Manual de Protocolos para Testes de Eccia em Produtos Desinfestantes

Manual de Protocolos para Testes de Eccia em Produtos Desinfestantes

ndice
Introduo O Que So Desinfestantes? O Que So Testes de Eccia? Quais as Pragas Mais Representativas? Tabela 1 : Pragas Urbanas (Intra e Peridomiciliares) Tabela 2 : Pragas de Jardim Teste de Eccia para Iscas Baraticidas Teste de Eccia para Volatilizantes Teste de Eccia para Espirais Teste de Eccia em Aerossis Frente a Insetos Rasteiros Teste de Eccia em Aerossis Frente a Insetos Voadores Teste de Eccia de Contato / Residual em Inseticidas Teste de Eccia em Rodenticidas Sob a Forma de Iscas Teste de Eccia em Rodenticidas Sob a Forma de Ps de Contato Teste de Potncia em Produtos Larvicidas Biolgicos Teste de Eccia em Produtos Larvicidas Biolgicos Teste de Eccia Curativo para Cupins de Madeira Seca Teste de Eficcia Preventivo / Residual para Cupins de Madeira Seca Teste de Eccia em Laboratrio Frente a Cupim Subterrneo 3 3 4 5 5 7 8 11 14 17 20 23 27 31 34 37 42 45 48

Introduo
Seguindo a losoa da ANVISA - salvaguardar a sade da populao nos produtos e servios sujeitos ao controle sanitrio e garantir que os mesmos sejam adequados aos ns propostos que desenvolvemos este trabalho em conjunto com representantes do setor regulado, comunidade cientca e laboratrios habilitados pela REBLAS, com o objetivo de preencher uma lacuna existente no pas e no mundo: protocolos padronizados para avaliao da eccia de produtos desinfestantes. Se a segurana dos produtos advm do conhecimento de suas caractersticas toxicolgicas, a comprovao da adequao para os ns propostos feita por meio dos testes de eccia. A evoluo da regulamentao sanitria para estes produtos culminou, em 1997, com a publicao das Portarias 321 e 322, sendo que a primeira foi revogada pela Resoluo RDC n 326, de 07 de dezembro de 2005, que passaram a ser as principais ferramentas para a concesso do registro e suas alteraes para produtos saneantes categorizados como desinfestantes, sendo tais atribuies competncia da Gerncia-Geral de Saneantes (GGSAN) da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA).

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O que so Desinfestantes?
So produtos, de venda direta ao consumidor ou para empresas especializadas, que se destinam aplicao em domiclios e suas reas comuns, no interior de instalaes, em edifcios pblicos ou coletivos e seus ambientes ans, para o controle de insetos, roedores e outros vetores incmodos ou nocivos sade. Incluem-se ainda os produtos de venda livre para aplicao em jardins residenciais e plantas ornamentais (cultivadas sem ns lucrativos), a m de controlar pragas e doenas, bem como aqueles produtos destinados revitalizao e embelezamento das plantas.

O que so testes de eccia?

So testes executados em laboratrio ou em campo, em condies padronizadas, com o m de comprovar a capacidade dos produtos para o controle de pragas urbanas e de jardim. At o momento, o Brasil no possua protocolos para testar estas categorias de produtos, nem parmetros para estabelecer variaes dos resultados dos testes de um laboratrio para outro, dicultando, assim, o estabelecimento de critrios para aceitao, ou no, dos mesmos para as nalidades apregoadas para estes produtos. A padronizao envolve o estabelecimento de variveis crticas para um dado teste, como por exemplo: nmero de espcimes por teste. nmero de repeties. forma fsica dos produtos. adoo de um produto padro para vericar a suscetibili dade/resistncia da populao exposta ao teste. local e data de aplicao. dose e modo de aplicao. modo de criao das pragas. espcies representativas para a realizao dos testes; den tre outros.

Quais as pragas mais representativas?

As tabelas 1 e 2 abaixo relacionam as espcies mais representativas que podero ser utilizadas para a comprovao da eccia dos desinfestantes.

Tabela 1 : Pragas urbanas (intra e peridomiciliares) Espcie

caro

Nome cientco

Nome comum

Aranha
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Barata Broca Barbeiro Borrachudo Carrapato

Cupim

Escorpio

Formiga

Dermatophagoides farinae caro domstico Tyrophagus putrescentiae Chelacaropsis moorei Nesticoides rupes Aranha domstica Loxoscelis spp Barata francesinha Blaella germanica ou alem Periplaneta americana Barata de esgoto Lyctus spp & Anobiun Broca de madeira spp seca Triatoma spp, Rhodinius spp e Panstrongylus Barbeiro megistus Simulium pertinax Borrachudo Rhipicephalus sanguineus Carrapato dos ces Boophilus micropulus Carrapato bovino Cupim de solo Coptotermes gestroi Cupim de madeira Cryptotermes spp seca Nasutitermes spp Cupim de solo Tityus serrulatus, T. Escorpio amarelo e Bahiensis escorpio marrom Monomorium pharaonis & orcola Formiga fara Solenopsis sevissima & Formiga lavap invicta Formiga carpinteira Camponotus spp Formiga argentina Linepithema humile Formiga fantasma Tapinoma melanocephalum

7
Moscas Musca domestica Mosca Mosquito/pernilongo Culex quinquefasciatus comum Aedes aegypti e Mosquito da dengue A.albopictus e febre amarela Anopheles spp Mosquito da malria Ctenocephalides felis felis Pulga dos gatos Ctenocephalides canis Pulga dos ces Camundongo Mus musculus Rato de telhado Raus raus Rato de esgoto (rataRaus novergicus zana) Tinea pellionella & bisTraa de parede selliella (casulo) Lepisma saccharina Traa dos livros

Mosquito

Pulga

Roedores

Traa

Tabela 2 : Pragas de jardim Espcie

caro

Nome cientco
Tetranychus urticae Polyphagotarsonemus latus Diabrotica spp e Costalimaita spp

Nome comum
caro rajado caro branco Caramujo-giganteafricano (espcie extica) e caracis (espcies Brasil) Caramujo-giganteafricano (espcie extica) e caracis (espcies Brasil)

Besouro

Caracol

Achatina fulica e Biomphalaria spp, Australorbius spp, Helix aspersa, Bradyboena similaris, Bulimulus spp Stenogyra spp

Cochonilha Formiga cortadeira Gafanhoto Lagarta

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Planococcus spp e Orthezia Acromyrmex spp Aa spp Schistocerca spp e Rhammatocerus spp Brassolis spp

Cochonilha Formiga-quenqum Sava Gafanhoto Lagarta das palmeiras Lesmas terrestres

Lesma

Percevejo

Pulgo Tripes

Limax spp, Phyllocaulis spp Stronpheicheilus oblongus, Sarasinula langsdori e Sarasinula linguaeformis, Veronicellidae (famlia) Nezara viridula e Lep- Percevejo verde toglossus spp (maria fedida) Percevejo-do-maracuj Aphis spp Pulgo Frankliniella spp Tripes

Teste De Eccia para Iscas Baraticidas 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da eccia de baraticidas sob a forma de isca.

2. Denies
2.1. 2.2. Mortalidade: situao em que o inseto se encontra sem nenhum movimento evidente, de qualquer apndice, aps observao por um perodo mnimo de 3 segundos. Sistema-teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumico ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos complexos, que se denam como objeto de estudo. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou biotecnolgica, formulao ou metablito, que est sob investigao em um estudo.

2.3.

