ACIDOS NUCLEICOS

Constituyen el grupo de biomolculas ms recientemente descubierto (Miesher, 1869). Existen 2 tipos de cidos nucleicos (AN): el cido desoxirribonucleico (DNA) y el cido ribonucleico (RNA), y estn presentes en todas las clulas. Su funcin biolgica no qued plenamente demostrada hasta 1944, en que Avery y colaboradores demostraron que el DNA era la molcula portadora de la informacin gentica. Los AN son polmeros lineales en los que la unidad repetitiva, llamada nucletido, est constituda por: (1) una pentosa (la ribosa o la desoxirribosa), (2) cido fosfrico y (3) una base nitrogenada (purina o pirimidina). La unin de estas bases a una pentosa constituye un nuclesido. La unin de tipo ster de un nuclesido con el cido fosfrico se llama nucletido. El DNA y el RNA se diferencian porque: (1) el peso molecular del DNA es generalmente mayor que el del RNA, (2) el azcar del RNA es ribosa, y el del DNA es desoxirribosa, (3) el RNA contiene la base nitrogenada uracilo, mientras que el DNA presenta timina y (4) la configuracin espacial del DNA es la de un doble helicoide, mientras que el RNA es un polinucletido lineal. LAS BASES NITROGENADAS Las bases pricas tienen la estructura fundamental del heterociclo purina. Las bases pirimidnicas derivan del anillo de pirimidina. Las bases pricas que se encuentran en los AN (tanto DNA como RNA) son la adenina y la guanina. Las bases pirimidnicas de los AN son uracilo y citosina en el RNA y timina y citosina en el DNA (Figura 1). En ciertos casos aparecen otros tipos de bases nitrogenadas en los AN. En el RNA transferente (RNAt) se encuentran a menudo bases como la N2-dimetilguanina, la hipoxantina o el dihidroxiuracilo. En el DNA se puede encontrar 5-metilcitosina o 5hidroximetilcitosina (Figura 2). Todas las bases mencionadas contienen la funcin lactama, que es una amida interna. Esta funcin se puede convertir en la funcin lactima (imida interna) por un fenmeno de isomera intramolecular llamado tautomera (Figura 3). En las condiciones fisiolgicas, el equilibrio est casi completamente desplazado hacia la forma lactama. NUCLEOSIDOS Los nuclesidos son -N-glicsidos de ribosa o desoxirribosa, en los que el sustituyente en posicin del carbono 1 de la pentosa es una base prica o pirimidnica (Figura 4). Los nuclesidos que contienen ribosa se llaman ribonuclesidos y los que contienen desoxirribosa son los desoxirribonuclesidos. Por convencin, la numeracin de los carbonos del anillo de la pentosa incluye un apstrofo para diferenciarlos de los tomos de los anillos de la base nitrogenada. Los ribonuclesidos ms importantes son la adenosina (A), guanosina (G), timidina (T), uridina (U) y citidina (C). Los

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desoxirribonuclesidos reciben los mismos nombres, pero con el prefijo desoxi: desoxiadenosina (dA), desoxiguanosina (dG), etc. Las bases nitrogenadas y los nuclesidos tienen poco inters bioqumico como sustancias libres, salvo en las vas biosintticas y degradativas de los AN. Las excepciones ms importantes son: el cido rico y la S-adenosilmetionina (SAM) (Figura 5). El cido rico es un derivado prico que constituye el producto final de la degradacin de purinas. Normalmente se elimina por la orina, pero en circunstancias patolgicas puede cristalizar originando clculos renales o la gota. La SAM se forma por condensacin de adenosina y metionina. Es un agente metilante muy enrgico. NUCLEOTIDOS Los nucletidos son steres fosfricos de nuclesidos. El ortofosfato se encuentra esterificado normalmente a los hidroxilos en posicin 3' y 5', aunque excepcionalmente tambin pueden hacerlo en 2'. El fosfato confiere carcter cido a la molcula. Los nucletidos, adems de integrar las cadenas de AN poseen funciones biolgicas en estado libre. Los