CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO NO: 161

IGNACIO LOPEZ RAYON

PRACTICAS DE BACTERIOLOGIA

DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS

ALUMNO: ISAIAS ARIAS VILCHIS

INTRODUCCION STHAPHYLOCOCCUS AUREUS

El Staphylococcus aureus es una bacteria que debe su nombre a su tendencia a agruparse formando racimos (en griego, Staphyl quiere decir racimo), a su forma esfrica (denominamos "cocos" a las bacterias de forma esfrica) y al color amarillo dorado que, a veces, tienen sus colonias cuando se le cultiva. SARM son las iniciales de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina. El Staphylococcus aureus tiene como principal reservorio en la naturaleza al ser humano. Se encuentra frecuentemente colonizando diversos lugares de la superficie externa de nuestro organismo; principalmente la piel y la mucosa de las fosas nasales, pero tambin puede hallarse en los cabellos, las uas, etc. La mayora de las personas que lo tienen son portadores sanos de este microorganismo, y la difusin de esta bacteria de una persona a otra puede hacerse por diferentes mecanismos, como el contacto directo (frecuentemente a travs de las manos) o por objetos contaminados (ropas, por ejemplo). En otras ocasiones, el estafilococo puede penetrar en nuestro organismo y ocasionar infecciones. Esto se ve favorecido por ciertas alteraciones de los mecanismos de defensa de la persona y por interrupciones en la continuidad de la piel (como sucede por ejemplo, cuando hay heridas o cuando se insertan catteres). A partir de la dcada de los cuarenta, el tratamiento de las infecciones producidas por el Staphylococcus aureus se hizo con penicilina G. Pero desde entonces se han hecho cada vez ms frecuentes unas cepas (variedades de la bacteria) que son resistentes a la penicilina, ya que son capaces de producir una enzima (betalactamasa) que la degrada, hacindola inactiva. En la actualidad, los Staphylococcus aureus resistentes a la penicilina predominan en casi todo el mundo, y por ello, este medicamento ya casi no se usa para tratar sus infecciones. Poco despus de comenzarse a utilizar la penicilina se introdujeron otros

antibiticos similares a ella, pero que eran capaces de resistir la accin de las betalactamasas del estafilococo, y que por tanto eran eficaces en el tratamiento de las infecciones producidas por Staphylococcus aureus resistentes a la penicilina. Uno de ellos es la meticilina. Pero desafortunadamente, han aparecido cepas tambin resistentes a la meticilina; y stas son las que conocemos como SARM. Estas cepas, adems de a la penicilina y a la meticilina, suelen ser resistentes a muchos otros antibiticos. Para el tratamiento de sus infecciones se dispone an de algunos antibiticos efectivos (no muchos), pero suelen tener que administrarse por va intravenosa y no suelen ser tan inocuos como la penicilina. Manitol Salado Agar. Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos. Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir de muestras clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros materiales de importancia sanitaria. Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas de Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar. Fundamento Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo. Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.

Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color. Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o prpura. Frmula (en gramos litro) Extracto de carne Pluripeptona d-Manitol Cloruro de sodio Agar Rojo de fenol por 1.0 10.0 10.0 75.0 15.0 Instrucciones

Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en 0.025 autoclave a 118-121C durante 15 minutos. pH final: 7.4 0.2

Siembra Sembrar en superficie un inculo denso de la muestra. Incubacin De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis. La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin durante 3 das a 32 C, en aerobiosis. Resultados Microorganismos Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Caractersticas del medio Medio preparado: rojo Crecimiento Excelente Bueno Inhibido Inhibido Caractersticas de las colonias Amarilla Roja Inhibido Inhibido

Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C. Medio preparado: a 2-8 Cfono y Fax: 53-84-20-95 53-84-20IFICACIONES El Agar Sal y Manitol es utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos a partir de muestras clnicas y diversos materiales. El Agar Sal y Manitol fue formulado por Chapman para obtener el aislamiento de estafilococos, inhibiendo el crecimiento de otras bacterias al utilizar una alta concentracin de sal. Al adicionar cloruro de sodio al 7.5% al Agar Rojo de Fenol y Manitol, observ un abundante crecimiento de cepas patgenas de estafilococos (coagulasa positivos) que formaban colonias y halos amarillos a diferencia de las cepas no patgenas que dan colonias pequeas de color rojo y sin cambio en el color del medio. En este medio las peptonas y el extracto de carne proporcionan la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales. El D.manitol es el carbohidrato. La alta concentracin de cloruro de sodio inhibe el crecimiento de flora acompaante. El rojo de fenol acta como indicador de pH. El agar es adicionado como agente solidificante. Digerido Pptico de Tejido Animal 5.0 Cloruro de Sodio 75.0 Digerido Pancretico de Casena 5.0 D-Manitol 10.0 Extracto de Carne 1.0 Rojo de Fenol 0.025 Agar Bacteriolgico 15.0 pH 7.4 0.2 Mtodo: Suspender 111 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121C (15 libras de presin) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50C y vaciar en placas de Petri estriles. Procedimiento: 1. Inocular las placas por el mtodo de estra. 2. Incubar las placas a 35 2 C durante 24 a 48 horas y observar el desarrollo. La morfologa colonial tpica se describe en la siguiente tabla: S. aureus Colonias pequeas a medianas con zonas amarillas alrededor Micrococos Colonias grandes de color naranja a blanco Otros estafilococos

Colonias pequeas de color rojo sin cambio en el color del medio Bacterias Gram negativas Inhibidas o muy poco desarrollo Estreptococos Sin crecimiento Almacenamiento: 2-30C. Caducidad: 5 aos en frasco cerrado. Presentacin: Frasco de 450 g Caja con 20 sobres para un litro Medio preparado en paquete con 10 placas Bibliografa: 1. Chapman, G.H. The significance of sodium chloride in studies of staphylococci. J. Bacteriol. 50:201 2. Kloos, W.E., and T.L. Bannerman. 1995. 1995. Staphylococcus and Micrococcus. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C., Tenover, and R.H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology. 6th ed. American Society for Microbiology. Washington, D.C. 3. United States Pharmacopeial Convention. 1995. The United States pharacopeia, 2nd ed. The Unites States Pharmacopeial Convention, Rockville, MD. 4. Hitchins, A.D., T.T. Tran, and J.E. MacCarron. 1995. Microbiology methods for cosmetics, p. 23.01-23.12. In Bacteriological analytical manual

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO NO: 161

IGNACIO LOPEZ RAYON

PRACTICAS DE BACTERIOLOGIA

DE STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS

ALUMNO: ISAIAS ARIAS VILCHIS

INTRODUCCION STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIS

Especies
Gnero y especie: Staphylococcus epidermidis Otros nombres: Micrococcus epidermidis, Albococcus epidermidis, Staphylococcus epidermidis albus (2)
NCBI: Taxonoma

Descripcin y significado
Staphylococcus epidermidis es positivo y estafilococos coagulasa-negativos gramo (4). Por lo general vive en la piel humana y de la mucosa y la mayora de las infecciones comunes en los catteres y los implantes (5). S. epidermidis es uno de los cinco organismos ms comunes causantes de infecciones noscomial debido al aumento en el uso de biomateriales en el entorno clnico (8). El patgeno nosocomial causa infecciones en las vlvulas protsicas, derivaciones de lquido cefalorraqudeo, prtesis articulares de prtesis vasculares, vlvulas, y en las heridas postoperatorias y el tracto urinario. Tambin es el agente ms frecuentemente encontrado en la sangre de los pacientes de trasplante de mdula sea y en los catteres venosos centrales para los pacientes de la nutricin parenteral total (4). Cepa de S. epidermidis de las coanas adultos sanos muestran que hay muchos tipos del organismo de cada individuo (9). Un comn S. epidermidis cepa RP62a (ATCC 35984) fue aislado en Memphis, Tennessee en 1979-1980 en una amplia difusin de la sepsis por catter intravascular. RP62a es una cepa que produce lodo, crece colectivamente y de forma biofilm. El tratamiento de S. epidermidis infecciones causadas por biopelculas con antibiticos es a menudo ineficaz y resulta en la necesidad de extraer los implantes (5). Otra cepa es S. epidermidis ATCC 12228, que no producen biofilm (7). La capacidad de producir limo permite al patgeno a permanecer en biomateriales. Las diferentes cepas de S. epidermidis se pueden distinguir por si o no producir lodo. En los laboratorios clnicos, S. epidermidis infecciones son estudiados por el uso de antibiogramas, biotipificacin, perfiles plasmdicos y la produccin de lodo, mientras que en la investigacin, fagotipado, serotipificacin, limitar el anlisis de enzimas y ADN-hibridacin de ADN se utilizan (4).

