e tambm nas espcies fitoplanctnicas potencialmente txicas (e suas variaes espaciais e temporais) perfaz o conjunto mnimo de informaes necessrias para avaliar a qualidade higinico-sanitrias dos bivalvos, sob a perspectiva das ficotoxinas. A Comisso Oceanogrfica Intergovernamental ( OI/UNESCO) recomenda considerar como altamente C perigoso sade pblica o consumo de bivalvos extrados ou produzidos de reas sem o devido monitoramento sanitrio (REGUERA, 2002). 2.2 Malacocultura O crescimento de moluscos bivalvos reflexo de um balano entre o ganho de energia atravs da alimentao e seu gasto (metabolismo interno ). Quando esse balano tende ao crescimento ( positivo) a energia empregada no crescimento somtico (formao de massa corprea) e posteriormente na maturao gonadal (gametognese). Tal situao ocorre quando o animal encontra-se em um contexto ambiental equilibrado, onde variveis abiticas (principalmente a temperatura) e biticas (quantidade e qualidade do alimento) encontram-se dentro do timo para o desenvolvimento do molusco. Em situaes ambientais adversas o gasto metablico reduz drasticamente as taxas de crescimento (RESGALLA-JR et alli, 2007). Dessa forma para otimizar o crescimento e ganho de peso do animal deve-se atentar para a correta escolha do local onde se instalar o cultivo e da espcie a ser criada, o tipo de estrutura a ser utilizado e a densidade correta de animais, respeitando a capacidade de suporte do ambiente (LAING; SPENCER, 1997). Bivalvos podem ser cultivados em sistemas suspensos (principalmente espinhel ou balsa), que garantem melhor acesso ao alimento disponvel na coluna dgua, ou em estruturas sobre o fundo marinho (MENDOZA et alli, 2003). No Brasil emprega-se principalmente o sistema de espinhel, onde mexilhes so dispostos em cordas e vieiras e ostras em lanternas (Figura 09). A) B)

C)

Figura 09. Fazenda Marinha da Associao de Maricultores de Mangaratiba, RJ. A) Sistema de cultivo suspenso, denominado espinhel, em vista panormica. Bombonas brancas e azuis constituem o sistema de flutuao do espinhel. Ao longo do cabo mestre (submerso assinalado com seta) ficam dispostas as cordas de mexilhes (B) e as lanternas com vieiras e ostras (C). Fotos da autora, exceto item c) FIPERJ.

O aproveitamento da carne dos animais varia segundo a espcie e as exigncias do mercado consumidor. Mexilhes e ostras geralmente so consumidos inteiros enquanto que 14

das vieiras consomem-se apenas o msculo adutor ou este acompanhado das gnadas (FAO, 2006). O peso da massa corprea de bivalvo s altamente influenciado pela maturao gonadal: da a importncia de conhecer os perodos de desova para retirar os animais antes que liberem seus gametas, maximizando assim a produtividade da fazenda marinha. Essa variao na massa corprea pode ser mensurada atravs do clculo do ndice de Condio, que modulado pelo ciclo reprodutivo dos animais (LI et alli, 2008; ORBAN t alli, 2002; LODEIROS et alli, 2001;). Na ltima reviso realizada pela Organizao para Alimentos e Agricultura da UNESCO -Food and Agriculture Organization- acerca do estado da arte da aquicultura mundial (FAO, 2006a) moluscos bivalvos ocupavam a terceira colocao tanto no volume de produo (com 22,31% dos 60 milhes de toneladas produzidos) quanto no de valores gerados pela aquicultura (14,18% dos U$$ 70 bilhes) considerando-se os grandes grupos de organismos cultivados (Figura 10). Segundo o banco de dados estatsticos pesqueiros e aqucolas da FAO (2008) as espcies mais cultivadas so a ostra do Pacfico (Crassostrea gigas), mexilhes (principalmente Mytilus edulis) e pectindeos (principalmante Patinopecten yessoensis). A China o maior produtor mundial de moluscos bivalvos. A FAO realiza regularmente relatrios sobre a pesca e a aquicultura no mundo, revelando que a cultura de ostras continua apresentando tendncia de crescimento (3,1%, no perodo de 2002 para 2004), o mesmo para produo de mexilhes (4,6% de crescimento para o mesmo perodo). Somente o cultivo de vieiras apresentou decrscimo na produo de 2,6% (FAO, 2006b). A) B)

Figura 10. Percentual dos grandes grupos da produo aqcola mundial. A) Por quantidade, dos 60 milhes de toneladas produzidos; B) Por valor, dos U$$ 70 bilhes gerados. Modificado de FAO, 2006a.

Mitilicultura outra denominao empregada ao cultivo de mexilhes. Conforme supracitado a China o maior produtor mundial de mexilhes (M. edulis e Perna viridis). No entanto para P. perna o Brasil o maior produtor, sendo a espcie tambm cultivada na Venezuela. Os demais integrantes do gnero Perna so cultivados na Nova Zelndia (P. canaliculus) e em pases do sudeste asitico (P. viridis) (FERREIRA; MAGALHES, 2004). A mitilicultura como atividade comercial iniciou-se em Santa Catarina, na dcada de 90 (DIEGUES, 2006). E em 1995 no litoral sul do Rio de Janeiro em escala experimental na baa

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de Ilha Grande (BASTOS et alli). Atualmente Santa Catarina o maior produtor nacional, seguido por So Paulo, Esprito Santo e Rio de Janeiro (IBAMA, 2008). O cultivo de pectindeos tambm recebe o nome de pectinicultura. A espcie mais cultivada Patinopecten yessoensis, seguida por Argopecten irradians (Na China e EUA), A. purpuratus e Pecten maximus (na Europa, segundo Le Pennec et alli, 2003). Porm, na Amrica Latina e Caribe a espcie mais cultivada Nodipecten nodosus. No Brasil, produzindo em escala comercial temos o Rio de Janeiro como primeiro produtor nacional de vieiras (ARAJO, 2007), seguido por Santa Catarina (ALBUQUERQUE; FERREIRA, 2006). Os animais so criados principalmente em estruturas chamadas gaiolas (Figura 09, item C), cujo tamanho de malha e densidade de animais por piso variam segundo o tamanho do animal. Na Venezuela, em cultivo experimental, temos N. nodosus e Pecten ziczac (VELEZ et alli, 1995; LODEIROS et alli, 1998) e na Colmbia juntamente com A. nucleus (VELASCO, 2007). No Brasil ainda existem mais duas espcies com potencial para cultivo: P. ziczac e Mimachlamys spp. Cujo processo de produo de seme ntes (larvicultura) encontra-se em desenvolvimento na Universidade Federal de Santa Catarina e no IEDBIG/RJ. 2.3. Ficotoxinas Diarricas 2.3.1 Ficotoxinas: produtos naturais marinhos O fitoplncton composto, aproximadamente, por mais de 15000 espcies, entre diatomceas, dinoflagelados, clorofceas, cocolitofordeos, criptofceas e silicoflagelados segundo GUILLARD; KILHAM (1997) apud STOERMER ; IMOL (1999), VAULOT (2001) e BONECKER et alli, (2002). No ambiente marinho h relatos de cerca de 5000 espcies de microalgas, cerca de 300 so capazes de produzir floraes intensas (DARANAS et alli, 2001), mas apenas 89 encontram-se listadas como potencialmente nocivas pela COI/UNESCO (MOESTRUP, 2004). Destas microalgas potencialmente nocivas 13 espcies pertencem ao gnero Prorocentrum (ELBRCHTER; FAUST, 2004) e 11 ao gnero Dinophysis (ZINGONE, 2004), envolvidos na produo de toxinas diarricas e/ou ictiotoxinas (Quadro 01). Recentemente foi relatada a expresso do potencial toxgeno de mais uma espcie da ordem Dinophysiales: Dinophysis ovum, ainda no includa na lista da Comisso Oceanogrfica Intergovernamental (RAHO et alli, 2008). O principal efeito nocivo apresentado por essas microalgas o seu potencial para a produo de substncias biologicamente ativas (MOESTRUP, 2004). Tais substncias so denominadas ficotoxinas, quando exercem seu efeito txico em humanos, principalmente, e demais mamferos, e ictiotoxinas quando seu efeito nocivo atua sobre peixes e invertebrados marinhos (DARANAS et alli, 2001). Portanto tais toxinas so consideradas como produtos naturais marinhos (BLUNDEN, 2001). As ficotoxinas no desempenham nenhuma funo vital para o organismo que a produz. So molculas orgnicas complexas, de alto peso molecular e sua sntese requer ga sto energtico. Por vrios anos pesquisadores questionaram esse aparente paradoxo: por que gastar energia em algo que no essencial ao metabolismo celular? Descobriu-se que sua sntese ocorre por um desvio de uma rota metablica primria ou por uma via r lquia, e caracterizando-as como um metablito secundrio (CEMBELLA; WRIGHT, 1996). Vrias hipteses foram formuladas para explicar a produo de compostos to complexos e de sntese intrincada. Essas substncias poderiam atuar funcionalmente como defesa qumica (alelopatia), reserva intracelular de nutrientes, induo de reproduo sexuada, proteo contra herbivoria, apresentando assim uma funo ecolgica (GEOHAB, 1998). Legrand et alli (2003) revisaram a definio e funo da alelopatia no contexto marinho e formularam hiptese de sua aplicabilidade para organismos fitoplanctnicos, uma 16

vez que para plantas terrestres a alelopatia compreendida e amplamente documentada. No ambiente marinho a alelopatia tem sido considerada como uma adaptao evolucion ria, um mecanismo para obteno de vantagens na competio por recursos entre organismos fitoplanctnicos. Foram citadas como principais consequncias da ao de alelopticos na comunidade fitoplanctnica a inibio da fotossntese, reduo nas taxas de crescimento, inibio da herbivoria e induo da formao de cistos de resistncia. Por exemplo, a ficotoxina diarrica cido okadaico apresentou a capacidade de inibir o crescimento da diatomcea Thalassiosira weissflogii (uma competidora por nutrientes), em situao experimental (WINDUST et alli, 1997; HU et alli, 1999; HAY; KUBANEK, 2002). Assim como o AO a dinophysistoxina-1 tambm apresentou a capacidade de inibir o crescimento de T. weissflogii, Dunalliela salina, D. tertiolecta e Amphydinium carterae (WINDUST et alli, 1996). Compostos alelopticos produzidos pelo dinoflagelado Karenia breve (potencial produtor de toxinas neurotxicas) durante florao inibiram o crescimento das espcies acompanhantes Prorocentrum minimum, Asterionelopsis glaciallis e Skeletonema costatum seus competidores em ambiente natural (PRINCE; MYERS, 2008). Em experimento realizado com Alexandrium tamarense (produtor de toxinas paralisantes), T. weissflogii e Rhodomonas spp., mesmo na ausncia da produo de toxinas paralisantes, as clulas da diatomcea e da criptofcea sofreram lise indicando a produo de exudatos alelopticos por A. tamarense (FISTAROL et alli, 2004).
Quadro 01. Lista das microalgas potencialmente txicas envolvidas no Envenenamento Diarrico por Moluscos e suas substncias bioativas. AO: cido okadaico; DTXs: dinophysistoxinas; PTXs: pectenotoxinas.
Microalga P. arabianum P. arenarium P. belizeanum P. borbonicum P. cassubicum P. concavum P. emarginatum P. faustiae P. hoffmannianum P. lima P. maculosum P. mexicanum P. minimum P. rhathymum Efeito nocivo Prorocentrum citotoxinas 1, DSP DSP Provavelmente neurotoxinas 1,3,6, DSP? ?1, Hemolisina1, DSP DSP e toxinas de ao rpida1, DSP e Ciguatera, toxinas de ao rpida1, DSP e Toxina de ao rpida1, Hemolisinas 15 Txica para artemia, moluscos e ratos1, Neurotoxina?12 Hemolisinas e toxinas solveis em metanol3, Dinophysis DSP DSP DSP DSP DSP DSP DSP DSP DSP DSP DSP DSP Toxina diarrica AO1, 13, 1 AO , DTX-5c4, ?1, ?1, AO e DTX-11, AO1, AO e DTX-13, DTX-15, AO, DTX-1 e DTX-27, DTX-48, AO1, DTX-48, AO1, DTX-1, PTX-29, 10, 16, AO, DTX-1 e DTX-21, PTX-29, AO e PTX-21, AO e DTX-111, AO, DTX-1 e DTX-21, PTX-214, AO e DTX-11, 11, DTX-11, AO2, AO e DTX-11, AO1, DTX-11, AO1, DTX-11, Ictiotoxina sim1, -

D. acuminata D. acuta D. caudata D. fortii D. miles D. mitra D. ovum D. norvegica D. rapa D. rotundata D. sacculus D. tripos
1-

MOESTRUP, 2004; 2- RAHO et alli, 2008; 3- ALIZIJAKI et alli, 2008; 4- PAZ et alli, 2007; 5 NASCIMENTO et alli, 2005; 6 HAGE et alli, 2002; 7- BRAVO et alli, 2001; 8- MOROO et alli, 2003; 9- MACKENZI et alli, 2005; 10 BLANCO et alli, 2007b; 11- MARASIGAN et alli, 2001; 12 - DENARDOU-QUENEHERVE et alli, 1999; 13 TEN-HAGE et alii, 2000; 14 - DRASCI et alli, 1996; 15 NAVES et alii, 2006, 16 KAMIYAMA; SUZIKI, 2009;

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O perfil de produo de ficotoxinas, bem como a concentrao intracelular no citoplasma da microalga, espcie especfico (MOROO et alli, 2003). Uma mesma ficotoxina pode ser produzida por diferentes espcies (Quadro 01) e uma mesma espcie pode produzir uma sute de diferentes ficotoxinas. Embora essa variabilidade possa ser observada temporal e espacialmente a proporo entre as toxinas produzidas por uma espcie em um mesmo local parece permanecer constante (MACKENZIE et alli, 2005). Por exemplo, na costa portuguesa Dinophysis acuta produz AO e DTX-2 na proporo de 60:40 (VALE, 2006). No entanto na Nova Zelndia D. acuta produz apenas PTX-2 (PUENTE et alii, 2004; MACKENZIE et alii op cit.). Portanto para avaliar o risco da ocorrncia de intoxicaes diarricas alm de identificar as espcies potencialmente txicas presentes e quantific- las tambm fundamental conhecer o perfil toxgeno de cada espcie de microalga: toxinas produzidas, sua proporo, bem como variabilidade espacial e temporal. Segundo Lindhal et alii (2007) em anlises de perfis txicos para D. acuta e D. acuminata na costa da Sucia, verificou-se que mexilhes apresentaram concentraes suficientes para produzir casos de DSP tanto quando se alimentaram de 1500 clulas de baixo potencial toxgeno, quanto de apenas 100 clulas com altas concentraes intracelulares de toxinas. Por exemplo, na baa de Sepetiba a ficotoxina diarrica cido okadaico foi detectada em baixas concentraes (na ordem de poucos nanogramas. grama de glndula digestiva -1 ) em diferentes situaes sugerindo um perfil constante de produo desta ficotoxina ao longo do tempo (OLIVEIRA et alli, 2005; FERREIRA, 2004). No entanto em um ambiente adjacente, na baa de Ilha Grande, a mesma ficotoxina apresentou grande variabilidade: da ordem de nanogramas de AO no outono de 2004 microgramas na primavera e vero de 2006/2007 (LOURENO et alli, 2007; MARIN, 2007). Nas duas situaes associou-se a produo da ficotoxina AO mesma espcie de dinoflagelado: Dinophysis acuminata. Essa espcie apresenta a ficotoxina cido okadaico como sua principal toxina diarrica em vrias partes de mundo, embora tambm possa produzir outras toxinas diarricas. As espcies de microalgas produtoras de ficotoxinas so denominadas potencialmente txicas porque podem no expressar sua capacidade toxgena em determinadas circunstncias. Ou seja, a simples presena da microalga potencialmente txica no significa presena obrigatria da(s) toxina(s) ela atribuda(s). A expresso do potencial toxgeno pode ser afetado por fatores biticos e/ou abiticos resultando em uma grande variabilidade intraespecfica. Por exemplo, Jhoansson et alli (1996) encontraram para D. acuminata aumento na produo de cido okadaico, em condies de limitao de nutrientes. Em situao limitante por nitrognio, o aumento da produo pode ser at seis vezes maior que em condies normais, onde a relao nitrognio:fsforo esteja balanceada (16:1). Comportamento similar apresenta Prorocentrum lima, indicando maior potencial para produo de toxinas em resposta ao estresse ambiental (GRANLI et alli, 1998). Tal variabilidade acaba por refletir-se em diferentes concentraes das toxinas nos moluscos. Muito se tem discutido acerca do aumento na frequncia e na intensidade de episdios associados microalgas nocivas. Vrios fatores j foram apontados como hipteses ao s incremento: aumento no esforo de pesquisa, disseminao das microalgas ou seus cistos via maricultura ou gua de lastro (hipteses de emigrao), favorecimento das espcies toxgenas devido eutrofizao cultural e mudanas climticas globais (hiptese da mudana ambiental) (HALLEGRAEF, 1993; SMAYDA, 2002). Mais de uma dcada de pesquisa e as hipteses foram sendo confirmadas. Smayda (2007) discute o paradigma da introduo de microalgas nocivas via gua de lastro (tambm por organismos utilizados na maricultura): ciclos naturais de expanso das microalgas, ritmos de floraes, problemas metodolgicos de amostragem, mudanas ambientais que favoream 18

o estabelecimento da microalga e posterior florao, entre outros. Cita diversos exemplos, como da introduo de dinoflagelados txicos associados entrada de ostras perlferas na Europa, introduo de cistos de Gymnodinium catenatum na Tasmnia via gua de lastro. Mas salienta a importncia de utilizar determinados critrios para verificar se uma espcie realmente foi introduzida acidentalmente ou se era uma espcie crptica na comunidade fitoplanctnica local. Denomina-se eutrofizao cultural a alterao no balano de nutrientes em guas costeiras mediado por ao antrpica. Esse desequilbrio inicialmente leva alteraes na composio da comunidade fitoplanctnica, e suas consequncias nocivas extendem-se ao longo de toda a teia trfica marinha. Atualmente h um consenso na comunidade cientfica acerca de seu papel na promoo e manuteno de floraes de algas nocivas, ao atuar como agente de desequilbrio no ambiente natural e levado ao favorecimento das microalgas mais rsticas e/ou mais aptas a sobreviverem nestas condies de degradao da qualidade da gua do mar (HEISLER et alli, 2008). Alm disso, Granli et alli (2008) reiteram que o fenmeno da eutrofizao cultural favorece a produo de substncias alelopticas/txicas como mecanismo para obteno de vantagens competitivas em um ambiente em desequilbrio. Na ltima dcada se pode observar, ao longo de regies costeiras em todo o mundo, eventos de FANs mais intensos, duradouros, com maior nmero de espcies txicas envolvidas levando a expressivos prejuzos ecolgicos e econmicos. Em funo dos sintomas causados em humanos as ficotoxinas marinhas so agrupadas basicamente em seis tipos de sndromes: a) Envenenamento Paralisante por Moluscos (Paralytic Shellfish Poisoning, PSP), com toxinas hidrossolveis (principalmente saxitoxinas STXs) produzidas por dinoflagelados por Alexandrium spp., Gymnodinium catenatum e Pyrodinium bahamense variedade compressum, apresenta casos fatais ; b) Envenenamento Diarrico por Moluscos (Diarrhetic Shellfish Poisoning, DSP), com toxinas lipossolveis (principalmente ocadaiatos AO e DTXs) produzidas por Prorocentrum spp. e Dinophysis spp.; c) Envenenamento Neurotxico por Moluscos (Neurotoxic Shellfish Poisoning, NSP), com toxinas lipossolveis (principalmente brevetoxinas PbTXs), produzidas pelo dinoflagelado Karenia breve; d) Envenenamento Amnsico por Moluscos (Amnesic Shellfish Poisoning, ASP), com toxinas hid rossolveis (principalmente cido domico AD) produzido por diatomceas Nitzschia spp. e Pseudo-nitzschia spp., pode apresentar casos fatais; e) Envenenamento Ciguatrico por Peixes (Ciguatera Fish Poisoning, CFP), toxinas lipossolveis (principalmente ciguatoxinas CTXs) produzidas pelos dinoflagelados epibentnicos Gambierdiscus toxicus, Prorocentrum spp., Ostreopsis spp. e Coolia spp. tambm apresentando quadro de fatalidade e f) Envenenamento Azaspircido (Azaspiracid Poisoning, AZP), com toxinas lipossolveis (AZAs) produzidas pelo dinoflagelado Protoperidinium compressum (DARANAS et alli, 2001; VAN EGMOND et alii, 2004). As sndromes de envenenamento por moluscos apresentam dois tipos bsicos de distrbios: neurolgicos (PSP e ASP segundo Cembella, 1996 e Bates, 1996) e gastrointestinais (DSP, Ciguatera e AZP segundo Cembella e Wright, 1996). No entanto, a sndrome NSP e Ciguatera apresentam os dois tipos de distrbio (DARANAS op cit.). Em comum as sndromes que apresentam sintomas gastrointestinais possuem ficotoxinas com estrutura qumica de cido graxo politer, que podem ser molculas lineares (cido okadaico e dinophysistoxinas), macrocclicas (pectenotoxinas) ou fusionadas (yessotoxinas, brevetoxinas e ciguatoxinas) (CEMBELLA ;WRIGHT, 1996). As toxinas que apresentam distrbios puramente neurolgicos tm constituio bioqumica protica, onde saxitoxinas e cido domico so estruturalmente semelhantes ao cido canico, atuando diretamente sobre fibras musculares e neurnios, respectivamente (VAN EGMOND et alii, 2004).