nucletidos se representan con la letra mayscula correspondiente al nuclesido del que derivan ms la letra p minscula, que repesenta al grupo fosfato y se antepone a la letra mayscula de la base si el fosfato est esterificado en posicin 5' o se pone detrs si el fosfato est esterificado en posicin 3'. As, el smbolo pA denota la adenosina-5'-fosfato, y el smbolo Ap a la adenosina-3'-fosfato (Tabla 1). A veces, los nucletidos contienen ms de un grupo fosfato, unidos entre s mediante un enlace anhidro. En este caso, cada grupo se representa por una letra p. De esta forma, pAp representa a la 5',3'-adenosina difosfato, ppA representa a la adenosina-5'-difosfato (ADP) y pppA a la adenosina -5'-trifosfato (ATP) (Figura 6). Cuando los nucletidos contienen ms de una molcula de cido fosfrico, como en el caso de la adenosina-5'-trifosfato (ATP, pppA), las 3 molculas de cido fosfricos se distinguen mediante los prefijos , y (Figura 6). La energa libre almacenada en el ATP se utiliza para desarrollar trabajo mecnico (contraccin muscular), osmtico (transporte activo), qumico (biosntesis) y elctrico (transmisin del impulso nervioso). La guanosina-5'- trifosfato (GTP, pppG) interviene en la sntesis de protenas, la uridina-5'- trifosfato (UTP, pppU) en el metabolismo de los glcidos y la citosina-5'- trifosfato (CTP, pppC) en el metabolismo lipdico. Los flavina-nucletidos son grupos prostticos de enzimas de oxidorreduccin. La flavina-mononucletido (FMN) est compuesta por la base flavina y el azcar ribitol. La FMN puede unirse al AMP para formar la flavina-adenina-dinucletido (FAD), que tambin es un grupo prosttico (Figura 7). Otros nucletidos de oxidorreduccin son las piridina-nucletidos. Suelen actuar como coenzimas libres. Las ms comunes son la nicotinamida-adenina-dinucletido (NAD), compuesta de la nicotinamida, AMP y ribosa, y la nicotinamida-adeninadinucletido-fosfato (NADP), que adems contiene cido fosfrico (Figura 8). Algunos nucletidos actan como intermediarios de la accin hormonal (mensajeros qumicos). Son nucletidos cclicos, en los que el cido ortofosfrico Acidos nucleicos 2

esterifica dos hidroxilos (el 3' y el 5') de la misma ribosa. Los ms comunes son la adenosina-3',5'-monofosfato o AMP cclico (AMPc) (Figura 9) y la guanosina-3',5'monofosfato o GMP cclico (GMPc). La coenzima A es un cofactor importante que participa en multitud de procesos enzimticos. Est compuesta por cido pantotnico (una vitamina), -mercaptoetilamina y una molcula de ADP (Figura 10). Interviene en reacciones de acilacin, en las que el grupo acilo entrante se incorpora al coenzima A mediante un enlace tioster, muy reactivo. POLINUCLEOTIDOS Los polinucletidos son cadenas lineales de nucletidos en los que los grupos fosfato estn esterificados a los hidroxilos 5' y 3' de dos nucletidos consecutivos (Figura 11). Como consecuencia, cada polinucletido contiene nicamente un OH libre en el grupo fosfato en posicin 5' (extremo 5' fosfato) y un OH libre en posicin 3' (extremo 3'). Los dos polinucletidos presentes en los seres vivos son el cido ribonucleico (RNA) y el cido desoxirribonucleico (DNA). En la sntesis de DNA o RNA, el nucletido que se va a aadir a la cadena de polinucletido (siempre en forma trifosfato) se une por su OH en posicin 5' al grupo OH en posicin 3' del ltimo nucletido de la cadena de polinucletido mediante un enlace fosfodister, liberando un grupo pirofosfato (Figura 11). Por convencin, la secuencia de los polinucletidos se representa en el sentido 5' 3'. ACIDO RIBONUCLEICO (RNA) Es el AN ms abundante en la clula. Una clula tpica contiene 10 veces ms RNA que DNA. El azcar presente en el RNA es la ribosa. Esto indica que en la posicin 2' del anillo del azcar hay un grupo hidroxilo (OH) libre (Figura 11). Por este motivo, el RNA es qumicamente