UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

CONTROL DE CALIDAD DE DROGAS VEGETALES

Mg. Q.F. MARILU ROXANA SOTO VSQUEZ Docente de las ctedras de Farmacognosia y Farmacobotnica msoto@unitru.edu.pe

Las drogas vegetal Ocupan un lugar importante en el comercio de medicamentos Preparados fitoteraputicos
M O N O G R A F I A F A R M A C O P E A surge

A NIVEL MUNDIAL

La necesidad de garantizar su control de calidad con aplicaciones de tcnicas modernas y el uso de patrones adecuados.

DROGA VEGETAL

CALIDAD

SEGURIDAD EFICACIA

CONTROL DE CALIDAD DE PLANTAS MEDICINALES

ORIGEN
CULTIVO

RECOLECCIN CONSERVACIN
ALMACENAMIENTO

CONTROL DE CALIDAD DE DROGAS VEGETALES

1. CONTROL DE IDENTIDAD ENSAYOS BOTNICOS -EXAMEN ORGANOLPTICO -EXAMEN MACROMORFOLGICO -EXAMEN MICROMORFOLGICO ENSAYOS FISICOQUMICOS - CUALITATIVOS 2. CONTROL DE CALIDAD ENSAYOS FISICOQUMICOS - GENERALES - CUANTITATIVOS 3. CONTROL DE PUREZA - AUSENCIA DE ELEMENTOS EXTRAOS - DETERMINACIN DE PESTICIDAS - DETERMINACIN DE METALES PESADOS - DETERMINACIN DE SUSTANCIAS RADIACTIVAS - DETERMINACIN DE CONTAMINACIN MICROBIANA

F A R M A C O P E A

M O N O G R A F A

CONTROL DE IDENTIDAD

ENSAYOS BOTNICOS

PERMITE CONFIRMAR LA IDENTIDAD DE LA DROGA DETECTANDO POSIBLES FALSIFICACIONES COMPRENDE

EXAMEN ORGANOLPTICO

EXAMEN MACROMORFOLGICO

EXAMEN MICROMORFOLGICO

CONTROL DE IDENTIDAD
I.- ENSAYOS BOTNICOS
1.1. EXAMEN ORGANOLPTICOS
aromtico, aliceo, alcanforceo, nauseabundo, desagradable, a especia, etc. Olores caractersticos o suigeneris como: la menta, la canela, ans.

OLOR

COLOR

polvos de hojas, sumidades y tallos son de color verde cortezas y races son de color marrn oscuro o marrn rojizo.

SABOR

dulce, cido, salino, astringente, punzante, nauseabundo, aromtico, etc.

COLOR
ROJO: QUINA CASTAO: CANELA

SABOR

OLOR

ANARANJADO: RUIBARBO BLANCO: GOMA ARBIGA)

Dulce: regaliz Amargo: nuez vmica, quina, genciana, acbar. Aromtico: canela, clavo

Plantas con aceites esenciales: Menta, hinojo, canela, romero, eucalipto, ans

CONTROL DE IDENTIDAD

I.- ENSAYOS BOTNICOS

1.2. EXAMEN MACROMORFOLGICO Los caracteres macroscpicos o macromorfolgicos de una droga son determinados en cada rgano se conocen examinando sus caractersticas tpicas como por ejm: la forma y tamao, las marcas externas y su color.

CARACTERES GENERALES DE CADA RGANO DE LA PLANTA

TALLOS

tipo: leoso o herbceo, erecto o rastrero, redondeada Forma del limbo; tipo de nerviacin, presencia o no de pelos; textura, superficie Nmero de piezas del cliz y de la corola Tipos; forma y dimensiones; caractersticas del pericarpio, dehiscencia.

HOJAS

INFLORESCENCIA Disposicin de flores; presencia o no de brcteas FLORES FRUTOS

SEMILLAS CORTEZA LEO

RGANOS SUBTERRANEOS DROGAS NO ORGANIZADAS

Tamao, color y forma; presencia o no de pelos Color; estriaciones; arrugas; fractura Zonas de crecimiento; radios medulares; vasos; fractura
Forma; aspecto de la superficie; caractersticas del corte transversal; consistencia Aspecto, coloracin: propiedades organolpticas.

