LA INSEMINACIN ARTIFICIAL La inseminacin artificial es usada en animales para propagar buenas cualidades de un macho en muchas hembras.

Es especialmente empleada en caballos, vacas, cerdos, perros con pedigr. Para conservar el semen se diluye en una solucin que contiene los componentes necesarios para mantener la viabilidad de los gametos tales como azucares (usualmente fructosa), sales y sustancias tamponadoras, as como nutrientes tales como los aportados por la yema de huevo o la leche descremada. La inseminacin artificial de animales de granja es una tcnica reproductiva de uso muy comn. Lo que permite un uso ms amplio del potencial gentico del animal ya que puede servir a un nmero mayor de hembras reproductoras. Un macho bovino, en monta natural o dirigida puede prear anualmente hasta 80 hembras, gracias a la inseminacin artificial, de un macho es tericamente posible obtener hasta 14.600 cras anuales, diseminando sus genes en todos ellos. VENTAJAS: 1.- Aprovechamiento del macho. El mejor aprovechamiento del macho se refiere, por un lado a que sus genes son distribuidos en una mayor cantidad de cras 2.- Mejoramiento gentico. La inseminacin artificial no es por si misma una herramienta de mejoramiento gentico, pero en virtud a que se obtienen grandes cantidades de descendientes de un mismo macho, es lgico que la seleccin de ellos ha de ser muy exigente (alto ndice de seleccin). 3.- Evita transmisin de enfermedades. Los machos que aportan el material seminal deben encontrarse libres de toda aquella enfermedad, venrea o no, que pudiese transmitirse a travs del semen, asegurndose as que no existe riesgo de transmitir enfermedades desde el macho a las hembras en cuyos sistemas reproductivos se depositar el semen. 5.- Uso de sementales que estn en malas condiciones fsicas. Tanto fracturas, desgarros musculares, especialmente del tren posterior, pueden impedir que un macho realice normalmente el coito, siendo entonces la inseminacin artificial una alternativa para obtener cras de ellos. 7.- Velocidad de cubrimiento. Un macho bovino puede prear en mismo da a un mximo de 3 a 4 hembras, sin embargo, gracias a la sincronizacin de celos, es posible tener muchas ms vacas en celo (estro) en una misma fecha, gracias a la inseminacin artificial estos celos pueden aprovecharse, logrndose entre otras cosas, un periodo de cubiertas (encastes) ms corto y una mayor homogeneidad en las edades de las cras obtenidas, lo que permite una mejor comercializacin de los mismos.

10.- Costos. La inseminacin artificial reduce los costos de prear las hembras, por un lado por que no requieren de sementales presentes en las fincas y por otro lado por que el material seminal, en la medida que la biotecnologa se masifica, ha alcanzado valores relativamente bajos.