inestable, de forma que en una disolucin acuosa se hidroliza fcilmente. En el RNA la base que se aparea con la A es U, a diferencia del DNA, en el cual la A se aparea con T. En la mayor parte de los casos es un polmero monocatenario, pero en ciertos casos puede presentar zonas en su secuencia con apareamientos intracatenarios. Puede purificarse fcilmente y se distinguen varios tipos de RNA en funcin, sobre todo, de sus pesos moleculares. El RNA heterogneo nuclear (RNAhn) es un RNA de alto peso molecular, presente en el ncleo de las clulas eucariotas. Se le considera como precursor de los dems tipos de RNA que se encuentran en el citoplasma. La fragmentacin del RNAhn para formar otros tipos de RNA constituye la maduracin del RNA (tambin llamado procesamiento del RNA). El RNA pequeo nuclear (RNAsn) est presente en el ncleo, y es de pequeo tamao. Parece estar implicado en los procesos de maduracin del RNAhn. El RNA transferente (RNAt) tiene un peso molecular de 25000 (75-90 nucletidos). Se conocen unos 60 RNAt distintos, y se encuentran en todas las clulas. Acidos nucleicos 3

Intervienen en la sntesis de protenas, ya que van unidos a un aminocido. Pueden presentar nucletidos poco usuales (cido pseudouridlico, cido inoslico) e incluso bases caractersticas del DNA como la timina. Su estructura presenta una disposicin caracterstica, denominada plegamiento en hoja de trbol, en la cual la cadena de polinucletidos presenta alternancia de zonas lineales y zonas apareadas. El RNA ribosmico (RNAr) est presente en los ribosomas, orgnulos intracelulares implicados en la sntesis de protenas. Se conocen 3 4 tipos distintos de RNAr. Su estructura presenta un plegamiento complejo que le permite asociarse tanto a las protenas integrantes de los ribosomas como a otros RNAr y participar en el proceso de sntesis proteica. El RNA mensajero (RNAm) se sintetiza sobre un molde de DNA y sirve de pauta para la sntesis de protenas. Su peso molecular es alto y contiene nicamente los nuclotidos A, U, G y C. Adems de contener codificada la secuencia de una protena, contiene seales para la iniciacin y terminacin de la sntesis. El RNA vrico (RNAv) es el que consituye el patrimonio gentico de ciertos virus como el bacterifago MS2, el virus del mosaico del tabaco, el poliovirus, el virus de la rabia, el virus de la gripe o el virus del SIDA. Es muy probable que el RNA fuese el primer biopolmero. En un ambiente similar al que debi existir en la Tierra primitiva pueden formarse espontneamente cadenas cortas de RNA, pero no de DNA o protenas. Adems, se conocen casos en los que las molculas de RNA se cortan y empalman por sitios especficos, en ausencia de protenas. Estos primitivos mecanismos de maduracin del RNA contribuyeron probablemente a que se consiguiera con xito la primera sntesis de protena dirigida por una cadena de polinucletidos (un gen). En una etapa posterior, a partir del RNA se formara el DNA, que llegara a convertirse en un depsito seguro de informacin gentica. ACIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (DNA) Los primeros estudios fsicos llevados a cabo con el DNA mediante la tcnica de difraccin de rayos X indican que (1) la molcula de DNA es una cadena extendida con una estructura altamente ordenada (2) la molcula de DNA es helicoidal y tiene 20 de dimetro (3) la hlice del DNA est compuesta por dos hebras helicoidales y (4) las bases de los nucletidos estn apiladas con los planos separados por una distancia de 3,4 (Figura 12). El anlisis qumico del contenido molar de las bases de DNA procedente de diversos organismos revel que en todos los casos [A]=[T] y que [G]=[C], o lo que es lo mismo, [A+G]=[T+C] ([purinas]=[pirimidinas]). Esta es la llamada ley de Chargaff. En 1953, James Watson y Francis Crick combinaron los datos qumicos y fsicos del DNA, y propusieron que las dos hebras estn enrolladas una alrededor de la otra formando una doble hebra helicoidal. En este modelo (Figuras 12 y 13), las dos cadenas de polinucletidos se mantienen equidistantes, al tiempo que se enrollan en torno a un eje imaginario. El esqueleto azcar-fosfato (formado por una secuencia alternante de