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Atualmente tem sido discutida uma nova forma de classificao para as ficotoxinas: em funo de sua estrutura qumica. Pesquisadores que participam como consultores do Codex Alimentarius argumentam que essa classificao operaciona lmente mais apropriada por questes analticas ligadas ao desenvolvimento de padres para o Codex. Dessa forma as ficotoxinas seriam agrupadas em: grupo dos azaspircidos (AZA), grupo das brevetoxinas, grupo dos ocadaiatos, grupo do cido domico, grupo das saxitoxinas, grupo das pectenotoxinas, grupo das yessotoxinas, grupo das iminas ciclicas (TOYOFUKU, 2006). A primeira etapa para a avaliao do risco representado pelas ficotoxinas diarricas a identificao do perigo, que comea ao se identificar as e spcies potencialmente txicas presentes nas reas de maricultura. E deve prosseguir com o estudo do comportamento destas espcies em suas variaes temporais e espaciais (FERREIRA et alii, 2008). 2.3.2 Ocadaiatos A ficotoxina diarrica mais amplamente distribuda e estudada o cido okadaico. a principal toxina promotora do EDM. Sua constituio bioqumica a de um cido graxo, politer de cadeia linear (Figura 11, item A), com peso molecular de 804,4661 e frmula C44 H71O13 (QUILLIAM ;WRIGHT, 1995). A)

B)

C)

Figura 11. Toxinas lipossolveis envolvidas no Envenenamento Diarrico por Moluscos. A) Ocadaiatos; B) Pectenotoxinas e C) Yessotoxinas. Adaptado de SUZUKI et alli, 2005.

As toxinas lipoflicas associadas ao Envenenamento Diarrico por Moluscos compreendem a famlia dos ocadaiatos (cido okadaico e dinophysistoxinas), as pectenotoxinas e as yessotoxinas (DARANAS et alli, 2001; VAN EGMOND et alii, 2004; SUZUKI et alli, 2005). Em comum possuem os organismos produtores (Principalmente 20

Dinophysis) e a composio bioqumica (cidos graxos). No entanto, os modos de ao destas ficotoxinas so dspares: ocadaiatos desencadeiam uma sintomatologia estritamente diarrica enquanto pectenotoxinas e yessotoxinas atuam sobre a fisiologia heptica (BURGUESS; SHAW, 2001; VAN EGMOND et alii, 2004). Atualmente recomenda-se que as yessotoxinas e pectenotoxinas sejam reclassificadas parte, como hepatotoxinas em no como toxinas diarricas. Variando-se os trs radicais encontrados na molcula do AO (com hidrognio e metil) obtm-se as toxinas derivadas: as dinophysistoxinas 1 e 2. Que diferem apenas em propriedades qumicas (peso molecular, tempo de reteno), mas no no modo de ao txico (VAN EGMOND et alii, 2004). Para obter-se o derivado DTX-3 a molcula do AO sofre adio de um radical acyl no stio 1 (VALE; SAMPAYO, 2002a). Todos os ocadaiatos so termoestveis, cido-base resistentes (no so inativados pelo pH cido da barreira estomacal, nem alcalino do intestino) (VAN EGMOND et alii, 2004). O cozimento de moluscos apenas apresenta o efeito de concentrar as toxinas presentes devido a perda de gua que a carne do molusco sofre durante a coco. Outro efeito do cozimento redistribuio das toxinas nos tecidos do animal: na carne fresca concentrava-se na glndula digestiva e na carne cozida foi redistribuda nos demais tecidos, permanecendo apenas 9% de toxina na glndula digestiva do mexilho M. edulis. As toxinas somente foram inativadas em altas temperaturas, acima de 130C, significando que este tipo de processamento no vivel como depurao para toxinas diarricas. Pois, moluscos sub metidos a essas temperaturas tornam-se impalatveis e perdem seu valor nutricional (MACCARON et alii, 2008). Toxinas homlogas ao cido okadaico (DTX-1,2) podem ser biotransformadas em DTX-3, por a o enzimtica na glndula digestiva de moluscos. A converso d-se por acilao e esses compostos acumulam-se preferencialmente em vieiras. Esse tipo de toxina diarrica metabolisada (DTX-3) predomina no Japo, derivada da ficotoxina DTX-1 produzida por Dinophysis fortii (VALE; SAMPAYO, 2002a). Em mexilhes h predominncia da presena de ocadaiatos em sua forma livre (MOROO et alii, 2003). H relatos demonstrando que a vieira Patinopecten yessoensis (SUZUKI et alli, 1999), o bivalvo Solen marginatus (VALE; SAMPAYO, 2002b), caranguejos (TORGENSEN et alii, 2005; VALE; SAMPAYO, 2002b) apresentam a capacidade de realizar a biotransformao de AO e DTX-1,2 em DTX-3. Saliento que no h informaes respeito de biotransformao para as espcies nativas da costa brasileira. A ficotoxina diarrica cido okadaico encontra-se disseminada amplamente nos mares de todo o planeta (VALE; SAMPAYO, 2002a). Geralmente DTX-1 ocorre em baixas concentraes na Europa, onde o cido okadaico a toxina diarrica predominante, exceto na Noruega (CARMODY et alli, 1996). Na Irlanda a toxina predominante a DTX-2, com D. acuta produzindo tambm AO em menores concentraes (JAMES et alli, 1997). Na Galcia (Espanha) BRAVO et alli (2001), relataram Prorocentrum lima produzindo DTX-1 nas mesmas propores que o AO (razo AO:DTX-1 de 12,9pg. clula-1 e 12,4pg. clula-1 , respectivamente), porm os eventos de DSP so produzidos por Dinophysis spp. com predomnio das toxinas AO (com D. acuminata) e DTX-2. No mar Adritico AO e DTX-1 so as principais toxinas diarricas causadoras de DSP (PAVELA-VRANIC et alli, 2002). No Canad DTX-1 a toxina predominante produzida por Prorocentrum lima, capaz de sintetizar tambm AO nas mesmas propores (BRAVO et alli op. cit.). Na costa oeste dos Estados Unidos o cido okadaico a principal toxina diarrica produzida em baixas concentraes, associada a dinoflagelados epibentnicos, principalmente P. lima (MARANDA et alli, 2007). Para o cone sulamericano encontramos o AO como principal toxina, acompanhado por DTX-1,2,3 no Chile (GARCIA et alli, 2004). Recentemente tambm h o relato da ocorrncia de PTX-2 no Chile produzida por D. acuminata (BLANCO et alli, 2007b). 21

Em guas brasileiras at o presente momento h relatos de ocorrncia do cido okadaico em Santa Catarina (SCHMITT; PROENA, 2000), no litoral do Rio de Janeiro (OLIVEIRA et alli, 2007; LOURENO et alli, 2007; MARIN, 2007; FERREIRA, 2004) e em Recife (SOUZA et alli, 2007). Ferreira op. cit. salienta a necessidade de maiores investigaes da presena de outras toxinas lipoflicas no litoral sul fluminense, principalmente DTX-1 e PTX-2 devido a ocorrncia de microalgas potencialmente produtoras na regio. Ainda no h estudos sobre o perfil toxgeno expresso pelas espcies de Dinophysis que ocorrem no litoral brasileiro. Em nosso litoral a pesquisa na linha de ficotoxinas ainda permanece em uma etapa puramente descritiva, que necessita ser urgentemente fomentada e ampliada toda costa principalmente onde h parques de maricultura. Na China o cido okadaico tambm a toxina diarrica mais importante ao longo de todo o ano (MAK et alli, 2005), sendo que na Austrlia o AO acompanhado, em menor escala, pela pectenotoxina-2 (MADIGAN et alli, 2006). O primeiro relato da presena de ficotoxinas na Rssia revelou a predominncia de AO, e em menores propores a presena de DTX-1, PTXs e YTXs (VERSHININ et alli, 2006). A ao txica dos ocadaiatos, verificada em ensaios biolgicos e citolgicos, classificada em: genotxica (SILVA et alli, 2001), carcinognica (SUEOKA; FUJIKI, 1997), neurotxica (FERNNDEZ-SNCHEZ et alli, 1997) e citotxica (HUYNH et alli, 1997). O principal sintoma do envenenamento diarrico causado pelo AO, a diarria, pode ser explicado pela hiperfosforilao das protenas que controlam a secreo de ons de sdio pelas clulas intestinais ou pelo aumento da fosforilao do citoesqueleto das clulas do epitlio intestinal resultando, ambas, em alteraes na permeabilidade intestinal, que por sua vez leva perda passiva de fluidos (QUILLIAM; WRIGHT, 1996). Tambm tem sido sugerido que o AO possua um mecanismo similar ao da bactria Vibrio cholerae, onde a ativao da enzima adenil ciclase gera um efeito em cascada aumentando o cAMP. Este fosforila certas protenas que regulam a secreo dos ons de sdio nos intestinos. Por esse motivo os sintomas de DSP so, s vezes, referidos como falso clera (BURGESS; SHAW, 2001). As toxinas DSP ligam-se uma classe particular de receptores celulares, as protenas fosfatases (PP1 e PP2A), presentes no estmago, clon e intestino delgado. Logo, a presena destes receptores para o AO indica os possveis locais para o desenvolvimento de tumores. A ligao do AO s protenas fosfatases resulta em uma rpida construo de protenas fosforiladas, atuando o AO como potente inibidor da atividade normal dessas protenas fosfatases PP1 e PP2A (SVENSSON; FRLIN, 1998). Ensaios realizados com cobaias sugerem que o efeito crnico dos ocadaiatos seja a promoo de tumores no estmago e intestino (FAO, 2004). Ocadaiatos possuem LD50 de 200 g.Kg-1 e 166 g.Kg-1 (i.v.) para AO e DTX-1, respectivamente (BURGUESS; SHAW, 2001). Porm para o desencadeamento de sintomas gastrintestinais em humanos a dose requerida menor, de 32 g de DTX-1, sugerindo uma maior sensibilidade em humanos ao da toxina que em ratos (YASSUMOTO et alli, 1985 apud BURGUESS; SHAW op. cit.). Toxinas diarricas so lipossolveis e acumulam-se na glndula digestiva dos moluscos. Assim que o animal tem acesso a alimento (microalgas) livres de toxinas inicia-se o processo de depurao. Svensson e Frling (2004) verificaram que a florao sazonal de diatomceas foi fundamental para a depurao natural de M. edulis nas costas da Sucia e Noruega. Dentre os fatores abiticos que influenciam na capacidade de depurao a temperatura foi o mais importante, pois atuou diretamente ditando o ritmo metablico.

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Em situao experimental controlada Svensson (2003) observou a capacidade de depurao do mexilho azul em 32 dias, contaminado naturalmente durante uma florao de Dinophysis spp. e alimentado em laboratrio com microalgas no toxgenas. A principal via de eliminao de substncias lipdicas em animais via fecal, conforme pode ser comprovado em experimentos com coppodos (microcrustceos) onde suas pelotas fecais continham grande quantidade de clula txicas de Dinophysis. Essa uma significativa forma de exportao de toxinas diarricas para o domnio bentnico, contribuindo para a toxidez de espcies coprfagas (MANEIRO et alii, 2002). Outro aspecto importante para a depurao de toxinas diarricas sua afinidade pela espcie de molusco. Por exemplo, para o mexilho M. galloprovincialis o cido okadaico (toxina que predomina na primavera e se estende at o vero) apresenta velocidade de depurao superior a DTX-2. Dessa forma a dinophysistoxina-2 acumula-se gradualmente nos mexilhes (mas sofre toxicocintica e migra da glndula digestiva para os demais tecidos) ao longo do final do vero e incio do outono no litoral portugus. J para o bivalvo Cerastoderma edulis as duas toxinas apresentaram o mesmo percentual de depurao (VALE, 2004). Moluscos que estejam contaminados com mais que 2g AO.grama-1 glndula digestiva de molusco ou 1,8g DTX-1.grama-1 glndula digestiva de molusco so considerados imprprios ao consumo humano (HALLEGRAEFF, 1995). O nvel regulatrio utilizado na maioria dos pases de 16mg AOequivalente. kg-1 de carne de molusco e a metodologia oficialmente recomendada o bioensaio com camundongos (TOYOFUKU, 2006). Esses limites foram estabelecidos com base em dados epidemiolgicos e toxicolgicos com objetivo de garantir que os moluscos estejam aptos ao consumo humano. A ferramenta empregada na vigilncia destes limites o monitoramento tanto das ficotoxinas nos moluscos e nas microalgas toxgenas, quanto do acompanhamento da identificao destas microalgas potencialmente txicas e de sua variabilidade espacial e temporal (REGUERA, 2002; VAN EGMOND et alli, 2004). Pases onde a malacocultura atingiu o status industrial contam com programas de monitoramento (que abrangem ficotoxinas, metais txicos, bacteriolgico e pesticidas) h dcadas. Como exemplo, pases da Unio Europia, Estados Unidos, Japo, Nova Zelndia e Chile (REGUERA op cit.). A FAO (2008) aponta como principal entrave ao desenvolvimento da macocultura brasileira a ausncia de um programa nacional de monitoramento, visto que apenas o litoral de Santa Catarina possui um programa piloto que envolve Universidades, EPAGRI, Secretaria Especial de Aquicultura e Pesca (SEAP) e o setor produtivo. Recentemente foi criado o Programa Nacional de Sanidade de Moluscos Aquticos (normativa MAPA, N 53 de 2 de julho de 2003) que organizar aes com vistas manuteno das condies higinico-sanitrias nos cultivos. E tramitando junto SEAP encontra-se em fase de discusso e organizao o Programa Nacional de Controle HiginicoSanitrio de Moluscos Bivalvos. Porm ambos os programas ainda no se encontram em atividade. Bioensaios apresentam baixa especificidade e alta sensibilidade. Isso significa que a presena de outras toxinas lipoflicas pode causar interferncias e gerar falsos resultados, alm de no se poder discernir entre as toxinas diarricas presentes. Alm disso, a DTX-3 no detectada atravs desta me todologia. Por exemplo, em um surto de DSP ocorrido em Portugal onde bioensaios foram negativos, pois a toxina que desencadeou o evento foi DTX-3, somente confirmada com o uso de cromatografia lquida de alta eficincia (VALE; SAMPAYO, 1999). Outra desvantagem pertinente ao limite de deteco: concentraes da ordem de dezenas ou centenas de nanogramas no so detectveis. Dessa forma, os consumidores poderiam ser expostos ao efeito crnico, sem que houvesse nenhuma suspeita desse perigo ou forma de avaliar seu risco. A utilizao de animais nestes ensaios, onde um dos critrios a ser avaliado 23

 observar tempo necessrio at o bito, tambm abarca aspectos ticos; o que vem despertando muita discusso entre os rgos protetores dos animais, comisses de tica e grupos de pesquisa (VAN EGMOND et alii, 2004). Os mtodos de ensaio analticos, baseados em caractersticas qumicas das toxinas diarricas fornecem alternativa com maior sensibilidade, especificidade, reprodutibilidade e menor limite de deteco. Um dos mais recomendados, embora mais caros e dependentes de pessoal altamente qualificado, a cromatografia lquida de alta eficincia (LEE et alii, 1987; LAGOS, 2002). A metodologia consiste na extrao da(s) toxina(s) da matriz orgnica (glndula digestiva do molusco ou citoplasma da microalga), com solventes orgnicos, etapa de clarificao para remoo de sujidades, derivao para tornar a toxina detectvel ao sensor UV, e anlise no cromatgrafo. No entanto as metodologias existentes ainda carecem de validao interlaboratorial, para sua acreditao e a certificao do laboratrio responsvel (VAN EGMOND et alii, 2004). Microalgas pertencentes ao gnero Prorocentrum geralmente produzem toxinas em situao de florao enquanto que Dinophysis pode produzi- las mesmo em baixas densidades celulares (poucas centenas de clulas por litro de gua do mar), segundo Reguera (2002). Em funo desta caracterstica o monitoramento da comunidade fitoplanctnica constitui importante ferramenta para a tomada de deciso em uma situao de risco. Em relao ao gnero Dinophysis h uma ferramenta de monitoramento denominado ndice Dinophysis. Que consiste em acompanhar, ao longo do tempo, o desenvolvimento das populaes deste gnero presentes na coluna dgua. Quando a contagem total de Dinophysis atinge o patamar de 400 clulas por litro de gua do mar configura-se uma situao de alerta, com risco da presena de toxinas diarricas em concentraes suficientes para causar DSP. (REGUERA op cit.). Foi o que aconteceu recentemente no litoral de Florianpolis e que possibilitou a tomada de deciso de suspender temporariamente a venda de moluscos. Mesmos assim, aps a populao de microalgas ter diminudo ocorreu repentinamente a primeira florao deste gnero relatada para a costa brasileira. E apesar das medidas tomadas cerca de 150 pessoas foram acometidas de DSP, nmero que poderia ter sido extremamente superior se as devidas medidas no tivessem sido tomadas (PROENA et alii, 2007). Quando as toxinas encontram-se nos moluscos e o alerta de sua presena dado pelo monitoramento culmina na suspenso da comercializao antes que surjam casos de EDM em humanos diz-se que ocorreu um evento txico (REGUERA, 2002). 2.3.3 Implicaes na sade pblica: envenenamento diarrico por moluscos O primeiro relato de problemas gastrintestinais associados ao consumo de moluscos, que haviam se alimentado de dinoflagelados, ocorreu na Holanda na dcada de 60. No entanto na ocasio foi implicado o agente etiolgico errado, pois Prorocentrum micans era a espcie mais abundante (posteriormente comprovada atxica). No houve suspeitas de que Dinophysis acuta, presente em densidades celulares baixas pudesse ser o real causador do evento (KATT apud SCHMITT; PROENA, 2000). Tambm no Chile foram observadas intoxicaes diarricas, entre 1970-1971, pioneiramente associadas florao de Dinophysis spp. (GUZMN; CAMPODONICO apud REGUERA, 2002). Porm, somente em 1976 o Envenenamento Diarrico por Moluscos foi definido como uma doena, sendo identificados seus sintomas, toxinas envolvidas, agente etiolgico e vetores para humanos. Nesse episdio foram acometidas mais de mil de pessoas que haviam comido mexilhes e vieiras. Isolou-se pela primeira vez a ficotoxina DTX-1, cuja produo por Dinophysis fortii foi comprovada inequivocamente (YASSUMOTO et alii, 1980). H relatos da sndrome DSP em escala global, ocorrendo principalmente onde h maior consumo de moluscos (DARANAS et alii, 2001). Recentemente foi relatado o primeiro 24

surto de DSP na costa brasileira. Ocorreu em Santa Catarina, em janeiro de 2007, com mais de 150 casos (PROENA et alii, 2007). Os sintomas clnicos de DSP podem ser confundidos com os de uma gastroenterite de origem bacteriana. No causam bitos. Em eventos agudos, com ingesto de doses acima de 48 g AO.grama -1 de glndula digestiva, os sintomas so nuseas, dores abdominais, vmitos e diarria. Surgem no intervalo entre 30 minutos at poucas horas aps o consumo de moluscos contaminados. Raramente o quadro clnico manifesta-se passadas mais de 12 horas. Os sintomas cessam aps trs dias, com ou sem tratamento mdico. Recomenda-se apenas, como suporte, a reposio de lquidos e eletrlitos para compensar a intensa perda de gua (FAO, 2004). No Codex Alimentarius (2006) ficotoxinas so classificadas como contaminantes naturais. Este rgo regulamenta padres internacionais para segurana alimentar, baseado em anlises de risco. Dessa forma possvel gerar padres internacionais que direcionem a criao e/ou aprimoramento de legislaes pertinentes contaminantes e xenobiticos nos alimentos. Por exemplo, na Europa a questo das biotoxinas marinhas regulada pela Directiva 91/492/CCE, de 15 de julho de 1991, definindo limites para a presena de ficotoxinas em moluscos cultivados ou explotados de bancos naturais. No Brasil h iniciativa de regulamentao para ficotoxinas (diarricas e paralisantes) em moluscos na forma de portaria 021/GABS/DAS, de 1 de outubro de 2002, no estado de Santa Catarina (PROENA; VILLAC, 2003). Pesquisadores ad hoc de uma junta composta pelas Organizaes para Agricultura e Alimentao, Comisso Oceanogrfica Intergoverna mental e Organizao Mundial de Sade (Joint FAO/IOC/WHO) avaliaram o risco das ficotoxinas presentes em moluscos bivalvos com vistas segurana alimentar. Calcularam o NOAEL2 e LOAEL 3 (Quadro 02) baseados em dados epidemiolgicos de casos ocorridos no Japo e Noruega. No entanto ainda no existem dados suficientes, epidemiolgicos nem estudos sobre os efeitos crnicos do AO, para um clculo seguro de Dose Diria de Ingesto destas substncias (TOYOFUKU, 2006).
Quadro 02. Dados utilizados no Clculo da Dose Aguda de Referncia para a toxina diarrica cido okadaico (e equivalentes) por pesquisadores Ad hoc da FAO/IOC/WHO para Biotoxinas Marinhas (UNESCO, 2005) comparado ao recomendado pela European Food Safety Authority e aos dados epidemiolgicos utilizados no Codex alimentarius.
Dados Japo Noruega Codex EFSA
a

NOAELa 1 -

LOAELa 1,2-1,6 1-1,5 1 0,8

Dose Aguda de Referncia (Provisria) 0,33g.kg de peso corpreo-1 0,3g.kg de peso corpreo-1

Nvel Mximo 0,16mg. kg-1

Por quilograma de peso corpreo.