Perras

Momento de inseminacin La IA debe ser realizada en el momento adecuado para que los espermatozoides puedan interelacionar con vulos maduros capaces de ser fecundados. Existen distintos mtodos para determinar el momento de la IA con distinta eficacia, practicidad, exactitud y costo de los mismos. En los caninos la duracin del proestro es variable, pudiendo oscilar entre 2 y 25 das. La ovulacin ocurre aproximadamente 48 horas luego de ocurrido el pico preovulatorio de hormona luteinizante (LH), al inicio del estro. La posterior maduracin del ovocito requiere aproximadamente 2 das. Si bien la hembra suele aceptar al macho slo durante su periodo frtil, frecuentemente tambin lo acepta durante periodos no frtiles. Debido a esto es que por s slo la observacin de la conducta no es un buen indicador. Debido a la elevacin de la estrogenemia en el proestro, el nmero de capas celulares del epitelio vaginal aumenta. Este hecho hace que las clulas luminales se alejen de la irrigacin sangunea evolucionando hacia la muerte. Sin embargo no se puede identificar exactamente el momento de mayor fertilidad de la hembra. Los vulos son capaces de ser fecundados durante 4 o 5 das, periodo en el cual se realiza la IA. Tcnicas de inseminacin El semen colectado puede inseminarse en la vagina (inseminacin intravaginal), o en el tero (inseminacin intrauterina). La inseminacin intravaginal es la empleada rutinariamente por ser una tcnica sencilla y de bajo costo. La inseminacin intrauterina se reserva para la inseminacin con semen congelado o semen de mala calidad, debido a que es una tcnica de mayor complejidad y costo, y que requiere de un entrenamiento especializado. La inseminacin intravaginal se realiza con un catter plstico, de distintas medidas segn el tamao de la perra, al que se adosa en su extremo una jeringa conteniendo el semen a inseminar, siendo posible utilizar asimismo una sonda rgida urinaria. El catter o la sonda se introducen dorso-cranealmente, con la perra en estacin. Una vez ubicado el catter lo mas craneal posible en la vagina, se descarga el semen completamente. Por ltimo, se llena la jeringa con aire y se descarga, a fin de evitar que quede semen retenido en el espacio muerto del catter. Los miembros posteriores de la hembra se elevan inmediatamente por alrededor de 10 minutos masajeando conjuntamente la regin vulvar a fin de estimular las contracciones uterinas, evitando el reflujo de semen y facilitando el transporte de los espermatozoides hacia el aparato genital craneal.

CERDOS
1- Extraccin y recoleccin de semen
El lugar de extraccin debe ser amplio, limpio y que permita la circulacin del macho alrededor del potro de salto o maniqu, debe ubicarse junto a los boxes donde se alojan los padrillos. Es importante que el suelo sea correcto (ni excesivamente liso ni muy spero) para que el padrillo pueda sostenerse bien sobre sus patas. 1- Potro o scubo: Conviene que sea slido y est fijado al suelo para poder resistir el peso del verraco y los golpes que ste da durante la fase de excitacin. Es preferible que sea regulable principalmente en altura y con acceso fcil para tomar el prepucio sin tener contacto con una parte del potro. 2- Guantes: sin talco ni productos qumicos, pueden tener efecto espermicida. 3-Recipiente para recoleccin: Puede utilizarse un recipiente de plstico graduado limpio y esterilizado dentro de una caja de telgopor o bien utilizar un termo o un recipiente de vidrio (vaso de precipitado) con bolsa descartable. 4- Gasa o filtro de papel: si se filtra el eyaculado durante la recoleccin para evitar la aglutinacin de los espermatozoides. El filtrado puede realizarse tambin en el laboratorio. Una vez que el macho salta sobre el potro con manifestaciones idnticas a las de la monta natural el pene es fijado con la mano cubierta con un guante de ltex ejerciendo ligera presin.

Local de extraccin
Durante la recoleccin pueden diferenciarse bien tres fracciones: la primera se descarta est contaminada con orina, contiene la secrecin de las glndulas y escasos espermatozoides. La segunda fraccin de aspecto blanco lechoso rica en espermatozoides es la que interesa diluir; la tercera comnmente denominada por su consistencia gelatinosa granos de tapioca debe ser descartada. La recoleccin se realiza en frascos de boca ancha previamente calentados a 32 C para evitar el shock trmico, provistos de gasa en el extremo para filtrar los granos de tapioca y luego mantenidos en caja de telgopor para evitar cambios bruscos de temperatura y al abrigo de la luz .El tiempo que media entre la extraccin y el procesamiento en el laboratorio no debe exceder las dos horas. En trminos generales los machos sern utilizados a partir de los 10 meses de edad con una frecuencia de dos veces por semana. 2- Examinacin y dilucin En el laboratorio el semen es sometido a controles para determinar la calidad. Su poder fecundante depender de: Color: vara de gris a crema segn la concentracin espermtica. Trazas rojas o marrones indican contaminacin con sangre o pus. Olor: si es muy fuerte indica contaminacin con orina, secreciones prepuciales o contaminacin bacteriana. Motilidad: Se coloca una gota de semen sobre platina caliente a 37 C al microscopio ptico y se califica en forma semicuantitativa en escala 0 a 5 (0:no motilidad, 5: 100% de motilidad) Concentracin: con colormetro o cmara hemocitomtrica como se cuentan los glbulos blancos.