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desoxirribosa y fosfato, unidos por enlaces fosfodister 5'-3') sigue una trayectoria helicoidal en la parte exterior de la molcula mientras que las bases se dirigen desde la cadena al eje central imaginario. Las bases de una hebra estn enfrentadas con las de la otra, formando los llamados pares de bases (PB). Las dos bases que forman un PB estn en el mismo plano y dicho plano es perpendicular al eje de la hlice. Las parejas formadas son siempre una purina y una pirimidina, de forma que ambas cadenas estn siempre equidistantes, a unos 11 una de la otra. Los PB adoptan una disposicin helicoidal en el ncleo central de la molcula, ya que presentan una rotacin de 36 con respecto al par adyacente (Figura 14), de forma que hay 10 PB por cada vuelta de la hlice. Las bases se unen entre s mediante puentes de hidrgeno. La A se empareja siempre con la T mediante dos puentes de hidrgeno, mientras que la C se empareja siempre con la G por medio de 3 puentes de hidrgeno (Figura 15). El apareamiento de bases es una de las caractersticas ms importantes de la estructura del DNA porque significa que las secuencias de bases de ambas hebras son complementarias. Este hecho tiene implicaciones muy profundas con respecto al mecanismo de replicacin del DNA, porque de esta forma la rplica de cada una de las hebras obtiene la secuencia de bases de la hebra complementaria. En cada extremo de una doble hlice lineal de DNA, el extremo 3'-OH de una de las hebras es adyacente al extremo 5'-P (fosfato) de la otra. En otras palabras, las dos hebras son antiparalelas, es decir, tienen una orientacin diferente. Por convencin, la secuencia de bases de una hebra sencilla se escribe con el extremo 5'-P a la izquierda. La doble hlice es dextrgira. Esto quiere decir que si alguien mira al eje de la hlice hacia abajo, en cualquier direccin, cada una de las hebras sigue una trayectoria en el sentido de las agujas del reloj al alejarse del observador. La hlice presenta dos surcos helicoidales externos, uno de ellos ancho y profundo (surco mayor) y el otro estrecho y poco profundo (surco menor). Los dos surcos son lo suficientemente amplios como para permitir que las molculas proteicas entren en contacto con las bases (Figura 13). La relacin A=T y C=G siempre se cumple, pero no hay regla que rija las concentraciones totales de G+C y de A+T. Existe una enorme variacin en esta relacin para los diferentes tipos de bacterias. Normalmente la composicin de bases de una molcula de DNA de un organismo se expresa como su contenido en G+C. En organismos superiores, este valor est prximo a 0,5, pero en los organismos inferiores (bacterias) este valor vara mucho de un gnero a otro. As, en el gnero Clostridium es de 0,27; en Sarcina es de 0,76 y en Escherichia es de 0,5. Esta estructura de doble hlice del DNA no es la ms habitual. En las clulas eucariotas, el DNA forma los cromosomas, que son complejas asociaciones de DNA superenrrollado y unas protenas llamadas histonas (Figura 16). En procariotas, as como en las mitocondrias y cloroplastos, el DNA se presenta en forma circular, en la que la doble hlice se cierra por sus extremos. Este DNA circular puede presentar diversos grados de superenrrollamiento (Figura 17). En virus, el DNA puede presentarse como una doble hlice cerrada, como una doble hlice abierta o simplemente como una nica hebra lineal.