Mesmo com um programa de monitoramento que abrange toda a costa europia continuaram surgindo casos de DSP em consumidores de moluscos, alm dos 10% de susceptveis previamente estimados. Segundo Alexander et alii (2008) o banco de dados toxicolgico dos ocadaiatos limitado e compreende principalmente estudos de toxicidade aguda. O Painel da European Food Safety Authority baseou-se em experimentos de DL50 (i.p.) para o estabelecimento de Fatores de Equival ncia Txica (toxic equivalence factors TEFs): AO e DTX1 = 1, DTX-2 = 0,6. Afirmam que os dados crnicos dos efeitos do AO e equivalentes (em animais e em humanos) so insuficientes para o clculo seguro da DDI. Em funo disso decidiram estabelecer uma Dose Aguda de Referncia (ARfD) provisria
2 3

No Observed Adverse Effects Level Nvel em que no so observados efeitos adversos. Lowest Observable Adverse Effects Level Nvel inferior em que se observam efeitos adversos.

25

baseada apenas em dados humanos. LOAEL 50gAO equivalente por pessoa, ou seja, 0,8gAOeq.kg peso corpreo-1 para adultos. Utilizou-se fator de segurana 3 para a extrapolao ao calcular-se o NOAEL que resultou em uma ARfD de 0,3gAOeq.kg peso corpreo-1 . O painel EFSA no considerou necessrio aplicar fator de incerteza visto que os dados humanos utilizados basearam-se em um grande nmero de consumidores de moluscos afetados oriundos de diversos pases. Para proteger os consumidores dos riscos oferecidos pelo efeito agudo do AO recomenda-se utilizar nos estudos uma poro maior que a realmente ingerida pelas pessoas. O painel EFSA considerou uma poro de 400g de molusco. Consumidores regulares de moluscos, contaminados com concentraes de toxinas diarricas abaixo do limite necessrio ao desencadeiamento dos sintomas clssicos, encontram-se expostos ao efeito crnico destas toxinas. A principal toxina diarrica, o cido okadaico, um potente promotor de tumores no trato gastrointestinal, assim como tambm o a dinofisistoxina-1 (SUEOKA; FUJIKI, 1997). Na Frana um estudo epidemiolgico pioneiro (estudo ecolgico) encontrou uma correlao significativa entre cncer e consumo de moluscos contaminados com a ficotoxina cido okadaico (CORDIER et alli, 2000). Os principais veculos de toxinas diarricas para humanos so os moluscos bivalvos. Na Europa principalmente Mytilus edulis (mexilho azul) e M. galloprovincialis (mexilho do Mediterrneo) segundo Moroo et alii, 2003; VAN EGMOND et alii, 2004; Mouratidou et alii, 2006. No entanto h relato de surto de DSP em Portugal associado ao consumo de Solen margiatus (razor clam) e caranguejos (Carcinus maenas) relatado por Vale e Sampayo (2002). Centenas de pessoas foram acometidas pela sndrome diarrica na Noruega ao comer caranguejos (Cancer pagurus) que haviam se alimentado de mexilhes durante uma florao de Dinophysis acuta (TORGENSEN et alii, 2005). Pouco AO livre foi detectado, sendo sua forma esterificada (DTX-3) a principal toxina envolvida neste surto. Toyofuku (2006) aponta como principal problema para o levantamento de mais dados toxicolgicos a falta de quantidades suficientes de toxinas diarricas purificadas. E salienta a necessidade de realizao de mais testes toxicolgicos, para consequentemente gerar avaliaes de risco mais precisas. A metodologia normativa utilizada internacionalmente para a deteco de ficotoxinas o bioensaio. 2.3.4 Efeitos adversos na sanidade de moluscos A Organizao Mundial para Sade Animal (World Organization for Animal Health OIE) define doena como infeco clnica ou no, com um ou mais agentes etiolgicos de doenas referidas no Cdigo Aqutico e agente de doena como organismo que cause ou contribua para o desenvolvimento de uma doena referida no Cdigo Aqutico. E lista para moluscos aquticos os patgenos de relevncia: Perkinsus marinus, P. olseni, Bonamia ostrae, B. exitiosa, Haplosporidium nelsoni, Marteilia refringens, Mikrocitus mackini (OIE, 2008). No h nenhuma citao acerca de microalgas potencialmente txicas. Conforme j supracitado, moluscos bivalvos atuam como organismos pastadores em ambientes aquticos, consumindo principalmente orga nismos da comunidade fitoplanctnica que conter microalgas capazes de produzir toxinas. Tais produtos naturais marinhos, ficotoxinas, tm demonstrado exercer a funo ecolgica de evitar a ao de herbvoros sobre as microalgas potencialmente nocivas. H relatos acerca de vrias espcies de moluscos que apresentam alteraes comportamentais como retrao de seus sifes, f chamento de suas e valvas e parada da alimentao na presena de microalgas nocivas (HGARET et alli, 2007). Via de regra, considerava-se que no havia efeitos adversos significativos das ficotoxinas sobre a sanidade destes animais. Em humanos e, mamferos marinhos em geral, as ficotoxinas atuam sobre canais de sdio (toxinas paralisantes, amnsicas, ciguatricas, neurotxicas) ou em protenas fosfatasases (ocadaiatos). Moluscos possuem em suas 26

membranas celulares canais de clcio, carencendo assim de stios de ligao onde as ficotoxinas pudessem exercer plenamente sua ao txica (VAN EGMOND et alii, 2004). Na ltima dcada intensificaram-se os trabalhos experimentais sobre os efeitos das microalgas nocivas, e suas substncias bioativas, na sade dos moluscos. Revelando que, embora no causem uma patologia stricto sensu, podem gerar alteraes de ordem fisiolgica ou histolgica, ou at mesmo levar mortalidade por toxicidade aguda determinados estdios de desenvolvimento de moluscos. Os trabalhos realizados tm revelado que a relao entre microalgas txicas e os moluscos espcie-especfica (GALIMANY et alli, 2008). A maioria dos experimentos tm sido realizados com ostras (Crassostrea gigas e C. virginica), pois so as espcies de bivalvos mais cultivadas em todo o mundo. Matsuyama et alii (2000) relataram a massiva mortalidade (90%) de larvas trocforas de C. gigas expostas 8-10 horas diferentes microalgas nocivas (Alexandrium tamarense, A. taylori, Gymnodinium mikimotoi). G. mikimotoi implicado na produo de ictiotoxinas e em mortalidade de diversos moluscos como Haliotis discus, Sulculus diversicolor e Mytilus edulis. O impacto gerado pela ficotoxina cido okadaico na sade de humanos j foi completamente elucidado e bem documentado na literatura cientfica desde a dcada de 70. Moluscos bivalvos desempenhavam comumente o papel de bioacumuladores desta toxina, atuando dessa forma apenas como vetores para os humanos consumidores (DARANAS et alli, 2001; HALLEGRAEFF, 2003). Carvalho Pinto-Silva et alli (2003) demonstraram experimentalmente o efeito genotxico do cido okadaico em mexilhes Perna perna. Animais adultos foram expostos ficotoxina (0,3g AO diludo em 10l gua ultrapura:metanol, 1:1 v/v; injetada diretamente em seus sifes inlantes) e tiveram a hemolinfa coletada em diferentes perodos (24, 48 e 72 horas). Os animais apresentaram percentual significativamente mais alto na formao de microncleo nos hemcitos da hemolinfa do tratamento de 24h. Tal fato sugere que o cido okadaico seja rapidamente metabolizado em uma forma altamente reativa causando dano ao DNA do ncleo dos hemcitos que se encontravam em processo de diviso celular naquele momento. Dessa forma a genotoxicidade da ficotoxina cido okadaico em mexilhes sugere um efeito adverso na biodiversidade gentica para a populao de animais desta espcie. O dano ao DNA poder ser traduzido na criao de mutaes letais, bem como na expresso de genes que afetem o crescimento e a reproduo desta espcie de bivalvo importante econmica e ecologicamente. O cido okadaico tambm j demonstrou ser genotxico para clulas de mamferos. Auriemma e Battistella (2004) verificaram a produo de uma protena de 30kDa na glndula digestiva de M edulis mediada pela presena do cido okadaico. Tal protena foi associada ao funcionamento do sistema imune do animal, atuando como um mecanismo natural de detoxificao. No grupo controle no foi observada a presena da protena. Durante o mesmo experimento, no grupo dos animais tratados com AO foi observada alterao histolgica na glndula digestiva, na forma de intensa formao de vesculas lipdicas. No houve relato de alterao na funo digestiva da glndula. Animais do grupo controle no apresentaram a alterao histolgica. Outro efeito adverso observado em hemcitos do mexilho Mytilus galloprovincialis foi o aumento da taxa de fagocitose mediado pelo cido okadaico em temperatura de 25C, indicando uma possvel alterao nos caminhos de sinalizao e transduo do imuncito. Como a ficotoxina bioacumula em bivalvos seu efeito a longo prazo permanece desconhecido. (MALAGOLI et alli, 2008). Galimany et alii (2008) observaram vrias respostas do sistema imune do mexilho M edulis na presena da microalga Prorocentrum minimum: diapedesi dos hemcitos no intestino (associado tentativa de encapsulamento de P. minimum), aumento da migrao dos hemcitos para a glndula digestiva e intestino na tentativa de proteger os rgos da ao 27

txica. Tambm foi observada uma progressiva degranulao dos he mcitos interpretada como uma resposta imune. A capacidade de clearence de P. perna afetada pela quantidade e qualidade do alimento disponvel, mas sobretudo, pela temperatura. Atinge seu mximo 25C e cessa 30C (RESGALLA-JR et alli, 2007). 2.4 Dinoflagelados do Gnero Dinophysis Ehremberg 1839 2.4.1 Classificao Dinoflagelados so organismos eucariotos, unicelulares, portanto classificados como Protistas (TAYLOR, 1987). Surgiram no final do Trissico (mais de 200 milhes de anos) e tiveram seu auge no Cretceo. Cistos de dinoflagelados (dinocistos) so amplamente utilizados como ferramenta de datao para sedimentos marinhos e anlise de paleoclimas. So fsseis encontrados em toda a costa brasileira e bons indicadores para a prospeco de petrleo (ARAI; LANA, 2004). Este um dos gneros de dinoflagelados com maior nmero de espcies (SOURNIA, 1986). A ordem Dinophysiales compreende trs famlias: Amphisoleniaceae, Dinophysiaceae e Oxyphysiaceae (Figura 12). Todas compartilham as caractersticas de achatamento lateral, orientao flagelar dinoconte, cngulo pr mediano, cngulo e sulcus margeados por aletas (sustentadas por espinhos, ou raios), teca constituda por 17 ou 18 placas. A famlia Dinophysiaceae compreende os gneros: Citharistes, Dinophysis, Histioneis, Ornithocercus, Phalacroma (= Dinophysis), Sinophysis (STEIDINGER; TANGEN, 1997). Atualmente encontram-se listadas 145 espcies para o gnero Dinophysis (mais Phalacroma), segundo Gmez (2005). Todas as formas so dinocontes e tecadas. No caso dos dinofisides a frmula da tabulao kofoideana similar para todas as espcies, que so constitudas por cerca de 18 ou 19 placas: 4 localizadas na epiteca, 2 apicais, 4 cingulares, 4 ou 5 sulculares e 4 localizadas na hipoteca (STEIDINGER; TANGEN, 1997). Domnio Eukaria Filo Dinophyta ou Phirrophyta Ordem Dinophysiales Lindemann, 1928 Famlia Dinophysiaceae Stein, 1883 Gnero Dinophysis Ehremberg, 1839

a)

b)

c)

Figura 12. Ordem Dinophysiales (Lindemann 1928). Composta por trs famlias: a) Amphisoleniaceae, representada por Amphysolenia bidentata escala 100 m; b) Dinophysiaceae, representada por Dinophysis acuta, escala 10 m; c) Oxyphysiaceae representada por Oxyphysis oxytoxoides, escala 10m. Adaptado de Steidinger; Tangen, 1997.

A descrio do gnero Dinophysis foi realizada com base em D. acuta descrita por Christian Ehremberg em 1839. Originalmente as espcies de dinofisides eram repartidas em 28

dois gneros Dinophysis e Phalacroma, agora considerados como sinonmias. A diferena morfolgica entre eles residia na epiteca sempre diminuta e escondida pela aleta cingular anterior no primeiro e proeminente e convexa em Phalacroma; tambm utilizava-se o argumento de que as espcies pertencentes a Phalacroma so predominantemente hetertrofas enquanto que em Dinophysis eram consideradas em sua maioria auttrofas. Posteriormente, baseando-se em estudos da tabulao das placas tecais no foram encontradas diferenas significativas entre os dois gneros, que foram reunindos em um s gnero: Dinophysis (HALLEGRAEFF; LUCAS, 1988; LARSEN; MOESTRUP, 1992). 2.4.2 Aspectos morfomtricos: taxonomia Dinoflagelados pertencentes ao gnero Dinophysis possuem envoltrio celular composto por um conjunto de placas celulsicas, semelhante a um quebra-cabeas, chamado teca. So ditos, portanto, dinoflagelados tecados. A superfcie da clula encontra-se marcada por duas reentrncias, uma transversal e outra longitudinal, denominadas cngulo e sulcus, respectivamente. As espcies deste gnero apresentam sempre o cngulo localizado em posio muito anterior (pr mediano) e sulcus muito curto (BALECH, 2002). Para fins de taxonomia convencionou-se como regio ventral a parte da clula onde localiza-se o sulcus. A regio oposta dita dorsal. A teca considerada como composta por duas metades, uma esquerda e outra direita unidas por uma sutura (Figura 13). Por isso esse gnero chamado bivalvo (BALECH, op. cit.). Para identificao das espcies observa-se o tamanho e formato da clula, a relao de tamanho entre a epiteca e a hipoteca, a presena de projees na hipoteca (quantidade e f rmato) e a morfologia das aletas sulcais e cingulares o (STEIDINGER; TANGEN, op cit.). A maioria das clulas apresenta tamanho mdio.
Regio apical A) acp aca B) c epiteca

a b hipoteca

vd ved

ve

hipoteca Regio antapical

Figura 13. Representao esquemtica de Dinophysis. A) Clula em viso lateral, valva direita: aca aleta cingular anterior; acp aleta cingular posterior; a aleta sulcal direita; b- aleta sulcal esquerda; epiteca oculta pela aleta cingular anterior. B) Clula em viso ventral: c cngulo; s sulcus; vd valva direita; ve valva esquerda; h - hipoteca. Adaptada de BALECH, 2002.

A parte superior da clula localizada acima do cngulo chama-se epiteca e a inferior, abaixo do cngulo, a hipoteca. Uma marcante caracterstica deste gnero uma epiteca sempre 29

diminuta (exceto em D. rotundata) e escondida pela aleta cingular anterior quando a clula vista lateralmente. A hipoteca bem desenvolvida, sempre de maior tamanho que a epiteca, podendo apresentar projees que auxiliam na caracterizao em nvel especfico. Dinoflagelados dinofisides possuem dois flagelos heterocontes, com origem na regio ventral da clula para os classificados como dinocontes. Um flagelo emerge do cngulo e enrola-se em torno dele. O outro nasce do sulcus e extende-se longitudinalmente em relao clula. A combinao do batimento destes dois flagelos produz o padro de natao rodopiante tpico deste grupo de microalgas (FENSOME et alli, 1993). Em exemplares fixados com formaldedo os flagelos no so observados, pois o fixador faz com que desprendam da clula. Para que possam ser observados, o material deve ser fixado com lugol (REGUERA, 2002). O cngulo ladeado por duas aletas: aleta cingular ant erior (aca) e aleta cingular posterior (acp). Da mesma forma o sulcos delimitado por duas aletas, uma direita sempre de tamanho pequeno e uma esquerda com presena de trs raios ou costelas (R1 , R2 , R3 ). Nas diferentes espcies deste gnero a aleta sulcal esquerda apresenta tamanho variado, porm sempre maior que a aleta sulcal direita (TAYLOR, 1987). Na observao da aleta sulcal esquerda necessrio cuidado, pois em clulas recmdivididas as clulas filhas apresentam-se cada uma com parte desta aleta (Figura 14): uma fica com a poro superior da aleta, com R1 e R2 , e a outra com a poro inferior somente com R3 . Como parte final do processo de diviso celular as aletas de ambas clulas se regeneraro completamente (REGUERA, 2004).

R1 asd R2
a

R3

Figura 14. Fotomicrografia de D. tripos clulas recm divididas. Notar a diviso da aleta sulcal esquerda em a e b. A clula filha da esquerda herdou a poro inicial a e os dois primeiros raios (R1 e R2 ). A clula filha da direita permaneceu com a poro final da aleta b, com o ltimo raio R3 e com a aleta sulcal direita (asd). O processo de diviso termina com a completa regenerao das aletas sulcais. Foto da autora, enseada de Maciis, Angra dos Reis, RJ.

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Vrios pesquisadores estudaram a disposio das placas tecais de Dinophysis e propuseram frmulas para sua tabulao. A tabulao proposta Balech atualmente a mais utilizada e compe-se de 18 placas: 4 na epiteca (E1-4 ), 4 cingulares (C 1-4 ), 4 sulcais (Sa, Ss, Sp e Sd), 4 na hipoteca (H1-4 ) e duas formando o poro apical (A1-2 ) (TAYLOR 1987; HALLEGRAEFF; LUCAS, 1988). Ab tentou aplicar o sistema de Kofoid enquanto que os outros propuseram um sistema nico para dinofisides. Os dois ltimos, Tai Lisung; Skogsberg e Balech, so muito similares entre si (FENSOME et alli, 1993). No sistema de tabulao proposto por Kofoid h seis sries transversais de sequncias para disposio das placas tecais: apical (), anterior intercalar (a), pr-cingular (), pscingular (), posterior intercalar (p) e antapical (). Notar que esta tabulao no inclui o estudo das placas cingulares e sulcais. Trabalhos posteriores adicionaram ao sistema kofoidiano placas cingulares (c), sulcais (s) e componentes do sis tema do complexo apical: poro apical (Po), cp e placa X. As tecas em prorocentrides e dinofisides podem ser divididas em duas metades similares no sentido longitudinal, sendo chamados de dinoflagelados bivalvos. Dessa forma a tabulao criada por Kofoid no se aplica aos dinoflagelados das ordens Prorocentrales e Dinophysiales (STEIDINGER; TANGEN, 1997). Outra incongruncia entre os sistemas kofoidiano e organismos dinofisides diz respeito ao complexo do poro apical. Na tabulao criada por Kofoid esse complexo localizase no topo da clula, na regio apical, o que no acontece com dinofisides. Nestes organismos o poro apical extremamente diminuto, localiza-se ventralmente e no apresenta placa X. formado por duas pequenas placas (A1 e A2 ) localizadas logo acima das placas epitecais E4 e E1 (Figura 15).

Po

Pf

Figura 15. Esquema da tabulao da teca de Dinophysis em viso ventral, sem as aletas cingulares e sulcais. A1 e A2 : placas do poro apical; Po : poro apical; E1-4 : placas da epiteca; C14 : placas cingulares; H : placas da hipoteca; S : sulcal anterior; S : sulcal sinister, i.e. 1-4 a s esquerda; Sd : sulcal dexter, i.e. direita; S : sulcal posterior; Pf: poro flagelar. Adaptada de p Taylor, 1980 apud Taylor 1987.

