Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO BIOLOGA MOLECULAR DE LA CLULA

Los animales conocen su entorno a travs de las respuestas de rganos especficos a estmulos: tacto, dolor, calor, fro, intensidad (luz o ruido), color, forma, posicin, tono, calidad, cido, dulce, amargo, salado, alcalino, olor y otros. Externamente, estos estmulos se manifiestan generalmente como respuestas en la piel, el ojo, el odo, la lengua y la nariz. La discriminacin de las seales tiene lugar en el punto de recepcin, pero el reconocimiento de lo que son se produce como resultado de una estimulacin secundaria del sistema nervioso y de la transmisin de las seales al cerebro. La actividad elctrica asociada a la transmisin de seales a lo largo de las neuronas y la actividad qumica asociada a la transmisin de seal a travs de las uniones sinpticas son comunes en estos fenmenos. En todos los caos, el estmulo ambiental recibido en forma de presin (piel, tacto), luz (ojo, visin), ruido (odo, audicin), sabor (lengua) u olor (nariz) debe convertirse (transducirse) en un impulso elctrico y en alguna otra forma de energa para ocasionar la respuesta final deseada ordenada por el cerebro. Hay un componente bioqumico asociado a cada uno de estos procesos. (6)

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO TEJIDO NERVIOSO: METABOLISMO Y FUNCIN: Alrededor de un 2,4 % del peso corporal de un adulto corresponde a tejido nervioso, del cual aproximadamente 83% se encuentra en el cerebro. El sistema nervioso proporciona la red de comunicaciones entre los sentidos, el medio exterior y todas las partes del cuerpo. El cerebro es el centro de mando. Este sistema siempre est en funcionamiento y necesita una gran cantidad de energa para mantenerse operativo. En condiciones normales, el cerebro obtiene su energa a partir del metabolismo de la glucosa. Los cuerpos cetnicos pueden atravesar la barreara hematoenceflica y ser metabolizado por el tejido cerebral. El metabolismo de estas sustancias es ms importante durante la inanicin, pero incluso en estas condiciones no pueden sustituir completamente la necesidad de glucosa. El cerebro humano utiliza aproximadamente 103g de glucosa por da. Para un cerebro de 1,4 Kg, esto corresponde a una tasa de utilizacin aproximada de 0,3 mol min-1 g-1 de tejido. Esta velocidad de utilizacin de la glucosa se corresponde con una capacidad de produccin de ATP, solamente a travs del ciclo de los cidos tricarboxlicos (ATC), de aproximadamente 6,8 mol min-1 g-1 de tejido. Por supuesto, ni la eficiencia del ciclo de los ATC para la produccin de ATP es del 100%, ni toda la glucosa se metaboliza a travs de este ciclo. La mayor parte de ATP utilizado por el cerebro y otros tejidos nerviosos se genera aerbicamente a travs del ciclo de los ATC, que trabaja casi al mximo de capacidad. La gluclisis funciona aproximadamente al 20% de su capacidad. Gran parte de la energa utilizada por el cerebro sirve para mantener los gradientes inicos a travs de las membranas plasmticas, as como para llevar a cabo diversos procesos de transporte y almacenamiento y para la sntesis de neurotransmisores y otros componentes celulares. (6)

Es importante destacar dos caractersticas en la composicin del cerebro. Contiene lpidos y complejos especializados cuya funcin parece ser la de mantener la integridad de la membrana ms que la de desempear un papel metablico. Las protenas del cerebro presentan

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO generalmente una velocidad de recambio rpida en relacin con otras protenas del cuerpo, a pesar de que las clulas neuronales en general no se dividen tras haberse diferenciado. (6) Las clulas del sistema nervioso responsables de captar y transmitir mensajes son las neuronas, que son clulas muy especializadas. Cada neurona consta de un cuerpo celular, dendritas que son protuberancias a modo de antenas cortas cuya funcin es recibir seales de otras clulas, y de un axn, y que se extiende a partir del cuerpo celular y que sirve para transmitir seales a otras clulas. En el sistema nervioso central (SNC) existen otras clulas adems de las neuronas. En el cerebro se encuentra una cantidad unas 10 veces superior de clulas gliales que de neuronas. Estas ocupan los espacios interneuronales y proporcionan cierto aislamiento elctrico. Las clulas gliales no son, en general, elctricamente activas, pero son capaces de dividirse. Bsicamente existen 5 tipos de clulas gliales: clulas de Schwann, oligodendrocitos, microglia, clulas ependimales y astrocitos. Cada uno de los tipos de clulas gliales cumplen una funcin especializada, pero solo los astrocitos parecen estar directamente asociados con funciones bioqumicas aplicadas en la actividad neuronal. Una de sus funciones es metablica y la otra es anatmica. (6) Loa astrocitos envan protuberancias hasta las superficies externas del SNC. Estas protuberancias estn entrelazadas formando complejos anatmicos que dan lugar a barreras cerradas, y aslan al SNC del medio externo. Los astrocitos tambin envan protuberancias similares hasta el sistema circulatorio induciendo el sellado de las clulas endoteliales de los capilares mediante la formacin y uniones cementadas que impiden la entrada pasiva en el cerebro de molculas hidrosolubles. Estas uniones cementadas se conocen como barrera hematoenceflica. Los compuestos hidrosolubles entran en el cerebro solo si existen sistemas de transporte de membrana especficos para ellos. (6) Un adulto normal tiene entre 1011 y 1013 neuronas, y la comunicacin entre ellas se lleva a cabo mediante seales elctricas y qumicas. Las seales elctricas transmiten el impulso nervioso a lo largo dl axn, y las seales qumicas transmiten la seal a travs del espacio intercelular. Se tratar algunos de los fenmenos bioqumicos que proporcionan a la clula sus propiedades elctricas y que intervienen en la propagacin de un impulso. (6)

ATP y potencial elctrico transmembrana en las neuronas El ATP generado en metabolismo de la glucosa se utiliza para mantener un potencial elctrico de equilibrio de -70 mV aproximadamente a travs de la membrana de la neurona, siendo el interior de la clula ms negativo que el exterior. Este potencial se mantiene por la accin de la ATPasa intercambiadora de Na+/K+, cuya energa se obtiene de la hidrlisis del ATP que da ADP y fosfato inorgnico. (6) La polarizacin y repolarizacin progresivas a lo largo del axn son la que permiten la propagacin del impulso elctrico sin disminucin de la molcula. (6)

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO En el tejido nervioso, la transmisin del impulso elctrico es un proceso continuo, siendo el ATP generado principalmente a partir del metabolismo de la glucosa el que mantiene funcional el sistema. (6) La interaccin neurona-neurona se produce a travs de sinapsis Existen dos mecanismos para la interaccin neurona-neurona: la sinapsis elctrica y la sinapsis qumica. Las sinapsis elctricas permiten la transferencia ms rpida de seales entre clulas. Las sinapsis qumicas permiten varios niveles de versatilidad en la comunicacin intercelular y son de dos tipos: aquellas en las que el neurotransmisor se une directamente a un canal inico y provoca que este se abra o se cierre, y aquellas en las que el neurotransmisor se une a un receptor que libera o conduce a la generacin de un segundo mensajero, que reacciona a su vez con un canal inico, provocando que este se abra o se cierre. (6)

Los neurotransmisores qumicos pueden ser excitadores o inhibidores. Algunos neurotransmisores excitadores son compuestos tales como la acetilcolina y las catecolaminas. (6) Tabla 01. Algunos neurotransmisores del tejido nervioso EXCITADORES Acetilcolina Aspartato Dopamina Histamina Noradrenalina Adrenalina Glutamato 5-Hidroxitriptamina INHIBIDORES