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FACTORES QUE DETERMINAN LA ESTRUCTURA DEL DNA La estructura helicoidal del DNA se mantiene gracias a interacciones no covalentes. Por un lado, el apilamiento entre las bases adyacentes de una misma hebra favorece interacciones hidrofbicas entre stas, y por otro lado, cada base est unida a su pareja mediante puentes de hidrgeno. La energa libre de las interacciones no covalentes que mantienen la estructura helicoidal del DNA no es muy superior a la energa de los movimientos trmicos a temperatura ambiente, por lo que a elevadas temperaturas se rompe la estructura tridimensional de los AN. Una macromolcula en un estado desorganizado, en el que las molculas se encuentran en una configuracin prxima al enrollamiento al azar se dice que est desnaturalizada. La configuracin ordenada, que es presumiblemente la que se encuentra en la naturaleza se llama nativa. La transicin entre el estado nativo y el desnaturalizado se conoce como desnaturalizacin. Cuando se calienta un DNA de doble hebra (forma nativa) se rompen las fuerzas de unin entre las hebras separndose entre s, por lo tanto, el DNA desnaturalizado es de una sola hebra. Si se deja enfriar uan disolucin de DNA monocatenario (desnaturalizado), se vuelve a formar el DNA nativo (de doble hebra). Este proceso recibe el nombre de renaturalizacin del DNA (Figura 18). La forma ms corriente de desnaturalizar el DNA es por calentamiento. Otro agente desnaturalizante es el pH elevado porque cambia la carga de algunos grupos que forman parte de los puentes de hidrgeno. En agua destilada (con una fuerza inica muy reducida) se produce la separacin de las hebras. Este fenomeno se debe a que en agua muy pura, la fuerte repulsin entre las cargas negativas de los grupos fosfato no es contrarrestada por los correspondientes contraiones (Na+, Mg+2). La desnaturalizacin del DNA se puede detectar observando el aumento de la capacidad de una disolucin de DNA de absorber la luz ultravioleta de una longitud de onda () de 260 nm (A260). Las bases de los cidos nucleicos absorben fuertemente la luz de 260 nm. La cantidad de luz que absorbe un nmero de bases dado depende de su proximidad. Cuando las bases estn altamente ordenadas (muy prximas entre s) como en el DNA de doble hebra, la A260 es menor que en un estado menos ordenado como el DNA de una sola hebra o las bases nitrogenadas libres en disolucin (Figura 19). As, si una disolucin de DNA de doble hebra tiene una A260= 1, la misma concentracin de una disolucin de DNA de una sola hebra presenta una A260=1,37, y la misma concentracin de bases nitrogenadas libres tiene una A260 de 1,6. El aumento en la A260 a medida que se desnaturaliza el DNA se llama efecto hipercrmico. El efecto inverso (disminuye A260 al renaturalizarse el DNA) se llama efecto hipocrmico. La desnaturalizacin del DNA se puede medir por calentamiento de un DNA de doble hebra. La grfica que representa la medida de A260 en funcin de la temperatura se llama curva de fusin del DNA (Figura 20). Esta curva presenta las siguientes caractersticas: 1.- La A260 permanece constante hasta temperaturas bien por encima de las fisiolgicas. En este intervalo, la molcula est en forma de doble hebra.

