Los diversos elementos que existen en la naturaleza, presentan tamaos, formas y composiciones distintas, la mayoria de ellas pueden verse,

algunas a simple vista, y otras mediante instrumentos.

Lo que nos interesa, es la clula, ella entera, o partes de ella.

El Microscopio optico El microscopio optico tiene un limite resolucon de cerca de 200 nm (0.2 m ). Este limite se debe a la longitud de onda de la luz (0.4-0.7 m ). Las celulas observadas bajo el microscopio optico pueden estar vivas o fijadas y teidas.

El Microscopio Electronico de Transmisin(MET) El microscopio electronico de transmisin (MET) tiene un limite de resolusin de cerca de 2 nm. Un MET mira celulas muertas , despues de haber sido fijadas y teidas con iones de metales pesados. Los electrones son dispersados cuando pasan a traves de una fina seccin del especimen, y luego detectados y proyectados hacia una imagen sobre una pantalla fluorescente.

El Microscopio Electronico de Barrido (MEB) El microscopio elctronico de barrido (MEB) tambien tiene un limite de 2nm. El MEB permite mirar a celulas muertas, despues de haber sido fijadas y teidas con iones de metales pesados. Con esta tecnica los electrones son reflectados sobre la superficie del especimen.

Sin embargo, son los registros de Academia dei Lincei, sociedad de cientficos a la que perteneca Galileo, los que publican un trabajo sobre la observacin microscpica de una abeja. Es en aos subsiguientes cuando se produce una importante publicacin que fue consecuencia de una observacin de Malpighi, dado que as se llamaba el cientfico que en 1665 realiza este trabajo a travs de un microscopio: la llamada teora de Harvey sobre la circulacin sangunea. Es para esos aos tambin que datan las investigaciones de Hooke las que dan origen a su obra Micrographia. Corren los aos promediando el siglo XVII cuando un comerciante holands ocupado en investigaciones cientficas visualiza con microscopios de fabricacin casera y describe por vez primera protozoos, bacterias,

espermatozoides y glbulos rojos. En verdad, distintas excavaciones nos remontan mucho ms atrs en la historia del microscopio: diferentes descubrimientos nos han trado a nuestros tiempos los restos de lentes planos, convexos y biconvexos con registro de antigedad que nos llevan hasta casi 3000 aos antes de Cristo. Un investigador de nombre Beck encuentra en una expedicin de 1928 estas lentes en la Antigua Mesopotamia. Es hacia la primera parte del siglo XIX que el microscopio va adquiriendo formas ms precisas y acercndose al formato que hoy conocemos. Como el modelo Oberhauser de 1835 de tan

slo 15 cm. Ya en 1860 Dollond idea un microscopio compuesto de 32 cm con espejo orientable y tornillo de tipo micromtrico con cremallera. Hacia 1880, ya casi a fines de ese siglo, Nachet fabrica un microscopio de tipo monocular que permite adaptarse a los binoculares y mide 28 cm. La precisin de este instrumental va acrecentndose y es en el ao 1900 que Carl Zeiss comienza a fabricar microscopios pensados para diseccin de cuerpos, fuera animales, vegetales y humanos. Tambin, su precisin comenz a alcanzar a microorganismos, bacterias y virus permitiendo descubrimientos que salvaran a la humanidad de expandir pestes y enfermedades letales, y alcanzando un grado de especificidad y precisin en las investigaciones que hubiera sido imposible de otra manera. En el siglo XX el microscopio va a conservar las caractersticas que haba venido trayendo ms las modificaciones que le van a permitir convertirse en un instrumento indispensable para investigadores, estudiosos, curiosos, aficionados y estudiantes. Algunas mejoras del microscopio tienen que ver con la inclusin de un carro en el que se desplaza la muestra sobre la platina, tambin la posibilidad de utilizar para una ptima visualizacin un sistema elctrico incorporado al cuerpo del microscopio. Con el crecimiento de los avances tecnolgicos, se permite contar con microscopios electrnicos de transmisin y tambin los de sistema de barrido. En ambos casos, este instrumental ha permitido obtener imgenes de gran resolucin en materiales ptreos, metlicos, y orgnicos.