La concentracin de espermatozoides vara entre 0.1 y 1 x 109espermatozoides por cm3. solo sern utilizados aquellos machos que exhiban concentraciones mayores a 0.2 x 109 /cm3.
Morfologa: Se utilizan diferentes tcnicas de tincin, las ms usadas son las de Violeta de metilo y Eosina-nigrosina y de fluorescencia.

Morfologa normal (Eosina-Nigrosina) Espermatozoides con tcnicas de fluorescencia

Entre los defectos ms frecuentes se pueden observar: espermatozoides sin colas, aglutinados, cabezas dobles, colas enroscadas y gotas protoplasmticas en el cuello.

Espermatozoides aglutinados
La observacin morfolgica del eyaculado y la determinacin de la concentracin se realiza cada vez que el macho ingresa al centro de IA y peridicamente. El color, olor y la motilidad se controlan en cada extraccin.
Realizados los controles de calidad el semen es diluido para mayor aprovechamiento y mantenimiento del poder fecundante. Existe gran variedad de diluyentes para ser utilizados en cerdos. La caracterstica comn es que contienen glucosa como fuente de energa.

El diluyente debe Conservar el poder fecundante de los espermatozoides, mantener la integridad de las estructuras celulares y proveer la energa necesaria para el metabolismo de las clulas.
La dilucin del eyaculado depender de la concentracin y el volumen del mismo, sin embargo se aconseja no realizar diluciones mayores de 1:8/10 para que la presin osmtica del diluyente no altere las membranas celulares. El diluyente se coloca en frascos de Erlenmeyer dentro de un bao trmico a 37C durante 20 minutos, en el mismo frasco puede verterse la cantidad de semen de acuerdo a la dilucin mezclando suavemente con varilla de vidrio. Luego el semen diluido es trasvasado a los frascos de inseminacin. Otra forma es depositar el diluyente y luego el semen en los frascos con pipeta. Cuando se realizan dosis heterosprmicas se procede a la dilucin previa de los eyaculados, mezclar al 1:10 teniendo el medio de conservacin 200 mg de gentamicina/litro. Se mantiene 1/2 hora a temperatura ambiente y posteriormente se realiza la mezcla de los eyaculados prediluidos.

Los frascos contendrn una dosis de 75 - 100cc de semen diluido con una concentracin mnima de 1.5 x 109 espermatozoides.
Conservacin Los frascos descartables estarn bien cerrados, identificados con el RP del animal, raza y fecha de extraccin. Sern conservados entre 15 y 18C y al abrigo de la luz. Dependiendo del diluyente utilizado la duracin ser de 72 hs a 5-7 das. 3- Tcnica de siembra Deteccin del celo. Es fundamental depositar el semen en el tracto genital femenino en el momento correcto en relacin a la ovulacin.

Vulva edematizada y enrojecida (4 das aprox.)

Reflejo de inmovilidad ante el macho (2,5 das aprox.)
48 36 24 12 0 12 24 36 48 60 Horas Momento optimo

Ovulacin

Pico de fertilidad Curva de fertilidad

Cuando se detecta el celo dos veces al da (maana y tarde):

El momento ptimo para inseminar depende del momento de deteccin del celo. Reflejo de Inmovilizacin Primera inseminacin Segunda inseminacin A la maana tarde 1er. da maana 2do. da A la tarde maana 2do. da tarde 2do. da Recuerde: No inseminar inmediatamente cuando aparece el reflejo de inmovilizacin Espere 8 a 12 hs luego del comenzado el reflejo de inmovilizacin Insemine por segunda vez 8 a 12 hs luego de la primera inseminacin

Tcnica de siembra La siembra se realiza con la pipeta de Melrose que es de goma o con pipetas descartables de plstico de las que existen varios modelos.