3. Materiais e Reagentes
3.1. Arena de superfcie lisa, no porosa, inerte, com dimenses de 1m x 1m x 10cm de altura, com o abrigo colocado em uma extremidade e a isca e a dieta em placa de Petri colocadas na outra extremidade, com gua, de acordo com a Figura 1:

Figura 1
3.2. 3.3. Rao para cachorros adultos. Sistema-teste: 3.3.1. Blatella germanica, adultas, 3 a 4 meses, criadas em biotrio com temperatura e umidade controladas

3.4.
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(23C a 27C e 50 a 70%, respectivamente), alimen tadas com dieta especca e aclimatadas em jejum por, no mnimo, 12 horas antes do estudo. 3.3.2. Periplaneta americana, adultas, 6 a 8 meses, criadas em biotrio com temperatura e umidade controladas (23C a 27C e 50% a 70%, respectivamente), alimen tadas com dieta especca e aclimatadas em jejum por, no mnimo, 12 horas antes do estudo. Termohigrmetro.

4. Procedimento Experimental 4.1.

4.1.1. Delineamento experimental: 4.1.1.1. Quatro repeties por tratamento e um controle. 4.1.2. Nmero de indivduos por repetio: 10 Periplaneta americana e 20 Blatella germanica, sendo 50% machos e 50% fmeas.

Geral

4.2.

4.2.1. Regular a temperatura da sala de teste entre 23C e 27C, e a umidade relativa entre 50% e 70%. 4.2.2. Inserir no interior da arena a substncia teste, na dose recomendada pelo fabricante, e a rao, conforme demonstrado na Figura 1. 4.2.3. Introduzir cada espcie do sistema teste, separadamente, prximo ao abrigo. 4.2.4. Realizar leituras de mortalidade em at 72 horas, ou de acordo com a recomendao do fabricante.

Especco

5. Tratamento Estatstico
Os dados obtidos sero submetidos anlise de varincia com delineamento inteiramente casualizado. Sendo detectadas diferenas signicativas superiores a 5% entre os tratamentos, dever ser aplicado um teste de mdias.

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6. Resultados
O teste ser considerado satisfatrio se o valor mdio da mortalidade, calculado pela frmula de Abbo, for de 9010% em, no mximo, em at 72 horas, ou no tempo estabelecido pelo fabricante.

Teste de Eccia para Volatilizantes 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da eccia de produtos volatilizantes (repelentes), com ou sem efeito knockdown sobre mosquitos.

2. Denies
2.1. 2.2. 2.3. Knockdown: posio em que o inseto se encontra, sob efeito do produto aplicado, tombado sobre a superfcie. KT50: tempo que 50% da populao dos insetos testados leva para ser afetada pela substncia-teste. Sistema-teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumico ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos complexos, que se denam como objeto de estudo. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou biotecnolgica, formulao ou metablito, que est sob investigao em um estudo.

2.4.

3. Materiais e Reagentes
3.1. 3.2. 3.3. 3.4. Cmara de teste com volume de 5,8 m3 (Peet-Grady), sem uxo forado de ar. Detergente alcalino. Recipiente plstico (dimetro de 9,5 cm e altura de 4,5 cm). Sistema teste: 3.4.1. Aedes spp, com idade entre 3 e 5 dias, criados em biotrio com temperatura e umidades controladas

3.5. 3.6.
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(23C a 27C e 50% a 70%, respectivamente). 3.4.2. Opcional: Culex quinquefasciatus, com idade entre 2 e 3 dias, criados em biotrio com temperatura e umidade controladas (23C a 27C e 50 a 70%, respectivamente), alimentados com dieta especca e aclimatados por, no mnimo, 12 horas antes do estudo. Soluo de acetona a 10 % v/v (volume por volume) em lcool etlico. Termohigrmetro.

4. Procedimento Experimental 4.1.

4.1.1. Delineamento experimental: 4.1.1.1. Quatro repeties por tratamento e um controle, por espcie 4.1.1.2. Nmero de indivduos/espcies por repetio: mos quitos 50 (cinqenta) fmeas. 4.1.2. A cmara deve ser limpa, entre cada teste, com detergente alcalino, seguido de enxage com gua e exausto. 4.1.3. Dever ser realizada uma validao, antes de conduzir o primeiro teste do dia, realizando-se um teste em branco para vericar a ocorrncia de knockdown dos insetos testados na cmara. Este ensaio, realizado com 20 indivduos fmeas, no pode apresentar um valor de knockdown superior a 5% da populao testada. A observao dever ser feita aps 20 minutos, contados a partir da soltura.

Geral

4.2.

4.2.1. Regular a temperatura da sala de teste com temperatura entre 23C e 27C e a umidade relativa entre 50% e 70%. 4.2.2. Coletar os insetos num recipiente plstico coberto com tela, no mnimo, 12 horas antes da conduo do teste. 4.2.3. Registrar a voltagem e a temperatura do aparelho a ser usado no teste. 4.2.4. Ligar o aparelho na tomada, sem o produto e fora da cmara. 4.2.5. Manter ligado por 30 minutos para pr-aquecimento (no caso

Especco

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de aparelhos eltricos). 4.2.6. Aps este perodo, transferir o aparelho para o interior da cmara, colocar o produto e manter o conjunto ligado pelo perodo de 5 minutos para pastilhas e 40 minutos para lquidos. 4.2.7. Soltar os insetos na cmara e iniciar a contagem de tempo para o clculo do knockdown. 4.2.8. Medir e registrar a temperatura do aparelho (quando for o caso). 4.2.9. Limpar a cmara com soluo de acetona. 4.2.10. Medir a eccia do protudo nos tempos de 0; 4; 8 e 11,5 horas, e, em cada um destes, o knockdown nos tempos de 40; 1; 130; 2; 3; 5; 10; 15 e 20 minutos. 4.2.11. Aps 15 minutos da ultima leitura do knockdown, acionar o sistema de exausto no interior da cmara.

5. Tratamento Estatstico
O KT50 ser obtido observando-se a regresso linear por meio do programa Probit.

6. Resultados
O teste ser considerado satisfatrio se o KT50 for menor que 25 5 minutos, em cada um dos tempos avaliados.

Teste de Eccia para Espirais 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da eccia de produtos repelentes sob a forma de espirais.

2. Denies
2.1. 2.2. Knockdown: posio em que o inseto se encontra, sob efeito do produto aplicado, tombado sobre a superfcie. KT50: tempo que 50% da populao dos insetos testados leva

2.3.

2.4.

para ser afetada pela substncia-teste. Sistema-teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumico ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos complexos, que se denam como objeto de estudo. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou biotecnolgica, formulao ou metablito, que est sob investigao em um estudo.

3. Materiais e Reagentes
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3.1. 3.2.

Balana analtica. Cmara teste em vidro de espessura mnima de 0,5 cm, com dimenses de 70 x 70 x 70 cm.

3.3. 3.4. 3.5.

Detergente alcalino. Recipiente plstico (dimetro de 9,5 cm e altura de 4,5 cm). Sistema-teste: 3.5.1. Aedes spp, com idade entre 3 e 5 dias, criados em biotrio com temperatura e umidade controladas (23C a 27C e 50% a 70%, respectivamen te), alimentados com dieta especca e aclimatados, no mnimo, 12 horas antes do estudo. 3.5.2. Opcional: Culex quinquefasciatus, com idade entre 2 e 3 dias, criados em biotrio com temperatura e umidade controladas (23C a 27C e 50% a 70%, respectivamente), alimentados com die ta especca e aclimatados por, no mnimo, 12 horas antes do estudo.