Partes del microscopio

Pero, qu partes componen un microscopio?, la parte bsica de un microscopio es un ocular, es la lente que permite ampliar la imagen del objetivo y se ubica cerca del ojo que observa. El objetivo es la lente que agranda la visin de la muestra y que se sita seguida

de sta. El revlver es el dispositivo donde se ubican los lentes objetivos y mediante el revlver de un microscopio se puede seleccionar qu lentes y objetivos usar. Para poner en foco la muestra estn los tornillos, con ellos se grada la visin. Sobre el cabezal de un microscopio de asientan los lentes oculares del tipo mono y binoculares. El diafragma es el dispositivo encargado de regular la luz sobre el condensador. El condensador del microscopio es el lente sobre el cual se concentra la luz para observar la muestra. La muestra se despliega sobre la platina a los fines de su observacin. La utilizacin del microscopio ha permitido acceder a la observacin de elementos de medidas infinitesimales y a una distancia mnima. La luz que procede sobre la muestra penetra en el microscopio por el objetivo y a manera de lupa, ste produce una imagen ampliada del elemento observado.
Tipos de microscopios

Respecto de los tipos conocidos de microscopios podemos mencionar los siguientes: ptico (es el ms sencillo y est formado por dos lentes, es el utilizado por principiantes y con un aceptable poder de resolucin), electrnico (de barrido especfico para observar las superficies de las muestras a partir de un delgado haz electrnico y de transmisin, ilumina la muestra con un haz de electrones y aumenta la imagen con lentes magnticas), digital (utiliza conexin USB y produce imgenes hacia el monitor de la PC) y cuntico (es parte del instrumental llamado nanoscpico dado que con ellos es posible ver elementos medidos en nanmetros y an menores, tambin llamado microscopio de barrido efecto tnel, presentado en 1982, propici el premio Nbel de Fsica para sus creadores Binnig y Rhrer en 1986.

Qu es el microscopio de contraste de fase? Para poder observar una clula o tejido al microscopio de campo claro convencional hay que fijarla y hacerle una tincin, lo que implica, la muerte de la clula en cuestin. Esto siempre ha sido una preocupacin para los expertos en el campo del estudio celular, debido que al pasar por todos estos procesos, algunas estructuras pueden daarse o cambiar su forma. Para esto se utiliza el microscopio de contraste de fase (entre otros mtodos ms modernos), que permite realizar exmenes inmediatos y observar clulas vivas. La microscopa de contraste de fase, fue desarrollada fundamentalmente por Zernike en 1932. Se basa fundamentalmente en el retraso que se produce en las ondas de luz al atravesar objetos de distintos ndices de refraccin, aprovechando y amplificando dichos retrasos. El microscopio de contraste de fase permite observar clulas sin colorear y resulta especialmente til para clulas vivas. Este aprovecha las pequeas diferencias de los ndices de refraccin en las distintas partes de una clula y en distintas partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor ndice de refraccin experimenta una deflexin y queda fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. Aparea otras longitudes de onda fuera

de fase por medio de una serie de anillos pticos del objetivo y del condensador, anula la amplitud de la porcin fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste til sobre la imagen. Las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas del espcimen; las partes claras de la imagen corresponden a porciones menos densas. Por lo tanto estos microscopios se utilizan para observar clulas vivas, tejidos vivos y cortes semifinos no coloreados. Dos modificaciones del microscopio de fase son el microscopio de interferencia y el microscopio de interferencia diferencial.

Constitucin del microscopio de contraste de fase Fundamentalmente el microscopio de contraste de fase es un microscopio ptico de campo claro con algunas modificaciones, como objetivos y condensadores especiales.

El condensador presenta un disco que proyecta un haz de luz con forma anular, y en la lente de salida de los objetivos, se agregan unos anillos de fase, que son discos transparentes con un diseo en relieve, cabe destacar que existen dos tipos diferentes de anillos de fase, denominados positivo y negativo, los cuales tienen distintos efectos sobre la luz y por lo tanto, las imgenes se ven diferentes en cada uno, esto se explicar ms adelante. Microscopa de fluorescencia: Descubierto en 1908 por Khler y Siedentopf, y se basa en que una sustancia natural en las clulas o un colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energa absorbi da como rayas luminosos. Siendo escasas las molculas autofluorecentes, su aplicacin ms difundida es para revelar una fluorescencia agregada, como en la deteccin de antgenos o anticuerpos. Tambin se puede inyectar molculas fluorescentes especficas en un animal o directamente en clulas y usarlas como marcadores.