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2.- El aumento de A260 tiene lugar en un estrecho rango de temperaturas (6-8 C). La A260 empieza a aumentar cuando comienzan a romperse las uniones entre las bases en varios segmentos de la molcula. El nmero de PB que se rompen aumenta con la temperatura, y con ella la A260. Al final del tramo ascendente, las dos hebras se mantienen juntas por unos cuantos PB. 3.- La A260 mxima es aproximadamente un 37% mayor que el valor inicial, y corresponde al estado en que las dos hebras estn completamente separadas. Un parmetro muy til para caracterizar la evolucin de la fusin es la temperatura a la que el aumento de la A260 ha llegado a la mitad de su camino. Esta temperatura se llama temperatura de fusin (Tm). Se ha comprobado que la Tm aumenta con el contenido de G+C. Como el par de bases G-C est unido por tres puentes de hidrgeno (a diferencia del par A-T que slo presenta 2) se requiere una temperatura ms alta para desnaturalizarlo. Los reactivos que incrementan la solubilidad de las bases disminuyen la Tm, ya que reducen la interaccin hidrofbica que las mantiene unidas. De esto se deduce que tanto los puentes de hidrgeno como las interacciones hidrofbicas cooperan para formar una estructura estable. Si se reduce o elimina cualquiera de estas interacciones, la estabilidad disminuye y la Tm es menor. Una disolucin de DNA desnaturalizado puede ser tratada de forma que recupere su configuracin nativa. El proceso se llama renaturalizacin, y se obtiene un DNA renaturalizado. Para que tenga lugar la renaturalizacin deben cumplirse dos requisitos: 1.- La concentracin salina debe ser alta ([NaCl] entre 0,15 y 0,5 M) para eliminar la repulsin entre los grupos fosfato de las dos hebras. 2.- La temperatura deber ser lo suficientemente elevada como para romper los puentes de hidrgeno intracatenarios producidos al azar en el DNA monocatenario, y lo suficientemente baja como para estabilizar los apareamientos correctos entre las bases de hebras distintas. La temperatura ptima de renaturalizacin es de unos 20 a 25 C por debajo de la Tm. La renaturalizacin es un fenmeno de unin al azar, y por tanto la molcula de DNA renaturalizada no contiene las hebras originales. Si mezclamos un DNA marcado con el istopo 15N con otro que contenga el istopo normal 14N y los desnaturalizamos, durante la renaturalizacin se forman 3 tipos de molculas de doble hebra: un 25% con 14N en las dos hebras, un 25% con 15N en las dos hebras y un 50% con una hebra 14N y otra 15N. Cuando el DNA renaturalizado se forma a partir de molculas de DNA de distinto origen la renaturalizacin se conoce como hibridacin. Una caracterstica importante de la hibridacin es que no slo se puede producir entre dos DNA distintos, sino tambin entre DNA y RNA.

LOS ACIDOS NUCLEICOS COMO MATERIAL GENETICO

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Hasta mediados de los aos 40 haba fuertes controversias sobre la naturaleza qumica del material hereditario. Si alguna biomolcula poda ser candidata a ser el material gentico, stas eran las protenas con su estructura tan compleja y variada. Molculas tan simples y repetitivas como los cidos nucleicos no eran, a priori, candidatos idneos como portadores del material gentico. Esta controversia fu resuelta en la dcada de los 40 mediante dos brillantes experimentos. 1.- EXPERIMENTO DE AVERY, McLEOD Y McCARTY En 1928, Griffith describi el llamado fenmeno de transformacin por neumococos. Se distinguen dos tipos de neumococos. Los neumococos de tipo R (rugoso) forman colonias de aspecto rugoso sobre un medio slido, y son poco virulentos. Los neumococos de tipo S (liso) forman colonias de aspecto liso y brillante sobre un medio slido, y provocan infecciones letales. Se caracterizan por poseer una cpsula de polisacridos en la superficie celular. Si se inyectan a un ratn conjuntamente neumococos vivos de tipo R y neumococos muertos de tipo S, se produce la muerte del ratn, y de la infeccin se pueden extraer neumococos vivos del tipo S (Figura 21). Se sospechaba, por tanto, de la existencia de un factor de transformacin. En 1944, Avery, McLeod y McCarty demostraron que el factor de transformacin del neumococo era el cido desoxirribonucleico (DNA). Trabajaban con cultivos puros de neumococo R a los que aadan distintos componentes de neumococos S muertos. Slo se produca el fenmeno de transformacin cuando se aada a los neumococos R el DNA de los neumococos S. Este DNA era captado por los neumococos R vivos con lo que se transformaban en neumococos S vivos y letales. Esta conclusin se vi reforzada por otra serie de experimentos. En presencia de proteasas (protenas que rompen protenas), el factor de transformacin sigue siendo operativo, mientras que en presencia de desoxirribonucleasa (enzima que rompe el DNA) el factor de transformacin deja de funcionar. Esto no deja lugar a duda sobre la naturaleza del factor de transformacin, que es un DNA y no una protena como se sospechaba en aquella poca. 2.