Espectroscopa de infrarrojo cercano (NIR)

Aspectos generales y base terica de la espectroscopa NIR

La espectroscopa de infrarrojo cercano es un mtodo analtico rpido, fcil de utilizar, no destructivo, fiable y verstil. La radiacin del infrarrojo cercano penetra en la muestra lo cual es de extremada importancia en el caso de la medicin de muestras heterogneas. Actualmente la espectroscopa NIR se utiliza de manera generalizada para la determinacin de multitud de parmetros de calidad en un gran nmero de materiales biolgicos como por ejemplo cereales, alimentos y piensos animales, carne y productos crnicos, vegetales y frutas. Su gran versatilidad hace que se utilice tanto a nivel de laboratorio como a nivel industrial como tcnica de anlisis en lnea (on-line) y para la monitorizacin de procesos. El descubrimiento de la radiacin invisible se debe a Herschel (1800) cuando observ que el efecto de calentamiento relativo generado por las diferentes porciones del espectro de la luz solar al atravesar un prisma, continuaba aumentando cuando colocaba el termmetro ms all del rojo del espectro visible. Sin embargo, la regin del infrarrojo cercano del espectro electromagntico fue muy poco utilizada hasta el ao 1950. La principal razn de ello era su complejidad en comparacin con las regiones del infrarrojo medio (MIR) y lejano (FIR). Estas regiones, MIR y FIR, proporcionan gran cantidad de informacin til a travs de la utilizacin de mtodos univariantes de tratamiento de datos debido a que los picos espectroscpicos estn resueltos y se pueden interpretar directamente. El espectro NIR, por el contrario, es el resultado de sobretonos y bandas de combinacin generadas por los diferentes grupos funcionales como son C-H, N-H y O-H. La regin NIR del espectro electromagntico comprende las longitudes de onda desde 780 a 2500 nm (12800-4000 cm-1). Las absorciones en esta regin estn causadas por tres mecanismos diferentes: Sobretonos de las vibraciones fundamentales que ocurren en la regin del infrarrojo (4000-300 cm-1). Bandas de combinacin de las vibraciones fundamentales que aparecen en la regin del infrarrojo. Absorciones electrnicas.

Se puede hablar de dos leyes que gobiernan la base de la espectroscopa vibracional: la Ley de Hooke y el Principio de Franck-Condon. La Ley de Hooke establece que, para un oscilador armnico simple de dos

~ cuerpos, la frecuencia de vibracin ( ) es igual al recproco de 2 veces la velocidad de la luz (c) por la raz cuadrada de la constante de fuerza (5 x 105 dynas cm-l) por la suma de las dos masas de los cuerpos partido por su producto.
~ (cm 1 ) = 1 2c k(m1 + m2 ) m1m2

La vibracin de las molculas se puede describir utilizando el modelo del oscilador armnico mediante el cual la energa de los diferentes niveles igualmente espaciados puede calcularse a travs de la siguiente ecuacin:
1 h Evib = + 2 2 k

donde es el nmero cuntico de la vibracin, h la constante de Planck, k la constante de fuerza y la masa reducida de los tomos que componen el enlace. Solo estn permitidas aquellas transiciones entre niveles consecutivos de energa (=1) que causen un cambio en el momento dipolar,
Evib = E rad = h

donde es la frecuencia fundamental de la vibracin del enlace que genera una banda de absorcin en la regin del infrarrojo. La Ley de Hooke se puede usar para calcular las vibraciones fundamentales en molculas diatmicas en el infrarrojo medio, pero en la zona del infrarrojo cercano aparecen las bandas de combinacin y los sobretonos. Si todo fuese as de sencillo, las bandas del NIR se podran calcular a partir de la combinacin de las bandas fundamentales del MIR y los sobretonos como 2, 3, 4, etc. veces la frecuencia de las fundamentales. Sin embargo, las cosas no son tan simples, el modelo del oscilador armnico no puede explicar el comportamiento de las molculas reales debido a que no tiene en cuenta la repulsin Coulombica entre los tomos ni la disociacin de los enlaces. Debido a esto, el comportamiento real de las molculas se acerca ms al modelo del oscilador anarmnico, en el que los niveles de energa no estn homogneamente espaciados. Por tanto, la diferencia de energa decrece al aumentar :
Evib = h [1 (2 + + 1)y ]

donde y es el factor de anarmonicidad. La anarmonicidad puede dar lugar a transiciones entre estados de energa vibracional donde =2,3... . Estas transiciones entre estados vibracionales no continuos, dan lugar a las bandas de absorcin denominadas sobretonos (primer y segundo sobretodo respectivamente) a, aproximadamente, mltiplos de las frecuencias fundamentales de vibracin. Adems, son mucho menos probables que las transiciones fundamentales y por ello las bandas son mucho ms dbiles (la banda del primer sobretodo es entre 10-100 veces ms dbil que la fundamental dependiendo del tipo de enlace). Estas bandas aparecen entre 780 y 2000 nm, dependiendo del tipo de sobretodo, la naturaleza del enlace y la fuerza del mismo. Debido a todo esto es necesario introducir el Principio de Franck-Condon en la espectroscopa NIR.