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Uma clula tpica de Dinophysis apresenta tabulao com quatro sries latitudinais bem distintas e conservativas: a) Sequncia da epiteca. Formada por duas grandes placas (E2 e E3 ) localizadas na regio dorsal anterior e duas placas menores (E1 e E4 ) na regio ventral, as duas primeiras com sua sutura inferior em contato com a parte anterior do cngulo e as duas ltimas em contato com o sulcus. Ainda na epiteca observam-se duas placas que delimitam o poro apical (A1-2 ) essas placas no possuem nenhum contato com o cngulo, o poro apical (Po ) apresenta tamanho muito reduzido e deslocado ventralmente; b) Sequncia do cngulo. Formada por quatro placas aproximadamente retangulares (C 1-4 ), localizado entre as aletas cingulares anterior e posterior. As placas dorsais (C 2 e C3 ) apresentam maior tamanho que as placas ventrais (C 1 e C4 ); c) Sequncia da hipoteca. Formada por duas grandes placas (H2 e H3 ) localizadas na regio dorsal com suas suturas superiores em contato com a parte posterior do cngulo e duas menores (H1 e H4 ) localizadas na regio ventral. H1 conecta-se com o cngulo e com o sulcus e H4 apenas com o sulcus. O sulcus permanece oculto entre as aletas sulcais direita e esquerda (TAYLOR 1987); d) Sequncia do sulcus. Formada por quatro placas identificadas por sua denominao latina: Sa sulcal anterior, Sd sulcal dexter (sulcal direita), Ss sulcal sinister (sulcal esquerda) e Sp sulcal posterior. As quatro placas delimitam o poro de onde emergem os flagelos transversal e longitudinal. As aletas cingulares so formadas partir de expanses das placas da epiteca (aleta cingular anterior) e da hipoteca (aleta cingular posterior), principalmente das placas dorsais de maior tamanho, E2 e E3 e H2 e H3 respectivamente. A aleta sulcal direita formada partir da placa hipotecal H3 e a aleta esquerda partir das placas H1 e H4 (SOURNIA, 1986). Porm Balech (1980) apud Hallegraeff; Lucas (1988) considera que Dinophysis apresenta teca com uma especializao morfolgica extrema e tabulao das placas tecais constante. Por isso, o estudo da morfologia e do arranjo das placas sulcais so de pouco valor taxonmico para a identificao das espcies deste gnero. Alm disso, o estudo das placas cingulares e sulcais demandam microscopia eletrnica de varredura e mesmo assim so de difcil visualizao. A identificao das espcies pertencentes a este gnero baseia-se na forma e tamanho da clula, ornamentao das tecas (principalmente a presena de projees e spinhos na hipoteca) e morfologia das aletas e espinhos (STEIDINGER; TANGEN, 1997). 2.4.3 Bioecologia Dinoflagelados so importantes constituintes na base da cadeia trfica marinha, principalmente em ambientes tropicais com guas oligotrficas. Dessa forma desempenham importante papel na transferncia de matria e energia ao longo da teia trfica marinha (SPECTOR, 1984). Atualmente senso comum que suas relaes ecolgicas dentro da comunidade planctnica so complexas e, at mesmo, paradoxais. Dinophysis podem atuar tanto como presas quanto como predadoras de protozorios (HANSEN, 1991; CARVALHO et alii, 2008). Tambm podem ser por eles parasitados, como o relatado para D. norvegica pela ameba Amoebophrya, podendo ser a infeco letal ao dinoflagelado (SOLOMON et alii, 2006). Podem alimentar-se de outras microalgas criptofceas de pequeno tamanho - e manter seus cloroplastos durante um certo tempo realizando fotossntese seu favor (TAKAHASHI et alii, 2005). No Japo Nishitani et alii (2005) observaram em ambiente natural a relao entre Dinophysis acuminata e pequenas criptofceas, estabelecendo uma correlao entre elas: com o decrscimo da abundncia das criptoficeas ocorria o pico de abundncia do dinoflagelado sugerindo uma relao predador-presa. A circunstncia supracitada, manter temporariamente os cloroplastos de sua presa, faz com que essas organelas em Dinophysis sejam denominadas como cleptoplastdios. O 32

pigmento principal de dinoflagelados autotrficos a peridinina e os encontrados em espcies autotrficas e mixotrficas de Dinophysis possuem plastdeos ricos em ficobilina. Estudos moleculares realizados por Takishita et alii (2002) demo nstraram afinidade filogentica de cleptoplatdeos de D. acuminata, D. fortii e D. norvegica com a criptofcea Geminigera cryophila. Outra via tambm discutida que tenha ocorrido ao londo de sua evoluo um evento de endossimbiose de criptofceas e Dinophysis. Posteriormente foram encontrados plastdeos em outra espcie D. mitra, desta vez heterotrfica. Anlises filogenticas revelaram pigmentos e ultrestruturas relaciodados haptfitas, provavelmente adquiridos via mizocitose (KOIKE et alii, 2005). Dinophysis tambm podem ser predadas por outro dinoflagelado: Noctiluca scintilans. Nas Rias Bajas da Galcia esses grandes dinoflagelados heterotrficos foram encontrados com vacolos alimentares repletos de Dinophysis spp. denotando que Noctiluca pode vir a desempenhar um papel na transferncia de toxinas diarricas dentro da teia trfica marinha (ESCALERA et alii, 2007). Outro importante predador so coppodos (microcrustceos) tanto em ambiente natural quanto em situao experimental. Porm no foram observados efeitos nocivos sobre os coppodos Calanus helgolandicus, Temora longicornis e Acartia sp. e nem sobre a maturao de seus ovos (JANSEN et alii, 2006). Os resultados sugerem que coppodos podem ser importantes tanto na prevenso quanto no controle de floraes de Dinophysis. Alm disso, os nveis de toxinas diarricas encontradas em coppodos foram muito baixos, inferiores ao esperado, demonstrando que esses organismos zooplanctnicos no constituem importante vetor destas toxinas para nveis trficos mais altos (KOZLOWSKY-SUZUKI et alii, 2006). Organismos filtradores so importantes predadores dessas microalgas no domnio bentnico: moluscos bivalvos (FAO, 2004), ascdeas, esponjas e poliquetos (REIZOUPOLOU et alii, 2008), dos quais apenas o primeiro grupo atua como vetor de toxinas diarricas para humanos consumidores devido ao consumo das microalgas toxgenas. Pequenos peixes pelgicos, planctfagos, tambm podem consumir Dinophysis. E, quando estas expressam sua capacidade toxgena os peixes podem apresentar concentraes trao de toxinas diarricas em suas vsceras (REGUERA, 2002). Quanto forma de alimentao as espcies deste gnero podem apresentar autotrofia (organismos que sintetizam seu prprio alimento a partir de fontes inorgnicas), heterotrofia (organismos que ingerem outros para sobreviver). Alm disso, tambm h espcies reconhecidamente capazes de ingerir matria orgnica particulada, mesmo continuando a realizar fotossntese, ou seja, espcies capazes de mixotrofia (CARVALHO et alii, 2008). A distino entre espcies auttrofas e hetertrofas pode ser realizada atravs de microscopia de epifluorescncia, onde nas primeiras espcies os cloroplastos emitem luminescncia vermelha enquanto que nas hetertrofas o citoplasma fluoresce em verde brilhante ou no h fluorescncia (HALLEGRAEFF; LUCAS, 1988; HANSEN, 1991). Este gnero reconhecidamente exigente em questes nutricionais, apenas os meios de cultura tradicionais com nutrientes inorgnicos e vitaminas mostraram-se insuficientes. Durante dcadas o cultivo de Dinophysis foi invivel devido impossib ilidade de atender a todas as suas exigncias nutricionais. Porm, Park et alii (2006) conseguiram pioneiramente estabelecer experimentalmente o cultivo de D. acuminata suplementando o meio de cultura com sua presa. Espcies classificadas anteriormente como pertencentes ao gnero Phalacroma so em sua maioria reconhecidamente heterotrficas, no possuindo pigmentos e seu habitat preferencial so guas ocenicas oligotrficas (KOFOID; SKOGSBERG (1928) apud HALLEGRAEFF; LUCAS, op cit.). Apresentam vacolos alimentares e para algumas espcies j foi descrito o comportamento alimentar, como em D. rotundata, que utiliza um 33

pednculo projetado partir do sulcus para alimentar-se do contedo citoplasmtico de protozorios ciliados marinhos (HANSEN, 1991). Tal processo alimentar foi denominado mizocitose e tambm recentemente foi relatado para D. acuminata na primeira experincia de cultivo bem sucedida para o gnero Dinophysis, onde a microalga foi alimentada com o ciliado Myrionecta rubra (PARK et alii, 2006). Carvalho et alii (2008) analisaram filogeneticamente populaes naturais de D. norvegica e encontraram em seus vacolos alimentares contedo citoplasmtico da criptofcea Teleaulax amphioxeia. No entanto ao tentar estabelecer cultivo de D. norvegica, fornecendo a criptofcea como presa no foi observado crescimento do dinoflagelado. Os pesquisadores sugeriram, semelhana do relatado por Park e colaboradores, que os cleptoplastdios adquiridos por D. norvegica tenham vindo de um protista que por sua vez ha via se alimentado da criptofcea. Concluram, ento, que a autotrofia mediada pelos cleptoplastidios seriam uma estratgia de obteno de energia complementar. Em espcies hetertrofas quando os cloroplastos esto presentes costumam ser pequenos, na forma de bastes e amarelados (KOFOID; SKOGSBERG 1928 apud HALLEGRAEFF; LUCAS, op cit.). Podem apresentar luminescncia tpica de auttrofos devido a presena de simbiontes ou ao contedo de alguma presa fotossintetizante (HALLEGRAEFF; LUCAS, op cit.). J as sempre classificadas como pertencentes ao gnero Dinophysis so consideradas como fotossintticas e de habitat nertico em sua maioria. Seus cloroplastos so granulares ou como bastes, de colorao amarela, marrom ou marrom-avermelhados (KOFOID; SKOGSBERG 1928 apud HALLEGRAEFF; LUCAS, op cit.). As espcies hetertrofas deste gnero, D. hastata e D. schuettii so encontradas em guas ocenicas de mares tropicais e subtropicais. Os pigmentos presentes em dinoflagelados auttrofos incluem clorofila c2 , peridinina e carotenides. A aquisio dos cloroplastos em Dinophysis deu-se via endossimbiose de uma crisofcea (PRZELIN, 1987), sendo estes cloroplastos denominados cleptoplastdios. 2.4.4 Fatores que interferem na sua distibuio Dinophysis um gnero amplamente distribudo em todo o oceano mundial. Tipicamente as espcies ocorrem em guas ocenicas e nerticas, podendo ser encontradas em ambientes costeiros (STEIDINGER; TANGEN, 1997). Algumas espcies podem ser abundantes em guas costeiras, especialmente em reas eutrficas (TAYLOR et al., 1995). Espcies de Dinophysis raramente formam floraes (104 -105 clulas por litro), geralmente apresentam concentraes celulares baixas (LARSEN; MOESTRUP, 1992; HALLEGRAEFF; LUCAS, 1988). Embora sejam eventos raros, h relatos de excepcionais floraes no mar do Japo com D. fortii, na Europa com D. acuminata, D. acuta (Espanha) e D. norvegica (mar do Norte) (HALLEGRAEFF; LUCAS, op cit.). Em janeiro de 2007 ocorreu a primeira florao que se tem relato de D. acuminata em guas brasileiras, atingindo o patamar mximo de 5.2 x 104 clulas.l-1 , havendo contaminao de mexilhes com toxinas diarricas e mais de uma centena de casos de EDM (PROENA et alii, 2007). No entanto, segundo REGUERA (2002), poucas centenas de clulas de Dinophysis por litro de gua do mar j seriam suficientes para produo de episdios de envenenamento diarrico por moluscos. Porm, comumente espcies pertencentes ao gnero Dinophysis no so abundantes na comunidade fitoplanctnica, geralmente correspondem a cerca de 1-10% de toda a comunidade (REGUERA, 2003). Para a comunidade planctnica da ilha Guaba FERREIRA (2004) encontrou abundncias relativas menores que 1% na primavera vero de 2003/2004; Vianna (2003) encontrou os mesmos valores para a primavera de 2001 e o outono de 2002. 34

Em macroescala (latitudinal) o gnero apresenta espcies tpicas de guas frias (como D. norvegica), tropicais (como D. caudata), mas tambm espcies capazes de apresentar ampla distribuio. Como exemplo de espcie cosmopolita pode-se citar Dinophysis acuminata que ocorre principalmente em guas temperadas e frias dos oceanos ndico, Pacfico (Chile, Japo, Tasmnia, Nova Zelndia) e Atlntico (Uruguai, Argentina e frica do Sul e toda a costa europia); tambm com ocorrncia para os mares Mediterrneo e Adritico (REGUERA, 2003). Os relatos existentes acerca deste gnero para guas brasileiras apresentam D. acuminata como a principal espcie do gnero nos litorais dos estados da regio sudeste (BARBOZA, 1997; VILLAC; TENENBAUM, 2001; VIANNA, 2003; FERREIRA, 2004; BASTOS; GARCIA, 2005; LOURENO, et alii 2007; MARIN, 2007; VILLAC et alli, 2008; MOSER et alii, 2009) e sul (SCHIMIT; PROENA, 2000; PERSICHT; GARCIA, 2003; PROENA, 2004; MAFRA-JUNIOR et alii, 2006; FUJITA; ODEBRECHT, 2007; PROENA, 2007; MACEDO, 2007; BASTOS, 2009a). Outras espcies so relatadas para guas mais quentes, quer sejam para o nordeste brasileiro ou para regies do sudeste/sul durante os meses mais quentes do ano: D. caudata (ESKINASE-LEA et alii, 1972; VIANNA, 2003; FERREIRA, 2004; BASTOS; GARCIA, 2005; FUJITA; ODEBRECHT, 2007; MACEDO, 2007; VILLAC et alli, 2008; BASTOS, 2009c); D. fortii (FERREIRA, 2004; MARIN, 2007; BASTOS, 2009f); D. tripos (VIANNA, 2003; FERREIRA, 2004; MOSER et alii, 2005; MARIN, 2007) e D. rotundata (FERREIRA, 2004). H espcies apenas relatadas para guas frias do extremo sul do Brasil: D. brevisulcus D. circumsutum, D. exigua, D. minuta, D. ovata, (Bastos, 2009 b, d-e, g-h). No entanto salienta-se que at o presente momento nenhuma destas espcies se encontra implicada na produo de toxinas diarricas (pois no encontram-se na Lista Taxonmica do IOC/UNESCO), embora todo o gnero Dinophysis seja considerado potencialmente toxgeno (REGUERA, 2002). Em mesoescala a distribuio das microalgas encontra-se atrelada s diferenas existentes entre massas dgua. Pois organismos fitoplanctnicos encontram-se sujeitos ao movimento imposto pelo hidrodinamismo devido a seu restrito poder de locomoo. Por esse motivo considera-se que organismos planctnicos s ejam excelent es indicadores de massa dgua (NYBAKKEN, 2001). Nessa escala encontramos principalmente diferenas moduladas pelos fenmenos e processos oceanogrficos que ocorrem nas provncias nertica e ocenica adjacente, com seu conjundo de massas dgua caracterstico. Xie et alii (2007) analisaram dados oceanogrficos e de distribuio de D. acuminata em uma srie temporal de 20 anos, com amostragens semanais, para a costa francesa. Puderam constatar que o aumento na densidade celular encontrava-se associado ocorrncia de pequenos vrtices de sub-superfcie, induzidos pela ao dos ventos de sudoeste/noroeste que ocorriam durante o final da primavera e ao longo do vero (em situao de coluna dgua estratificada em funo da temperatura). Baseado nessas circunstncias foi determinada uma janela de tempo, denominada estao Dinophysis, com durao mdia de 5 meses (iniciando em abril/maio e com trmino entre setembro/novembro) onde ocorrem as maiores densidades celulares para essa espcie, fora deste perodo a densidade celular era muito baixa, menos que 20 clulas por litro de gua do mar (Figura 16). Em microescala (de metros decmetros) a distribuio das microalgas a resultante de um balano entre variveis biticas e abiticas na busca pelo timo de desenvolvimento para cada espcie de microalga (NYBAKKEN, 2001). Dessa forma condies de estabilidade de uma coluna dgua podem propiciar um acmulo de dinoflagelados em uma determinada 35

profundidade, principalmente onde haja formao de barreiras de densidade. Tal condio de estabilidade da coluna dgua pode ser modulada por um gradiente de temperatura ou de salinidade.

Densidade celular (clulas.l-1)

Estao Dinophysis

Semanas

Figura 16. Janela de tempo da distribuio de Dinophysis, em amostragem semanal, ao longo de 12 anos (1989-2000) na baia de Vilaine, Frana. Adaptado de Xie et alii, 2007.

Delmas et alii (1992) encontraram um forte gradiente de temperatura determinando a estabilidade da coluna dgua na costa francesa e nessas condies Dinophysis spp. apresentaram aumento na densidade celular, por crescimento e/ou acmulo, na regio da termoclina. Tambm foi verificado se a concentrao de nutrientes inorgnicos havia contribudo para o acmulo, porm essa varivel no se mostrou significativa. Nesse trabalho tambm foi relatado que para ocorrer o acmulo de Dinophysis a condio de estabilidade deveria apresentar-se constante ao longo de um perodo de duas semanas. Para vero no mar Bltico, D. acuminata apresentou uma distribuio vertical preferencial por guas profundas, abaixo da termoclina 77 metros de profundidade, em condies de baixa luminosidade e temperatura. Foi constatada evidncia de mixotrofia e a microalga apresentou densidade de 18 000 clulas.l-1 de gua do mar (SETL et alii, 2005). Durante o vero na costa francesa observa-se que Dinophysis tendem a se acumular em uma camada de 2 metros de espessura sobre a picnoclina 12 metros de profundidade (LUVEN et alii, 2005). Villarino et alii (1995) encontraram para D. acuminata comportamento de migrao vertical, em situao de estabilidade no vero. A realizao de migrao vertical asseguraria a captao de nutrientes disponveis em guas mais profundas, abaixo da termoclina, durante o perodo noturno para a realizao da fotossntese durante o dia na zona euftica. Nesse estudo foi encontrada a densidade mxima de Dinophysis entre 0-10 metros durante o dia.

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3. MATERIAIS E MTODOS 3.1 rea de Estudos A rea de estudos localiza-se na regio tropical do Atlntico Sul, sobre a Plataforma Continental Sudeste, que se extende desde Cabo Frio (23 S, Rio de Janeiro) at o Cabo de Santa Marta (28 40 S, Santa Catarina). A baa de Sepetiba um ambiente raso, que funciona como um esturio parcialmente misturado em conjunto com a baa de Ilha Grande (BELO, 2003). Localizada no litoral sudoeste do Estado do Rio de Janeiro, entre os paralelos de 22 53' e 23 05' sul e os meridianos de 44 01' e 43 33' oeste, a baa de Sepetiba encontra-se limitada ao norte e ao leste pelo continente, ao sul pela restinga da Marambaia e a oeste pela baa de Ilha Grande. Possui cerca de 130 Km de linha de costa, espelho d'gua de 305 Km2 , com dimenses de 25 Km no eixo leste-oeste e 12,5 Km no norte-sul (SEMA, 1998). A fazenda marinha da Associao de Maricultores de Mangaratiba (AMAR) localizase na ponta da Passagem na ilha Guaba em frente ao distrito sede do municpio de Mangaratiba, estado do Rio de Janeiro (Figura 17). A regio localiza-se sobre a linha imaginria que separa as baas de Sepetiba e Ilha Grande.

Figura 17. Baa de Sepetiba, litoral sul do estado do Rio de Janeiro, onde se localiza a Ilha Guaba, municpio de Mangaratiba. Assinalada com seta no mapa a ponta da Passagem onde localiza -se a fazenda marinha da AMAR.

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Sobre a Plataforma Continental Sudeste (onde se localiza a regio da baa de Sepetiba) encontram-se massas dgua resultantes de uma mistura de: gua Tropical4 (AT), gua Central do Atlntico Sul5 (ACAS) e gua Costeira 6 (AC) (CASTRO; MIRANDA, 1998 apud OLIVEIRA, 2006). A Corrente do Brasil (CB) exerce grande influncia na Plataforma Continental Sudeste e Sul, principalmente em sua poro mais externa, transportando a AT at a isoterma de 20C onde se encontra com a Corrente das Malvinas (CM), formando a Zona de Confluncia Brasil-Malvinas (ZCBM), entre as latitudes de 36-39 S (SOUZA; ROBINSON, 2004). Durante o vero a CB extende sua influncia at a Plataforma Continental Sul e recuando no outono/inverno at a latitude de 24S. Logo, para a baa de Sepetiba a CB exerce influncia ao longo de todo o ano. Stevenson et alii (1998) demonstraram que durante situaes excepcionais no inverno (passagens de sistemas frontais) guas tpicas de sistemas temperados podem chegar at a baa de Sepetiba. Tal fato foi demonstrado pela presena de taxons indicadores de guas da plataforma Argentina, que sofreram adveco em direo ao norte atravs da parte interna da plataforma continental at cerca de 22S. Souza; Robinson (2004) relataram que recentes trabalhos tem associado chegada de guas frias e menos salinas da ZCBM em latitudes mais baixas durante o inverno a sistemas frontais e Oscilao Sul El Nino. A baa de Sepetiba um sistema estuarino, recebendo aporte de guas doces dos rios de sua bacia hidrogrfica e gua salgada do oceano Atlntico, atravs de duas passagens que os interligam. Sua bacia hidrogrfica possui cerca de 2 617 Km2 , abrangendo 12 municpios, onde se encontram reas de expanso urbana e industrial da cidade do Rio de Janeiro e reas cobertas por vegetao de mata Atlntica. Essa ocupao do solo diferenciada reflete-se na qualidade da gua doce que chega baa de Sepetiba (SEMA, 1998). Uma regio hidrogrfica apresenta caractersticas tipicamente serranas (serra do Mar, na rea III e II da baa), com cursos d'gua de menor volume (rios Grande, Ingaba, do Bagre e Sa), que drenam reas menos povoadas e com pouca, ou nenhuma, atividade industrial. A outra regio hidrogrfica apresenta rios com volume d'gua mais expressivos (rios Guandu, da Guarda, Guandu-Mirim e canal do It) que drenam reas densamente povoadas, sem saneamento bsico, e com intensa atividade industrial (rea I da baa) fonte de poluio principalmente por metais txicos. Outros rios, menos expressivos (Piraqu, Portinho, Mazomba e Engenho Novo), embora drenem reas menos populosas, desguam em partes da baa onde a circulao restrita, ou seja, com taxa de renovao de guas muito baixas resultando em degradao ambiental por carga orgnica (extremo leste da rea I da baa). O contato com o oceano Atlntico d-se principalmente a oeste, na entrada da baa, entre as ilhas de Itacuru e Jaguanum e a ponta da Pombeba (na restinga da Marambaia). Nessa regio encontram-se as maiores profundidades, entre 24 e 31 metros. Em menor proporo, em virtude das pequenas profundidades, no extremo leste da restinga da Marambaia, na regio de barra de Guaratiba, encontra-se a outra comunicao da baa com o oceano. A profundidade mdia das guas da baa de Sepetiba encontra-se em torno de 7,7 metros sendo que, aproximadamente, 50% de sua rea possui profundidades inferiores a 6 metros (SEMADS, 2001). Outra rea de maiores profundidades o canal central, utilizado para navegao do Porto de Itagua. O volume mdio de suas guas foi estimado em 2,9 x109 m3 . Como corpo d'gua semifechado, a baa de Sepetiba apresenta guas salinas e salobras,
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Quente (T > 20C) e salina (> 36,4), transportada na camada superficial da CB (0-200m de profundidade); Relativamente fria (T <20C) e menos salina (< 36,4), transportada pela CB entre 200-500 de profundidade; 6 Resultante da mistura da AT, ACAS com o aporte fluvial. Caracterizada por temperaturas elevadas e baixa salinidade.