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15
3.6. 3.7. 3.8. Soluo de acetona a 10 % v/v (volume por volume) em lcool etlico. Termohigrmetro. Ventilador a pilha.

4. Procedimento Experimental 4.1. Geral

4.1.1. Delineamento experimental: 4.1.1.1. Cinco repeties por tratamento e um controle, por espcie. 4.1.1.2. Nmero/espcie de indivduos por repetio: Mos quitos - 20 (vinte) fmeas. 4.1.2. A cmara deve ser limpa, entre cada teste, com detergente alcalino, seguido de enxge com gua, soluo de acetona e exausto. 4.1.3. Dever ser realizada uma validao, antes de conduzir o primeiro teste do dia, realizando-se um teste em branco, para vericar a ocorrncia de knockdown dos insetos testados na cmara. Este ensaio, realizado com 20 indivduos fmeas, no pode apresentar um valor de knockdown superior a 5% da populao testada. A observao dever ser feita aps 20 minutos, contados a partir da soltura.

4.2. Especco

4.2.1. Regular a temperatura da sala de teste entre 23 C e 27C, e a umidade relativa entre 50% e 70 %. 4.2.2. Coletar os insetos num recipiente plstico coberto com tela. 4.2.3. Pesar 0,5 g da espiral, introduz-la no suporte no interior da cmara e acender as duas extremidades, simultaneamente. 4.2.4. Ligar o ventilador. 4.2.5. Manter o produto na cmara at sua queima completa. 4.2.6. Abrir a cmara de teste, desligar o ventilador e soltar os insetos no interior da mesma. 4.2.7. Registrar o nmero de insetos em knockdow nos tempos 40; 1; 130; 2; 3; 5; 10; 15 e 20 minutos. 4.2.8. Ventilar a cmara aps 15 minutos aps a ltima leitura do knockdown.

4.2.10. Recolher os mosquitos.

5. Tratamento Estatstico
O KT50 ser obtido observando-se a regresso linear por meio do programa Probit.

6. Resultados
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O teste ser considerado satisfatrio se o KT50 for menor que 255 minutos.

Teste de Eccia em Aerossis Frente a Insetos Rasteiros 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da eccia de inseticidas sob a forma de aerossol frente a insetos rasteiros.

2. Denies
2.1. 2.1. 2.2. 2.3. Mortalidade: situao em que o inseto se encontra sem nenhum movimento evidente de qualquer apndice aps observao por um perodo mnimo de 3 segundos. Knockdown: posio em que o inseto se encontra, sob efeito do produto aplicado, tombado sobre a superfcie. KT50: tempo que 50% da populao dos insetos testados leva para ser afetada pela substncia-teste. Sistema-teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumico ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos complexos, que se denam como objeto de estudo. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou biotecnolgica, formulao ou metablito, que est sob investigao

2.4.

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em um estudo.

3. Materiais e Reagentes
3.1. 3.2. 3.3. 3.4. 3.5. 3.6. Balana analtica. Cilindro em ao inoxidvel com 20 cm de dimetro e 60 cm de altura. Detergente alcalino. Dosador automtico Recipiente plstico (dimetro de 9,5 cm e altura de 4,5 cm). Sistema-teste: 3.6.1. Blaella germanica, adultas, entre 3 e 4 meses, cria das em biotrio com temperatura e umidade contro ladas (23C a 27C e 50% a 70%, respectivamente), alimentadas com dieta especca e aclimatadas por, no mnimo, 12 horas antes do estudo. 3.6.2. Periplaneta americana, adultas, entre 6 e 8 meses, criadas em biotrio com temperatura e umidade controla das (23C a 27C e 50% a 70%, respectiva mente), alimenta das com dieta especca e aclima tadas por, no mnimo, 12 horas antes do estudo. 3.6.3. Formigas domsticas, adultas, criadas em biotrio com temperatura e umidade controladas (23C a 27C e 50% a 70%, respectivamente), alimentadas com dieta especca e aclimatadas por, no mnimo, 12 horas antes do estudo. 3.6.4. Para testes frente a outros insetos e artrpodes, con sultar as tabelas 1 e 2 apresentadas anteriormente. Soluo de acetona a 10 % v/v (volume por volume) em lcool etlico.

3.7.

4. Procedimento Experimental 4.1.

4.1.1. Delineamento experimental: 4.1.1.1. Quatro repeties por tratamento e controle; 4.1.1.2. Nmero/espcie de indivduos por repetio:

Geral

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4.1.1.2.1. Blaella germanica: 10 (dez); 4.1.1.2.2. Periplaneta americana: 06 (seis); 4.1.1.2.3. Formigas: 100 (cem); 4.1.2. O cilindro deve ser limpo, entre cada teste, com soluo de acetona seguido de gua e exausto. 4.1.3. Dever ser realizada uma validao antes de conduzir o primeiro teste do dia, realizando-se um teste em branco para vericar a ocorrncia de knockdown nos insetos testados. O knockdown da populao testada no poder ultrapassar os seguintes valores: 4.1.3.1. 20 % at 10 indivduos; 4.1.3.2. 10% de 11 a 50 indivduos; 4.1.3.3. 5% superior a 51 indivduos.

4.2.

4.2.1. Regular a temperatura da sala de teste entre 23C e 27C e a umidade relativa entre 50% e 70%. 4.2.2. Coletar os insetos num recipiente plstico coberto com tela, no mnimo, 12 horas antes da conduo do teste. 4.2.3. Transferir os insetos no pote acrlico (vide desenho abaixo) com fundo em tela de ao inox para dentro do cilindro de metal. 4.2.4. Aps determinar a dosagem do aerosol, aplicar em dose nica para cada repetio conforme o quadro abaixo:

Especco

Inseto
B. germnica P. americana Formigas

Massa de produto
900 50 mg 1000 50 mg 650 50 mg

4.2.5. Aps a aplicao do produto, fechar o cilindro na parte superior por 30 segundos. 4.2.6. Passados 20 minutos, retirar os insetos, levar para o biotrio e fornecer gua e alimento. 4.2.7. Registrar a mortalidade em at 72 horas. 4.2.8. Limpar o cilindro com detergente alcalino, rinsar com gua, soluo de acetona e ventilar

7. Resultados
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O teste ser considerado satisfatrio se a mortalidade, calculada pelo mtodo de Abbo, for de 90 10% em at 72 horas.

Teste de Eccia em Aerossis Frente a Insetos Voadores 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da eccia de inseticidas sob a forma de aerossol frente a insetos voadores.

2. Denies
2.1. 2.2. 2.3. 2.4.

2.5.

Knockdown: posio em que o inseto se encontra, sob efeito do produto aplicado, tombado sobre a superfcie. KT50: tempo que 50% da populao dos insetos testados leva para ser afetada pela substncia-teste. Mortalidade: situao em que o inseto se encontra sem nenhum movimento evidente de qualquer apndice aps observao por um perodo mnimo de 3 segundos. Sistema-teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumico ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos complexos, que se denam como objeto de estudo. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou biotecnolgica, formulao ou metablito, que est sob investigao em um estudo.

3. Materiais e Reagentes
3.1. 3.2. 3.3. 3.4. 3.5. 3.6. Balana analtica. Cmara de teste com volume de 5,8 m3 (Cmara Peet-Grady/ CSMA). Detergente alcalino. Dosador automtico. Recipiente plstico (dimetro de 9,5 cm e altura de 4,5 cm. Sistema-teste: 3.6.1. Musca domestica, com idade entre 2 e 5 dias, criadas em biotrio com temperatura e umidade controladas

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3.7. 3.8.