Materiales de siembra
Pipetas descartables para siembra convencional
Es recomendable evaluar el estado de las dosis del semen con un microscopio antes de sembrarlo. La tcnica de siembra es extremadamente sencilla. Es conveniente que la hembra en celo tenga contacto visual con el padrillo para que se produzca la cadena de reflejos que acontecen en la monta natural. El operador presiona la grupa para que se manifieste el reflejo de inmovilizacin que caracteriza la cerda en celo. Toma la dosis de semen a utilizar de la heladera o caja de telgopor y la guarda en el bolsillo al abrigo de la luz. Limpia los labios de la vulva con papel o gasa estril y agua, retira la dois del bolsilo y la agita suavemente lubrica el extremo de la pipeta con unas gotas de semen e introduce la misma dirigindola hacia la columna vertebral.

Tcnica de siembra
La pipeta se desplaza suavemente hacia arriba y adelante hasta que toca el cervix uterino, momento en que debe ser rotada en sentido contrario a las agujas del reloj para que el extremo de la misma quede trabado en los pliegues del cuello uterino.

Tcnica de siembra
Se acopla el frasco al extremo libre introduciendo lentamente el contenido del mismo. En las cerdas destetadas el semen desciende por gravedad, en las cachorras es necesario aplicar una ligera presin. Lo ideal es que la inseminacin dure entre 4 y 5 minutos. Vaciado el frasco y sin introducir aire, el mismo se desacopla y se gira la pipeta en el mismo sentido que las agujas del reloj retirando la pipeta suavemente.

Tcnica de siembra
Siembra convencional Siembra cervical profunda
Resultados obtenidos A modo de ejemplo se muestran los datos obtenidos en tres criaderos comerciales:

Criadero % de preez LNV

A 71 9.9 B 80 10.5 C 87 11.8

Cuando se comparan los resultados obtenidos en porcentaje de preez y tamao de camada (IA vs MN) , los mismos no difieren dentro de granjas . Si existen marcadas diferencia entre criaderos, que probablemente se encuentren asociadas a otros factores de los cuales los mas frecuentes son el nivel sanitario y errores humanos (entrenamiento, registro de datos, dedicacin) etc.

% de preez (n) Primparas 75.9 (9557) Multparas 88.8 (21700)

Cuando se evalan los datos en cachorras y cerdas adultas los resultados son inferiores en cachorras, lo mismo ocurre cuando las cerdas son apareadas con padrillos (MN).

YEGUAS
Tcnica de la inseminacin

Aunque no se requieren grandes inversiones para inseminar correctamente, se necesitan instalaciones adecuadas que varan en funcin de si se recoge esperma para elaborar la dosis, para lo que se necesitar una zona o sala de recogida de esperma, un laboratorio bsico (fijo o mvil) que permita la valoracin del esperma y elaboracin de dosis para inseminar, y un potro de inmovilizacin necesario para explorar ecogrficamente e inseminar a la yegua. Tambin son necesarios material y equipos especficos como los catteres de inseminacin de un solo uso para depositar el esperma en el tero de la yegua. Tradicionalmente, al inseminar se deja la dosis de esperma en el cuerpo del tero, atravesando para ello el crvix con el catter de inseminacin. Sin embargo, actualmente, la tendencia generalizada es realizar la inseminacin en su variante intrauterina profunda, porque permite incrementar los porcentajes de fertilidad y reducir la concentracin de espermatozoides de la dosis. Esta variante de inseminacin est ms indicada cuando se emplea esperma congelado (con menos capacidad fecundante, figura 7, derecha). En este caso se pueden emplear catteres largos semirigidos de pequeo volumen (figura 7, izquierda) o se puede usar un endoscopio flexible adaptado que permite regar la papila tubrica con la dosis. Evidentemente, la inseminacin con el endoscopio es ms exacta pero tambin ms cara, y por eso se utiliza en ms ocasiones el catter para inseminacin con pequeo volumen, que se lleva, va vaginal, hasta la parte distal del cuerno uterino correspondiente al ovario que tiene el folculo preovulatorio, ayudados de una mano introducida en el recto (mtodo rectovaginal).
Momento de la inseminacin