CONTROL DE IDENTIDAD
I.- ENSAYOS BOTNICOS
1.3. EXAMEN MICROMORFOLGICO

El examen micromorfolgico es indispensable para confirmar la identidad de la droga y descartar la presencia de posibles adulterantes.
CORTES HISTOLGICOS

DROGAS PULVERIZADAS

CORTES HISTOLGICOS
DROGAS ORGANIZADAS Y NO PULVERZADAS

Estructura tpica (Reconocimiento ms fcil)

ENTERAS O TROCEADAS

Estructura no organizada (Reconocimiento ms difcil) Ejm: goma arbiga

Los estudios histolgicos se llevan a cabo mediante cortes transversales o longitudinales efectuados mediante el micrtomo, montados con tcnicas de aclarado y coloracin. REACTIVOS PARA ACLARAR(hojas y ptalos): hidrato de cloral, potasa alcohlica al 5%, lactoferol, hipoclorito de sodio. Los rganos oleaginosos(semillas) se desengrasan previamente introduciendo en alcohol. REACTIVOS DE MEMBRANA .Floroglucinol = colorea en rojo los tejidos lignificados Cloroioduro de zinc = azul violeta los tejidos celulsicos y en amarillo marrn los lignificados y suberificados.

PRINCIPALES CARCTERSTICAS ANATOMICAS A OBSERVAR

HOJA

Clulas epidrmicas, tejido parenquimtico, presencia de estomas y pelos o tricomas.

EPIDERMIS FOLIAR DE Neirium olander Laurel rosa

Nymphaea: hoja epistomtica Dorsiventral. Lirio de agua

HOJA

Tricomas glandulares del Pelargonium hortorum

Pelargonium hortorum

estoma en vista superficial (MEB)

Pelos urticantes (emergencias) en Urtica dioica, ortiga

Urtica dioica, ortiga

PRINCIPALES CARCTERSTICAS ANATOMICAS A OBSERVAR

RACES Y TALLOS (Epidermis, sber, elementos esclerificados en el parenquima cortical)
Transcortes de tallo primario de Tilia (tilo, Dicotilednea): vista general y detalle

Zea mays

Transcorte de raz en Zea mays

CORTEZA: Caractersticas del sber, elementos esclerosos y elementos secretores

FRUTOS Y SEMILLAS:ESTRUCTURA DEL PERICARPIO Y TEGUMENTO

Soja: fruto - corte transversal - corte longitudinal

DROGAS PULVERIZADAS
En la droga pulverizada muchas clulas estn rotas excepto las paredes lignificada. Se puede encontrar tambin fragmentos de almidn, cristales de oxalato de calcio, aleurona, etc)
El examen microgrfico de las drogas pulverizadas

elementos celulares
se basa en el estudio de

Granos de fcula Granos de aleurona Cristales Grasas y esencias

contenido celular

Elementos conductores: vasos y traquedas Clulas epidrmicas Clulas de parnquima Clulas de colnquima Clulas de sber Clulas de esclernquima

GRANOS DE FCULA

GRANOS DE ALEURONA

Granos de almidn de papa

aleurona de un grano de trigo

CRISTALES

GRASA Y ESENCIAS

Prismas de oxalato clcico en clulas del tallo de chopo (Populus x boleana).

aceite esencial del clavo de olor

Elementos conductores: vasos y traquedas

Clulas de parnquima

Clulas de sber

Clulas de colnquima
Clulas epidrmicas

Clulas del esclernquima

Tradescantia (MO)

colenquima del sauco tallo de zapallo

PRUEBAS MICROQUMICAS
vichayo
Las pruebas microqumicas se pueden realizar tanto como material fresco como de herbario y an conservado, siendo preferible al estado fresco. ALCALOIDES (Reactivo de Dragendorff) ALEURONAS (Gota de colorante organge G) ALMIDN (Reactivo de lugol) CELULOSA (Prueba de clorioduro de cinc) GRASAS Y ACEITES(Reactivo de Sudan III o Sudan Presencia de flavonoides (color IV) amarillo) y taninos (color rojo) LIGNINA(Prueba de floroglucina) MUCLAGOS(Azul de cesil al 1%) OXALATO DE CALCIO(Reactivo acetato cprico) PECTATO, SUSTANCIAS PCTICAS(Rojo de rutenio al 0,1%) QUITINA(Reactivo de lugol y cloruro de cinc) SAPONINAS(cidos sulfrico concentrado) Presencia de alcaloides de color TANINOS (Sulfato frrico) marrn (Dragendorff)