4-Aminobutirato Glicina Taurina

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO Todos los neurotransmisores se sintetizan y se almacenan en las neuronas presinpticas. Despus de la estimulacin de la neurona, son liberadas, atraviesan las sinapsis y se unen a un receptor especfico en la unin postsinptica para desencadenar una respuesta en la siguiente clula. Si el neurotransmisor es excitador provoca una despolarizacin de la membrana. Si es un neurotransmisor inhibidor, se une a un receptor vinculado a un canal y provoca un cambio de conformacin que abre el poro para permitir la entrada de pequeos iones cargados negativamente, concretamente Cl- . El efecto neto de todo ello es aumentar la conductancia de cloruros de la membrana postsinptica, haciendo ms difcil que se despolarice la clula; es decir, que el transmisor inhibidor produce hiperpolarizacin de manera efectiva. (6) Sntesis, almacenamiento y liberacin de neurotransmisores Los neurotransmisores no peptdicos pueden sintetizarse en prcticamente cualquier parte de la neurona, en el citoplasma cerca del ncleo y axn. La mayora de neurotransmisores no peptdicos son aminocidos o derivados de aminocidos. Los neurotransmisores viajan rpidamente a travs de la unin sinptica, se unen a los receptores del lado postsinptico, inducen cambios conformacionales en los receptores o en la membrana de la neurona postsinptica e inician el proceso de propagacin del impulso elctrico. El almacenamiento y la liberacin de los neurotransmisores son procesos complejos. Se ha demostrado, mediante tcnicas convencionales, que algunas neuronas contienen ms de una clase qumica de neurotransmisor. La liberacin de un neurotransmisor es un fenmeno cuntico, es decir un impulso nervioso que llega a una terminacin presinptica da lugar a la liberacin de neurotransmisores procedentes de un nmero determinado de vesculas sinpticas. La libracin de neurotransmisores implica la fusin de la vescula sinptica a la membrana y la exocitosis de su contenido hacia la hendidura sinptica. (6) El almacenamiento de neurotransmisores se produce en vesculas de tamao grande o pequeo, en la terminal presinptica. Las vesculas pequeas son predominantes y se encuentran en dos reservas: libres y unidas a protenas del citoesqueleto, principalmente actina. Las vesculas pequeas contienen solamente molculas pequeas, los transmisores clsicos. Las vesculas grandes pueden contener pequeas molculas neurotransmisoras clsicas y neuropptidos. Algunas pueden contener enzimas. (6)

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO Tabla 02. Listado de protenas de la vescula sinptica Sinapsina Sinaptofisina Sinaptotagmina Sintaxina Sinaptobrevina Rav3 y Ravifilina SV-2 Bomba vacuolar de protones

Terminacin de la seal en la unin sinptica La accin del neurotransmisor puede finalizar mediante el metabolismo, la recaptacin o la difusin hacia otros tipos celulares. Los neurotransmisores responsables de respuestas rpidas se inactivan generalmente mediante uno de los dos primeros mecanismos, o por ambos a la vez. (6)

Los neuropptidos provienen de protenas precursoras Los neurotransmisores peptdicos se sintetizan generalmente como protenas mayores que son cortadas mediante protelisis para producir las molculas de neuropptido. Su sntesis requiere la misma maquinaria bioqumica que el de cualquier sntesis proteica y tiene lugar en el cuerpo celular, no en el axn. (6)

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO

EL OJO: METABOLISMO Y MECANISMO DE LA VISIN: El ojo es un rgano casi esfrico con varias capas concntricas. En realidad el rgano que efecta el proceso de la visin es el cerebro, la funcin del ojo es traducir las vibraciones electromagnticas de la luz en un determinado tipo de impulsos nerviosos que se transmiten al cerebro a travs del nervio ptico. (1) El globo ocular es una estructura esfrica de aproximadamente 2.5 centmetros de dimetro con un marcado abombamiento sobre su superficie anterior. La parte exterior se compone de tres capas de tejido: La capa ms externa o esclertica: tiene una funcin protectora. Cubre unos cinco sextos de la superficie ocular y se prolonga en la parte anterior con la crnea transparente. La capa media o vea: tiene tres partes: la coroides (vascularizada), el cuerpo ciliar (procesosfiliares) y el iris (parte frontal del ojo). La capa interna o retina: es la sensible a la luz. (1)

La luz que entra en el ojo pasa progresivamente a travs de la crnea, dela cmara anterior, constituida por el humor acuoso; el cristalino; el cuerpo vtreo; constituido por el humor vtreo y finalmente se enfoca sobre la retina, que contiene el aparato sensitivo visual. El exterior de la crnea esta baado por las lgrimas, mientras que el interior lo est por el humor acuoso, un fluido isosmtico que contienen sales, albumina, globulina,

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO

glucosa y otros componentes. El humor acuoso proporciona nutrientes a la crnea y al cristalino y elimina productos finales del metabolismo de esos tejidos. El humor vtreo es una masa colagenosa o gelatinosa que ayuda a mantener la forma del ojo aunque tambin le permite conservar cierta flexibilidad. (1) La cornea obtiene su atp a partir del metabolismo aerobico: La crnea es la estructura hemisfrica y transparente localizada al frente del ojo que permite el paso de la luz y protege al iris y al cristalino. Posee propiedades pticas de refraccin significativas, representando cerca de 2/3 de la capacidad total de enfoque del ojo, aproximadamente 44 dioptras. (2) Consta de tres capas separadas por dos membranas: la ms externa es el epitelio corneal, compuesto por epitelio pluriestratificado (varias capas) no queratinizado con gran potencial regenerativo; la media es el estroma (la capa ms ancha de las tres) compuesta por tejido conjuntivo y la ms interna es un endotelio monoestratificado (una sola capa de clulas). (2) Las dos membranas que separan la capa central o estroma de las otras dos son la membrana de Descemet, que separa el estroma del endotelio y la membrana de Bowman, que separa el estroma del epitelio anterior. Podemos decir en sntesis que consta de cinco capas: 1) Epitelio Anterior, 2) Membrana de Bowman, 3) Estroma corneal, 4) Membrana de Descemet y 5) Endotelio. (2) La crnea es uno de los pocos tejidos del cuerpo que no posee irrigacin sangunea (no tiene vasos sanguneos), pero s est inervada (tiene sensibilidad). Es la porcin anatmica del cuerpo humano que posee ms terminaciones nerviosas sensoriales en relacin a su tamao. Se nutre de la lgrima y del humor acuoso. (2) Cuando la crnea pierde su transparencia por alguna enfermedad ocular, se produce prdida de visin. Para recuperarla a veces es necesario realizar una intervencin (3) quirrgica que se llama queratoplastia o trasplante de crnea. El cristalino es en su mayor parte agua y protenas: El cristalino esta baado por un lado por el humor acuoso y est sustentado por el humor vtreo. (2)