El momento para realizar la inseminacin artificial depender del tipo de esperma. Con refrigerado se realiza normalmente por exploracin rectal ecogrfica del aparato

reproductor para identificar en un ovario la presencia de un folculo preovulatorio (FP), de tal manera que si est en celo y/o tiene un FP se insemina por primera vez y se repite a las 24 horas hasta que termine el celo o se observe la ovocitacin (figura 6, derecha). El porcentaje medio de fertilidad obtenido es del 60% o mayor. Sin embargo, cuando se quiere inseminar con esperma congelado conviene que la dosis se deposite en el tero entre las 6-8 horas anteriores a la ovocitacin o las 6 posteriores. Para poder predecir el momento de la misma es imprescindible el examen ecogrfico seriado del ovario activo. La fertilidad del congelado vara mucho entre donantes (20-100%) y est influido por la hembra y la tcnica de inseminacin. OVINOS
INSEMINACIN ARTIFICIAL La inseminacin de la oveja puede ser vaginal, cervical transcervical intrauterina. Los mtodos difieren en cuanto a su complejidad y expectativas de xito. La inseminacin vaginal es el mtodo ms simple y ms rpido cuando se realiza semen fresco diluido pero requiere una dosis de semen generalmente mayor que si se utiliza alguno de los otros mtodos. Aunque no se pueda recomendar de una forma general, la inseminacin vaginal puede ser til cuando el tiempo y las disponibilidades sean factores limitantes o para inseminar hembras vrgenes en las que la estrechez de la parte vestibular no permite la penetracin del espculo. El mtodo ms comnmente utilizado para ovejas es la inseminacin cervical utilizando semen fresco. Cuando se practica adecuadamente, la inseminacin cervical de semen fresco o semen sin diluir da por resultado una alta fertilidad, comparable a la obtenida en rebaos con monta natural. Este es el mtodo generalmente recomendado de inseminacin cuando se utiliza semen freso diluido o sin diluir El porcentaje de xitos de la inseminacin cervical utilizando semen de carnero congeladodescongelado ha sido relativamente bajo, pero se pueden obtener resultados satisfactorios al practicar la inseminacin intrauterina que lleva implcito una ciruga menor. En algunas cabras se puede practicar la inseminacin intrauterina, va crvix. La inseminacin intrauterina con semen fresco diluido se utiliza para inseminar hembras superovuladas en los programas de transferencia de embriones. En la oveja, la inseminacin cervical artificial a tiempo fijo resultados del estro hormona el transporte de esperma ha reducido en la crvix y disminuy la fertilidad. Estos resultados estn en contraste con la inseminacin intrauterina que evita la crvix y resultados en las proporciones de gestaciones altas e indica eso durante inseminacin artificial que la crvix ovina no permite al pasaje libre de semen. Varios marcadores de inflamacin, incluso, prostaglandinas y el interleucina 8 (IL-8) est presente en la crvix y es parte de la cascada inflamatoria que lleva a la contratacin eventual de neutrofilos, descargo de la enzima y avera del tejido. Las respuestas inflamatorias ocurren el funcionando normal de varios rganos reproductores, incluso el ovario y el tero, as como la crvix (Mitchell et al., 2002). La proporcin de fertilizacin est sumamente alta en las ovejas despus de la monta natural en un estro espontneo, indicando una diferencia en la funcin cervical entre las ovejas inseminaron naturalmente y las ovejas inseminaron artificialmente (Bearden y Fuquay, 1982; Salamn, 1990; Mejia y