(23C a 27C e 50% a 70%, respectivamente), alimen tadas com dieta especca e aclimatadas por, no m nimo, 12 horas antes do estudo. 3.6.2. Aedes spp, com idade entre 3 e 5 dias, criados em biotrio com temperatura e umidade controladas (23C a 27C e 50% a 70%, respectivamente), ali mentados com dieta especca e aclimatados por, no mnimo, 12 horas antes do estudo. 3.6.3. Opcional: Culex quinquefasciatus, com idade entre 2 e 3 dias, criados em biotrio com temperatura e umidade controladas (23C a 27C e 50% a 70%, res pectivamente), alimentados com dieta especca e aclimatados por, no mnimo, 12 horas antes do estudo. Soluo de acetona a 10 % v/v (volume por volume) em lcool etlico. Termohigrmetro

4. Procedimento Experimental 4.1. Geral

4.1.1. Delineamento experimental: 4.1.1.1. Quatro repeties por tratamento e um controle. 4.1.1.2. Nmero/espcie de indivduos por repetio: 4.1.1.2.1. Mosquitos: 50 (cinqenta) fmeas; 4.1.1.2.2. Moscas: 100 (cem). 4.1.2. A cmara deve ser lavada, entre cada teste, com detergente alcalino, seguido de enxge com gua. No intervalo de cada aplicao, limpar a cmara com soluo de acetona e exausto. 4.1.3. Dever ser realizada uma validao antes de conduzir o primeiro teste do dia, realizando-se um teste em branco para vericar a ocorrncia de knockdown dos insetos testados na cmara. Este ensaio, realizado com 20 indivduos fmeas, no pode apresentar um valor de knockdown superior a 5% da populao testada. A observao dever ser feita aps 20 minutos, contados a partir da soltura.

20

21

4.2.5. 4.2.6. 4.2.7. 4.2.8. 4.2.9.

4.2.1. Regular a temperatura da sala de teste entre 23C e 27C e a umidade relativa entre 50% e 70%. 4.2.2. Coletar os insetos num recipiente plstico coberto com tela. 4.2.3. Abrir a cmara de teste e soltar os insetos no interior da mesma. 4.2.4.Aplicar uma dose da substncia teste de 650 50 mg, em 4 disparos em pontos diametralmente opostos, de modo a simular sua aplicao espacial. Ventilar a cmara passados 20 minutos Retirar os insetos. Levar para o biotrio e fornecer gua e alimento. Registrar a mortalidade em at 72 horas. Limpar a cmara com detergente alcalino.

4.2.

Especco

5. Resultados
O teste ser considerado satisfatrio se o valor mdio da mortalidade for de 90 10% em at 72 horas.

Teste de Eccia de Contato / Residual em Inseticidas 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da eccia residual de inseticidas.

2. Denies

2.1. Efeito residual: produto que apresenta eccia por um perodo pr-estabelecido pelo fabricante. 2.2. Knockdown: posio em que o inseto se encontra, sob efeito do produto aplicado, tombado sobre a superfcie. 2.3. KT50: tempo que 50% da populao dos insetos testados leva para ser afetada pela substncia-teste. 2.4. Mortalidade: situao em que o inseto se encontra sem ne

nhum movimento evidente, de qualquer apndice, aps obser vao por um perodo mnimo de 3 segundos. 2.5. Sistema-teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumico ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos comple xos, que se denam como objeto de estudo. 2.6. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou bio tecnolgica, formulao ou metablito, que est sob investiga o em um estudo.
Manual de Protocolos para Testes de Eccia em Produtos Desinfestantes

3. Materiais e Reagentes
3.1. Balana analtica. 3.2. Dosador automtico. 3.3. Placas de azulejo 15 x 15 cm. 3.3.1. Caso o porduto seja indicado para aplicao em ou tras superfcies o teste dever ser conduzido, nas suoperfcies e dosagens recomendadas pelo fabricante. 3.4. Recipiente plstico (dimetro de 9,5 cm e altura de 4,5 cm). 3.5. Sistema-teste: 3.5.1. Musca domestica, com idade entre 2 e 5 dias, criadas em biotrio com temperatura e umidade controladas (23C a 27C e 50% a 70%, respectivamente), alimen tadas com dieta especca e aclima tadas por, no mnimo, 12 horas antes do estudo. 3.5.2. Aedes spp., com idade entre 3 e 5 dias, criados em biotrio com temperatura e umidade controladas (23C a 27C e 50% a 70%, respectivamente), alimentados com dieta especca e aclimatados por, no mnimo, 12 horas antes do estudo. 3.5.3. Blaella germnica, adultas, entre 3 e 4 meses, cria das em biotrio com temperatura e umidade controladas (23C a 27C e 50% a 70%, respectiva mente), alimentadas com dieta especca e aclimatadas por, no mnimo, 12 horas antes do estudo.

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Periplaneta americana, adultas, entre 6 e 8 meses, criadas em biotrio com temperatura e umi dade controladas (23C a 27C e 50% a 70%, respectivamente), alimentadas com dieta especca e aclimatadas por, no mnimo, 12 horas antes do estudo. 3.5.5. Formigas domsticas, adultas, criadas em biotrio com temperatura e umidade controladas (23C a 27C e 50% a 70%, respectivamente), alimentadas com dieta especca e aclimatadas por, no mnimo, 12 horas antes do estudo 3.5.6. Para outras pragas consultar as tabelas 1 e 2 cons tantes deste manual. 3.6. Termohigrmetro. 3.5.4.

4. Procedimento Experimental 4.1. Geral

4.1.1. Delineamento experimental: 4.1.1.1. Quatro repeties por tratamento e controle. 4.1.1.2. Nmero/espcie de indivduos por repetio: 4.1.1.2.1. Mosquitos: 25 (vinte e cinco) fmeas; 4.1.1.2.2. Blaella germanica: 10 (dez), 50% machos e 50% f meas; 4.1.1.2.3. Periplaneta americana: 6 (seis), 50% machos e 50% fmeas; 4.1.1.2.4. Musca domestica: 25 (vinte e cinco); 4.1.1.2.5. Formigas domsticas: 100 (cem);

4.2. Especco

4.2.1. Regular a temperatura da sala de teste entre 23C e 27C e a umidade relativa entre 50% e 70%. 4.2.2. AEROSSIS E LQUIDOS PARA PRONTO USO: aplicar, no caso de aerossois com auxlio de um dosador automtico, as doses abaixo descritas:

Inseto
B. germnica P. americana Musca domestica Formigas domsticas Mosquitos

Massa de produto
900 50 mg 1000 50 mg 650 50 mg 650 50 mg 650 50 mg

4.2.4. LQUIDOS: Preparar a calda na concentrao indicada pelo fabricante e aplicar o produto. 4.2.5. SLIDOS: Polvilhar o produto de acordo com a quantidade indicada pelo fabricante. 4.2.6. Armazenar as placas em ambiente com temperatura entre 23C e 27C e umidade relativa entre 50% e 70%, mantendo ciclos claro/escuro de 12 horas. 4.2.7. Aps a secagem natural do produto retirar as placas para a realizao do ensaio para o tempo zero. 4.2.8. Coletar os insetos em recipiente plstico coberto com tela. 4.2.9. Posicionar duas placas, uma com e outra sem a substnciateste. 4.2.10. Colocar o recipiente plstico contendo os insetos sobre a placa sem a substncia-teste, posicionando as mesmas numa angulao de 45 para moscas e mosquitos, e horizontal para baratas. 4.2.12. Deslocar os insetos, aps 5 minutos de aclimatao, para a placa contendo a substncia-teste. 4.2.14. Passados 20 minutos, retirar os insetos, levar para o biotrio e fornecer gua e alimento. 4.2.15. Registrar a mortalidade em at 72 horas. 4.2.16. Manter um inseto-testemunha, sem tratamento, para com parar a mortalidade. 4.2.17. Repetir o experimento tantas vezes quantas forem necess rias para comprovao do perodo de ao (efeito residual) indicado pelo fabricante.