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO

El cristalino no tiene aporte sanguneo pero es un tejido metablicamente activo. Esta constituido principalmente por agua y protenas. La mayora de protenas son las cristalinas , , . (4) Tambin contiene albuminoides enzimas y protenas de membrana que se sintetizan en una capa epitelial situada alrededor del borde del cristalino. (4) Las protenas del cristalino han de mantenerse en un estado nativo sin agregar. Estas protenas son sensibles a varias agresiones, tales como cambios en el estado de oxidacin- reduccin, osmolaridad, concentraciones demasiado elevadas de metabolitos y la radiacin UV. La integridad estructural del cristalino es mantenida mediante la ATP asa intercambiadora de sodio y potasio para el equilibrio osmtico, la glutatin reductasa para el equilibrio del estado redox y la sntesis proteica para el crecimiento y el mantenimiento. (4) Intercambio de iones La protena MIP26 del cristalino funciona como un canal inico, que permite que las fibras del cristalino funcionen como un sincitio inico y elctrico. MIP26 se ha identificado recientemente como miembro de la familia de las acuaporinas, que son transportadores de agua que funcionan como osmoreceptores. MIP26 extrae agua del cristalino y mantiene la transparencia. Ratones con mutaciones en este gen presentan cataratas. MIP26 est ausente en las clulas epiteliales del cristalino.(4) Por otro lado, para que el cristalino funciona como un sincitio desde un punto de vista elctrico y qumico, existen canales inicos que extraen de forma activa el sodio (Na+) del cristalino, mientras que el potasio (K+) y el agua entran de forma pasiva. El epitelio, por su parte, tambin presenta uniones "gap" entre las superficies laterales de sus clulas, lo que tambin permite la interconexin celular y el funcionamiento sincrnico. La comunicacin entre las clulas del epitelio y las fibras del cristalino se realiza mediante endocitosis, va vesculas recubiertas.(4) La bomba sodio-potasio presente en el polo apical del epitelio intercambia de forma activa Na+ (que se extrae) y K+ (que se introduce). El Na+ se difunde luego de forma pasiva hasta el humor acuoso. (4)

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO

METABOLISMO DE LA VISIN: La principal fuente de energa del cristalino es la glucosa procedente del humor acuoso. La glucosa entra en las clulas mediante transportadores independientes de insulina localizados en la membrana plasmtica. Cerca del 80% de la glucosa se consume en el cristalino utilizando la glicolisis anaerobia. La utilizacin aerobia de la glucosa en el ciclo del cido ctrico se realiza nicamente en las clulas del epitelio, ya que stas son las nicas que conservan mitocondrias. (4) La sntesis de protenas nuevas se detiene cuando las clulas se transforman en fibras. Todos los cambios que se producen a partir de ese momento son modificaciones posttraduccionales. Por ejemplo, se produce la fosforilacin de muchos tipos de protenas, como cristalinas, protenas del citoesqueleto y MIP26. Adems, se han detectado protenas con actividad proteasa en el cristalino, posiblemente implicadas en los procesos de apoptosis. Con la edad aumenta la degradacin de protenas, sobre todo MIP26, lo que puede tener importancia en las conexiones intercelulares y contribuir en la aparicin de cataratas. (4) En cuanto a los lpidos, la membrana plasmtica de las fibras contienen proporciones inusualmente altas de esfingomielina, colesterol y cidos grasos saturados, que confieren rigidez a la membrana, importante para mantener las conexiones intercelulares. (4) El cristalino est expuesto constantemente al ataque por agentes oxidativos: de hecho en el humor acuoso hay normalmente un nivel elevado de perxido de hidrgeno, y la actividad peroxidasa se detecta en el cristalino. Por ello, el cristalino presenta sistemas redox, conjuntos de enzimas capaces de minimizar o tamponar los efectos de los oxidantes. Entre estas enzimas se encuentran la catalasa, la superxido dismutasa, la glutatin peroxidasa y la glutatin-S transferasa. (4) La retina obtiene su atp a partir de la glucolisis anaerbica: La retina es una fina cutcula transparente, con un alto consumo de oxgeno. Al igual que el cristalino, depende en gran manera de la glucolisis anaerbica para la produccin de ATP. A diferencia del cristalino, la retina es un tejido vascular aunque esencialmente no presenta vasos sanguneos en el rea donde es mayor la agudeza visual, la fobia central. En la clulas de la retina, incluidos bastones y conos, existen

10

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO

mitocondrias, excepto en los segmentos externos de los bastones y conos, que es donde se localizan los pigmentos visuales. (3) MECANISMO DE LA VISIN: El enfoque del ojo se lleva a cabo debido a que la lente del cristalino se aplana o redondea; este proceso se llama acomodacin. En un ojo normal no es necesaria la acomodacin para ver los objetos distantes, pues se enfocan en la retina cuando la lente est aplanada gracias al ligamento suspensorio. Para ver objetos ms cercanos, el msculo ciliar se contrae y por relajacin del ligamento suspensorio, la lente se redondea de forma progresiva. (1) La visin es un proceso fisiolgico, resultado de varios fenmenos sucesivos, que nos permite revelar la presencia de los cuerpos, con identificacin de su forma, color y dimensiones. En ese proceso intervienen el ojo y la zona de la corteza cerebral encargada de interpretar las sensaciones luminosas que se proyectan sobre la retina de aqul. La visin es pues una actividad que implica la necesidad de luz; sin ella no existe visin. (1) Por otro lado implica la sensibilizacin de las clulas en forma de bastones gracias a un pigmento, la prpura visual, sintetizada en su interior. Para la produccin de este pigmento es necesaria la vitamina A, y su deficiencia conduce a la ceguera nocturna. (1) Cuando la luz intensa alcanza la retina, los grnulos de pigmento marrn emigran a los espacios que rodean a estas clulas, revistindolas y ocultndolas. De este modo los ojos se adaptan a la luz. (1) Los movimientos del globo ocular hacia la derecha, izquierda, arriba o abajo se llevan a cabo por los seis msculos oculares que son muy precisos. Se estima que los ojos pueden moverse para enfocar como mnimo cien mil puntos distintos del campo visual. La visin es un fenmeno muy complicado que consta de cuatro fases bien diferenciadas: Percepcin: primero tiene lugar la bsqueda y seguimiento de las imgenes, realizada por los msculos externos del ojo. Posteriormente, tiene lugar el enfoque de dicha imagen, realizado por las estructuras del polo anterior del ojo. Transformacin: cuando los impulsos en forma de energa luminosa llegan a la retina se activan sus clulas sensoriales, y estas, por medio de reacciones qumicas, transforman dichos impulsos en energa elctrica. Transmisin: los impulsos elctricos son conducidos por las fibras nerviosas a travs de las clulas neuronales retinianas, formando el nervio ptico. Este

11

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO

abandona el globo ocular y la rbita y penetra en la cavidad craneana, conduciendo los estmulos hasta la corteza cerebral a travs de las vas pticas. Interpretacin: se realiza en la corteza cerebral (2)

MSCULO Y CITOESQUELETO: PROTENAS MUSCULARES Y MECANISMO DE LA CONTRACCIN MUSCULAR Las estras del musculo esqueltico aparecen como bandas claras y oscuras alternamente. Las bandas oscuras son las bandas A (anisotrpicas) y contienen los filamentos gruesos de miosina, tambin contienen los filamentos delgados que sobreponen a los filamentos gruesos. Las bandas claras son las bandas I (isotrpicas) y contienen filamentos delgados el musculo y los haces musculares (fascculos) estn formados de unidades llamadas fibras musculares, y estn hechas de miofibrillas y estas de series repetitivas de sarcmeras. Las sarcmeras se extienden a partir de un disco Z al siguiente y los filamentos delgados de actina estn fijos al disco Z. La hiptesis de los filamentos deslizantes se basa en las estructuras del musculo relajado y en contraccin. Durante la contraccin, los sarcmeros se acortan y los discos Z se acercan. La banda A mantiene su longitud y la banda I se acorta.

PROTENAS DEL MUSCULO ESQUELETICO La Miosina:

12

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO

Primera protena importante, consiste en dos cadenas pesadas idnticas (230KDa), dos cadenas ligeras esenciales (16-20KDa) y dos cadenas ligeras reguladoras(16-20KDa). La miosina posee actividad ATPasa, es el sitio de transduccin donde la energa qumica del ATP pasa a energa mecnica. Contiene dominio regular en el amino terminal y un segmento de cola, largo, tipo varilla, en el carboxilo terminal de la cadena pesada.los segmento de cola de varias molculas de miosina se ensamblan y forman filamentos gruesos.la apariencia de la miosina no globular depende de la direccin de donde se observe siendo anisotrpicas y es el componente proteico principal de la banda A.