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Hernndez, 1996; Hafez y Hafez, 2000). La fertilidad del estro inducido por un progestageno solo o con gonadotropina es ms bajo que en las ovejas cclicas. Aumenta la fertilidad con las concentraciones mayores de progestageno probablemente es el resultado del desarrollo folicular ms apropiado, cronometrando la oleada de LH, y transporte de esperma, la proporcin de ovulacin es baja durante el anestro pero se aument por el eCG (gonadotropina corionica equina) o por FSH al retiro del progestageno (Knights et al., 2001). INSEMINACIN VAGINAL La inseminacin vaginal consiste en la deposicin el semen fresco diluido dentro de la vgina anterior sin el uso del espculo ni el intento de localizar el crvix. Con frecuencia se hace referencia a

esta tcnica como disparo en la oscuridad. Precisamente por los malos resultados obtenidos, esta tcnica se reemplaza por la cervical y solo se utiliza cuando la segunda es imposible de realizarse. La vulva de la hembra se debe limpiar con un poco de algodn para evitar la contaminacin de la vgina al introducir la pipeta, esta se carga primero con un poco de aire, hasta la divisin 0.2 ml, y luego con la dosis requerida de semen, cogida del tubo que se mantiene en bao a 30 C. El aire tiene la misin de ayudar a que se expulse toda la cantidad de semen contenida en la jeringa. La pipeta se debe introducir, con sumo cuidado, lo ms lejos posible en la vgina, deslizando su punta por la parte superior de esta, evitndose as su introduccin accidental en la uretra, que esta en el piso de la vgina. Como por lo general no se utiliza espculo, la introduccin de la pipeta libre y tratando de mover de un lado a otro, con suavidad, la pipeta para que penetre mejor. Se aprieta, una vez en su sitio, el embolo de la jeringa y se retira la pipeta. La pipeta de inseminacin se puede utilizar varias veces siempre que se limpie concienzudamente, despus de utilizarla. Si se contamina cualquier pipeta se debe desechar. Para asegurarnos de que las pipetas estn limpias y secas adecuadamente y que no interfieran el proceso de la inseminacin se debe encargar a una nica persona de este cometido.. INSEMINACIN CERVICAL A la fecha es la prctica ms comnmente utilizada. La deposicin del semen se realiza dentro de los primeros pliegues cervicales, los cuales son visibles con la ayuda de un espculo con fuente de luz. El mtodo, barato y relativamente fcil, regularmente utiliza semen fresco el cual puede o no ser refrigerado. La utilizacin de semen congelado ha resultado en rangos poco aceptables de fertilizacin, pudiendo ser de hasta 10-30% en ovejas. En cabras el uso del semen congelado resulta en mayores tasas de concepciones (hasta 70%). Lo anterior probablemente refleja la diferencia en la profundidad de inseminacin alcanzada en ambas especies. La anatoma de la crvix permite una penetracin completa dentro del cuerpo del tero en un 3060% de las hembras adultas (con lo cual la tcnica se convierte en una inseminacin intrauterina no quirrgica). As, el rango de concepcin se encuentra aparentemente correlacionado de una forma positiva con la profundidad de inseminacin dentro del crvix, incrementndose aproximadamente un 10 % por cada centmetro de avance. La tcnica cervical se convierte en intrauterina transcervical cuando se logra atravesar por completo el cuello del crvix y depositar el semen intrauterinamente. Recientemente, se ha evaluado una modificacin en el mtodo transcervical en ovejas. Dicha modificacin implica la sujecin y retraccin del crvix por la vgina con un par de pinzas para permitir introduccin del instrumento inseminatorio en el canal cervical. En condiciones de prueba el tiempo recurrido para lograr la retraccin del crvix y la penetracin uterina suele ser, en promedio, de 2.6 minutos por oveja. La utilizacin en campo de esta tcnica es limitada, aun cuando se logran fertilidades aceptables.