Manual de Protocolos para Testes de Eccia em Produtos Desinfestantes

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4. Resultados
O teste ser considerado satisfatrio se o valor mdio da mortalidade, calculado pela frmula de Abbo, for de 90 10% em at 72 horas.

Teste de Eccia em Rodenticidas Sob a Forma de Iscas 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da eccia de rodenticidas sob a forma de iscas.

2. Denies
2.1. Sistema-teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumico ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos complexos, que se denam como objeto de estudo. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou biotecnolgica, formulao ou metablito, que est sob investigao em um estudo.

2.2.

3. Materiais e Reagentes
3.1. Balana analtica. 3.2. Detergente alcalino. 3.3. EPI apropriado para captura e manuseio dos animais. 3.4. Gaiola. 3.5. Potes para alimentao e gua. 3.6. Rao padro: acar cristalizado 5%, milho triturado 50%,farelo de trigo - 37%, leo de milho - 5% e farinha de carne - 3%. 3.7. Sistema-teste: 3.7.1. Mus musculus, adultos selvagens e saudveis, com no mnimo 10g de peso corpreo, aclimatados por pelo menos 7 dias em biotrio. As fmeas

Manual de Protocolos para Testes de Eccia em Produtos Desinfestantes

3.8.

no devem estar grvidas. A alimentao durante o perodo de aclimatao deve ser a rao padro. 3.7.2. Raus raus, adultos selvagens e saudveis, com no mnimo 100g de peso corpreo, aclimatados por pelo menos 3 semanas em biotrio. As fmeas no devem estar grvidas. Os animais devem ser pr-tratados para eliminar os ectoparasitas antes do perodo de aclimatao. A alimentao durante o perodo de aclimatao deve ser a rao padro. 3.7.3. Raus novergicus, adultos selvagens e saudveis, com no mnimo 100 g de peso corpreo, aclimatados por pelo menos 3 semanas em biotrio. As fmeas no devem estar grvidas. Os animais devem ser pr-tratados para eliminar os ectoparasitas antes do perodo de aclimatao. A alimentao durante o perodo de aclimatao deve ser a rao padro. Termohigrmetro.

4. Procedimento Experimental 4.1. Geral

4.1.1. Delineamento experimental: 4.1.1.1. Um controle com 10 indviduos (5 fmeas e 5 machos), por espcie. 4.1.1.2. Nmero de indivduos por repetio: vinte (10 fmeas e 10 machos), por espcie. 4.1.2. O teste s ser vlido se for conduzido com e sem opo ali mentar, salvo seja alcanada, no teste com opo alimentar, a mortalidade mnima.

4.2.

4.2.1. Regular a temperatura da sala de teste para 21 2C e a umidade relativa entre 30% e 70 %. 4.2.2. Manter os animais em gaiola com dois potes de rao nas extremidades e gua na posio central. 4.2.3. Retirar as demais fontes de alimentao. A gua deve ser fornecida, sem restries, durante o perodo do teste. 4.2.4. No 3 dia uma quantidade fresca e pesada da rao, em quan-

Teste com Opo Alimentar

26

27
tidade superior fornecida normalmente. 4.2.5. Aps 24 horas, a rao restante dever ser pesada e, a quantidade consumida por cada animal, calculada. Deve ser assegurado que todos os animais estejam se alimentando normalmente da rao contida nos potes. 4.2.6. Colocar o produto num pote limpo, pesar e substituir por um dos potes que guarneciam a rao. 4.2.7. Aps 24 horas retirar o produto e pesar. 4.2.8. Repetir as etapas 4.2.7. e 4.2.8. por 2 dias para raticidas de dose mltipla. 4.2.9. Recolocar a rao. 4.2.10. Observar os animais durante 14 dias, 2 vezes ao dia, registrando a mortalidade e sintomas toxicolgicos observados.

4.3.

4.3.1. Regular a temperatura da sala de teste para 21C e a umidade relativa entre 30% e 70 %. 4.3.2. Manter os animais em gaiola com a rao colocada na posio central. 4.3.3. Retirar as demais fontes de alimentao. A gua deve ser fornecida, sem restries, durante o perodo do teste. 4.3.4. No 3 dia uma quantidade fresca e pesada da rao em quantidade superior fornecida normalmente. 4.3.5. Aps 24 horas, a rao restante dever ser pesada e a quantidade consumida por cada animal, calculada. Deve ser assegurado que todos os animais estejam se alimentando normalmente da rao contida nos potes. 4.3.6. Colocar o produto num pote limpo, pesar e colocar na mesma posio onde anteriormente havia sido colocada a rao. 4.3.7. Aps 24 horas, retirar o produto e pesar. 4.3.8. Repetir as etapas 4.2.7. e 4.2.8. por 2 dias para raticidas de dose mltipla. 4.3.9. Recolocar a rao. 4.3.10. Observar os animais durante 14 dias, 2 vezes ao dia, registrando a mortalidade e sintomas toxicolgicos observados.

Teste Sem Opo Alimentar

5. Resultados
O produto ser considerado satisfatrio se: 5.1. O teste com opp alimentar apresentar um consumo mnimo de 30 % do produto em relao a rao e apresentar, dentro de 14 dias, uma mortalidade, calculada pelo mtodo de Abbo for de 90 10%. 5.2. No caso de ser observada uma mortalidade inferior a 90 10% dever ser conduzido o teste sem opo alimentar, onde a mortalidade mnima dever ser de 90 10%.
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Teste de Eccia em Rodenticidas Sob a Forma de Ps de Contato 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da eccia de rodenticidas sob a forma de p-de-contato.

2. Denies
2.1. Sistema-teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumi co ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos complexos, que se denam como objeto de estudo. 2.2. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou biotecnolgica, formulao ou metablito, que est sob investigao em um estudo.

3. Materiais e Reagentes
3.1. 3.2. 3.3. 3.4. Balana analtica. Caixas quadradas (duas) com 1 m2 de rea. Detergente alcalino. EPI apropriado para captura e manuseio dos animais.

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29
3.5. 3.6. 3.7. 3.8. Gaiola. Potes para alimentao e gua. Rao padro: acar cristalizado 5%, milho triturado - 50%, farelo de trigo - 37%, leo de milho - 5% e farinha de carne 3%. Sistema-teste: 3.8.1. Mus musculus, adultos selvagens e saudveis, com no mnimo 10g de peso corpreo, capturados no ambiente, e aclimatados por pelo menos 7 dias em biotrio. As fmeas no devem estar grvidas. A alimentao durante o perodo de aclimatao deve ser a rao padro. 3.8.2. Raus raus, adultos selvagens e saudveis, com no mnimo 100g de peso corpreo, capturados no ambiente, e aclimatados por, pelo menos, 3 semanas em biotrio. As fmeas no devem estar grvidas. Os animais devem ser pr-tratados para eliminar os ectoparasitas antes do perodo de aclimatao. A alimentao durante o perodo de aclimatao deve ser a rao padro. 3.8.3. Raus novergicus, adultos selvagens e saudveis, com no mnimo 100g de peso corpreo, capturados no ambiente, e aclimatados por pelo menos 3 sema nas em biotrio. As fmeas no devem estar grvidas. Os animais devem ser pr-tratados para eliminar os ectoparasitas antes do perodo de aclimatao. A alimentao durante o perodo de aclimatao deve ser a rao padro. Tubo de PVC com 1m de comprimento e dimetro interno de 75mm.