La Actina:

Segunda cadena importante del musculo, es una protena prominente en todas las otras clulas. La actina existe como forma monomerica o G (globular) varios monmeros de actina G forman filamentos helicoidales (F, actina filamentosa)y se encuentran como tales en los filamentos delgados del musculo esquelticos. Catorce molculas de actina forman una vuelta de filamentos helicoidal. La interaccin de las cabezas de la miosina y los filamentos de actina es responsable de la generacin de la fuerza. La tropomiosina es una molcula larga delgada compuesta de dos subunidades proteicas diferentes de peso molecular de 33kDa y de 37kDa. La tropomiosina interacciona con siete molculas de actina en el filamento delgado y bloquea la interaccin de actina y miosina en el estado relajado. La tropomiosina se encuentra con troponina, consiste en tres tipos diferentes de subunidades la troponina I inhibe la interaccin de la actina y la

13

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO

miosina a travs de la accin de la tropomiosina. La troponina c se enlaza en el calcio en forma reversible. La troponina T interacciona con la tropomiosina.

CONTRACCIN DE MUSCULO ESQUELETICO La actividad ATPasa de la miosina tiene un papel central en la conversin de energa qumica a energa mecnica. La actividad ATPasa reside en el dominio globular de la meromiosina pesada, bajo condiciones de reposo, la tropomiosina bloquea estricamente la interaccin de la actina con la miosina. Despus de aumento de la concentracin de calcio en el sarcoplasma de aproximadamente 0.1-5 M. la troponina C forma un complejo con el calcio y sufre un cambio de conformacin. La tropomiosina es desplazada por el complejo con la miosina. Esta interaccin estimula la actividad ATPasa de la miosina y promueve la generacin de fuerza. Cuando la concentracin de calcio cae, la troponina C libera el calcio asume su conformacin inicial y promueve el movimiento relativo de la tropomiosina, la cual a su vez, inhibe la interaccin de actina y miosina.

14

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO

La asociacin y disociacin cclicas de actina y miosina se relacionan con la hidrlisis del ATP, como se describe en el siguiente esquema. Un complejo de actina y miosina reacciona con ATP; la actina es desplazada, y la miosina se une al ATP. El ATP es hidrolizado para formar ADP + P, y una miosina en estado energizado. Sorprendentemente, esta hidrlisis ocurre antes de cualquier generacin de fuerza. Sin embargo, el complejo es energizado como un resorte extendido. Este componente energizado interacciona entonces con actina para formar un complejo de actina * miosina * (ATP + P). La miosina genera fuerza y es transformada de un estado energizado a un estado desenergizado. El ATP + P es descargado, dejando un ejemplo actina*miosina escaso en energa. Los siguientes pasos describen el mecanismo de del filamento deslizante para la contraccin muscular:

1. Se necesita ATP para disociar la actina de la miosina. Esto permite a la miosina moverse en relacin con el filamento delgado 2. La hidrlisis del ATP produce miosina energizada. En respuesta a un impulso nervioso, se libera calcio del retculo sarcoplasmico y el calcio dispara la contraccin muscular. Los iones de calcio, que acta a travs de la troponina y la tropomiosina, permiten que la miosina*(ATP + P)energizada interaccione con la actina. 3. La cabeza de la miosina se inclina y mueve una cadena de molculas filamentosas de actina relacionadas con el filamento grueso por un proceso tipo rueda. Durante este acontecimiento, el filamento delgado se mueve unos 12 nm en relacin con el filamento grueso. 4. El ADP y el P son descargados, y la miosina se enlaza al ATP y el ciclo se repite. Este ciclo ocurre hasta 8 veces por segundo por la duracin de una sola contraccin. Al final de la contraccin el retculo sarcoplsmico no libera, sino que activamente remueve el calcio. (5)

15

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO

MECANISMO DE LA COAGULACIN SANGUNEA

La circulacin sangunea tiene lugar en un tipo de sistema cerrado altamente especializado en el cual el volumen de fluido circulante se mantiene prcticamente constante. ste es tambin un sistema en que la transferencia de solutos a travs de sus lmites es necesaria para su funcin. Como en cualquier sistema de tubos y caeras, pueden tener lugar fugas como resultado de varios tipos de lesiones, que deben ser reparadas para mantener un estado de homeostasis, es decir sin hemorragias. Esta seccin se centra en algunos de los procesos bioqumicos que intervienen en la hemostasis, en particular en la coagulacin de la sangre. (6) Procesos bioqumicos de la hemostasis La hemostasis implica que el proceso de formacin de cogulos (procoagulacin) est en equilibrio con los procesos que detienen la formacin de cogulos (anticoagulacin) y de su disolucin (fibrinlisis). El proceso de procoagulacin conduce a la produccin de fibrina a partir del fibringeno y a la agregacin de la fibrina en una malla insoluble, o cogulo, que cubre el rea de la lesin y evita que contine la prdida de sangre. Durante el mismo perodo de tiempo tiene lugar la agregacin de plaquetas en el lugar de la herida. La agregacin de plaquetas forma un tapn fsico para ayudar a detener la fuga. Los cambios morfolgicos que sufren las plaquetas provocan liberacin de sustancias qumicas que contienen y que ayudan en otros aspectos al proceso global. (6) La siguiente fase de la hemostasis, la fase de anticoagulacin, se inicia pronto en el proceso, tan pronto como es cinticamente posible, y evita la formacin excesiva de cogulo. Finalmente, el proceso de disolucin del cogulo o fibrinlisis tiene lugar cuando el propio vaso herido est suficientemente reparado para evitar la hemorragia. Muchas de las protenas que intervienen en el proceso de coagulacin de la sangre contienen dominios de tipo factor de crecimiento epidrmico (EGF) que pueden actuar directa o indirectamente para facilitara la regeneracin de las reas daadas de los vasos sanguneos. Todos estos procesos dinmicos y la mayora de ellos son impulsados por procesos cinticos y de accin de masas. De esta forma una fase no finaliza antes de que se inicie la otra fase. (6)

16

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO

Factores Primarios Factor Precalicreina (PK) Quiningeno de alto peso molecular (HMWK) Nombre(s) Comn(es) Factor Fletcher Va Intrnseca Caracterstica Funciona con el HMWK y el factor XII Co-factor en la activacin de la calicrena y el factor XII, necesario en la activacin del factor XIIa por el factor XI, precursor de la bradicinina (un potente vasodilatador e inductor de la contraccin del msculo liso Contiene el segmento gla de la Nterminal

Cofactor de activacin al Intrnseca contacto, Fitzgerald, factor Flaujeac Williams

I II III IV V

Fibringeno Protrombina

Ambas Ambas

Factor tisular Calcio Proacelerina, factor dbil, acelerador (Ac-) globulina VI (igual que el Acelerina Va) VII Proconvertina, acelerador de la conversin de la protrombina del suero (SPCA), cotromboplastina VIII Factor A antihemoflico, globulina antihemoflica (AHG) IX Factor de Navidad, factor B antihemoflico, compuesto de la tromboplastina plasmtica (PTC) X Factor Stuart-Prower XI Antecedente de la tromboplastina plasmtica

Extrnseca Ambas Ambas Cofactor protico Ambas Este es el Va, una redundancia del Factor V Extrnseca Endopeptidasa con residuos gla