El Principio de Franck-Condon establece que cuando una molcula vibra, la probabilidad de encontrar un tomo dado en una cierta posicin es inversamente proporcional a su velocidad en ese punto. Por ello, los tomos de una molcula en vibracin pasan la mayor parte del tiempo en configuraciones en las que la energa cintica es la menor posible; o lo que es igual, en configuraciones para las que la energa potencial es casi idntica a la energa total, o en la interseccin del nivel de energa vibracional con la superficie de energa potencial de la molcula. Por tanto, es ms fcil captar un protn cuando los ncleos se encuentran en estado estacionario o movindose lentamente. Es ms, la excitacin resultante de la absorcin de un protn no puede ser transferida directamente al ncleo. El ncleo tender a moverse lentamente inmediatamente despus del proceso de absorcin. Por tanto, en el estado excitado la configuracin nuclear tambin tiende a acercarse a la interseccin entre el nivel vibracional de energa y la superficie de energa potencial de excitacin. De este modo, las transiciones tienden a tener lugar entre niveles vibracionales en los que las configuraciones nucleares son las mismas para los dos estados, y tienden a ocurrir cuando las cinticas nucleares son pequeas (extrado y traducido de la referencia. Estas pequeas variaciones incrementan la anarmonicidad, lo que causa que las bandas de combinacin y los sobretonos recaigan en mltiplos imprecisos de las bandas fundamentales. Cuanto ms fuerte es la vibracin, ms grande la anarmonicidad. Uno de los mejores ejemplos es la molcula de agua. La banda de combinacin del agua aparece aproximadamente a 5150 cm-1 (1940 nm) y se cree que deriva de la banda fundamental a 3756 cm-1 (tensin asimtrica) y a 1596 cm-1 (deformacin), sera 3756 + 1596 = 5352 cm-1 (1868 nm). La gran diferencia entre la banda calculada (1868 nm) y la observada (1940 nm) se debe principalmente a los puentes de hidrgeno. En molculas poliatmicas, dos o ms modos vibracionales pueden interaccionar de tal manera que causen cambios de energa simultneos y generar bandas de absorcin llamadas bandas de combinacin. Las frecuencias de estas bandas son la suma de mltiplos de cada una de las frecuencias de interaccin. Las bandas de combinacin en el espectro infrarrojo aparecen entre 1900 y 2500 nm y tienen dos efectos en el espectro NIR: Las absorciones aparecen en posiciones inesperadas en el espectro NIR. Las regiones de absorcin aparecen como bandas anchas causadas por el solapamiento de multitud de absorciones diferentes.

Las absorciones electrnicas estn causadas por el movimiento de los electrones desde una rbita a otra de mayor energa. Se observan normalmente en las regiones del visible y el ultravioleta del espectro electromagntico pero tambin pueden aparecer en la regin del infrarrojo cercano, en particular en la regin entre 780-1100 nm. La mayor utilidad de estas bandas se presenta para los espectros de los elementos pertenecientes al grupo de tierras raras. La consecuencia de todos estos mecanismos diferentes hace que el espectro NIR sea muy complejo y, a menudo, esta complejidad se refleja en unas pocas bandas anchas del espectro. La intensidad de las bandas NIR depende del cambio en el momento dipolar y de la anarmonicidad del enlace. El tomo de hidrgeno es el ms ligero, y por ello presenta las vibraciones ms grandes y la mayor desviacin del comportamiento

armnico. Como consecuencia de esto, las principales bandas observadas en la regin NIR corresponden con los enlaces en los que est implicado el hidrgeno u otros tomos ligeros (concretamente C-H, N-H, O-H y S-H); por el contrario, las bandas para los enlaces como C=O, CC y CCl, son mucho ms dbiles o incluso ausentes. Las interacciones entre tomos de diferentes molculas (por ejemplo los puentes de hidrgeno o las interacciones dipolo-dipolo) alteran los estados vibracionales de energa, generando desplazamientos en las bandas de absorcin o dando lugar a nuevas bandas debido a diferencias en la estructura cristalina. Los puentes de hidrgeno se generan debido a la tendencia del hidrgeno a formar enlaces dbiles con tomos dadores de electrones, especialmente oxgeno y nitrgeno. La formacin de un enlace dbil afecta a todas la vibraciones asociadas a ese hidrgeno y su compaero dador-electrnico. Esto se traduce en desplazamientos de bandas (hacia mayores y menos energticas longitudes de onda) que se observan habitualmente como ensanchamiento de picos. La estructura del puente de hidrgeno del agua es muy compleja y depende de la temperatura, el pH, la concentracin inica, etc por tanto, siempre que el agua est presente en una muestra, existir una compleja y dinmica interaccin entre el agua y la muestra, que ser nica para ese tipo de muestra. Todo esto permite que se puedan diferenciar las distintas formas del cristal y determinar las diferentes propiedades fsicas de una muestra (densidad, viscosidad, tamao de partcula en slidos pulverulentos). En otras palabras, el espectro NIR no solo contiene informacin qumica relacionada con la composicin de la muestra, sino que tambin contiene informacin fsica que puede ser utilizada para determinar determinadas propiedades fsicas de las muestras. En conclusin, un espectro NIR de reflectancia o transmitancia es el resultado de las condiciones fsicas de ambos: el instrumento y la muestra. Parmetros como la geometra del instrumento, el tamao de partcula o de gota, la forma y la distribucin, los ndices de refraccin, etc son importantes en la medicin de un espectro NIR. Cuando se obtiene el espectro NIR de materiales biolgicos, es imposible (o costara mucho tiempo) medir sin la existencia de fenmenos de dispersin de la luz. Esto requerira una purificacin total de las muestras y la posible prdida de interacciones importantes y efectos sinrgicos entre los constituyentes de las mismas. Esta es la razn por la cual se hace extensiva la utilizacin de mtodos de tratamientos multivariante de datos con el objetivo de revelar la informacin especfica y til del espectro NIR. Los espectros NIR se presentan normalmente en unidades de absorbancia definidas por cualquiera de las expresiones A = log(1/R) o A = log(1/T), dependiendo de que los datos sean de reflectancia (R) o transmitancia (T). Aunque los espectros NIR son muy complejos, el hecho de que los mismos tomos estn involucrados en mltiples absorciones diferentes significa que estas absorciones pueden ser utilizadas, a travs de los tratamientos matemticos adecuados, para obtener informacin analtica sobre grupos funcionales especficos