3.9.

4. Procedimento Experimental 4.1. Geral

4.1.1. Delineamento experimental: 4.1.1.1. Um controle com 10 indivduos (5 fmeas e 5 ma chos), por espcie;

4.2. Teste

4.1.1.2. Nmero de indivduos por repetio: vinte (10 f meas e 10 machos), por espcie.

4.2.1. Regular a temperatura da sala de teste entre 21 2C e a umidade relativa entre 30% e 70 %. 4.2.2. Montar o sistema conforme indicado no desenho abaixo:

Manual de Protocolos para Testes de Eccia em Produtos Desinfestantes

4.2.3. Manter os animais durante 3 dias para reconhecimento do aparato. 4.2.4. Pesar 20g do produto e distribuir uniformemente na parte central, ao longo de 30cm para o Mus musculus e, 50cm para demais espcies (vide gura 4.2.2.). 4.2.5. Manter os animais por perodos de 1 a 8 dias. 4.2.6. Aps o perodo de exposio, recolher os animais em gaiolas individuais e observar at 28 dias registrando a mortalidade.

5. Resultados
O teste ser considerado satisfatrio se dentro de 28 dias a mortalidade, calculada pelo mtodo de Abbo, for de 90 10%.

Teste de Potncia em Produtos Larvicidas Biolgicos 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da potncia, em UTI/mg, de larvicidas biolgicos a base de Bacillus thuringiensis e/ou B. sphaericus para culicdeos, sob condies de laboratrio.

2. Denies
2.1. CL50: concentrao do biolarvicida (mg/L) capaz de matar

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50% do nmero de insetos em teste em um perodo de tempo determinado (24 ou 48 h segundo o biolarvicida). Frmula de Abbo: frmula aplicada para a correo da mortalidade nos grupos tratados, quando necessrio [(% mortalidade do grupo tratado % mortalidade do grupo controle) / (100 - % mortalidade do grupo controle)] X (100). Larva morta: aquela que no realiza deslocamento na coluna de gua do recipiente teste quando recebe estmulo tctil. Potncia larvicida da substncia-teste expressa em UTI/mg: (potncia do padro) X (CL50 do padro/ CL50 da substnciateste). Sistema teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumico ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos complexos que se denam como objeto de estudo. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou biotecnolgica, formulao ou metablito, que est sob investigao em um estudo. UTI: Unidade Txicas Internacionais.

2.2.

2.3. 2.4. 2.5.

2.6. 2.7.

3. Materiais e Reagentes
3.1. 3.2. 3.3. 3.4. 3.5. 3.6. 3.7. 3.8. 3.9. 3.10. 3.11. 3.12. Agitador de tubos tipo Vrtex. gua destilada. Balana analtica. Marcador de recipientes e tubos. Micropipetas automticas e ponteiras. Microtubos para1,5 a 2 mL. Padro certicado da substncia teste. Prolas de vidro com dimetro entre 4 e 6 mm. Pipetas tipo Pasteur (2 mL) descartveis. Proveta graduada de 100 mL. Rao para gatos macerada. Recipientes em plstico de cor branca com 7 cm de dimetro e altura , volume para 180-200 mL; 3.13. Sistema teste: 3.13.1. Aedes aegypti, larvas no incio do 4 instar (cpsu

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la ceflica de cor clara), mantidas em insetrio com temperatura, umidade e fotoperodo controlados (24 a 28C, 60a 80% e 10:14 h claro/escuro, respectiva mente), alimentados com dieta especca. 3.13.2. Culex quinquefasciatus, larvas no incio do 4 instar (cpsula ceflica de cor clara), mantidas em insetrio temperatura, umidade e fotoperodo controlados (24 a 28C, 60 a 80% e 10:14 h claro/escuro, respectiva mente), alimentados com dieta especca. 3.14. Soluo de lcool etlico a 70%. 3.15. Soluo de hipoclorito de sdio a 2%. 3.16. Tubos para 15 a 20 mL.

4. Procedimento Experimental 4.1. Geral

4.1.1. Delineamento experimental: 4.1.1.1. Seis concentraes da substncia-teste que promo vam mortalidade dose-crescente entre 10 e 95%, e um controle no tratado, por ensaio; 4.1.1.2. Trs replicatas por concentrao e por controle no tratado, por ensaio; 4.1.1.3. No de larvas por replicata: 20; usar lotes homogne os de larvas. 4.1.1.4. Trs repeties vlidas do ensaio, realizadas em da tas diferentes, para estabelecer a mdia dos resultado da CL50 da substncia-teste. 4.1.1.5. Realizar o mesmo procedimento com o padro. 4.1.2. Os ensaios devero ser realizados em bancada higienizada com soluo de lcool etlico a 70 %, em sala individual sob as mesmas condies (temperatura, umidade e fotoperodo) de manuteno das larvas. 4.1.3. No grupo controle aceitvel uma mortalidade de 0 a 5% da amostra sem correo e de 5% a 10% mediante correo da mortalidade dos grupos tratados com a frmula de Abbo. Desconsiderar o ensaio quando a mortalidade for maior do que 10%.

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4.1.4. Descartar, ao trmino do ensaio, o contedo dos recipientes em balde contendo soluo de hipoclorito de sdio diluda 100 vezes (Ex: para 5 L de descarte adicionar 50 mL da soluo de hipoclorito). 4.1.5. Aps 24 h descartar o material.

4.2. Especco

4.2.1. Preparar uma suspenso (A) da substncia-teste a 5 g/L ( 50 mg da substncia-teste + 10 mL de gua destilada) em tubo contendo 15 prolas de vidro e manter sob agitao no Vrtex por 10 minutos. 4.2.2. Preparar uma suspenso (B) a 50 mg/L (0.1 mL A + 9.9 mL de de gua destilada) e manter sob agitao no Vrtex por 3 minutos. Alquotas desta suspenso adicionadas aos recipientes correspondem s concentraes relacionadas na tabela abaixo:

Alquotas L suspenso Concentrao (mg/L) B (50 mg/L)* nal no recipiente*

160 0.08 80 0.04 60 0.03 40 0.02 20 0.01 16 0.008 10 0.005 * Esta concentraes so sugeridas com base na potncia do padro. Outras concentraes podero ser utilizadas com base na potncia da substncia teste. 4.2.3. Preparar os recipientes contendo 100 mL de gua destilada e 20 larvas e identic-los com a concentrao utilizada ou como controle. 4.2.4. Tratar cada recipiente distribuindo, lenta e uniformemente na superfcie da gua, a alquota da suspenso B necessria para atingir a concentrao nal desejada. 4.2.5. Se a alquota utilizada for superior a 1,0 mL necessrio retirar, antes, o mesmo volume da gua do recipiente.

4.2.6. Quando a substncia-teste for a base Bacillus sphaericus, adicionar uma pequena quantidade de rao. 4.2.7. A determinaoo da mortalidade das larvas nos recipientes feita 24 ou 48 horas aps a aplicao da substncia-teste base de Bacillus thuringiensis ou B. sphaericus, respectivamente, com base no n de larvas sobreviventes. 4.2.8. O nmero de larvas mortas em cada replicata igual a 20 menos o n de larvas vivas. Ocorrendo a presena de pupas nos recipientes deve ser registrada e seu nmero excludo do total de indivduos expostos.
Manual de Protocolos para Testes de Eccia em Produtos Desinfestantes

5. Tratamento Estatstico
O clculo da CL50 da substncia-teste em cada ensaio feito por regresso linear Log-Probit a partir da curva de concentrao (mg/ L)- mortalidade (%) obtida no ensaio.