Intrnseca

Cofactor protico

Intrnseca

Endopeptidasa con residuos gla

Ambas Intrnseca

Endopeptidasa con residuos gla Endopeptidasa

17

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO (PTA) XII Factor Hageman Intrnseca XIII Protransglutaminasa, factor Ambas estabilizante de la fibrina (FSF), fibrinoligasa Clasificacin Funcional de los Factores de coagulacin Proteasas Zimgenos de Actividades Serina Factor XII Se une al colgeno expuesto en el lugar de la lesin en la pared del vaso, activado por el quiningeno de alto peso molecular y la calicreina Factor XI Activado por el factor XIIa Factor IX Activado por el factor XIa en presencia del Ca2+ Factor VII Activado por la trombina en presencia del Ca2+ Factor X Activado en la superficie de plaquetas activadas por un complejo de tenasa y por el factor VIIa en presencia del factor tisular y Ca2+ Factor II Activado en la superficie de plaquetas activadas por el complejo protrombinasa Cofactores Actividades Factor VIII Activado por la trombina; el factor VIIIa es un cofactor en la activacin del factor X por el factor IXa Factor V Activado por la trombina; el factor Va es un cofactor en la activacin de la protrombina por el factor Xa Factor III (factor tisular) Una glicoprotena de la superficie celular subendotelial que acta de cofactor del factor VII Fibringeno Actividad Factor I Clivado por la trombina para formar un cogulo de fibrina Transglutaminasa Actividad Factor XIII Activado por la trombina en presencia del Ca2+; estabiliza el cogulo de fibrina a travs de uniones covalentes Protenas Actividades Reguladoras/Otras Factor von Willebrand Asociado con el tejido conectivo subendotelial; sirve como un puente entre la glicoprotena GPIb/IX de las plaquetas y el colgeno Protena C Activada a protena Ca por una trombina unida a una trombomodulina; luego degrada a los factores VIIIa y Va Protena S Acta como un cofactor de la protena C; ambas protenas contiene residuos gla Trombomodulina Protena en la superficie de las clulas endoteliales; se une a la trombina la cual luego activa a la protena C

Endopeptidasa Transpeptidasa

18

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO Antitrombina III El inhibidor de coagulacin ms importante, controla la actividad de la trombina y los factores IXa, Xa, XIa y XIIa

Las Cascadas de la Coagulacin

Las cascadas de coagulacin: la cascada intrnseca (la cual tiene menos importancia in vivo en comparacin a la cascada extrnseca) es iniciada cuando se realiza el contacto entre la sangre y las superficies expuestas de carga negativa. La va extrnseca es iniciada cuando ocurre una lesin vascular lo cual resulta en una exposicin del factor tisular (TF) (tambin identificado como el factor III), una glicoprotena subendotelial en la superficie celular que se une a fosfolpidos. La flecha punteada verde representa un punto de cruce entre la va extrnseca y la intrnseca. Las dos vas se convergen en la activacin del factor X a Xa. El factor Xa tiene un papel en la activacin del factor VII a VIIa como se demuestra por la flecha verde. El factor Xa activo hidroliza y activa la protrombina a trombina. La trombina puede por ende activar los factores XI, VIII y V lo cual ayuda a que proceda la cascada. Bsicamente, el papel de la trombina es convertir el fibringeno a fibrina y activar el factor XIII a XIIIa. El factor XIIIa (tambin llamado transglutaminasa) se une a polmeros de fibrina y as solidificando el cogulo. HMWK = quiningeno de alto peso molecular. PK = precalicreina. PL = fosfolpidos.

19

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO El Kallikrein-Kinin Sistema de Coagulacin El kallikrein-kinin sistema comprende un complejo de protenas que, cuando activado conduce a la liberacin de kinins vasoactivos. El kinins son liberados de alto peso molecular kininogen (HMWK) y de bajo peso molecular kininogen (LMWK) como consecuencia de la activacin de cualquiera de los tejidos kallikrein o plasma kallikrein. El kallekreins s existen en la pre-formas inactivas. El kinins estn involucrados en muchos fisiolgicos y patolgicos incluidos los procesos de regulacin de la presin arterial y el flujo (a travs de la modulacin de la reninaangiotensina va), la coagulacin de la sangre, la proliferacin celular y el crecimiento, la angiognesis, apoptosis, y la inflamacin. Kinin accin en las clulas endoteliales conduce a la vasodilatacin, el aumento de la permeabilidad vascular, la liberacin de activador tisular del plasmingeno (tPA), la produccin de xido ntrico (NO), y la movilizacin de cido araquidnico, fundamentalmente el resultado de la prostaciclina (PGI2) la produccin por las clulas endoteliales. Aunque las actividades de la kallikrein-kinin sistema estn involucrados en numerosos procesos, en esta seccin se ocupar slo con su funcin en la coagulacin de la sangre. Con respecto a la hemostasia ms importante es la bradiquinina kinin que se libera de HMWK. (7) Las dos formas de prekallikrein, plasma y tejidos, se derivan de diferentes los genes en diferentes cromosomas. El plasma kallikrein gen (smbolo KLKB1) est en el cromosoma 4q34q35 y el tejido kallikrein gen (smbolo KLK1) situado en el cromosoma 19q13.2q13.4. Estos dos son serina proteasas kallikreins cuyos principales sustratos son HMWK (plasma kallikrein) y LMWK (tejido kallikrein). Cundo plasma prekallikrein est activada para kallikrein que Cleaves HMWK en dos fases proceso que, en definitiva, libera bradiquinina. Bradiquinina es un 9-aminocido pptido vasoactivo que induce a la vasodilatacin y el aumento vasculares permeabilidad. Activado tejido kallikrein Cleaves lysyl-bradiquinina (tambin llamado kallidin) de LMWK. Lysyl-bradiquinina es bradiquinina con un residuo de la lisina en la N-terminal que un 10-aminocido pptido vasoactivo. Sus actividades son esencialmente idnticos a los de la bradiquinina. (7) Ambos HMWK y LMWK se derivan del mismo gen en el cromosoma 3q26qter que est compuesto de 11 exones. Exones 1 al 9 de codificar la cadena pesada de ambas kininogens. Exn 10 codifica bradiquinina, as como la luz de la cadena de HMWK. Exn 11 codifica la cadena de luz LMWK. La pesada cadena de la luz y la nomenclatura se refiere a la servidumbre-disulfuro de la estructura de cada kininogen despus de su a travs de la activacin por kallikrein escisin. (7) HMWK se considera una -globulina y se compone de seis reas funcionales. La protena que circula en el plasma como una sola cadena polipeptdica con un peso molecular de 88120 kDa depende el nivel de glucosilacin. El cadena pesada es de 64 kDa y contiene los dominios 1, 2 y 3 mientras que la cadena de luz es de 4556 kDa y comprende dominios 5 y 6. La cadenas pesadas y ligeras son unidos entre s a travs de dominio 4, que tambin contiene la secuencia de la bradiquinina. Dominio 1 contiene una baja afinidad de unin de calcio. Dominios 2 y 3 contienen secuencias de aminocidos (QVVAG) que inhiben la cistena proteasas. Dominio 3 tambin ha de plaquetas y clulas endoteliales vinculante actividad. Dominio de las secuencias de 5 ha heparina