- EXPERIMENTO DE HERSHEY Y CHASE Los bacterifagos (o fagos) son virus que atacan a las bacterias. Los fagos de la serie T-par (T2, T4 y T6) atacan a la enterobacteria Escherichi coli. Estos fagos constan de una cabeza proteica que guarda una molcula de DNA, una cola y una serie de filamentos (Figura 22). Cuando estos virus encuentran una bacteria susceptible, se fijan a un receptor especfico de la superficie celular y le inyectan el contenido de la cabeza (el DNA). En el interior de la bacteria, este DNA crea varios cientos de copias de s mismo y de las protenas que lo componen, aprovechando la maquinaria biosinttica de la clula. Una vez completada la sntesis, las molculas de DNA y de protena se ensamblan para formar nuevas copias del virus. Una vez terminado el proceso, la bacteria de destruye (lisis) y los nuevos virus son liberados al medio donde pueden iniciar nuevos ciclos de infecin (ciclo ltico) (Figura 23). Como los virus de la progenie heredan los caracteres fenotpicos del virus primitivo, Hershey y Chase disearon un sistema para averiguar si la herencia era comunicada por el DNA o por las protenas. Utilizaron tcnicas de marcaje radioactivo Acidos nucleicos 8

para construir dos tipos de fagos distintos. Una poblacin de fagos creci en un medio que contena 35S. El 35S marca a las protenas que contienen residuos de Cys o Met y por lo tanto, esta poblacin contiene protenas radioactivas y DNA no radioactivo, ya que el DNA no contiene S. La segunda poblacin de virus creci en un medio que contena 32P. El 32P marca los cidos nucleicos, pero no a las protenas, de forma que esta poblacin contiene DNA radioactivo y protenas no radioactivas. Ambos tipos de virus fueron utilizados por separado para infectar a clulas de E. coli susceptibles. Despus de la infeccin, y antes de que se completara el ciclo ltico sometan a las clulas a una fuerte agitacin mecnica para desprender de la superfice de la clula a todos los virus que pudiesen estar adheridos, y despus, por centrifugacin separaban las clulas de las partculas vricas. A continuacin medan la radioactividad asociada a las clulas. Las clulas presentaban radioactividad nicamente cuando se haca el experimento con virus 32P. Cuando se realizaba el experimento con virus 35S, las clulas no contenan radioactividad (Figura 24). Como los virus que surgen de ambos ciclos lticos son absolutamente normales, este experimento indica que las caractersticas genticas del virus han sido comunicadas a la progenie mediante el DNA, no mediante la protena. PROPIEDADES BIOLOGICAS DEL DNA En las clulas eucariotas, el DNA est presente en el ncleo, as como en mitocondrias y cloroplastos. En procariotas, el DNA se encuentra en el citoplasma celular. La molcula de DNA es el soporte material de los caracteres hereditarios de una especie y es trasmitida ntegramente a la progenie. Cada cromosoma eucariota contiene una sla molcula de DNA. Su masa molecular es enorme. El peso molecular por unidad de longitud de la hlice es aproximadamente de 2 x 106 dalton por m. El modelo de Watson y Crick explica las propiedades biolgicas del DNA: 1.- Resistencia a la alteracin de las bases (mutacin): Si aparece una base incorrecta, su emparejamiento se ve impedido, y la doble hlice se altera. Estos errores pueden ser reparados por medio de diversos mecanismos celulares (Figura 25). 2.- Duplicacin del material gentico: Las clulas hijas tienen la misma dotacin gentica que su progenitora. Para obtener esta duplicacin exacta, basta la separacin de las dos cadenas de la doble hlice y la sntesis de las complementarias (Figura 26). 3.- Transcripcin de la informacin gentica: La complementariedad de bases permite a la clula copiar en un RNAm la secuencia complementaria a una de las hebras de DNA (Figura 27).

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