6. Resultados

O teste ser considerado satisfatrio quando a variao da potncia declarada e obtida no ensaio for de 10 %.

Teste de Eccia em Produtos Larvicidas Biolgicos 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da eccia de larvicidas biolgicos a base de Bacillus thuringiensis e/ou B. sphaericus para culicdeos, sob condies de laboratrio.

2. Denies
2.1. 2.2. Larva morta: aquela que no realiza deslocamento na coluna de gua do recipiente teste quando recebe estmulo tctil. Sistema teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumico ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos complexos que se denam como objeto de estudo.

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2.3. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou biotecnolgica, formulao ou metablito, que est sob investigao em um estudo.

3. Materiais e Reagentes
3.1. Recipientes-teste em plstico resistente, opaco, de cor escura, com dimenses aproximadas de 44 cm de dimetro e 58 cm de altura, volume para 60 L, tampa com tela de nylon de malha na. 3.2. gua de torneira desclorada (48 h). 3.3. Balana analtica. 3.4. Marcador de recipientes. 3.5. Etiquetas autocolantes. 3.6. Borrifador (tipo jardinagem). 3.7. Pipetas sorolgicas (10 mL). 3.8. Pipetador automtico ou pra. 3.9. Cubas em plstico de cor branca, dimenses (cm) aproximadas de 10 (largura) X 20 (comprimento) X 4 (altura). 3.10. Rao para gatos macerada. 3.11. Soluo de hipoclorito de sdio a 2%. 3.12. Sistema teste: 3.12.1. Aedes aegypti, larvas no incio do 4 instar (cpsula ceflica de cor clara), mantidas em insetrio com temperatura, umidade e fotoperodo controlados (24 a 28C, 60 a 80% e 10:14 h claro/escuro, respectivamente), alimentados com dieta especca. 3.12.2. Culex quinquefasciatus, larvas no incio do 4 instar (cpsula ceflica de cor clara), mantidas em insetrio temperatura, umidade e fotoperodo controlados (24 a 28C, 60 a 80% e 10:14 h claro/escuro, respectivamente), alimentados com dieta especca.

4. Procedimento Experimental 4.1. Geral

4.1.1. Delineamento experimental: 4.1.1.1. Utilizar a concentrao da substncia-teste recomendada pelo fabricante para ser submetida vericao da eccia.

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4.1.1.2. Trs replicatas da concentrao e do controle no tratado, por teste; 4.1.1.3. No de larvas por replicata: 200 larvas de lotes homogneos. 4.1.1.4. Trs repeties vlidas do teste, realizadas em datas dife rentes, para estabelecer a mdia dos resultados de mortali dade da substncia-teste. 4.1.2. Os ensaios devero ser realizados em sala sob as mesmas condies (temperatura, umidade e fotoperodo) de manuteno das larvas. 4.1.3. No grupo controle aceitvel a mortalidade de at 10%, desconsiderar o ensaio quando a mortalidade for maior do que 10%. 4.1.4. Adicionar aos recipientes, ao trmino do ensaio, so luo de hipoclorito de sdio diluda 100 vezes (Ex: para 50 L adicionar 0,5 L da soluo de hipoclorito de sdio). 4.1.5. Aps 24 h descartar contedo dos recipientes.

4.2. Especco

4.2.1. Preparar a amostra da substncia-teste segundo a menor dose recomendada pelo fabricante no rtulo (adaptar ao volume ou superfcie do recipiente-teste). 4.2.2. Preparar os recipientes contendo 50 L de gua declorada, colocar as larvas, adicionar 200 mg de rao e identic-los com a concentrao utilizada, ou como controle. 4.2.3. Para formulaes lquidas diluir a dose necessria em 30 ml de gua de torneira, aplicar sobre a superfcie da gua do tanque com o borrifador. Utilizar uma barreira durante a aplicao para evitar contaminao dos recipientes prximos. Para formulaes em grnulo pesar a dose necessria e distribuir manualmente os grnulos sobre a superfcie da gua. Para comprimidos depositar delicadamente o comprimido sobre a superfcie da gua no centro do recipiente; no caso de 2 ou mais comprimidos, distribuir uniformemente, nunca deposit-los juntos. 4.2.4. A determinao da mortalidade das larvas nos recipientes feita 24 ou 48 horas aps a aplicao da substncia-teste base de Bacillus thuringiensis ou B. sphaericus, respectivamente,

36

37
com base no n de larvas sobreviventes coletadas com pipeta e transferidas para contagem em cubas. 4.2.5. O nmero de larvas mortas em cada replicata igual ao n total de larvas introduzidas menos o n de larvas vivas. Ocorrendo a presena de pupas nos recipientes deve ser registrada e seu nmero excludo do total de indivduos expostos.

5. Resultados
O teste ser considerado satisfatrio se o valor mdio da mortalidade for de 90 10% nos recipientes-teste no perodo da avaliao.

Teste de Eccia Curativo para Cupins de Madeira Seca 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da eccia de cupinicidas para uso em madeira seca como tratamento curativo.

2. Denies
2.1. 2.2. Mortalidade: situao em que o inseto se encontra sem nenhum movimento evidente, de qualquer apndice, aps observao por um perodo mnimo de 3 segundos. Sistema-teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumico ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos complexos, que se denam como objeto de estudo. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou biotecnolgica, formulao ou metablito, que est sob investigao em um estudo.

2.3.

3. Materiais e Reagentes
3.1. Corpo de prova (madeira previamente infestada pela praga)

Manual de Protocolos para Testes de Eccia em Produtos Desinfestantes

medindo 50x10x 1cm de comprimento, largura e espessura, respectivamente. 3.2. Pulverizador manual em ao inoxidvel com vazo constante, presso de 40 lb / pol2 e bico leque 8002. 3.3. Dosador automtico para aplicaes de aerossol. 3.4. Termohigrmetro. 3.5. Pincel. 3.6. Seringas. 3.7. Tanques para imerso. 3.8. EPIs. 3.9. Sistema-teste: 3.9.1. Criptotermes brevis

4. Procedimento Experimental 4.1. Geral

4.1.1. Separar 24 corpos de prova em ambiente controlado com temperatura entre 23 e 270C e umidade relativa do ar entre 50 e 70% e ciclos claro/escuro de 12 horas. 4.1.2. Momentos antes do incio do ensaio selecionar doze corpos de prova para tratamento com a substncvia teste e doze com o controle. 4.1.3. Realizar a aplicao de acordo com a recomendao do fabricante, utilizando pulverizao, doseamento automtico, pincelamento, injeo ou imerso. 4.1.4. Realizar avaliaes semanais de mortalidade at no mximo 60 (sessenta) dias. OBS: As avaliaes devem ser realizadas atravs de aberturas parciais em cada um dos corpos de prova.

4.2.