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onde o rio So Francisco e o Piraco tm influncia significativa na distribuio da salinidade dentro da baa, sendo que nas reas costeira e no fundo da baa a salinidade inferior a 30. Na parte central e nas reas mais expostas ao oceano Atlntico a salinidade varia entre 30 e 34 (SEMADS, 2001). A circulao das guas, no interior da baa, realiza-se principalmente pela ao da onda de mar, mas tambm sendo influenciada pela batimetria, morfologia (do fundo e da costa), regime de ventos e pelo aporte de gua doce. A amplitude mdia da mar, em situao de sizgia de 1,1 metros e, em situao de quadratura de 0,3 metros. O sistema de mar o semidiurno, com desigualdade diurna, ou seja, ocorrncia de duas preamares e de duas baixamares, em um perodo de 24h, porm com amplitudes diferentes. O padro de circulao caracteriza-se pelo pequeno tempo de residncia (4,17 dias) e ausncia de estratificao (grande mistura da coluna d'gua) (SEMADS, 2001). Portanto a baa de Sepetiba pode ser dividida em trs reas (SEMA, 1998):rea I Compreende a regio costeira desde a barra de Guaratiba at a ilha da Madeira. Nessa rea encontram-se as menores profundidades, com correntes de mar menos intensas, sedimentos de fundo predominantemente argilo-siltosos (caractersticos de ambientes de baixa energia), grande influncia de guas continentais. Principalmente no trecho entre a ilha da Madeira e o canal do It, chega baa 63,7% da carga orgnica total (69.920 Kg DBO.dia -1 ), oriunda de esgotos domsticos. A poro localizada leste do canal do It recebe cerca de 34,7% da carga orgnica total da baa. rea II - Regio localizada entre a costa oeste da ilha da Madeira e da costa oeste da ilha de Jaguanum. Aqui, encontram-se as maiores profundidades, consequentemente correntes de mar mais intensas, sedimentos de fundo com valores equivalentes de areia e argilo-siltosos (caracterstico de balano de energia). uma rea de transio onde h maior mistura da gua costeira com a que chega da plataforma. rea III Situada a partir da costa oeste da ilha de Jaguanum. Predomnio de sedimentos grossos (rea de alta energia), principalmente areia, caracterizando forte influncia ocenica. As reas II e III juntas contribuem com apenas 1,6% da carga orgnica total diria para a baa de Sepetiba. 3.2 Coleta 3.2.1 Das microalgas Mensalmente, durante um ano, a comunidade fitoplanctnica foi coletada utilizando-se uma garrafa Van-Dorn (Alfakit, capacidade de 2L), cada metro ao longo de uma coluna dgua de 8 metros de profundidade, segundo definido conjuntamente com a Dr. Beatriz Reguera (comunicao pessoal7 ). Como as espcies procuradas so caracatersticas de ambientes nertico e ocenico as coletas ocorriam sempre na preamar. Um litro de gua do mar era mensurado em uma proveta graduada e passado atravs de uma rede de plncton (Alfakit, 30 cm de boca, 1 metro de comprimento, malha de 20m) para a coleta da frao do microfitoplncton e para concentrar a amostra em um volume de 100ml. As amostras foram acondicionadas em frascos plsticos foscos, com bartoque, identificadas e fixadas com formaldedo para posterior identificao e contagem das espcies d dinoflagelados de os interesse. As coletas foram realizadas em embarcao cedida pelo maricultor Lcio Gualaudi Silva e viabilizada pela Secretaria de Agricultura, Pesca e Meio Ambiente da Prefeitura Municipal de Mangaratiba e pela Associao dos Maricultores de Mangaratiba.

Pesquisadora do Instituto Oceanogrfico Espanhol, Vigo, Pontevedra, Galcia. Em janeiro de 2007.

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3.2.2 Das variveis oceanogrficas Ao longo do mesmo perfil de 8 metros a temperatura foi mensurada atravs de termmetro acoplado garrafa Van-Dorn, a salinidade obtida pelo uso do refratmetro porttil UNITY (RTS-101ATC), a profundidade Secchi mensurada com disco de Secchi. Os parmetros climatolgicos (precipitao mdia, intensidade e direo mdia do vento) foram gentilmente cedidas pela Estao Meteorolgica da Cia. Vale localizada na ilha Guaba. 3.3 Identificao e Quantificao de Dinophysis Foram observadas 5 alquotas de 20ml de cada amostra coletada, perfazendo um total de 100ml analisado por amostra. As alquotas foram depositadas em cmaras de sedimentao Utherml (Fleming), cobertas com lamnula e observadas sob microscpio ptico invertido NIKON Eclipse TS100. Como as microalgas de interesse apresentam ocorrncia rara, foi contada toda a cmara de sedimentao em aumento de 100x. Os exemplares de Dinophysis foram fotografados com mquina digital KODAC EasyShare (CX7430) nos aumentos de 100, 200 e 400x em microscopia de campo claro e contraste de fase. A identificao foi baseada em anlise morfomtrica, uma vez que a tabulao de Dinophysis constante em nvel de gnero. O material de referncia utilizado na identificao foi Taylor et alii (1995), Steidinger; Tangem (1997), Balech (2002) e Raho et alii (2008). 3.4 Anlise Estatstica Foi realizada anlise de varincia bi- fatorial (bem como testes de normalidade e homogeneidade das varincias) para verificar se houve diferena significativa na densidade celular de Dinophysis nas diferentes profundidades amostradas, em relao diferentes pocas do ano (outono, inverno, primavera e vero). E tambm se a variao na ocorrncia das microalgas com a profundidade est relacionada estao do ano com auxlio do programa GraphPad Prism verso 5.01 (GraphPad Software, 1992-2007). A dominncia de uma determinada espcie de Dinophysis em funo do tempo foi calculada atravs de anlise de classificao (Cluster) efetuada com o programa Fitopac v1.6 (SHEPHERD, 2004). Para verificar a relao existente entre as espcies de Dinophysis e os parmetros oceanogrficos e climatolgicos disponveis foi realizada anlise multivariada (Anlise de Redundncia Cannica) no programa CANOCO for Windows. Anlise empregada foi uma anlise de Redundncia cannica (RDA), usando uma matriz de variveis faunsticas (dino flagelados) e de variveis previsoras (ambientais ou abiticos). A anlise de Redundncia Cannica parte da premissa de que as relaes entre as distribuies de organismos (no caso, representadas pela matriz de ocorrncias de dinoflagelados) e o ambiente (as variveis fsicas) seguem um modelo linear de resposta. Nesta anlise tambm foi utilizada a matriz transformada de concentraes de dinoflagelados. Executada no programa CANOCO for Windows. Como a anlise baseia-se em distncias euclidianas entre os objetos (amostras), que sero calculadas atravs da matriz transformada, na realidade ela utilizou-se da distncia de Hellinger. Significncia das variveis previsoras (correlao fauna x varivel fsica) testada atravs de modelos de permutao de Monte Carlo (9999 permutaes), atravs de rotina do CANOCO. Variveis significativas foram selecionadas para o modelo final. No significativas foram excludas. Todas as amostras que apresentaram valores nulos foram excludas das anlises.

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4. RESULTADOS E DISCUSSO 4.1 Identificao das Espcies Foram identificadas seis espcies de Dinophysis na rea de estudo. As clulas que se apresentaram em viso dorsal foram tipadas como Dinophysis spp. apenas. 4.1.1 Dinophysis acuminata (Claparde & Lachmann 1859)

Figura 18. Dinophysis acuminata exemplares de vero (dezembro de 2007), fotomicrografias em aumento de 400x. A) Variedade acuminata em microscopia de contrastes de fase, em evidncia os trs espinhos da aleta sulcal esquerda (R1 , R2 e R3 ); B) Variedade lachmani em microscopia de campo claro, em detalhe vacolos alimentares e n (ncleo); C) Variedade lachmani, teca vazia evidenciando a ornamentao regular da hipoteca com aurolas, microscopia de campo claro; D) Variedade lachmani, detalhe da regio antapical retilnea na poro ventral. Fotos da autora.

Sinnimos: Dinophysis borealis Paulsen 1949; Dinophysis lachmanni Paulsen 1949; Dinophysis boehmii Paulsen 1949; D. acuminata var. granulata? Jorgensen; D. simplex Bhm Tamanho : Pequeno a mediano (38-58 m). Forma: Elptica ou oval. Largura mxima da clula encontra-se no ponto mdio do comprimento mximo. Epiteca: Pequena, em geral plana, ligeiramente convexa e baixa. No foi visvel quando a clula encontra-se em viso lateral. Hipoteca: Corresponde a maior parte da clula. Regio antapical levemente convexa, com a poro ventral retilnea (Figura 18, D). A regio antapical arredondada podendo apresentar de 2 a 4 ndulos (no encontrados nos exemplares analisados). A superfcie da hipoteca tipo E, apresentou-se coberta por pequenas aurolas circulares com poros em quase todas (Figura 18, C). Aletas: Aleta cingular anterior sem raios. Aleta sulcal esquerda bastante curta (em relao hipoteca, localizada a cerca de 2/3 do comprimento mximo da hipoteca), com trs raios pequenos (Figura 18, A). Aleta sulcal direita termina na altura da poro media entre R2 e R3 . 41

A espcie apresentou grande variabilidade morfolgica ao longo do perodo analisado. Na primavera e vero pode-se observar clulas bem desenvolvidas, repletas de vacolos, provavelmente alimentares (Figura 18, B). Ao longo do outono e do inverno as clulas apresentaram menor largura, embora exemplares repletos de vacolos tambm pudessem ser encontrados (Figura 19). D. acuminata mixotrfica e pode, alm de efetuar fotossntese, se alimentar de protozorios ciliados como Myrionecta rubra. Nessa circunstncia o contedo citoplasmtico do protozorio sugado atravs de um pednculo alimentar, que se extende partir da regio sulcal do dinoflagelado, e armazenado em vacolos alimentares da microalga, conforme evidenciado no primeiro relato de cultivo para essa espcie (PARK et alii, 2006).

Figura 19. Dinophysis acuminata variedade lachmani, exemplares de inverno (julho de 2007), fotomicrografias em aumento de 400x. A) Clula em contraste de fase; B) Microscopia de campo claro evidenciando os trs espinho (R1 , R2 e R3 ) da aleta sulcal esquerda; C) e D) a mesma clula em campo claro e contraste de fase, em evidncia vacolos alimentares. Fotos da autora.

A espcie possui ampla distribuio latitudinal (macroescala) e ocorre principalmente em guas temperadas e frias dos oceanos ndico, Pacfico (Chile, Japo, Tasmnia, Nova Zelndia) e Atlntico (Uruguai, Argentina e frica do Sul e toda a costa europia). Tambm h relatos para os mares Mediterrneo e Adritico (REGUERA, 2003). Em guas brasileiras h relatos da presena de D. acuminata na regio sudeste para o litoral do Rio de Janeiro nas baas de Sepetiba (VIANNA, 2003; FERREIRA, 2004), Ilha Grande (LOURENO, et alii 2007; MARIN, 2007) e Guanabara (BARBOZA, 1997; VILLAC; TENENBAUM, 2001); em So Paulo (VILLAC et alli, 2008; MOSER et alii, 2009) e no Esprito Santo (BASTOS; GARCIA, 2005). Na regio sul a espcie foi relatada no Paran (MAFRA-JUNIOR et alii, 2006; MACEDO, 2007), em Santa Catarina (SCHIMIT; PROENA, 2000; PROENA, 2004; PROENA, 2007) e no Rio Grande do Sul (PERSICH; GARCIA, 2003; FUJITA; ODEBRECHT, 2007; BASTOS, 2009a). Abundante em guas costeiras, especialmente em reas eutrficas (TAYLOR et al., 1995).

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4.1.2 Dinophysis caudata (Saville-Kent 1881)

R1 R2

R3

Figura 20. Dinophysis caudata. Clula em viso lateral (valva esquerda), microscopia de campo claro aumento de 200x. Detalhes taxonmicos: aca, aleta cingular anterior em forma de funil; seta, projeo antapical ventral.

Sinnimo: Dinophysis homunculus Stein 1883 Tamanho: Grande (70-110 m). Normalmente menor que 105m. Forma: Apresenta na hipoteca apndice em forma de cauda, bem definido e robusto, com espessura varivel. Aletas: Aleta cingular anterior com raios finos (Figura 20, aca). Aleta esquerda grande e esculpida, com trs raios bem visveis (Figura 20, R1 , R2 e R3 ). Epiteca: Baixa e achatada. Hipoteca: Aproximadamente retilnea no incio da regio dorsal; na poro final da regio dorsal suavemente convexa. Regio ventral retilnea, ao trmino da aleta sulcal esquerda a hipoteca apresenta angulao de quase 90 em direo ao antapex. Apresenta apndice em forma de cauda na poro ventral da regio antapical (Figura 20, marcao com seta). Distribuio: Espcie euritrmica e eurihalina. Predominantemente nertica e de guas quentes. Presente no litoral do Rio de Janeiro (VIANNA, 2003; FERREIRA, 2004), do Esprito Santo (BASTOS; GARCIA, 2005) e em So Paulo (VILLAC et alli, 2008). Para a regio sul encontrada no Paran (MACEDO, 2007), Santa Catarina (PROENA, 2004) e no Rio Grande do Sul (PERSICH; GARCIA, 2003; FUJITA; ODEBRECHT, 2007; BASTOS, 2009c). Tambm relatada para a regio nordeste, no litoral de Pernambuco (ESKINASI-LEA et alii, 1972).

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4.1.3 Dinophysis fortii (Pavillard 1923)

A)

B)

C)

D)

Figura 21. Dinophysis fortii exemplares de vero, fotomicrografias em aumento de 400x. A) clulas pareadas, recm divididas em contraste de fase, de fevereiro, no detalhe poro final da aleta sulcal esquerda herdada pela clula filha; B) as mesmas clulas pareadas, recm divididas em microscopia de campo claro; C) exemplar de fevereiro; D) exemplar de dezembro, no detalhe regio ventral retilnea. Fotos da autora.

Sinnimos: Dinophysis intermedia Pavillard 1916, Dinophysis ovum Schtt sensu Martin 1929 Tamanho : Mdio (60-80 m). Forma: Clula sub-ovalada. Aletas: Aleta cingular anterior sem raios. Aleta sulcal esquerda grande (cerca de 4/5 da hipoteca) com trs espinhos. Na figura 21 (tem B), vemos apenas dois espinhos porque a poro final da aleta sulcal esquerda foi herdada pela outra clula filha. Epiteca: Achatada e no visvel com a clula em viso valvar. Hipoteca: Regio ventral r ta at a base do terceiro raio da aleta sulcal esquerda. Regio e dorsal suavemente convexa. Regio antapical ampla e arredondada. Parte mais larga da clula localizada cerca de 2/3 do comprimento total. Ornamentao da hipoteca do tipo E: com aurolas he xagonais marcadas com poros. Cloroplastos presentes. Distribuio: guas temperadas. rara no sul do Brasil, mas frequente ao norte em guas mais quentes (BALECH, 2002). Segundo Reguera (2003) espcie nertica e ocenica. Possui ampla distribuio em mares temperados e frios (Pacfico: Japo, Austrlia, Tasmnia, Califrnia; Atlntico: Brasil e pennsula Ibrica; Meditarrneo). Encontrada n Rio de Janeiro na baa de Sepetiba (FERREIRA, 2004) e na baa de o Ilha Grande (MARIN, 2007). Tambm no Rio Grande do Sul (BASTOS, 2009f).

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4.1.4 Dinophysis ovum (Schtt 1895)

Figura 22. Dinophysis cf. ovum, setas indicam reas de convexidade na regio ventral e antapical, linhas tracejadas a parte mais larga da clula na altura de R3 . Exemplares de vero. A) Fotomicrografia em contraste de fase no aumento de 400x; B) Fotomicrografia em campo claro no aumento de 200x; C) Fotomicrografia em contraste de fase no aumento de 400x; D) Microscopias em campo claro, aumento de 400x. Fotos da autora.

Tamanho: pequeno, comprimento de 44-62m e largura de 38-45m. Forma: Em viso lateral apresenta forma ovalada, mais regular que D. acuminata. Mais estreita na regio apical do que na antapical. Aletas: Aletas cingulares no possuem raios. Aleta sulcal direita apresenta contorno suave e termina na base do segundo raio (R2 ) da aleta sulcal esquerda. Epiteca: Pequena, no visvel quando a clula posiciona-se lateralmente. Hipoteca: Contorno da regio ventral at o terceiro raio suavemente convexo (enquanto que em D. acuminta anguloso). partir do terceiro raio da aleta sulcal esquerda o contorno aproximadamente arredondado. A regio dorsal acent uadamente mais convexa que a regio ventral. A poro mais larga da clula d-se na altura do terceiro raio da aleta sulcal esquerda (R3 ) ou um pouco mais abaixo (Figura 22, linhas tracejadas em A, C e D). Teca ornamentada com aurolas. Distribuio: Espcie tpica de guas subtropicais quentes. Encontrada nos mares Mediterrneo, Adritico e no oceano Atlntico (costa inglesa e espanhola), segundo Raho et alii (2008). Possui plastdios de colorao dourada. No foram encontrados relatos anteriores para essa espcie no litoral brasileiro. Essa espcie encontra-se relacionada ao complexo Dinophysis acuminata, ou seja, faz parte de um conjunto de espcies com morfologia muito semelhante D. acuminata e que comumente so identificadas equivocadamente. Tais espcies (D. ovum, D. sacculus, por exemplo) geralmente ocorrem em populaes muito reduzidas, o que dificulta mais ainda sua identificao. Na maioria das vezes ocorrem como espcies crpticas.

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4.1.5 Dinophysis tripos (Gourret 1883 )

R1

R2

R3

A)

B)

Figura 23. Dinophysis tripos, exemplares de primavera, fotomicrografias em aumento de 200x. A) Clula recm-dividida, microscopia de campo claro, em detalhe a pequena aleta sulcal direita, notar que a microalga possui apenas a poro final da aleta sulcal esquerda; B) Clula recm-dividida, poro final da aleta sulcal esquerda regenerada, porm ainda sem reticulao, assinalados os trs grandes espinhos que sustentam a aleta, seta assinala a aleta cingular anterior, com seus raios. Fotos da autora.

Tamanho: Grande (90-125 m). Forma: Possui duas projees antapicais alongadas, uma anterior curta (ventral) e outra posterior (dorsal) mais longa. Aletas: Aleta cingular anterior com muitas estrias (Figura 23, B), formando um funil com uma peque na epiteca no fundo. Aleta sulcal esquerda longa, podendo chegar at a base da projeo posterior (ventral), com os trs raios bem evidentes (Figura 23, B). Aleta sulcal direita pequena. Epiteca: De tamanho pequeno, retilnea. No visvel lateralmente. Hipoteca: Apresenta grande tamanho. Inicialmente a regio dorsal cncava e depois se torna suavemente convexa. Apresenta na regio antapical duas projees bem evidentes: uma dorsal, de menor tamanho, e outra ventral muito bem desenvolvida (Figura 24). Deve-se ter cuidado ao observar a projeo dorsal, pois se o morfotipo a apresentar muito reduzida pode ser confundido com D. caudata. Distribuio: guas temperadas e tropicais, ocasionalmente em guas frias. Presente no sul do Brasil (BALECH, 1988 citado por BALECH, 2002). Encontrada na baa de Sepetiba (VIANNA, 2003; FERREIRA, 2004) e na baa de Ilha Grande (MARIN, 2007). Presente em So Paulo (MOSER et alii, 2005; VILLAC et alli, 2008).

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Figura 24. Dinophysis tripos exemplares de vero, fotomicrografias em campo claro, aumento de 200x. Fotos da autora.

4.1.6 Dinophysis rotundata (Claparde & Lachmann 1859 )

A)

B)

C)

D)

Figura 25. Dinophysis rotundata fotomicrografias em aumento de 400x. A) exemplar de outono, clula plena de vacolos alimentares; B) exemplar de inverno; C) exemplar de primavera; D) exemplar de vero, presena de vacolos alimentares porm menos evidentes. Todas as fotomicrografias em campo claro exceto B) contraste de fase. Notar em todas as fotos a epiteca convexa. Fotos da autora.