Instrumentacin y deteccin

La instrumentacin NIR ha evolucionado de manera vertiginosa en respuesta a la necesidad de realizar anlisis rpidos y la flexibilidad para adaptar la tcnica a los diferentes tipos de muestra. Los espectrofotmetros empleados para registrar los espectros NIR son, en esencia, idnticos a aquellos empleados en otras regiones del espectro electromagntico. Sin embargo, los equipos del infrarrojo cercano pueden incorporar una gran variedad de accesorios dependiendo de las caractersticas de la muestra, las condiciones analticas particulares y necesidades (velocidad, complejidad de la matriz y condiciones ambientales), por lo que la tcnica es muy flexible. Los espectrofotmetros NIR pueden ser de dos tipos en funcin de que la seleccin de la longitud de onda sea discreta o que recojan el espectro completo. La deteccin de los sistemas NIR utiliza dispositivos compuestos por semiconductores (PbS o InGaAs). En los detectores multi-canal, los diferentes elementos de deteccin se encuentran alineados en filas (diode arrays) o planos (charged coupled devices-CCDs) para registrar mltiples longitudes de onda de una sola vez e incrementar al mismo tiempo la velocidad a la que se adquiere el espectro NIR. Este tipo de detectores ha dado lugar a la llamada espectroscopa de imagen NIR, en la que los espectros son registrados mediante el empleo de cmaras que pueden determinar la composicin en diferentes puntos del espacio y registrar la forma y el tamao del objeto. La toma de mediciones a diferentes longitudes de onda permite obtener la imagen tridimensional como una funcin de la composicin espacial de la muestra y la longitud de irradiacin usada. El anlisis es rpido no solo por la velocidad a la que se registran los espectros NIR sino porque no hay necesidad de pretratamiento de las muestras. Esto ha permitido el desarrollo de accesorios de cuarzo y fibra ptica que permiten recoger los espectros de muestras con diferentes caractersticas mediante la previa seleccin del modo ms adecuado para cada muestra (normalmente reflectancia para slidos, transmitancia para lquidos y transflectancia para emulsiones y lquidos turbios). Otro factor que influencia la velocidad del anlisis es la capacidad para realizar medidas de campo en vez de tener que recoger las muestras para su posterior anlisis en el laboratorio. Algunos espectrofotmetros NIR pueden realizar medidas in-situ. La miniaturizacin de los componentes pticos ha potenciado el desarrollo de espectrofotmetros NIR porttiles. Los modelos de este tipo actualmente disponibles incluyen instrumentos de mano y equipos que pueden ser transportados en una mochila o colocados en un vehculo. Concluyendo, la tcnica de la espectroscopa NIR no solo comprende los principios de la fsica terica y la electrnica de la instrumentacin, sino que incluye adems la quimiometra y los anlisis de referencia como parte de la metodologa NIR. En la actualidad, el uso de la espectroscopa de infrarrojo cercano se est extendiendo a nuevas aplicaciones y, dentro de poco tiempo, aparecern sensores que utilizaran mltiples regiones del espectro electromagntico y tendrn capacidades de clculo acopladas para incrementar, en gran manera, la capacidad de clasificar, identificar, medir y asegurar la calidad. Por lo general, cada una de las

tecnologas industriales presenta un periodo de crecimiento y auge, sin embargo, despus de un cierto tiempo, dicha tecnologa es reemplazada por otra ms eficiente o verstil. Esto no ocurrir con el NIR, ya que su crecimiento ha dependido y depender siempre de un conjunto de tecnologas que proporcionan, de manera conjunta, una herramienta poderosa en el campo de la qumica analtica.