20

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO vinculante, sitios de unin celular, propiedades y antiangiognicos. La unin de HMWK a las superficies de carga negativa se produce a travs de una regin de la histidina cadena de luz que se encuentra en dominio 5. 6 contiene el dominio prekallikrein y factor XI-sitios de unin. Al ser capaces de obligar a cargado a travs de superficies de dominio 5 y al mismo tiempo obligar factor XI y prekallikrein dominio a travs de 6, puede servir como HMWK cofactor en la activacin de contacto con el plasma. LMWK se considera una -globulina y tiene un peso molecular de 50 a 68 kDa. La estructura de LMWK es similar a la que de HMWK, sin embargo, la cadena de luz est a slo 45 kDa y no tiene ningn contacto activacin ni prekallikrein-sitios de unin. (7) El plasma kinin que forman el sistema se llama el sistema de contacto y de plasma se compone de factor XII, factor XI, prekallikrein y HMWK. Factor XII, prekallikrein, y HMWK saturably reversible y se unen a las clulas endoteliales, plaquetas y granulocitos en una reaccin dependiente de zinc. Cuando se hace de plasma contacto con una superficie de carga negativa, el factor XII se une y se autoactivated del factor XII (el "uno" significa el factor activado). Entonces el factor XIIa prekallikrein activa a kallikrein y kallikrein Cleaves HMWK liberacin bradiquinina. Existe tambin la activacin del factor de reciprocidad XII por kallikrein resultante en el sistema de amplificacin. La superficie real que conduce al factor XII se autoactivation desconocido sin embargo, varias sustancias fisiolgicas apoyar el proceso. Estos sustancias incluyen hematin, la piel, cidos grasos, los cristales de urato sdico, protoporfirina, sulfatides, heparinas, sulfatos condroitina, el cartlago articular, endotoxina, la L-homocistena, -amiloide y la protena. Una vez que el sistema de contacto se activa la va intrnseca (se describe a continuacin) se inicia. (7)

Cascada Intrnseca de la Coagulacin La va intrnseca (tambin llamada la va de activacin por contacto) es mucho menos significante en la hemostasis bajo condiciones fisiolgicas normales en comparacin a la va extrnseca. Sin embargo, durante un estado patolgico tal como la hiperlipidemia o una infiltracin bacteriana puede conllevar a la activacin de la trombosis a travs de la cascada de coagulacin de la va intrnseca. (7) La va intrnseca requiere de los factores de coagulacin VIII, IX, X, XI y XII. Tambin requiere de protenas tales como la precalicreina (PK) y el quiningeno de alto peso molecular (HK o HMWK), al igual que iones de calcio y fosfolpidos secretados por las plaquetas. Cada uno de los componentes de estas vas resulta en la conversin del factor X (inactivo) al factor Xa ("a" significa activo). La iniciacin de la va intrnseca ocurre cuando la precalicreina, quiningeno de alto peso molecular, factor XI y el factor XII son expuestos a una superficie de carga negativa. A esto se lo denomina como la fase de contacto y puede ocurrir como el resultado de una interaccin con los fosfolpidos (principalmente fosfotidiletanolamina, PE) de las partculas lipoprotenas circulantes tales como los quilomicrones, VLDL y LDL oxidada. Esta

21

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO es la base del papel de la hiperlipidemia en promover un estado pro-trombtico y en el desarrollo de la arterosclerosis. (7) La activacin de contacto de la va intrnseca tambin puede ocurrir en la superficie de las bacterias, y mediante la interaccin con el cido rico cristales, cidos grasos, protoporfirina, amiloide, y homocistena. De hecho, los niveles elevados de homocistena en la sangre han demostrado que son equivalentes con disfuncin cardiovascular. Por lo tanto, es importante garantizar que la funcin apropiada de la reaccin metionina sintasa se mantiene. Aunque sera suponer que una mayor ingesta de vitamina B12 debera conducir a Conversin de aumento de la homocistena en metionina, y por lo tanto reduce los niveles de circulantes de homocistena, estudios controlados han demostrado que esto no ocurrir. El ensamblaje de los componentes de la fase de contacto resulta en la conversin de la precalicreina a la calicreina, la cual a su vez activa al factor XII a factor XIIa. El factor XIIa puede entonces hidrolizar ms precalicreina a calicreina, estableciendo una recproca activacin de la cascada. El factor XIIa tambin activa al factor XI a factor XIa y conlleva a la liberacin de bradicinina, un vasodilatador potente, a partir del quiningeno de alto peso molecular. (7) En la presencia del Ca2+, el factor XIa activa al factor IX a factor IXa. El factor IX es una proenzima que contiene residuos -carboxiglutamato (gla) vitamina K-dependientes, cuya actividad de proteasas de serina es activada luego de que el Ca2+ se une a los residuos gla. Varias de estas proteasas de serina de la cascada (II, VII, IX y X) son proenzimas que contienen gla. El factor activo IXa cliva al factor X en una unin interna de arg-ile (R-I) resultando en su propia activacin al factor Xa. (7) La activacin del factor Xa requiere el ensamblaje del complejo de tenasa (Ca2+ y los factores VIIIa, IXa y X) en la superficie de las plaquetas activadas. Una de las respuestas de las plaquetas a su activacin es la presentacin de un fosfatidilserina (PA) y un fosfatidilinositol (PI) en sus superficies. La exposicin de estos fosfolpidos permite que se forme el complejo de tenasa. El papel del factor VIII en este proceso es de servir como un receptor, en la forma del factor VIIIa, para los factores IXa y X. El factor VIIIa se denomina un cofactor en la cascada de coagulacin. La activacin del factor VIII al factor VIIIa (el verdadero receptor) ocurre en la presencia de cantidades diminutas de trombina. Cuando la concentracin de trombina se incrementa, el factor VIIIa es clivado por la trombina e inactivado. Esta accin doble de la trombina, sobre el factor VIII, acta para limitar la formacin del complejo de tenasa y por ende, la extensin de la cascada de coagulacin. (7) Cascada Extrnseca de la Coagulacin El factor Xa activado es el sitio en el cual las cascadas de coagulacin intrnseca y extrnseca se convergen. La va extrnseca es iniciada en el sitio de la lesin en respuesta a la liberacin del factor tisular (factor III) y por ende, es tambin conocida como la va del factor

22

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO tisular. El factor tisular es un cofactor en la activacin catalizada del factor X por el factor VIIa. El factor VIIa una proteasa de serina que contiene un residuo gla, cliva al factor X en factor Xa de manera idntica a la del factor IXa en la va intrnseca. La activacin del factor VII ocurre a travs de la accin de la trombina o el factor Xa. La habilidad del factor Xa de activar al factor VII crea una asociacin entre las vas intrnseca y extrnseca. Una asociacin adicional entre las dos vas se da a travs de la habilidad del factor tisular y el factor VIIa de activar al factor IX. Se cree que la formacin del complejo entre el factor VIIa y el factor tisular es el paso principal en toda la cascada de coagulacin. La evidencia de esta declaracin nace del hecho que personas con deficiencias hereditarias en los componentes de la fase de contacto de la va intrnseca no exhiben problemas de coagulacin. Uno de los mecanismos ms importantes de la inhibicin de la va extrnseca ocurre en el complejo tisular factor-factor VIIaCa2+Xa. La protena, un inhibidor de la coagulacin asociado a una lipoprotena, LACI se une especficamente a este complejo. LACI tambin se denomina el inhibidor de la va extrnseca, EPI o factor tisular inhibidor de la va, TFPI y anteriormente se lo conoca como anticonvertina. LACI es compuesto de 3 dominios inhibidores de proteasas. El dominio 1 se une al factor Xa y el dominio 2 se une al factor VIIa pero slo en la presencia del factor Xa. (7) Activacin de la Protrombina a Trombina El punto en el cual las dos vas se convergen es en la activacin del factor X al factor Xa. El factor Xa activa a la protrombina (factor II) para convertirse en trombina (factor IIa). La trombina, a su vez, convierte el fibringeno a fibrina. La activacin de la trombina ocurre en la superficie de las plaquetas activadas y requiere de la formacin de un complejo de protrombinasa. Este complejo est compuesto de los fosfolpidos de las plaquetas: fosfatidilinositol y fosfatidilserina, Ca2+, factores Va y Xa y protrombina. El factor V es un cofactor en la formacin del complejo de protrombinasa y tiene un papel similar al del factor VIII en la formacin del complejo de tenasa. Como la activacin del factor VIII, el factor V es activado al factor Va a travs de cantidades diminutas y es inactivado por niveles aumentados de trombina. El factor Va se une a receptores especficos en la superficie de las plaquetas activadas y forma un complejo con la protrombina y el factor Xa. (7) La protrombina es una protena de cadena simple de 72,000 Daltons, que contiene diez residuos gla en la regin de su N-terminal. Dentro del complejo de protrombinasa, la protrombina es clivada en 2 sitios por el factor Xa. Este clivaje genera una molcula de trombina activa de 2 cadenas que contiene una cadena A y una cadena B las cuales estn unidas por una unin simple de disulfuro. (7) Adems de su papel en la activacin de la formacin del tampn de fibrina, la trombina juega un papel regulador importante en la coagulacin. La trombina se une con la trombomodulina presente en la superficie de las clulas endoteliales formando un complejo que convierte la protena C a la protena Ca. La protena S y la protena Ca son cofactores que degradan a los factores Va y VIIIa y as limitando la actividad de estos 2 factores en la cascada de la coagulacin.