Sinnimo: Phalacroma rotundatum (Claparde & Lachmann) Kofoid & Michener 1911; Dinophysis whittingae Balech, 1971. 47

Tamanho : De pequena mediana (36-56 m). Forma: Elptica, quase circular (Figura 25). Epiteca: Embora baixa, nitidamente convexa e mais alta que das outras espcies. Hipoteca: Ornamentao do tipo A: aurolas pequenas com poros em um de cada 5-10 aurolas. A largura mxima a hipoteca encontra-se na altura entre o segundo e o terceiro raio da aleta sulcal esquerda. Aletas: Aletas cingulares lisas e quase horizontais. Aleta sulcal estreita, com trs raios (o segundo localizado bem prximo ao primeiro). Ausncia de cloroplastos. Essa espcie foi a primeira onde observou-se o processo de mizocitose, isto , a capacidade apresentada por D. rotundata de alimentar-se predando um ciliado (Tiarina fusus) atravs de pednculo alimentar (HANSEN, 1991). Nessa situao a microalga mostra-se plena de vacolos alimentares, repletos do contedo citoplasmtico do ciliado. Presente em na bai de Sepetiba, Rio de Janeiro (FERREIRA, 2004). Tambm descrita para o litoral de So Paulo (VILLAC et alli, 2008). 4.2 Distribuio Espacial e Temporal de D. acuminata Dinophysis acuminata foi a espcie mais frequente e abundante do gnero Dinophysis ao longo de todo o perodo estudado na ilha Guaba. Tal fato encontrou-se de acordo com o j relatado por Ferreira (2004) para a mesma regio, no perodo de primavera e vero de 2003/2004. Vianna (2003) tambm relatou a espcie como tendo a maior abundncia relativa (em relao ao gnero Dinophysis) na mesma regio na primavera de 2001 e no outono de 2002. Ainda para o litoral do Rio de Janeiro a espcie j foi encontrada na baa de Ilha Grande, porm em abundncia to baixa tanto, no outono de 2004, que a espcie somente foi detectada em amostras concentradas de rede, ocorrendo em abundncias abaixo do limite de deteco para a garrafa van-dorn (LOURENO et alii, 2007). Foi modificada a metodologia de coleta e na primavera/vero de 2006 Marin (2007), com auxlio de bomba submersa conseguiu, em amostra concentrada de 90 litros de gua do mar, quantificar D. acuminata em <10 clulas.2l-1 . Para o estado de So Paulo a espcie foi relatada por Villac et alii (2008) em um trabalho que comp ilou registros do fitoplncton de todo o litoral paulista nos ltimos 100 anos; no entanto no h registros acerca da frequencia e abundncia desta espcie, apenas foi relatada sua presena. MOSER et alii (2009) em estudo realizado na baa de Santos focando microalgas nocivas encontraram incremento na populao de Dinophysis cf. acuminata por ocasio de um grande aporte pluvial continental que intensificou a condio de baixa mistura turbulenta da coluna dgua. Para o sul do Brasil D. acuminata encontra-se relatada como a principal espcie do gnero no estado de Santa Catarina, tendo inclusive formado intensa florao pela primeira vez em guas brasileiras em janeiro de 2007 (PROENA et alii, 2007). No Rio Grande do Sul D. acuminata foi associada mortandade de organismos bentnicos (PERSICH; GARCIA, 2003) e foi encontrada em amostras de primavera e vero na lagoa dos Patos (FUJITA; ODEBRECHT, 2007), novamente no fo ram relatadas informaes pertinentes sua abundncia e frequncia apenas a presena. A espcie a mais amplamente difundida do gnero Dinophysis, sendo encontrada desde guas do Atlntico norte: n Noruega e Finlndia (SETL et alii, 2005), a mais a abundante na costa ocidental da Europa (KAT, 1983; JOHANSSON et alii, 1996; REGUERA, 2002; KLPPER et alii, 2003; XIE et alii, 2007; RAHO et alii, 2008) e tambm na Amrica do Norte (CEMBELLA, 1989); no mar Mediterrneo (KOUKARAS; NIKOLAIDIS, 2004; AUBRY et alii, 2005; MARASOVIC et alii, 2007; REIZOUPOLOU et 48

alii, 2008), ocorre em todo o cone sul americano (BALECH, 2002; BLANCO et alii, 2007b), na Nova Zelndia (BURNS; MITCHEL, 1982; MACKENZIE et alii, 2005), no mar Branco da Rssia (VERSHININ et alii, 2006), na China (LIU; MINGJIANG, 2004; LU; RODGKISS, 2004) e no Japo (HOSHIAI et alii 2002; NISHITANI et alii, 2002; NISHITANI et alii, 2005; ADACHI et alii, 2008). A anlise de varincia realizada para verificar se houve diferena significativa na densidade de Dinophysis acuminata ao longo de cada metro da coluna dgua (de 8 metros de profundidade) revelou a existncia apenas de dois estratos: 0 4 metros e abaixo de 4 metros. Tal fato coincidiu com observaes realizadas em campo que sugeriram a presena de maior ao hidrodinmica da corrente de mar em torno dos 4 metros de profundidade (dados no apresentados na tese). Dentro de cada um desses estratos no houve diferena significativa na densidade dos indivduos amostrados por litro de gua do mar (Figura 26). A variao na ocorrncia de D. acuminata foi significativa em relao estao do ano (p<0.0001) e constituiu a principal fonte de variabilidade (49,05% da varincia dos dados). A diferena entre o Vero e demais estaes foi significativa (p<0,001). A diferena entre as demais estaes, entretanto, no foi significativa.

Dinophysis acuminata
> 4m at 4m > 4m at 4m > 4m at 4m > 4m at 4m 0 5 10 15 20 25

Profundidade

Primavera Vero Outono Inverno

raiz(concentrao (ind/l))
Figura 26. Variao da densidade celular de Dinophysis acuminata em relao profundidade (estratos) e s estaes do ano. Dados transformados.

Dinophysis acuminata apresentou maiores densidades celulares (densidade mdia para a estao do ano) no estrato de 0-4 metros no inverno (63 clulas.l-1 ), na primavera (46 clulas.l-1 ) e no vero (297 clulas.l-1 ) do que para o estrato >4metros: 33 clulas.l-1 , 12 clulas.l-1 e 160 clulas.l-1 , inverno, primavera e vero respectivamente. Apenas para o outono o estrato >4 metros apresentou-se com maior abundncia com 57 clulas.l-1 , contra 24 clulas.l-1 para o estrato 0-4 metros. No entanto somente durante o vero houve diferena significativa na abundncia para os diferentes estratos. Para as demais estaes as diferenas no foram significativas estatisticamente. Tais dados significam que D. acuminata apresentou maior abundncia no estrato superior da coluna dgua durante o vero (Dezembro com 192 clulas, Janeiro com 343 clulas e Fevereiro com 355 clulas por litro de gua do mar) do que no estrato inferior (Dezembro com 78 clulas, Janeiro com 243 clulas e Fevereiro com 160 clulas por litro de gua do mar).

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E que D. acuminata foi capaz apenas apresentar distribuio diferenciada em relao profundidade durante o vero, sendo mais abundante no estrato superior da coluna dgua. Nas demais estaes do ano essa diferena na abundncia no foi significativa estatisticamente. A variao decorrente da profundidade foi responsvel por 3,35% da varincia total dos dados ( =0.0118). A interao entre ambos os fatores (variao entre p estratos relacionada estao do ano) no foi significativa (p=0.07), tendo sido responsvel por 3,7% da varincia total dos dados. No estrato de 0-4m o valor mximo de abundncia relativa encontrado ocorreu durante o vero, no ms de fevereiro, e foi de 355 clulas.l-1 (Tabela 01), valor considerado na literatura como uma abundncia baixa (LINDHAL et alii, 2007). O valor mnimo ocorreu na primavera, no ms de outubro, com abundncia relativa de 8 cllas.l-1 . Para o estrato de >4m o valor mximo de abundncia tambm ocorreu no vero, no ms de janeiro, com 243 clulas.l-1 . E o valor mnimo foi de 3 clulas.l-1 , na primavera (ms de novembro). A espcie no foi detectada nos meses de maro e outubro para este estrato (Figura 27). O vero tem sido relatado como a estao do ano que propicia incremento populaes dessa espcie de dinoflage lado em mares de todo o mundo. Normalmente na baa de Ise (Japo) D. acuminata ocorre no vero em densidades de 300 clulas por litro de gua do mar (NISHITANI et alii, 2005). Na Grcia as abundncias relativas comumente registradas para a espcie oscilam em torno de 300-600 clulas.l-1 (KOUKARAS; NIKOLAIDIS, 2004). Altas abundncias tambm foram registradas no vero: no Japo 4200 clulas.l-1 (NISHITANI et alii, 2005), no mar do Norte na costa germnica exibindo mais de 4000 clulas.l-1 (KLPPER et alii, 2003), na costa da Grcia com 5000 clulas.l-1 (KOUKARAS; NIKOLAIDIS, 2004). No Brasil j foram relatadas 4600 clulas.l-1 para o litoral do Paran (MAFRA-JR et alii, 2006).
Tabela 01. Distribuio e abundncia de Dinophysis acuminata. Comparao entre resultados encontrados pelo presente trabalho (FERREIRA, 2009) e registros da literatura consultada.
Baixa abundncia relativa: centenas de clulas.l-1 Autores Densidade celular Estao Profundidade ?T Local Ferreira, 2009 355 clulas.l-1 vero 0-4 metros 2-3C Ilha Guaba, RJ Brasil Delmas et alii, 1992 (in shore) 400 clulas.l-1 vero Frana Nishitani et alii, 2005 300 clulas.l-1 vero 0-3 metros Baa de Ise, Japo Koukaras; Nikolaidis, 2004 300-600 clulas.l-1 vero Mar de Termaikos, Grcia

Altas abundncias relativas: milhares de clulas.l -1 Autores Densidade celular Estao Profundidade ?T Local Mafra-Jr et alii, 2006 4600 clulas.l-1 vero Paran, Brasil Delmas et alii, 1992 (offshore) 1500 clulas.l-1 vero 10-15 metros 3,5-5C Frana Klper et alii, 2003 4000 clulas.l-1 vero Mar do Norte, Alemanha Koukaras; Nikolaidis, 2004 5000 clulas.l-1 vero Mar de Termaikos, Grcia

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Continuao da Tabela 01.

Floraes: dezenas de centenas de clulas.l -1 Autores Densidade celular Estao Profundidade ?T Local Proena et alii, 2007 52000 clulas.l-1 vero Santa Catarina, Brasil Setl et alii, 2005 18000 clulas.l-1 vero 77 metros Mar Bltico, Finlndia Hoshiai et alii, 2002 88000 clulas.l-1 vero Japo Koukaras; Nikolaidis, 2004 85400 clulas.l-1 vero Mar de Termaikos, Grcia

- Ausncia de informao na literatura consultada.

Embora floraes de Dinophysis spp. sejam eventos raros, o vero o perodo mais propenso sua ocorrncia. Por exemplo, floraes de D. acuminata foram relatadas para o litoral do Japo com 88000 clulas.l-1 (HOSHIAI et alii, 2002); na Grcia com 57000 e 85400 clulas.l-1 , tendo a ltima florao durado mais de 4 meses (KOUKARAS; NIKOLAIDIS, 2004); na Finlndia com 38000 clulas.l-1 (LINDAHL et alii, 2007), na Austrlia com 20800 clulas.l-1 (MADIGAN et alii, 2006). No Brasil, na costa de Santa Catarina recentemente houve o primeiro relato de florao para essa espcie de dinoflagelado (Proena et alii, 2007). Nesse evento a microalga apresentou densidade celular mxima de 52000 clulas por litro de gua do mar, o mximo j relatado para o litoral brasileiro. Para as demais estaes do ano relata-se que D. acuminata apresente densidade celular muito baixa, como por exemplo, cerca de 40-120 clulas.l-1 para as guas da baa de Termaykos, na Grcia (KOUKARAS; NIKOLAIDIS, 2004). Dados que encontram-se de acordo com as baixas abundncias encontradas no presente trabalho para as estaes de outono, inverno e primavera (Figura 27). Importante salientar que mesmo com a presena de poucas centenas de clulas Dinophysis podem produzir toxinas diarricas suficientes para gerar casos de EDM (REGUERA, 2002), conforme pode ser observado na costa germnica (KLPER et alii, 2003). Quando a contagem de clulas chega ao patamar de 400 clulas por litro de gua do mar recomenda-se aumentar a frequncia amostral e permanecer alerta para a ocorrncia de uma florao. A adoo de tal procedimento possibilitou a pronta e correta tomada de deciso durante a florao de D. acuminata ocorrida no litoral catarinense em 2007, que evitou um impacto das toxinas diarricas para a sade pblica na regio de maiores propores. O aleta foi dado dia 17 de janeiro de 2007 e a florao ocorreu poucos dias aps, em 30 de janeiro. Houve suspenso da comercializao de moluscos, pois o bioensaio revelou a presena de toxinas diarricas. Poucos casos foram relatados (cerca de 150) devido ao correto e rpido procedimento adotado, lembrando que o surto ocorreu em uma rea turstica durante o perodo de frias (PROENA et alii op. cit.). Na literatura h relatos de vrios trabalhos que demonstram a formao de adensamentos de Dinophysis acuminata em uma determinada profundidade, geralmente em colunas dgua submetidas forte estabilidade, quer seja devido um gradiente trmico (? T > 5 C) ou salino, e cuja estabilidade dure ao menos duas semanas (DELMAS et alii, 1992). Nas Rias Baixas da Galcia Reguera et alii (1995) relataram a formao de adensamento para outra espcie de Dinophysis, D. acuta, localizada sobre a termoclina durante uma persistente florao desde o incio do vero at meados da primavera que atingiu o mximo de 23000 clulas.l-1 . Nessa mesma regio, durante o vero D. acuminata atingiu o 51

patamar de 2800 clulas.l-1 , no estrato entre 0-5 metros de profundidade. Essa coluna dgua encontrou-se submetida fraca mistura turbulenta (mencionada na literatura consultada forte como estratificao trmica). Setl et alii (2005) relataram a formao de um adensamento, localizado 77 metros, de D. acuminata em uma coluna dgua de 120 metros de profundidade, submetida condies de baixa mistura turbulenta (citada na literatura como fortemente estratificada) (termoclina sazonal localizada entre 17-20 metros) durante o vero no mar Baltico, Finlndia. Tal adensamento apresentou densidade celular de 18000 clulas. l-1 . Por exemplo, no Japo D. acuminata costuma agregar-se na profundidade de 3 metros, em uma coluna dgua sujeita condies de baixa mistura turbulenta (em funo da temperatura) na baa de Matsuru, apresentando o mximo de densidade celular 708 clulas.l-1 (NISHITANI et alii, 2002). Da mesma maneira na baa de Sepetiba (ambiente costeiro, abrigado) observou-se comportamento semelhante onde D. acuminata apresentou maior abundncia no estrato superior da coluna dgua (0-4 metros). Delmas et alii (1992) estudaram a distribuio vertical de D. acuminata em dois locais: um costeiro (inshore) na isbata de 10 metros e outro localizado sobre a isbata de 50 metros (offshore). A maior abundncia foi observada no final da primavera. Poucas clulas foram detectadas na estao inshore enquanto que offshore foi observada a maior densidade celular para a espcie ( 5 x 103 clulas por litro) entre 10-15 metros de profundidade. 1 Portanto a regio da termoclina, ao funciona r como uma barreira de densidade, tanto propicia o acmulo de clulas sobre essa regio, quanto tambm propicia seu desenvolivento in situ por ser uma regio rica em nutrientes (orgnicos e inorgnicos) e provavelmente tambm rica nas presas preferenciais de Dinophysis. Somente na estao offshore ocorreu baixa mistura turbulenta (citada na literatura como estratificao da coluna dgua) devido a forte gradiente trmico (? T = 3,5 - 5,5 C). Na estao inshore as correntes de mar e a pouca profundidade impediam a formao da estratificao trmica, caracterizando essa estao como uma coluna dgua submetida intensa mistura turbulenta. O desenvolvimento dessa florao de D. acuminata deu-se desde o final de abril (onde havia cerca de aproximadamente 400 clulas), apresentou um incremento no incio de maio (1000-5000 clulas) e culminou com o mximo de densidade celular relatado para o final de maio. No incio de junho fortes ventos romperam a condio de estabilidade, ao misturar a coluna dgua; como consequncia a florao de Dinophysis dispersou-se paulatinamente ao longo dos prximos dez dias nas estaes offshore. Lindhal et alii (2007) compararam a densidade celular de D. acuminata em dois diferentes fiordes, um costeiro e outro mais exposto processos offshore. O ambiente mais costeiro apresentou, sempre entre o vero e outono, densidades celulares baixas (< 300 clulas.l-1 ), atingindo um patamar mximo de 1200 clulas.l-1 no meio do outono. Porm no fiorde mais exposto foram relatadas no vero densidades celulares maiores, 2000 clulas sobre a picnoclina e 6000-28000 clulas 20 metros. No final do vero houve florao com o mximo de 38000 clulas.l-1 sobre a picnoclina. Foi relatado que D. acuminata significativamente ocorreu em maiores densidades sobre a picnoclina se comparado s suas densidades na superfcie e no fundo. Na ilha Guaba, ambiente raso e costeiro, durante quase todo o ano a coluna dgua manteve-se isotrmica. Apenas no vero apresentou suave gradiente trmico em dezembro (?T = 3 C) em fevereiro (?T = 2 C), conforme visto na Figura 31. No entanto o ?T no foi suficientemente alto e constante para caracterizar uma situao de mistura turbulenta baixa (estratificao trmica conforme definido por Delmas et alii, 1992). Tanto que essa varivel hidrolgica no contribuiu significativamente para o modelo multivariado resultante utilizado 52

para explicar a influncia dos fatores abiticos sobre os padres de distribuio de Dinophysis, na ilha Guaba para o perodo estudado. To importante quanto estabilidade da coluna dgua em relao mistura turbulenta a durao dessa condio de estabilidade. Ao longo dos meses de janeiro e fevereiro de 2008 sucessivos sistemas frontais, intensificados por zonas de convergncia subtropical, exerceram sua influncia ao passarem pelo litoral sul do estado do Rio de Janeiro. Dessa forma a durao mnima das condies de estabilidade, 2 semanas conforme o relatado por Delmas et alii (1992), no pode ser desenvolvida na regio estudada.

Tabela 02. Densidades celulares de Dinophysis acuminata ao longo da coluna dgua e dos meses amostrados. Valores em clulas.l-1 . 1m Dezembro Janeiro Fevereiro Maro Abril Maio Junho Julho Agosto Setembro Outubro Novembro 420 250 260 10 SD 20 30 20 170 60 20 220 2m 210 240 650 0 41 20 30 40 130 SD 0 80 3m 90 280 180 0 60 0 20 10 30 30 10 50 4m 50 600 330 30 70 10 30 20 230 0 0 40 5m 50 280 180 0 90 0 30 60 150 70 0 0 6m 110 270 150 0 210 30 10 0 140 30 0 0 7m 90 260 150 20 190 10 0 0 0 10 0 10 8m 60 160 160 0 140 10 10 0 0 20 0 0

Posteriormente para regies costeiras, descritas anteriormente em trabalhos consultados como inshore, Delmas et alii (1993) propuseram que as populaes de Dinophysis desenvolvidas em mar aberto (em condies de estabilidade j descritas em Delmas et alii, 1992) seriam carreadas em direo costa por correntes de mar. Foi montado um experimento para a verificao da produo de toxinas diarricas e tambm realizadas todas as coletas de Perna perna concomitantes s coletas de fitoplncton. O objetivo deste experimento era verificar a variao temporal da presena do AO e buscar sua relao com Dinophysis acuminata (anteriormente j associada ao AO na ilha Guaba por Ferreira, 2004). Porm, por questes operacionais no foi possvel atingir este objetivo. Mas, conforme situao descrita por Klper et alii (2003) mesmo em baixas abundncias Dinophysys spp. oferecem perigo sade pblica. Dinophysis acuta esteve presente em abundncia de 50 clulas e D. norvegica em torno de 100 clulas por litro de gua do mar e, mesmo assim, foram capazes de produzir uma concentrao de cerca de 140190 ng de toxinas diarricas. g-1 de glndula digestiva de molusco Mytilus edulis em junho de 2000 na costa da Alemanha.