4.2.1. Lquidos: preparar a calda na concentrao e indicaes de uso informadas pelo fabricante. Poder ser utilizado um pulverizador manual de vazo e presso constantes de 40 lb/pol2, com bico de leque 8200. Realizar as aplicaes a 30 cm da superfcie a ser tratada. 4.2.2. Slidos: polvilhar a substncia-teste de com a quantidade in-

Especco

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dicada pelo fabricante, utilizando um polvilhador manual ou a prpria embalagem do produto. Aplicar a uma distncia de 30 cm. Aerossol: utilizar um dosador automtico ou aplicar manualmente, com auxlio de um tubo de PVC de 30 cm de altura por 20 cm de dimetro. Pronto-uso: utilizar a prpria embalagem, por exemplo, bomba de Fritz ou pulverizador similar. Pincelamento: pincelar uniformemente a madeira, utilizando a dose e volume indocados pelo fabricante. Imerso: imergir a madeira, utilizando a dose e volume de calda indicados pelo fabrcante.

4.2.3. 4.2.4. 4.2.5. 4.2.6.

5. Resultados

A substncia teste ser considerada satisfatria se o valor mdio da mortalidade for de 9010%, sendo calculada de acordo com Abbo (1925).

Teste de Eccia Preventivo / Residual para Cupins de Madeira Seca 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da eccia de cupinicidas para uso em madeira seca como tratamento preventivo/residual para cupins.

2. Denies
2.1. 2.2. Mortalidade: situao em que o inseto se encontra sem nenhum movimento evidente, de qualquer apndice, aps observao por um perodo mnimo de 3 segundos. Sistema-teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumico ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos complexos, que se denam como objeto de estudo. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou biotec-

2.3.

nolgica, formulao ou metablito, que est sob investigao em um estudo.

3. Materiais e Reagentes
3.1. Corpo de prova 15 x 15 cm (madeira no infestada, pinus, ou seguir a indicao do fabricante).previamente infestada pela praga) medindo 50x10x 1cm de comprimento, largura e espessura, respectivamente. 3.2. Pulverizador manual em ao inoxidvel com vazo constante, presso de 40 lb / pol2 e bico leque 8002. 3.3. Dosador automtico para aplicaes de aerossol. 3.4. Termohigrmetro. 3.5. Pincel. 3.6. Seringas. 3.7. Tanques para imerso. 3.8. EPIs. 3.9. Sistema-teste: 3.9.1. Criptotermes brevis

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4. Procedimento Experimental 4.1. Geral

4.1.1. Separar uma quantidade de corpos de prova de acordo com o tempo de efeito residual desejado, onde cada tempo deve conter quatro corpos de prova para o tratamento controle e quatro para o tratamento com a substncia teste. 4.1.2. Aplicar o produto (vide 4.2.). 4.1.3. Aps a secagem dos corpos de prova, introduzir os mesmos em ambiente controlado com temperatura entre 23 e 27C e umidade relativa do ar entre 50 e 70%. 4.1.4. Separar 200 cupins previamente climatizados e realizar infestao de 25 insetos sobre as superfcies de cada uma das repeties. 4.1.5. Manter em exposio durante 20 minutos, sendo retirados e introduzidos em madeiras isentas de tratamento para posteriores avaliaes de mortalidade em 24, 48 e 72 horas.

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4.1.6. Avaliar semanalmente a mortalidade, dentro do tempo recomendado pelo fabricante, mantendo os corpos de prova tratados inicialmente em prateleiras, em ambiente com umidade e temperaturas controlados ( 23 a 27 C e 50 a 70 % de umidade relativa) e ciclos de claro-escuro de 12 horas.

4.2. Especco

4.2.1. Lquidos: preparar a calda na concentrao e indicaes de uso informadas pelo fabricante. Poder ser utilizado um pulverizador manual de vazo constante e presso de 40 lb/pol2, com bico de leque 8200. Realizar as aplicaes a 30 cm da superfcie a ser tratada. 4.2.2. Slidos: polvilhar a substncia-teste de com a quantidade indicada pelo fabricante, utilizando um polvilhador manual ou a prpria embalagem do produto. Aplicar a uma distncia de 30 cm. 4.2.3. Aerossol: utilizar um dosador automtico ou aplicar manualmente, com auxlio de um tubo de PVC de 30 cm de altura por 20 cm de dimetro. 4.2.4. Pronto-uso: utilizar a prpria embalagem, por exemplo, bomba de Fritz ou pulverizador similar. 4.2.5. Pincelamento: pincelar uniformemente a madeira, utilizando a dose e volume indocados pelo fabricante. 4.2.6. Imerso: imergir a madeira, utilizando a dose e volume de calda indicados pelo fabrcante.

5. Resultados
A substncia teste ser considerada satisfatria se o valor mdio da mortalidade for de 9010%, sendo calculada de acordo com Abbo (1925).

Teste de Eccia em Laboratrio Frente a Cupim Subterrneo 1. Objetivo

Estabelecer a metodologia a ser adotada para avaliao da eccia, em laboratrio, frente a cupins subterrneos.

2. Denies
Manual de Protocolos para Testes de Eccia em Produtos Desinfestantes

2.1. 2.2.

2.3.

Mortalidade: situao em que o inseto se encontra sem nenhum movimento evidente, de qualquer apndice, aps observao por um perodo mnimo de 3 segundos. Sistema-teste: qualquer animal, planta, microorganismo, bem como, outro sistema celular, subcelular, qumico ou fsico, ou combinao destes, incluindo os sistemas ecolgicos complexos, que se denam como objeto de estudo. Substncia-teste: qualquer espcie qumica, biolgica ou biotecnolgica, formulao ou metablito, que est sob investigao em um estudo.

3. Materiais e Reagentes
3.1. 3.2. 3.3. 3.4. 3.5. 3.6. 3.7. 3.8. Corpo de prova 1 x 1 x 5 de largura, espessura e comprimento, respectivamente (madeira pinus no infestada pela praga e isenta de tratamento). Tubo de vidro de 2 cm de dimetro interno por 6 cm de altura. Funil plstico. Placa de Petri. Balde plstico. Trado. EPIs. Sistema-teste: 3.8.1. Nasutitermes sp. 3.8.2. Coptotermes gestroi.

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4. Procedimento Experimental 4.1.

4.1.1. Diluir a substncia teste de acordo com a recomendao do fabricante, com o auxlio de um funil aplicar a calda em 1 metro linear sobre o solo, distribuindo este volume a cada 20cm dentro de orifcios, medindo 10mm de dimetro por 20cm de profundidade. 4.1.2. Vinte e quatro horas aps a aplicao, com o auxlio de um trado, coletar pores de solo entre os orifcios que receberam a aplicao, sendo todo o contedo amostrado transferido para um balde plstico, sendo este solo homogeneizado e acondicionado em ambiente controlado com temperatura entre 23 e 27C e umidade relativa do ar entre 50 e 70%.

Aplicao da Substncia-teste

4.2.

4.2.1. Introduzir 20 g de solo previamente homogeneizado em tubos de vidro e posicionar verticalmente sobre uma placa de Petri. 4.2.2. Introduzir os corpos de prova no interior dos tubos na parte superior do solo. 4.2.3. Infestar sobre estes corpos de prova, 48 operrios e 2 soldados em cada repetio. 4.2.4. Os insetos devero ser incubados em ambiente controlado (temperatura entre 23 e 27C e umidade relativa do ar entre 50 e 70%) e ciclos claro-escuro de 12 horas. 4.2.5. Realizar avaliaes do nmero de insetos vivos, mortos e sinais de ataque nos corpos de prova durante 15 dias.

Preparo de Ensaio

5. Resultados

A substncia teste ser considerada satisfatria se o valor mdio da mortalidade for de 90 10%, sendo calculada de acordo com Abbo (1925). O ensaio ser considerado vlido se no tratamento controle ocorrer sinais de ataque dos cupins e tendo como tolerncia uma mortalidade mxima de 20% no perodo de 15 dias.

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