Staphylococcus epidermidis es a menudo comparado con Staphylococcus aureus. Estas bacterias son las dos principales patgenos en el gnero por el milln de infecciones graves causadas en los hospitales por ao. S. epidermidis es la especie dominante, que vive principalmente en la piel, mientras que S. aureus vive principalmente en las superficies mucosas. Dado que estas especies son la resistencia a muchos antibiticos y antimicrobianos, los restantes nico tratamiento para la mayora de estos estafilococos es glucopptido vancomicina antibiticos, sin embargo, una cepa resistente a la vancomicina de S. aureus se encontr recientemente (7). Un tema controvertido en S. epidermidis sostiene o no todas las cepas tambin pueden causar enfermedad y si un genotipo especfico determina una enfermedad especfica (6).

Estructura del genoma

escopeta mtodo al azar fue utilizado por completo la secuencia del genoma de 2,6 Mb ~ S. epidermidis RP62a en el Instituto de Investigacin Genmica (TIGR) (7). longitud RP62A de cromosomas es 2.616.530 pares de bases, contiene 32.10% de contenido de G + C, 6 operones rRNA y plsmido con 28.080 pb y 32% el contenido de G + C (11). Dos plsmidos vSe1 y vSe2 fueron identificados en el RP62a cepas y ATCC 12228 y tienen genes phrophage integrasa. Los genes del plsmido vSe1 tienen para la resistencia, mientras que el cadmio un sortase segunda cepa especfica y dos protenas de superficie LPXTG adjunto es codificada por vSe2 de ATCC 12228 (7). S. epidermidis genoma RP62A se compar con ATCC 12228 genoma para analizar y descubrir la evolucin de la virulencia y la resistencia de ellos. Las partes nonsyntenic de las islas del genoma es donde las diferencias de resistencia y patogenicidad se encuentran. Estafilococos y bacterias grampositivas de bajo contenido GC asistida en el cambio de su virulencia y resistencia. El opern de la PAC que es el factor de virulencia en la parte superior Bacillus anthracis tambin se encuentra en S. epidermidis (7). Cuando todo el genoma de S. aureus y S. epidermidis se analiza que mostr que en general son syntenic, pero con diferencias en las islas del genoma, profago integrado, elementos IS, transposones compuestos, y los plsmidos integrado (la enfermedad y la virulencia). TIGR encontrado un genmica vSa nueva isla que se encuentra en todos los S. aureus y S. genomas epidermidis (7).

La estructura celular y el metabolismo

En comparacin con otras bacterias, como Micrococcus, S. 'De la pared celular epidermidis es mucho ms fuerte. La adicin de lisostafina puede diferenciar S. epidermidis de Micrococcus. Micrococcus es ms probable que lisar mientras que la pared celular de S. epidermidis contiene las propiedades qumicas del peptidoglicano que impide la lisis. Hay que cortar las endopeptidasas-glicina bonos glycl en el o hexpeptide crossbridge penta del peptidoglicano de S. epidermidis. Las cepas que contienen serina en los puentes interpeptide son ms resistentes a la lisis (4). La pared celular de los estafilococos contienen cidos teicoicos que estn conectados con el peptidoglucano por enlaces covalentes. Los cidos teicoicos estn compuestos de glicerol o ribitol que estn conectadas por enlaces fosfodister. Son solubles en agua compuesto por polmeros de 3050% de los componentes en seco de la clula. S. aureus y S. epidermidis se distingue por tener ribitol o glicerol. S. epidermidis ha glicerol cido residuos glucosilo teicoicos y S. aureus ha de N-acetilglucosamina cido teicoico ribitol (4). S. epidermidis es capaz de crecer utilizando la glucosa anaerbicamente pero no puede crear coagulasa o manitol fermentar. La mayora de las cepas de S. epidermidis hacer acetona, fosfatasa y reducir el nitrato. Con el oxgeno, todas las cepas pueden producir cido cuando se expone a la glucosa, fructosa, maltosa, sacarosa, y el glicerol y el 70% -90% con la galactosa, manosa, y la lactosa. El cido no puede formarse a partir de manitol, trehalosa, ramnosa, xilosa, arabinosa o (4).