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Esse exemplo ilustra o relatado por Reguera (2002) que poucas centenas de Dinophysis presentes em um litro de gua do mar podem produzir toxinas diarricas em quantidade suficiente para gerar casos de EDM, mesmo em baixas densidades celulares como o verificado para a ilha Guaba ao longo de 2007/2008 pelo presente trabalho. Tal fato foi elucidado Lindahl et alii (2007) que verificaram o contedo intracelular de toxinas diarricas em diferentes populaes de D. acuminata e constataram que moluscos que se alimentaram de cerca de 100 clulas de alto potencial toxgeno contaminaram-se da mesma maneira que outros alimentados com 1500 clulas com baixo potencial toxgeno. Na Austrlia o Plano de Manejo de Biotoxinas considera como Nvel de Alerta a ocorrncia de 1000 clulas de D. acuminata por litro de gua do mar (BROWN; TURNBULL, 2008). Dessa forma saliento a necessidade de que se continue a estudar Dinophysis spp. no apenas em sua variao espacial e temporal na ilha Guaba. Mas, sobretudo seu perfil toxgeno e os fenmenos que ocorrem em mesoescala que, conforme amplamente relatado na literatura, influenciam em sua distribuio para toda a regio sudeste e conseque ntemente para o litoral sul do estado do Rio de Janeiro. Fica registrada a situao potencial de perigo para a sade pblica dos cons umidores de molusco em toda a regio. Como no pode ser constatada a presena das toxinas diarricas em moluscos cultivados na ilha Guaba, reitero a necessidade da implementao de um programa de monitoramento higinico-sanitrio no litoral sul do estado do Rio de Janeiro. 4.3 Distribuio Espacial e Temporal das Demais Espcies de Dinophysis D. fortii foi a segunda espcie mais abundante na ilha Guaba durante o perodo analisado (Figura 28). Ocorreu em todo o ano, exceto no ms de junho e outubro de 2007. Foi mais abundante durante os meses de vero (58 clulas.l-1 no estrato de 0-4 metros; 25 clulas.l-1 no estrato de >4 metros), uma abundncia extremamente baixa se comparada literatura. Relatada anteriormente para o Rio de Janeiro na baa de Sepetiba (FERREIRA, 2004) e na baa de Ilha Grande (MARIN, 2007). Tambm j foi identificada no Rio Grande do Sul (BASTOS, 2009f). Espcie tipicamente dominante no Japo sozinha (IWASAKI, 1986) ou acompanhada por D. acuminata no Japo (NISHITANI et alii, 2002; ADACHI et alii, 2008). muito abundante no Japo, onde um mximo de 700 clulas foi detectado 24 metros de profundidade; essa espcie foi a primeira a ser descrita como produtora de toxinas diarricas (YASSUMOTO, 1980). Hoshiai et alii (2003) relataram D. fortii como uma espcie tipicamente ocenica que carreada pela corrente marinha quente Tushima para a regio costeira do norte do Japo durante a primavera e o vero; durante esse perodo sua abundncia raramente excede 100 clulas por litro de gua do mar. Na Europa tambm foi relatada sempre em baixas abundncias, na Espanha (REGUERA et alii, 1995), na Grcia (KOUKARAS; NIKOLAIDIS, 2004), Crocia (MARASOVIC et alii, 2007) e no mar Adritico (AUBRY et alii, 2000). Essa espcie produz intensas floraes na costa do Japo e foi a responsvel pelos eventos de envenenamento dirrico nesse pas (SUZUKI et alii, 1997). Hallegraeff (1987) tembm relata florao e toxicidade em moluscos atribudos D. fortii no sul da Austrlia. D. tripos somente esteve presente no final da primavera (40 clulas. l-1 somente 1 metro de profundidade, apenas no ms de novembro), durante o vero (40 clulas. l-1 no estrato 0-4 metros de profundidade em dezembro e 20 clulas.l-1 no estrato 0-4 metros de profundidade em fevereiro). Em agosto, porm foram encontradas 10 clulas.l-1 1 metro de profundidade. Sua presena j havia sido relatada para a ilha Guaba anteriormente por Ferreira (2004). Ainda no litoral brasileiro foi encontrada em So Paulo (VILLAC et alii, 2008). Moser et alii (2005) relatou a espcie em alta densidade na baa de Santos. Encontra-se presente em guas da Nova Zelndia (BURNS; MITCHELL, 1982). Tambm no mar

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Mediterrneo na costa da Crocia por Marasovic et alii (2007), porm sem nenhuma informao acerca de sua abundncia ou de sua frequncia. D. rotundata s esteve ausente nos meses de agosto, outubro e novembro. Foi mais abundante durante o vero (mdia de 50 clulas.l-1 , com mximo de 70 clulas.l-1 em dezembro). No outono 33 clulas.l-1 , no inverno 20 clulas.l-1 e na primavera apenas 3 clulas.l-1 . A espcie j foi relata anteriormente para a bai de Sepetiba, apenas na ilha Guaba, Rio de Janeiro (FERREIRA, 2004). Tambm j foi descrita para o litoral de So Paulo (VILLAC et alli, 2008). Klpler et alii (2003) consideraram sua abundncia muito baixa (< 160 clulas.l-1 ) e relatou sua ocorrncia somente no vero, na costa da Alemanha. Os demais trabalhos consultados apenas relatam a presena da espcie na costa da Finlndia (SUIKKANEN et alii, 2007), Nova Zelndia (BURNS; MITCHELL, 1982), no mar Adritico (AUBRY et alii, 2000), na costa do Vietn (NGUYEN et alii, 2006), na Crocia (MARASOVIC et alii, 2007), na Grcia (KOUKARAS; NOKOLAIDIS, 2004) e no mar Negro (VERSHININ et alii, 2007). O nico relato encontrado para florao de D. rotundata ocorreu na costa leste do Canad (CEMBELLA, 1989).

Figura 27. Somatrio das densidades celulares de cada espcie de Dinophysis identificada para a ilha Guaba, durante o perodo analisado (ao longo de uma coluna dgua de 8 metros de profundidade).

D. caudata foi encontrada, sempre em densidades celulares muito baixas, principalmente nos perodos mais quentes de primavera (20 clulas.l-1 apenas em novembro, 3 metros de profundidade) e vero (30 clulas.l-1 , apenas em dezembro entre 5-6 metros de profundidade) na ilha Guaba. Porm 20 clulas.l-1 foram encontradas no ms de abril 2 metros de profundidade. Sua presena na baa de Sepetiba j havia sido relatada por Vianna (2003) e tambm por Ferreira (2004) nas ilhas Guaba e Madeira. Ainda na regio sudeste do Brasil foi relatada apenas sua presena nos estados do Esprito Santo (BASTOS; GARCIA, 55

2005) e em So Paulo (VILLAC et alli, 2008). Na regio sul, foi encontrada no Paran (MACEDO, 2007), Santa Catarina (PROENA, 2004) e no Rio Grande do Sul (PERSICH; GARCIA, 2003; FUJITA; ODEBRECHT, 2007; BASTOS, 2009c). Tambm relatada para a regio nordeste, no litoral de Pernambuco (ESKINASE-LEA et alii, 1972). A espcie tem sido relatada para mares tropicais como a costa do Vietn, onde ocorreu durante todo o ano e atinge densidades celulares mximas de 3000 clulas.l-1 durante o vero (NGUYEN et alii, 2006). Tambm na costa das Filipinas essa espcie foi a mais abundante, juntamente com D. miles, principalmente no incio da primavera apresentando de 1000-1500 clulas.l-1 e a densidade mxima de 2800 clulas.l-1 durante o vero (MARASIGAN et alii, 2001). A espcie tambm produz floraes na costa chinesa (LU; RODGKISS, 2004). Produz floraes na costa da ndia (SANTHANAM; SRINIVASAP, 1996). D. ovum ocorreu apenas no vero (em mdia 97 clulas.l-1 ) e exibiu a densidade celular mxima no ms de fevereiro com 220 clulas.l-1 . Espcie tpica de guas subtropicais quentes. Encontrada nos mares Mediterrneo, Adritico e no oceano Atlntico (costa inglesa e espanhola), segundo Raho et alii (2008). E tambm para a Nova Zelndia (BURNS; MITCHELL, 1982). 4.4 Dominncia na Comunidade de Dinophysis As associaes existentes entre as espcies que compuseram a comunidade de Dinophysis na ilha Guaba, durante o perodo estudado, foram verificadas mediante Anlise de Classificao. Onde as anlises no modo R foram obtidas agrupando amostragens em funo das espcies ocorrentes e modo Q atravs do agrupamento de espcies em funo do padro de ocorrncia nas amostragens tempo e profundidade. A anlise no modo R mostrou 2 grandes grupos. No primeiro D. acuminata e D. fortii comportaram-se como espcies dominantes (apresentando alta abundncia), tendo Dinophysis spp., D. ovum, D. tripos como espcies acessrias. No segundo grupo D. acuminata continuou dominando, porm apesentando abundncia menor; D. caudata e D. rotundata ocorreram em abundncias semelhantes da espcie dominante, exercendo assim uma maior dominncia relativa dentro do grupo 2 (Figura 28).

a)

b)

Figura 28. Dendrograma com as relaes e xistentes entre as espcies dominantes e acessrias nos dois grupos (a) e (b) determinados por anlise de classificao no modo R, para a comunidade de Dinophysis na ilha Guaba, 2007/2008.

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No Japo D. acuminata e D. fortii so relatadas por Nishitani et alii (2005) como espcies dominantes de uma comunidade onde tambm ocorrem D. caudata, D. infundibula, D. mitra e D. rudgei. Durante o final da primavera e incio do vero D. acuminata domina a comunidade. Durante o vero sua densidade celular diminui enquanto D. caudata aumenta sensivelmente e D. fortii assume a dominncia da comunidade durante o final do vero e outono. As demais espcies permanecem sempre como espcies acessrias. partir do final do outono e durante todo o inverno as espcies de Dinophysis no foram detectadas. Na anlise de classificao no modo Q as espcies foram agrupadas sob a perspectiva das coletas (ms, profundidade), para a observao de padres de amostragem com composies de espcies similares (Figura 29). Foram gerados cinco grupos de amostras a um nvel de corte definido arbitrariamente em 2,5 e todos os grupos foram considerados altamente significaticos (p<0,001). Analisando-se o padro de ocorrncias em cada grupo conforme visto na tabela 03.
Tabela 03. Grupos da anlise no Modo Q. Teste de significncia dos grupos executado pelo Modelo de permutaes de Monte Carlo. Todos os grupos foram significativamente diferentes (p<<0,0001).
Grupo Perodo jan 1m, jan 2m, jan 3m, jan 4m, jan 5m, fev 3m, abr 2m, abr 3m, abr 4m, abr 5m, abr 6m, abr 7m, abr 8m, mai 2m, jul 3m, ago 1m, ago 2m, ago 3m, ago 4m, set 1m, set 5m, set 7m, dez 3m; jan 6m, jan 7m, jan 8m, fev 1m, fev 2m, fev 4m, fev 5m, fev 6m, fev 7m, fev 8m, mar 4m, mai 1m, mai 6m, jul 5m, ago 6m, set 8m, nov 1m, nov 2m, nov 3m, dez 1m, dez 2m; M ai 4m, mai 7m, jun 3m, jun 4m, jun 8m, jul 1m, dez 4m*, dez 5m, dez 6m, dez 7m, dez 8m, M ar 2m, mar 5m, mar 6m, mai 5m M ar 1m, mar 7m, mai 8m, jun 1m, jun 5m, jun 6m, jul 2m, jul 4m, ago 5m, set 3m, set 6m, out 1m, out 3m, nov 4m, nov 7m; Espcie dominante Abundncia relativa Espcies acessriasa Todas as demais espcies presentes em pelo menos uma amostra

D. acuminata D. fortii

Alta

D. acuminata Dinophysis spp.

Alta

Todas exceto D. caudata

3 4

D. acuminata D.rotundata D. fortii D. rotundata

Baixa Baixa Baixa

a

Nenhuma Nenhuma

5
*

D. acuminata

Nenhuma

amostra com padro de abundncia diferente do observado no grupo; relativa dentro do grupo.

Espcies que apresentaram menor abundncia

O padro de agrupamento de amostragens refletiu o resultado encontrado para Dinophysis acuminata. Isso porque foi a espcie que apresentou maior relevncia, em termos de abundncia relativa e ocorrncia, evidenciando as suas relaes demonstradas na tabela 03. As coletas realizadas na estao onde D. acuminata apresentou suas maiores abundncia (vero, principalmente no estrato 0-4 metros de profundidade) encontraram-se nos grupos 1 e 2, no modo Q de agrupamento. A exceo foi a coleta de dezembro na profundidade de 4 metros, que exibiu D. acuminata em baixa abundncia relativa (50 clulas.l-1 ), por causa da presena das outras espcies, D. tripos e D. rotundata, com 10 clulas.l-1 cada. Os grupos 3, 4 e 5 apresentam em comum as menores abundncias relativas de D. acuminata e a ausncia de espcies acessrias. Nesses grupos encontram-se principalmente as coletas de outono, inverno e primavera. Salientando que na anlise de varincia no houve diferena siginificativa entre essas estaes para a abundncia e distribuio de D. acuminata.

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Figura 29. Dendrograma anlise de classificao no modo Q das coletas em funo da ocorrncia de Dinophysis spp. a um nvel de corte de 2,5.

O que diferiu um grupo do outro foi a ocorrncia das espcies co-dominantes D. fortii e D. rotundata, isso porque D. acuminata exibiu baixa abundncia relativa nessas amostras. Por exemplo, na coleta de Julho 1 metro de profundidade D. acuminata e D. rotundata apresentaram abundncia de 20 clulas.l-1 cada; em maio 4 metros de profundidade D. acuminata e D. rotundata apresentaram abundncia de 10 clulas.l-1 cada. As coletas referentes ao vero relatadas no grupo 3 foram pertinentes presena de D. rotundata como espcie co-dominante no estrato inferior da coluna dgua em Dezembro (>4 metros), com por exemplo, D. acuminata, D. fortii e D. rotundata apresentando abundncia de 60 clulas. l1 , 10 clulas.l-1 e 10 clulas.l-1 , respectivamente. Na Alemanha, no vero de 2000, D. acuminata tambm ocorreu como espcie -1 -1 dominante (4260 clulas. l ) sendo acompanhada por D. norvegica (<400 clulas. l ) e D. -1 rotundata e D. acuta ambas com densidades celulares na ordem de 100 clulas. l . Durante o perodo em que o trabalho foi realizado houve produo de toxinas diarricas, porm sem que se pudesse estabelecer alguma relao direta entre a densidade celular e a concentro de toxinas: ora a densidade de Dinophysis era alta e a concentrao de toxinas era baixa, ora acontecia o inverso ou ambas elevam-se juntas. Em relao s variveis oceanogrficas o perodo de maiores densidades de Dinophysis em guas germnicas coincidiu com as menores salinidades (abaixo de 32) e maiores temperaturas (17,8C) segundo Klpper et alii (2003). D. acuminata dominou durante todo o ano na ilha Guaba, apenas variando em abundncia, alta principalmente no vero e baixa no outono/inverno (conforme visto na Tabela 01). No outono/inverno e tambm no incio do vero ela divide a dominncia com D. rotundata. medida em que o vero se desenvolveu D. rotundata cedeu o lugar de codominate D. fortii. Para a costa Francesa Delmas et alii (1993) relatam como espcie mais frequente e dominante D. acuminata e D. sacculus; como espcie acompanhante D. rotundata, mas sempre em baixas abundncias. D. acuta, D. tripos e D. caudata foram relatadas como episdicas. D. acuminata e D. acuta so apontadas como as espcies dominantes da 58

comunidade de Dinophysis nas Rias Bajas da Galcia (NE da Espanha). Durante a primavera/vero a comunidade dominada por D. acuminata e durante o outono por D. acuta. Nessa comunidade tambm ocorrem, sempre em baixas densidades celulares (< 20 clulas.l-1 ) D. sacculus, D. rotundata, D. tripos, D. caudata, D. hastata e D. fortii (REGUERA et alii, 1995). D. caudata foi relatada para um levantamento da comunidade de dinoflagelados da Plataforma levantina (na costa da Turquia, mar Mediterrneo) como uma espcie frequente, tambm tendo sido identificadas D. tripos e D. rotundata classificadas como ocasionais ou raras. Outras espcies deste gnero ainda no relatadas como txicas tambm foram identificadas: D. amandula, D. argus, D. diegensis, D. doryphorum, D. elongata, D. favus, D. hastata, D. mitra, D. schuettii, D. sphaerica (POLAT; KORAI, 2007). Ainda para guas japonesas na baa de Matsuru D. acuminata e D. fortii dominam durante a primavera/vero. Mais especificamente D. acuminata domina durante o final da primavera e incio do vero e no final do outono. Outras espcies do gnero ocorrem como acessrias: D. rudgei, D. infundibula, D. caudata, D. rotundata e D. mitra (NISHITANI et alii 2002). Em ambientes tropicais na costa das Filipinas, caracterizados por guas mais quentes e menos salinas as espcies dominantas so D. caudada e D. miles, ocorrendo como acessrias D. doryphorum, D. rapa. D. pulchela, D. mitra e D. rudgei (MARASIGAN et alii, 2001). Da mesma forma no Vietn D. caudata domina e relatou-se como espcies acessrias D. fortii, D. miles, D. rotundata, D. mitra e D. hastata (NGUYEN et alii, 2006). Na costa da Alemanha D. acuminata a espcie dominante, exibindo alta densidade no vero (cerca de 4000 clulas). No outono D. norvegica tamb domina, porm com abundncias de 1/10 daquelas apresentadas por D. acuminata. D. rotundata e D. acuta tambm foram encontradas, mas com abundncias inferiores 160 clulas.l-1 (KLPER et alii, 2003). Para a Grcia a comunidade de Dinophysis apresentou-se dominada por D. acuminata, havendo ocorrncia de D. sacculus, D. rotundata, D. fortii, D. odiosa e D. caudata em abundncias baixas como espcies acessrias (KOUKARAS; NIKOLAIDIS, 2004). 4.5 Influncia dos Fatores Abiticos na Distribuio de Dinophysis spp. Buscou-se ordenar as espcies identificadas, suas abundncias, as variveis hidrogrficas e parmetros climatolgicos, bem como a variao com a profundidade e o tempo, perfazendo assim uma matriz que possibilitou a projeo das amostras em um plano (formado por dois eixos principais), gerando assim uma imagem simplificada dessa estrutura multidimensional. Para isso utilizou-se a Anlise de Redundncia Cannica (como mtodo de ordenao condicionada) que, ao posicionar todos os dados gerados em relao aos eixos definidos, buscou possibilitar a visualizao das inter-relaes ecolgicas existentes nesse universo de informaes geradas (VALENTIN, 2000). Essa ferramenta estatstica tem sido amplamente utilizada para avaliar as relaes existentes entre variveis ambientais e parmetros biolgicos associados comunidade planctnica. Em um lago hipertrfico localizado em Valncia (Espanha) a anlise de redundncia (RDA) foi considerada um mtodo eficiente para avaliar as interaes entre o fitoplncton e as variveis ambientais e, tambm para revelar a tendncia na sucesso das espcies de cianofceas ao longo do tempo (ROMO; TONGEREN, 1995). Skaloud et alii (2006) encontraram a distncia da costa como a varivel mais significativa (35% da variabilidade total dos dados) para a variao na composio da comunidade planctnica ao longo de um transecto de 250 km na costa da Dinamarca. Nos trabalhos supracitados as variveis significativas foram selecionadas atravs do teste de permutaes de Monte Carlo.

59

A distribuio de dinocistos, na costa oeste do Canad, foi estudada com vistas reconstruo das condies paleoceanogrficas. Dois grupos de dados foram definidos pela anlise multivariada. No primeiro grupo, das vinte e uma variveis ambientais avaliadas a anlise de redundncia revelou apenas 8 como significativas (37,6% da varincia total dos dados), entre elas a temperatura no inverno e a salinidade no outono. No segundo grupo, das trinta e quatro variveis avaliadas apenas 7 foram significativas(39,2% da varincia total dos dados), entre elas a distncia da praia e do porto de Vancouver (RADI et alii, 2007). O programa de monitoramento executado na costa da Esccia forneceu dados para o estudo da diversidade e da variao sazonal de Pseudo-nitzschia spp., diatomceas produtoras de cido domico. A anlise de redundncia revelou como significativas 7 variveis (concentraes de silicato, fosfato e nitrato, amnia, temperatura salinidade e principalmente fotoperodo) que explicaram 31% da variao dos dados destas espcies de microalgas que so fotoautotrficas (FEHLING et alii, 2006). Foram mensurados para o presente trabalho variveis hidrolgicas: temperatura (Figuras 30, 31, 32 e 33), salinidade (Figura 34, 35, 36, 37), profundidade Secchi (Figura 38) e parmetros climatolgicos: pluviosidade, velocidade de vento e direo do vento (Tabela 04). Dos quais apenas salinidade e intensidade de vento foram considerados significativos pelo Teste de Permutaes de Monte Carlo.
Dezembro 2007
-1 -2 18 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Temperatura 19 20 21 22 23 24 25 26

Janeiro 2008
-1 -2 18 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Temperatura 19 20 21 22 23 24 25 26

Fevereiro 2008
-1 -2 18 Profundidadede -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Temperatura 19 20 21 22 23 24 25 26

Figura 30. Variao da temperatura ao longo da coluna dgua durante os meses de vero, na ilha Guaba.

60

Maro 2007
-1 Profundidade de -2 18 -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Temperatura 19 20 21 22 23 24 25 26

Abril 2007
-1 -2 18 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Temperatura 19 20 21 22 23 24 25 26

Maio 2007
-1 -2 18 Profundidade -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Temperatura 19 20 21 22 23 24 25 26

Figura 31. Variao da temperatura ao longo da coluna dgua durante os meses de outono, na ilha Guaba.