23

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO La trombina tambin se une, resultando en la activacin de la sealizacin, a una clase de receptores acoplados a protenas G llamados receptores activados por proteasas (PARs), especficamente PAR-1, -3 y -4. Los PARs utilizan un mecanismo nico para convertir el producto del clivaje proteoltico extracelular a un evento de sealizacin intracelular. Los PARs llevan su propio ligando el cual se mantiene inactivo hasta que el clivaje por las proteasas libere al ligando, por ejemplo como es el caso de la trombina. El ligando liberado reacciona con un dominio de unin del ligante del PAR lo que resulta en la activacin de varias cascadas de sealizacin. Estas cascadas de sealizacin resultan en una liberacin aumentada de interleucinas, (ILs), IL-1 e IL-6, una secrecin aumentada de la molcula de adhesin intercelular-1 (ICAM-1) y la molcula de adhesin de la clula vascular-1 (VCAM-1). La sealizacin inducida por la trombina tambin resulta en un aumento en la activacin plaquetaria y en la adhesin de leucocitos. (7) La trombina tambin activa al inhibidor de fibrinlisis activado por la trombina (TAFI) y as modulando la fibrinlisis (degradacin de los cogulos de fibrina). El TAFI tambin se conoce como la carboxipeptidasa U (CPU) cuya actividad resulta en la eliminacin de las lisinas en la C-terminal de la fibrina parcialmente degradada. Esto conlleva a una falla en la activacin del plasmingeno, y as reduciendo la taza de la disolucin del cogulo de fibrina (esto se llama fibrinlisis). (7) Control de los Niveles de Trombina La incapacidad del cuerpo de controlar los niveles circulantes de la trombina activa puede resultar en graves consecuencias. Hay dos mecanismos principales por los cuales la actividad de la trombina es regulada. La forma de la trombina que predomina en la circulacin es la protrombina inactiva cuya activacin requiere de las vas de activacin de las proenzimas de la cascada de la coagulacin, descritas anteriormente. A cada paso de la cascada, los mecanismos de retroalimentacin regulan el balance entre las enzimas activas e inactivas. (7) La activacin de la trombina tambin es regulada por 2 inhibidores de trombina especficos. La antitrombina III es el ms importante debido a que tambin puede inhibir la actividad de los factores IXa, Xa, XIa y XIIa. La actividad de la antitrombina III es aumentada en la presencia de la heparina a travs de las siguientes maneras: la heparina se une a un sitio especfico en la antitrombina III, produciendo una conformacin alterada de la protena y la nueva conformacin tiene una afinidad ms alta para la trombina al igual que otros sustratos. Este efecto de la heparina es la base de su uso clnico como un anticoagulante. El activador de la heparina de la antitrombina III est presente como heparan y heparan sulfato en la superficie de las clulas endoteliales de los vasos. Es esta misma caracterstica que controla la activacin de la cascada de la coagulacin intrnseca. (7) Sin embargo, la actividad de la trombina es inhibida por la 2-macroglobulina, heparina cofactor II y la 1-antitripsina. Aunque la 1-antitripsina tiene un papel pequeo en la regulacin de la trombina, es el inhibidor principal de proteasas de serina en el plasma humano. Su

24

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO importancia fisiolgica se ilustra por el hecho de que la deficiencia de esta protena juega un papel en el desarrollo del enfisema. (7) Protena C: Control de la Coagulacin y Sepsis La protena C (PC) es una serina proteasa tripsina-que sirve como un regulador importante del proceso de coagulacin. La protena S (PS) sirve como un cofactor para las funciones de la protena C activada (abreviado aPC, y tambin de APC). El gen de la protena C humana (gen smbolo = PROC) se encuentra en Cromosoma 2p1314 y se compone de 9 exones que codifican una protena de 419 aminocidos. Protena C pasa por una serie de modificaciones posttraduccionales que incluyen varias sitios de N-glicosilacin en alternancia y -carboxilacin de nueve residuos de glutamina (residuos glaciares) en el extremo amino terminal. Estos glaciares residuos en el extremo amino terminal de la PC constituyen el "dominio gla" de la protena. Adems del dominio gla, PC contiene dos factor de crecimiento epidrmico-como regiones (dominios EGF), el dominio de la proteasa serina, y un pptido de activacin. (7) Divisin de PC de trombina elimina el pptido de activacin de generacin aPC. Cuando se activa a travs de la hendidura por la trombina, aPC se unir ambos factor Va y el factor VIII en las enzimas inactivas. Esto resulta en la la terminacin de la funcin del VIII como el andamiaje para la formacin de la tenasa compleja y Va como un cofactor en la conversin de protrombina en trombina en el complejo protrombinasa. El efecto neto, a nivel de la coagulacin, de la la activacin de la PC es la terminacin de nuevas subidas en la produccin de trombina y un alto a la formacin de ms cogulos de fibrina. La activacin de la PC, se produce trombina en la superficie del endotelio cuando se une a la trombina y la trombomodulina "captura" de circulacin PC. Despus de la activacin, aPC interacta con PS y rompe VIIIa y Va. (7) La importancia de la aPC en el control de la actividad de Virginia se puede ver en el hypercoagulopathy (trombofilia) se refiri a como el factor V Leiden. Este trombofilia es causada por una mutacin en el gen del factor V que resulta en una protena que no es realmente degradada por aPC. El factor V Leiden es la ms comn de trombofilia hereditaria en la poblacin caucsica de origen europeo. En general, el 5% de la poblacin mundial alberga la mutacin del factor V Leiden. La sntomas del factor V Leiden son la trombosis venosa profunda (TVP) y pulmonar embolia, los cuales pueden ser fatales. De hecho se estima que hasta en el 30% de los pacientes que sufren de TVP o embolia pulmonar son portadores de el factor V Leiden, mutacin. La prdida de la protena C en la masiva y por lo general letales complicaciones trombticas en nios con deficiencia homocigota de PC. En individuos que son heterocigotos para las deficiencias de PC hay un mayor riesgo para la trombosis venosa. (7) Aunque el papel de aPC en la terminacin de la coagulacin es muy importante que tambin sirve muchas funciones adicionales que modifican el inflamatoria procesos que ocurren en la vasculatura. Activado PC se une al endotelio receptor de la protena C (EPCR) y conduce a la activacin de PAR-1 (vase ms arriba para el papel de la trombina en la activacin de PAR), que