CONTROL DE IDENTIDAD
ENSAYOS FISICOQUMICOS - CUALITATIVOS
DROGA ENTERA DROGA PULVERIZADA EXTRACTOS

IDENTIFICACIN Y DETECCIN DE POSIBLES ADULTERACIONES

REACCIONES DE IDENTIFICACIN A. Reacciones de coloracin o precipitacin B. Fluorescencia C. Microsublimacin ANLISIS CROMATOGRFICO :

REACCIONES DE IDENTIFICACIN
A. Reacciones de coloracin o precipitacin
CORTEZA DE CSCARA SAGRADA(Rhamnus purshiana) + Sol. Amoniacal = coloracin roja(antraquinonas)

Comino rstico(Ammi visnaga) + KOH = coloracin prpura (furocromonas)

Semillas de almendras amargas(Prunus amygdalus var.) + papel picrosdico = coloracin rojiza Esteroides + Lieberman(HOAc +AC2O/H2SO4) = Coloracin azul verdosa Alcaloides (H+/H2O) + METALES PESADOS(Bi, Hg, etc.) = Formacin de precipitados

B.- FLUORESCENCIA

quinina

C.-MICROSUBLIMACIN

Se realiza con drogas con p.a. (principios activos) fcilmente sublimables (antraquinonas, alcaloides)

ANALISIS CROMATOGRAFICO

CROMATOGRAFA DE CAPA FINA Esta cromatografa es especialmente para aislar y purificar vitaminas, hormonas, diversos alcaloides, hetrosidos cardiotnicos, antraquinonas

CONTROL DE CALIDAD
1. Confirman la IDENTIDAD 2. Permiten VALORA la CALIDAD y la PUREZA

ENSAYOS FISICOQUMICOS CUANTITATIVOS

GENERAL (normalizacin de drogas)

ESPECFICOS

Porcentaje de humedad Mtodos volumtricos Mtodos espectrofotomtricos Determinacin de Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) cenizas
Cromatografa de gases Determinacin de aceites esenciales ndice de acidez ndice de yodo ndice de saponificacin ndice de steres ndice de perxido ndice de yodo ndice de refraccin Poder rotatorio fluorometra ndice de hinchamiento

Determinacin de agua (Humedad residual)

Un exceso de agua en una droga puede provocar el crecimiento microbiano, la presencia de hongos o insectos y el deterioro, seguido de la hidrlisis de los principios activos. Este ensayo es especialmente importante para drogas que absorben humedad fcilmente o se deterioran rpidamente en presencia de agua. Los lmites de agua establecidos en la Farmacopea para las drogas, oscila entre un 8 y un 14 % con pocas excepciones, correspondiendo los valores ms altos con la humedad de cortezas, tallos y races.
Las bacterias necesitan para reproducirse 40% de humedad y los hongos 15 a 20% de humedad% . < 10% de agua evita la presencia de estos.

AGUA DE VEGETACION. (SE PIERDE CON FACILIDAD)

AGUA DE CONSTITUCION DE TEJIDOS. (DIFICIL DE ELIMINAR)

La humedad residual o lmite para la cantidad de agua, puede ser establecida mediante el estudio de secado de la droga.
Para esta determinacin puede ser empleados dos mtodos:

MTODO GRAVIMTRICO

(Prdida por desecacin)

No es empleado para plantas con aceite esencial
105 C/1H

MTODO AZEOTRPICO
Utilizado especialmente para drogas con aceites esenciales

AZEOTRPICO
En este mtodo el agua de la droga es arrastrada por destilacin con un disolvente no miscible con el cual forma una mezcla azeotrpica cuando se somete a una temperatura constante de ebullicin, en un aparato de destilacin a reflujo. El agua se acumula a una trampa y se lee directamente su volumen. Los vapores del azetropo se condensan por refrigeracin, separndose el agua del disolvente en dos capas, pudiendo entonces medir el volumen del agua separada de la droga.
Los disolventes utilizados pueden ser: Benceno (p.e. 80) Tolueno(p.e. 110C) Xileno ( p.e. 136 a 140C)

Segn la Farmacopea: Destilar 200mL de disolvente , al que se le aade 2 mL de agua. Luego se enfra y se mide el volumen de agua n separado en la parte del tubo. Se introducen 20 g de muestra triturada se somete a ebullicin con tolueno. Por 5 minutos, se enfria y se procede a la lectura del volumen de agua (n )