Fluorocromos: Pueden usarse directamente, aprovechando la propiedad de unirse a determinadas molculas u orgnulos. Pero lo ms habitual es que estos colorantes se empleen conjugados a otras molculas, como anticuerpos, que son capaces de unirse de modo especfico a estructuras concretas de la clula. Algunos colorantes denominados fluorocromos tienen la propiedad de ser excitados (pasar a un nivel superior de energa) cuando absorben luz ultravioleta (luz de longitud de onda corta). Problema: La utilizacin de fluorocromos pierde grandes intensidades de luz empleadas, entonces no pueden observadas durante largos periodos de tiempo debido a la desaparicin de la fluorescencia. Fluorescencia: A medida que las molculas excitadas regresan a su estado normal liberan el exceso de energa en forma de luz visible de mayor longitud de onda que la radiacin excitante. Los objetos fluorescentes aparecen brillantemente iluminados contra un fondo oscuro, segn el color del colorante usado. Epifluorescencia: Hoy da se utiliza mucho un microscopio de fluorescencia en el cual la luz es emitida desde arriba del preparado. Por lo tanto, el objetivo del microscopio acta como lente iluminadora y de imagen.

COMPARACION ENTRE MICROSCOPIOS DE LUZ Y ELECTRONICO Los microscopios de luz y electrnico son esencialmente, idnticos. Tanto uno como otro nos permiten amplificar aquellos objetos que son indistinguibles a nuestro ojo. La

diferencia fundamental entre los dos es la fuente de iluminacin. Mientras el microscopio de luz utiliza un haz de luz en el rango de las longitudes de onda del visible, el microscopio electrnico emplea un haz de electrones de muy corta longitud de onda que permite obtener una mayor resolucin. Una tabla comparativa, entre ambos microscopios se muestra a continuacin. Cabe destacar que la misma, involucra caractersticas generales de los microscopios electrnicos y no considera las diferencias particulares entre TEM y SEM. MICROSCOPIO DE LUZ Iluminacin Longitud de onda Lentes Medio Resolucin Magnificacin Focalizacin Contraste Haz de luz 2000 - 7500 Vidrio Atmsfera 2000 10 x - 2000 x Mecnica Absorcin - Reflexin MICROSCOPIO ELECTRONICO Haz de electrones 0.037 - 0.086 Electromagnticas Vaco 3 100 x - 450000 x Elctrica Scattering

RESOLUCION El concepto de resolucin est relacionado con la capacidad de distinguir detalles finos en una imagen. En otras palabras, es la distancia mnima r1 a la cual podemos distinguir, claramente, dos puntos como entidades separadas.

MICROSCOPIA ELECTRONICA DE BARRIDO (SEM). El microscopio electrnico de barrido (SEM) es similar al microscopio electrnico de transmisin. Ambos tienen ciertas caractersticas comunes tales como un can de electrones donde se genera el haz de electrones, lentes condensadoras y objetivo, sistema de vaco. La diferencia principal entre ellos es la manera en que forman y magnifican la imagen. Esto hace que la informacin que se obtenga de cada uno sea distinta. Mientras el TEM permite el estudio de la ultraestructura de muestras delgadas, el SEM posibilita conocer la morfologa superficial. En el microscopio electrnico de barrido, el haz electrnico, atraviesa la columna y llega a la muestra. Un generador de barrido es el responsable de producir el movimiento del haz , de manera que barra la muestra punto a punto. De la interaccin entre los electrones

incidentes con los tomos que componen la muestra se generan seales, las cuales pueden ser captadas con detectores adecuados para cada una de ellas. El detector capta una seal y las convierte en una seal electrnica que es proyectada en un tubo de rayos catdicos (CRT).