25

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO provoca citoprotectora y las respuestas anti-inflamatorios en las clulas endoteliales. Las funciones EPCR como co-receptor para la ruptura de APC-mediada y la activacin de PAR-1. El EPCR se encuentra tambin en monocitos, neutrfilos, fibroblastos y queratinocitos. Los efectos citoprotectores provocado por la activacin de aPC de PAR-1 incluyen la proteccin de la clula endotelial barrera y la induccin de las vas de sealizacin anti-apoptticos, as como la expresin eNOS. Adicional endotelial respuestas a la activacin de aPC de PAR-1 se producen a travs de la inhibicin de la expresin y las acciones de la potente proinflamatorias factor de transcripcin NFB. La supresin de NFB accin regulacin a la baja en los resultados de la sntesis de xido ntrico endotelial pro-inflamatorias citocinas como la IL-6 e IL-8, la quimiocina MCP-1 (quimiotctica de monocitos protena-1), y la molcula de adhesin celular ICAM-1 (de adhesin intercelular molcula-1). (7) La unin de aPC a la EPCR en monocitos conduce a la inhibicin de la sntesis y liberacin de citoquinas pro-inflamatorias (por ejemplo, la IL-1, IL-6 y TNF) de estos clulas que resulta de la inhibicin de las acciones de NFB. monocitos adicional efectos de aPC incluyen disminucin del factor tisular (factor III) de la expresin y la inhibicin de la liberacin de las quimiocinas MIP-1 (macrfagos inflamatorios protena-1) y MCP-1. Los efectos anti-inflamatorios y citoprotectores de aPC son tan potentes que el frmaco Xigris (dotrecogin alfa) es aprobado por los Estados Unidos FDA recombinante aPC utiliz en el tratamiento de la sepsis. La sepsis se inicia por la infeccin por el que microbios y / o toxinas microbianas liberadas a la sangre y desencadenar una sistmico activacin incontrolada tanto de la cascada de la coagulacin e inflamatorios vas. La sepsis es la principal causa de muerte en pacientes de cuidados intensivos que no son los pacientes coronarios. La sepsis grave afecta a ms de 700.000 personas en los Estados Unidos cada ao con una tasa de mortalidad de 30% a 50%. Adems de su eficacia demostrada en el tratamiento de la sepsis, aPC actualmente se est investigando para el tratamiento de numerosas condiciones. Estos incluyen el tratamiento de una carrera ya que en modelos de ratn anti-inflamatorios y acciones anticoagulante de la aPC tienen la ventaja adicional de ejercer efectos neuroprotectores. lesin por isquemia-reperfusin (I / R) se produce cuando los tejidos temporalmente privados de sangre oxigenada (isquemia) y el retorno de la sangre flujo (reperfusin) se traduce en daos al tejido. El dao secundario de I / R es una consecuencia de las intensas reacciones inflamatorias que se inician en respuesta a la anoxia. El dao de reperfusin puede ocurrir en los tejidos u rganos que no se vieron afectadas por el episodio isqumico inicial. En modelos de ratn que tiene Se ha demostrado que la infusin de aPC atena el dao oxidativo de los tejidos isquemia y este efecto puede deberse a la inhibicin directa de aPC-mediada de activacin de los neutrfilos. Otras afecciones que pueden tratarse con aPC infusin incluyen la lesin pulmonar aguda, asma, y la pancreatitis aguda. Los estudios han tambin demostr que aPC puede promover la cicatrizacin de heridas y la angiognesis. (7) Activacin del Fibringeno a Fibrina

26

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO El fibringeno (factor I) consiste en 3 pares de polipptidos (*A+*B+*+)2. Las 6 cadenas estn covalentemente unidas cerca de sus N-terminales a travs de uniones disulfuro. Las porciones A y B de las cadenas A y B constituyen los fibrinopptidos, A y B, respectivamente. Las regiones de fibrinopptidos del fibringeno contienen varios residuos de glutamato y aspartato impartiendo una alta carga negativa a esta regin y promoviendo la solubilidad del fibringeno en el plasma. La trombina activa es una proteasa de serina que hidroliza al fibringeno en cuatro uniones arg-gly (R-G) entre el fibrinopptido y las porciones a y b de la protena. (7) La liberacin de los fibrinopptidos mediada por la trombina, genera monmeros de fibrina con una estructura de subunidades ()2. Estos monmeros se agregan espontneamente en un arreglo regular, formando un cogulo de fibrina relativamente dbil. Adems de la activacin de la fibrina, la trombina convierte el factor XIII al factor XIIIa, una transglutaminasa altamente especfica que introduce uniones covalentes entre el nitrgeno de amidas de las glutaminas y el grupo -amino de las lisinas pertenecientes a los monmeros de fibrina. (7)

Disolucin de los Cogulos de Fibrina La degradacin de los cogulos de fibrina es la funcin de la plasmina, una proteasa de serina que circula como la proenzima inactiva plasmingeno. Cualquier plasmina libre circulante es rpidamente inhibida por la antiplasmina 2. El plasmingeno se une al fibringeno y a la fibrina, y as se incorporan en un cogulo. El activador tisular del plasmingeno (tPA) y, a un grado menor, la urocinasa son proteasas de serina que convierten el plasmingeno a plasmina. El tPA inactivo es liberado de las clulas endoteliales vasculares luego de una lesin; se une a la fibrina y es consecuentemente activado. La urocinasa es producida como el precursor de la prourocinasa por las clulas epiteliales que recubren los conductos excretorios. El papel de la urocinasa es activar la disolucin de los cogulos de fibrina que pueden depositarse en estos conductos. (7) La tPA activa cliva al plasmingeno para producir plasmina la cual digiere a la fibrina; esta degradacin resulta en un producto soluble al cual ni la plasmina ni el plasmingeno se pueden unir. Luego de la liberacin del plasmingeno y la plasmina, stos se inactivan rpidamente por sus respectivos inhibidores. La inhibicin de la actividad de la tPA resulta de la unin de especficas protenas inhibidoras. Por lo menos 4 diferentes inhibidores han sido identificados, dos de los cuales son inhibidores de los activadores del plasmingeno tipo I (PAI-1) y tipo 2 (PAI-2) tienen la mayor importancia fisiolgica. (7)

27

Facultad de Farmacia y Bioqumica BIOQUMICA II - SEMINARIO

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

1. Fisiologa de la visin. [en lnea] Fecha de acceso: 06/11/11. Disponible en: http://usuarios.discapnet.es/ojo_oido/el_ojo_cuatro.htm 2. Escuela de ciencias bsicas de tecnologa y Ingeniera, Biologa. Captulo 3. Fecha de acceso 06/11/11. Disponible en: http://www.google.com.pe/imgres?imgurl=http://www.unad.edu.co/curso_biologia/i magenes/anat_ojo2. 3. La deficiencia visual; Elvira Martn Hernndez, Carlos Manuel Santos Plaza; fecha de acceso 06/11/11. Disponible en: http://www.google.com.pe/imgres?imgurl=http://www.once.es/otros/sordoceguera/ HTML/capitulo01_archivos/image003.jpg&imgrefurl=http://www.once.es 4. Jimmy Wales, Wikipedia; Fecha http://es.wikipedia.org/wiki/Cristalino de acceso: 06/11/11. Disponible en:

5. ROSKOSKI, R. (1998). Bioquimica. (1, ed.). Mxico: Mc Graw-Hill . p: 497-500. 6. DEVLIN, T. (2006). Bioqumica y aplicaciones clnicas. (5, ed.). Espaa: Revert. p: 990, 991 1001,1031,1032. 7. Michael Kin; School of medicine; Fecha de acceso: 09/11/11. http://themedicalbiochemistrypage.org/spanish/blood-coagulation-sp.html Disponible en:

28