Ecologa
El entorno natural de S. epidermidis es el cuerpo humano y por lo general se origina en la enfermedad. Dado que la bacteria suele vivir en la piel y fosas nasales de todos los seres humanos y es un patgeno nosocomial, es imporant para poder identificar las cepas especficas. S. epidermidis es el ms comn de estafilococos en la piel humana. Adems, la S. epidermidis tambin cubre el 90% -100% de los estafilococos en las fosas nasales de S. aureus no est presente. Cuando S. aureus est presente la S. epidermidis cantidad disminuye drsticamente (4). La formacin de biofilm permite S. epidermidis para unir y hacer crecer en los dispositivos biomdicos y se liberan en la sangre para infectar a nuevas reas (8).

Patologa
El incrementar el uso de catteres intravasculares ha provocado un aumento similar en S. epidermidis infecciones. El incremento provoca un problema, ya

que S. epidermidis es resistente a la meticilina y las penicilinas de todo, penems, carbapanems, y las cefalosporinas que se utilizan comnmente los antibiticos (3). S. epidermidis tambin se ha encontrado para ser ms resistentes a los antibiticos de otras especies (4). Aunque no hay una viruelence factores especficos de S. epidermidis, la capacidad de formar biofilm es uno de los factores de virulencia (5,6). El biofilm permite que las clulas bacterias se adhieran a un inerte o zonas de vida (5). Cuando se ha formado un biofilm se vuelve ms difcil de tratar ya que las clulas dentro de la biopelcula estn protegidos de los antibiticos y el sistema inmune (5). Biofilm tambin libera una respuesta inmune del husped frente a los antgenos que impide la remocin de la biopelcula y tambin puede dar lugar a daos en los tejidos (9). La bacteria puede ser liberada en la sangre de biopelculas y empezar nuevas infecciones por el apego a los dispositivos mdicos, por lo tanto los dispositivos debern ser retirados (8). Algunas estrategias de prevencin de las infecciones son proporcionar tratamiento antibitico para cubrir prohylatic insercin quirrgica de temporales dispositivos intravasculares. Tambin hay informes que advierten de no utilizar profilcticos de antibiticos, en especial la vancomicina para la dilisis. tcnicas aspticas deben ser utilizados para las infecciones del catter para evitar la contaminacin. Las nuevas tcnicas se concentran en las barreras fsicas elctricas para la colonizacin y el uso de biomateriales con agentes antimicrobianos que ya estn dentro. Sin embargo, estos nuevos mtodos no han sido juzgados en el mbito clnico (9).

Aplicacin a la Biotecnologa
S. epidermidis contiene un gen de la lipasa que puede incrementar la actividad de la lipasa y mejorar la especificidad del sustrato con el uso de mutagnesis dirigida. tipo salvaje y los genes mutantes (M415A y V6491) son capaces de hacer steres diferentes sabores en una solucin acuosa. componentes aromatizantes se hacen a menudo por los steres. Se utilizan en productos con sabor a frutas, repostera, vinos y productos lcteos. Sin embargo, han sido eliminados de los sistemas alimentarios importantes porque son caros. Mediante el uso de materias primas naturales, tales como los cidos grasos y los alcoholes, los steres de sabor se puede hacer ms barato. Las lipasas de S. epidermidis son capaces de producir steres sin el uso de disolventes orgnicos que es una ventaja. Cuando disolventes orgnicos no se utilizan, la toxicidad y la inflamabilidad se pueden prevenir. Adems de simplificar la purificacin del producto, sino que tambin pueden formar diferentes tipos de steres tales como steres de cadena media, steres geranilo y steres saturados y pueden ser diseados para formar steres de cadena corta y otros cidos grasos (10).