A temperatura apresentou amplitude de variao de 18C (inverno) 26C (vero). Durante o vero as maiores temperaturas foram encontradas, no estrato superior da coluna dgua com mdias de 24,75C (0,96C) para dezembro, 23C (0C) para janeiro e 24C (0C) para fevereiro. As temperaturas mximas encontradas ocorreram no primeiro metro de profundidade 26C, 23C e 24C em dezembro, janeiro e fevereiro, respectivamente. No estrato inferior as temperaturas apresentaram a tendncia natural de diminuio com o aumento da profundidade: mdias de 23,5C (0,58C) para dezembro, 22,5C (0,41C) para janeiro e 22,88C (0,63C) para fevereiro. Os meses de incio do outono apresentaram as maiores temperaturas ao longo de toda a coluna dgua. Apenas em maio houve reduo na temperatura. Maro apresentou a coluna dgua praticamente isotrmica 25C, exceto a temperatura mxima de 26C encontrada 1 metro de profundidade. O ms de maro tambm relatado como o mais quente do ano para a baa de Ilha Grande por Ferreira (1999). Em abril a coluna dgua apresentou temperatura mdia de 25C (0,58) no estrato de 0-4 metros devido s temperaturas mnimas encontradas 2 e 3 metros (24,5C); no restante da colunadgua a temperatura foi de 25,5C (0C). Em maio houve reduo na temperatura e a coluna dgua apresentou-se isotrmica 19C exceto 1 metro de profundidade (20,5C).

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Junho 2007
-1 -2 18 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Temperatura 19 20 21 22 23 24 25 26

Julho 2007
-1 -2 18 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Temperatura 19 20 21 22 23 24 25 26

Agosto 2007
-1 -2 18 Profunfidade -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Temperatura 19 20 21 22 23 24 25 26

Figura 32. Variao da temperatura ao longo da coluna dgua durante os meses de inverno, na ilha Guaba.

Os meses de inverno apresentaram a coluna dgua isotrmica 23,5C em junho, 21,8C em julho e 21,8C em agosto. Os meses de julho novembro apresentaram as maiores intensidades de vento, que possivelmente modularam a homogeneidade da temperatura ao longo da coluna dgua (Tabela 04).
Tabela 04. Parmetros climatolgicos ( valores mdios mensais) da estao meteorolgica localizada na ilha Guaba. Fornecidos gentilmente pela Cia. Vale.
Mar Pluviosidade (mm) Intensidade de vento (m.s-1 ) Direo vento (em graus) 8,55 2,92 184,41 Abr 6,34 2,8 176,72 Mai 1,714 2,99 185,7 Jun PP PP PP Jul 0,90 3,55 179,77 Ago 0,18 3,44 171,33 Set 0 3,83 158,83 Out 8,34 3,35 168,16 Nov 8,51 3,52 174,14 Dez 6,35 3,06 184,61 Jan 7,47 3,13 184,33 Fev 5,98 2,96 184,77

PP parcela perdida

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Setembro 2007
-1 -2 18 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Temperatura 19 20 21 22 23 24 25 26

Outubro 2007
-1 -2 18 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Temperatura 19 20 21 22 23 24 25 26

Novembro 2007
-1 -2 18 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Temperatura 19 20 21 22 23 24 25 26

Figura 33. Variao da temperatura ao longo da coluna dgua durante os meses de primavera, na ilha Guaba.

A primavera apresentou temperaturas semelhantes s encontradas no inverno. Durante os meses de setembro e outubro a coluna dgua tambm manteve-se praticamente isotrmica 23C (com temperaturas ligeiramente mais baixas junto ao fundo). Em novembro a coluna dgua esteve completamente isotrmica 22C. Inverno e primavera encontram-se sujeitos ao das maiores intensidades de vento relatados para a ilha Guaba durante todo o perodo analisado. Em relao salinidade todos os meses analisados apresentaram aumento dessa varivel em direo ao fundo e as menores salinidades prximo superfcie; caracterizando assim a entrada de guas tipicamente ocenicas (mais salinas) junto ao fundo. Excetuando-se o ms de janeiro o estrato inferior da coluna dgua (> 4 metros) na ilha Guaba no apresentou salinidades inferiores 35. Os meses de vero (exceto dezembro) apresentaram as menores salinidades nos dois estratos. Janeiro foi o ms onde ocorreram as menores salinidades registradas: mdia de 30,75 ( 0,5) no estrato superior e de 32 ( 0,82) para > 4 metros (Figura 34). Dentre os meses de vero, janeiro apresentou maior mdia de pluviosidade (Tabela 04), devido a chegada de sucessivos sistemas frontais.

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Profundidade Secchi
4 3,5 3 Metros s 2,5 2 1,5 1 0,5 0
No vem bro De zem bro M aio Jul ho Se tem bro Jun ho Fe ve rei ro
38 38

M ar o

Ag ost o

Figura 34. Variao da profundidade Secchi ao longo da coluna dgua durante o perodo analisado, na ilha Guaba.

Dezembro 2007
-1 -2 30 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Salinidade 31 32 33 34 35 36 37

Janeiro 2008
-1 -2 30 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Salinidade 31 32 33 34 35 36 37

Fevereiro 2008
0 -1 30 Profundidade de -2 -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Salinidade 31 32 33 34 35 36 37 38

Figura 35. Variao da salinidade ao longo da coluna dgua durante os meses de vero, na ilha Guaba.

Ou tub ro

Jan eiro

Ab ril

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A profundidade Secchi foi utilizada para estimar a penetrao de luz na coluna dgua (Figura 34). As guas que circundam ailha Guaba so turvas, tanto pela presena de microalgas (ambiente mesotrfico) quanto pela presena de sedimentos e material orgnico particulado trazido pelo aporte de rios existentes na regio (e que drenam reas vegetadas por manguezais). O valor mximo encontrado (3,4 metros) ocorreu em Setembro, ms onde a precipitao mdia foi de 0mm (Tabela 04), o que reduz o caudal dos rios e indica ausncia de nebulosidade. Os meses de outono e inverno apresentaram os menores valores mdios para esse parmetro: 2,0 metros (0,5) e 2,1 metros (0,4). Os meses de primavera e vero apresentaram o mesmo valor mdio para esse parmetro 2,8 metros (com desvio padro de 0,7m na primavera e 0,4m no vero).
Maro 2007
-1 -2 30 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Salinidade 31 32 33 34 35 36 37 38

Abril 2007
-1 -2 30 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Salinidade 31 32 33 34 35 36 37 38

Maio 2007
-1 -2 30 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Salinidade 31 32 33 34 35 36 37 38

Figura 36. Variao da salinidade ao longo da coluna dgua durante os meses de outono, na ilha Guaba.

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Junho 2007
-1 -2 30 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Salinidade 31 32 33 34 35 36 37 38

Julho 2007
-1 -2 30 Profundidadeede -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Salinidade 31 32 33 34 35 36 37 38

Agosto 2007
-1 -2 30 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Salinidade 31 32 33 34 35 36 37 38

Figura 37. Variao da salinidade ao longo da coluna dgua durante os meses de inverno, na ilha Guaba.

Assim como ocorreu com a varivel temperatura, a salinidade tambm apresentou comportamento semelhante no inverno e na primavera. As duas variveis distribuiram-se homogenamente ao longo da coluna dgua, configurando uma situao de mistura turbulenta alta, durante as estaes sujeitas maiores intensidades de vento (Tabela 04). No inverno a coluna dgua mostrou-se praticamente isohalina, exceto pequeno incremento junto o fundo (em junho e julho) e prximo superfcie em agosto. As maiores salinidades encontradas durante o perodo analisado ocorreu no inverno (35,5 para junho, 37,5 para julho e 35 em agosto) esto de acordo com os menores ndices de pluviosidade (Tabela 04). Durante os meses de setembro e outubro a coluna dgua esteve isohalina, 35 e 37 de salinidade, rspectivamente. Em novembro houve reduo na salinidade nos 2 primeiros metros de profundidade (devido precipitao) e o restante da coluna dagua manteve-se 36 de salinidade.

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Setembro 2007
-1 -2 30 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Salinidade 31 32 33 34 35 36 37 38

Outubro 2007
-1 -2 30 -3 Profundidade -4 -5 -6 -7 -8 -9 Salinidade de 31 32 33 34 35 36 37 38

Novembro 2007
-1 -2 30 Profundidade de -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 Salinidade 31 32 33 34 35 36 37 38

Figura 38. Variao da salinidade ao longo da coluna dgua durante os meses de primavera, na ilha Guaba.

No presente trabalho o plano cannico resultante da Anlise de Redundncia Cannica explicou apenas 11% da varincia (inrcia) total dos dados, ou da distribuio do gnero Dinophysis no tempo e profundidade, sendo 10,6% no primeiro modo de variao (Eixo 1), e 0,4% no segundo modo (Eixo 2). Apenas dois eixos devem ser considerados aqui, pois apenas duas variveis apresentaram relao siginificativa com a distribuio das espcies estudadas (Tabela 05).
Tabela 05. Autovalores e inrcia total obtidos atravs da anlise de redundncia partir dos parmetros e variveis abiticos fornecidos. Modelo original: primeira anlise antes do teste de significncia com todas as variveis abiticas; Modelo final: contendo apenas as variveis significativamente relacionadas distribuio de Dinophysis spp. selecionadas pelo Teste de Monte Carlo. Autovalores Eixo Modelo original Modelo final 1 0.139 0.106 2 0.029 0.004 3 0.023 4 0.007 Varincia total 0.202 0.110

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A varivel abitica salinidade e o parmetro abitico intensidade de vento siginificativos foram selecionados atravs do modelo de permutao de Monte Carlo (rotina do CANOCO), cujos resultados so apresentados na tabela 4. Em relao temperatura e salinidade D. acuminata, a espcie mais representativa do gnero no presente estudo, apresenta grande plasticidade ambiental. Porm tais fatores abiticos tambm possuem importncia sob a perspectiva de sua capacidade de promover estabilidade em uma coluna dgua. No presente trabalho a temperatura no apresentou relevante variao ponto de formar uma situao de estabilidade da coluna dgua. J a salinidade apresentou um decrscimo durante o vero (para o estrato de 0-4 metros) devido intensa precipitao gerada pela passagem de sucessivos sistemas frontais entre janeiro e fevereiro de 2008. Para microalgas autotrficas como diatomceas a disponibilidade de luz (estimada aqui indiretamente pela profundidade Secchi) tem sido apontada como varivel ambiental mais significativa pela RDA, alm tambm da disponibilidade de nutrientes inorgnicos (WULLF et alii, 2005; FEHLING et alii, 2006). Porm conforme j descrito na reviso de literatura Dinophysis spp. so consideradas mixotrficas em sua maioria, podendo ser abundantes em ambientes com restrita disponibilidade de luz (SETL et alii, 2005). Para o dinoflagelado heterotrfico Noctiluca scintilans todas as varives ambientais mensuradas por Dela-Cruz et alii (2007) tanto fsicas (temperatura, salinidade), qumicas (nutrientes inorgnicos) e biolgica (clorofila a) foram significativas, para a confirmar a hiptese de que a eutrofizao cultural atuou como determinante no padro de abundncia espacial do dinoflagelado. Especialmente a varivel clorofila a explicou 54,1% e 55% do total da varincia dos dados para o ms de novembro e fevereiro, respectivamente, em guas australianas. Dados gerados por programas de monitoramento oferecem como vantagem uma longa srie de dados. Dessa forma trabalho realizado no mar Bltico para avaliar a influncia de fatores abiticos na sucesso de gr upos fitoplanctnicos revelou com a anlise de redundncia grande variabilidade no percentual de explicao das variveis abiticas: 42% para o grupo das diatomceas e tambm das cianofceas, 30% para os dinoflagelados, 58% para as criptofceas. Para as diatomcas e os dinoflagelados a salinidade foi a varivel abitica mais significativa na varincia total dos dados abiticos apontados no estudo (GASIUNAITE et alii, 2005).
Tabela 06. Resultado do teste de Monte Carlo para significncia das relaes entre parmetros e variveis ambientais e distribuio de dinoflagelados Dinophysis spp. (p=0,05). Efeitos condicionais Varivel Precipitao mdia Temperatura Profundidade Secchi Direo do vento Velocidade do vento Salinidade Lambda A 0.01 0.02 0.02 0.02 0.03 0.10 p 0.530 0.163 0.128 0.091 0.032 0.000 F 0.80 1.56 1.75 1.97 2.52 8.04

O primeiro eixo cannico representou o gradiente principal dos dados, associado ao parmero salinidade, sendo gerado por um processo de regresso mltipla da matriz de Dinophysis pela matriz de variveis ambientais. Este gradiente explicou grande parte (10,6%) da varincia total (11%) dos dados. O segundo maior gradiente (Eixo 2) relacionou-se a velocidade do vento, que explicou uma pequena frao ( ,4%) da varincia dos dados. A 0 68

despeito disso, ambos os eixos foram significativos (Teste de Monte Carlo para significncia do trao cannico, com 9999 permutaes; p<0,001). No primeiro eixo, as espcies do lado positivo (escores ou projees positivos no primeiro eixo) ocorreram em valores menores de salinidade, e vice-versa. Da mesma forma, as amostras com valor positivo (projeo nesse eixo, ou escore) apresentaram valores de salinidade menores, e maior presena de espcies ocorrentes em baixa s salinidades, como por exemplo, D. acuminata no vero. O padro mais acentuado no grfico de RDA (Figura 39) foi pertinente D. acuminata (e espcies co-dominantes no perodo, grupos 1 e 2 apresentados na tabela 03) encontrou-se relacionado s menores salinidades relatadas para a regio no estrato superior da coluna dgua durante o vero, principalmente nos meses de janeiro (salinidade 30-31 no estrato 0-4 metros de profundidade) e fevereiro (33 no estrato 0-4 metros de profundidade). Para esse conjunto de dados, o parmetro vento apresentou uma influncia franca, ou seja, apresentou pouca relao com o gradiente definido pelo primeiro eixo (salinidade). medida em que a salinidade aumentou, principalmente para as coletas de outono (36,5 0,8) e inverno (35,5 1) foram encontrados preferencialmente os grupos 1 e 5, e em poucas amostragens o grupo 2. O vento tambm exerceu pouca influncia sobre esse padro de distribuio.

Figura 29. Plano cannico da Anlise de Redundncia (RDA) utilizando a matriz de abundncias de dinoflagelados (espcies de Dinophysis) e a matriz de variveis ambientais significativas salinidade (modo principal de variao, eixo I) e velocidade do vento (modo secundrio de variao, eixo II). Grupo 1 Dominncia de D. acuminata e D. fortii, em abundncias relativas maiores, com presena de todas as espcies de Dinophysis em pelo menos uma amostra. Grupo 2 - Presena de todas as espcies, exceto D. caudata. Dominncia de D. acuminata e Dinophysis spp.; Grupo 3 - Dominncia de D. acuminata e D. rotundata, com baixas abundncias relativas; Grupo 4 Dominncia de D. fortii e D. rotundata em baixas abundncias relativas; Grupo 5 - Amostras onde ocorreu apenas D. acuminata.

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Dinophysis acuminata tem sido relatada como amplamente distribuda em mares de todo o mundo por apresentar grande plasticidade ambiental, principalmente em relao salinidade e temperatura. Na baa de Hiroshima D. acuminata apresentou maiores densidades celulares sob as condies de temperaturas amenas (16-19,5C) e salinidade (19,1-28,6) (NISHITANI et alii 2005). No entanto para a baa de Matsuru 10-29,4C (superfcie) e 12,727,2C (3 metros) e salinidade de 22,7-34 (NISHITANI et alii, 2002). Hoshiai et alii (2003) relataram as maiores densidades celulares de D. acuminata em salinidades de 32,70,85 tambm para o Japo. J D. fortii foi associada guas ocenicas, da corrente de Tushima (Japo), com salinidades de 33,590,24. D. caudata foi encontrada em temperaturas entre 1534,3C e salinidades de 8-34, mas sua densidade celular somente foi expressiva acima de 20C e em salinidade de 8,2 no litoral do Vietn (NGUYEN et alii, 2006). No segundo eixo, as amostras de junho apresentaram os maiores valores de D. rotundata e menores valores de velocidade do vento, muito embora esse padro tenha sido bastante tnue (0,4% da varincia total). A maioria das amostras do ms de junho apresentou comportamento singular. Esse conjunto de dados concentrou-se principalmente em funo do parmetro vento, bem separadas do padro de distribuio principal observado. Nesse conjunto foram encontrados os grupos 3 e 5, com dominncia de D. acuminata e D. rotundata em baixas abundncias relativas. Os grupos anteriormente definidos na Tabela 03 apresentaram comportamento diferenciado no grfico RDA (Figura 40): Grupo 1 amostragens com maior diversidade e abundncia; tendeu a se agrupar mais na poro positiva do eixo 1 (salinidade menor). No apresentou tendncia relacionada ao segundo eixo (velocidade do vento); Grupo 2 distribuio sem tendncias aparentes relacionadas aos dois eixos cannicos; Grupo 3 totalmente concentradas nas pores negativas dos eixos I e II. Relacionadas as maiores abundncias relativas de D. caudata e D. rotundata. Tendncia de ocorrncia em salinidades maiores; Grupo 4 Tendncia a se aglomerar na poro negativa do primeiro eixo, provavelmente devido a presena de D. rotundata; Grupo 5 Apareceu preferencialmente na poro negativa do primeiro eixo e totalmente na poro negativa do segundo eixo com presena isolada de D. acuminata tendendo para amostras com velocidade do vento maior. Deve-se lembrar que o eixo dois quase no contribuiu para o modelo.

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5. CONCLUSES 5.1 Foram identificadas seis espcies do gnero Dinophysis, na ilha Guaba, durante o perodo analisado: D. acuminata, D. caudata, D. fortii, D. ovum, D. tripos e D. rotundata. Sendo que ainda no havia relato de D. ovum em guas brasileiras. Todas so consideradas potencialmente nocivas por serem relatadas como produtoras de toxinas envolvidas na sndrome Envenenamento Diarrico por Moluscos. 5.2 D. acuminata foi a espcie mais frequente e com maior abundncia relativa dentre as espcies identificadas, ao longo de todo o ano, na ilha Guaba. A espcie dominou a comunidade de Dinophysis ao longo de todo o ano. No vero houve co-dominncia com D. fortii e no outono e inverno com D. rotundata. 5.3 D. acuminata foi capaz de apresentar distribuio diferenciada em relao profundidade apenas durante o vero, para a ilha Guaba, sendo mais abundante no estrato superior da coluna dgua. Nas demais estaes do ano essa diferena na abundncia no foi significativa, nem entre as demais estaes e nem em relao distribuio em funo da profundidade. 5.4 O vero foi a estao do ano que apresentou a maior ocorrncia de espcies de Dinophysis, todas as identificadas, em maiores abundncias relativas. D. ovum apenas ocorreu nessa estao. 5.5 Mesmos as maiores abundncias relativas encontradas pelo presente trabalho durante o vero so consideradas baixas se comparadas s citadas na literatura consultada. No foi observada nenhuma evidncia de florao durante o perodo analisado. 5.6 Dentre as variveis hidrolgicas e climatolgicas avaliadas para modular a distribuio de Dinophysis apenas a salinidade e a intensidade do vento foram significativas. As maiores abundncias relativas de D. acuminata foram associadas salinidade mais baixas e fraca intensidade de ventos durante o vero. 5.7 Mesmo em baixa abundncia relativa durante o vero (poucas centenas de clulas) Dinophysis spp. poderiam oferecer perigo de contaminao para os moluscos se, e somente se, as toxinas estivessem sendo produzidas. Portanto, mesmo ocorrendo em baixas densidades celulares D. acuminata oferece h perigo ocorrncia de EDM em humanos consumidores de moluscos na regio.

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6. RECOMENDAES

6.1 Ampliar a escala de trabalho espacial para mesoescala: incluir pontos de coleta na parte interna baa de Sepetiba; delinear uma malha amostral que inclua a baa de Ilha Grande, alm de pontos amostrais sobre a plataforma continental externa ao largo das supracitadas baas. Continuar a investigao da distribuio destas microalgas em funo da profundidade. 6.2 Ampliar a escala temporal de trabalho, para observar se h ocorrncia de variaes interanuais na distriduio de Dinophysis spp. ao longo de toda a malha de amostragem. Trabalhar com periodicidade amostral quinzenal durante o vero e mensal no restante do ano. 6.3 Avaliar a influncia de processos oceanogrficos na distribuio de Dinophysis: transporte por correntes de mar e geradas por ventos. 6.4 Estudar a autoecologia de D. acuminata na regio: aspectos ligados ao seu desenvolvimento, suas relaes ecolgicas com predadores, presas e competidores e sua relao com variveis ambientais. 6.5 Avaliar o perfil toxgeno de Dinophysis spp. e sua relao com os moluscos: aspectos ligados sanidade dos animais e segurana alimentar. 6.6 A FAO aponta como entrave ao desenvolvimento da malacocultura a falta de um programa de monitoramento e da elaborao de legislao adequada que estabelea limites seguros ao consumo de bivalvos. A imediata implementao do Programa de Controle Higinco-Sanitrio de Moluscos Bivalvos previstos pelo MAPA e SEAP fundamental para garantir tanto a sanidade dos moluscos, quanto a segurana alimentar. Bem como possibilitar a expanso do mercado maricultor, at mesmo para exportao. 6.7 condio sine qua non a necessidade da integrao entre universidades, rgos governamentais e maricultores. De forma que a pesquisa cientfica gere conhecimento, as polticas pblicas garantam sua aplicabilidade e o setor produtivo possa convert-lo em produtividade, gerando finalmente o desenvolvimento social, econmico e ambiental que a malacocultura almeja.

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7. REFERNCIAS BIBLIOGRFIAS

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