% de agua = (n n) 100/p Donde: p = peso en gramos

CENIZAS TOTALES
Las cenizas totales permiten determinar la cantidad de material remanente despus de la ignicin: Cenizas fisiolgicas, Derivados de los tejidos de la planta y Cenizas no fisiolgicas, que son el residuo despus de la ignicin de la materia extraa (Polvo, arena, tierra, etc.), adherida a la superficie de la droga.
CALCINACIN

INCINERACIN

700 -750C 2H

CENIZAS SOLUBLES EN AGUA

son calculadas por diferencia en peso entre las cenizas totales y el residuo remanente despus del tratamiento de las cenizas totales con agua. Cuando los valores obtenidos para las cenizas totales son elevados (>5%), es necesario conocer si las mismas estn compuestas por metales pesados, lo cual se determina mediante los ensayos de cenizas insolubles, y si este resultado es elevado hay que someter la droga a otros anlisis antes de aprobar su uso.

Ceniza total + 15 a 20 mL de agua + calentar +mufla (700 a 750 C)/2H

CENIZAS CIDO-INSOLUBLES
Las cenizas cido-insolubles son los residuos despus de la ebullicin de las cenizas totales con cido clorhdrico diluido. Esta determinacin mide la presencia de slice, especialmente de arena y tierra silcea.
Ceniza total + 2 a 3 ml HCl 10% hervir 10 + mufla (700 a 750 C)/2H Indican contaminacin con producto trreos

ENSAYOS FISICOQUMICOS CUANTITATIVOS ESPECFICOS

METODOS VOLUMTRICOS
Se fundamenta en la determinacin de una sustancia por su reaccin con un volumen medido de una sustancia estandarizada conocida. MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS

Estos mtodos se aplican a la mayora de los p.a. y estn basados en la capacidad de absorcin energtica que presentan ciertas molculas al ser expuestas a una determinada intensidad de energa y con La longitud de onda () un longitud de onda concreta. comprende entre 190 y
800 nm.

CROMATOGRAFA DE LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN (CLAR) o HPLC

La cromatografa es una tcnica que permite identificar, cuantificar y purificar los componentes de una mezcla de compuestos qumicos.

CROMATOGRAFA GASEOSA
Determina con componentes voltiles (aceites esenciales, alcanfor, cidos vegetales, algunos alcaloides del opio y tabaco, resinas de la marihuana, sapogeninas y hetersido cardiactivos. Deteccin de cocana metabolitos en el organismo humano, de gran importancia en el campo forense.

Artemisia absinthium ajenjo

DETERMINACIN DE ACEITES ESENCIALES

El contenido mnimo, en porcentaje, de aceites esenciales de numerosas drogas viene recogido en muchas farmacopeas.

INDICE DE HINCHAMIENTO
Aplicable a las drogas con muclagos es definido como el volumen en mililitros ocupado por un gramo de droga y muclago, despus de su hinchamiento por permanecer cuatro horas en contacto con un liquido acuoso. Por ejemplo: para el agar su valor es > a 15,y para la semilla de lino > 4 para la droga entera y > 4.5 para el polvo.

Aceites fijos
Caracteres organolpticos: olor, sabor y color Ensayos fisicoqumicos Solubilidad Indice de acidez: Cantidad en mg de KOH necesaria para neutralizar los cidos libres presentes en 1 g de sustancia Indice de refraccin Indice de hidrxidos Indice de saponificacin: Cantidad de KOH (mg) necesaria para neutralizar los cidos libres y saponificar los steres, en 1 g de sustancia
Control de calidad de drogas de origen vegetal. Ctedra de Farmacognosia. FFyB-UBA-

 Indice de yodo: Cantidad de yodo fijada a 100g de sustancia. Indice de ster: Diferencia entre los dos ndices anteriores Indice de perxidos: Es el nmero que expresa en mEq de O2 activo la cantidad de perxido contenido en 1000 g de sustancia. Insaponificable: Es el % de sustancias no voltiles a 100-105C, obtenidas por extraccin con un disolvente orgnico, de una disolucin de la muestra previamente saponificada. Rotacin ptica Densidad relativa Espectros UV e IR Anlisis cromatogrfico: TLC y GC
Control de calidad de drogas de origen vegetal. Ctedra de Farmacognosia. FFyB-UBA-

Aceites esenciales
Caracteres: Se incluye la apariencia y el olor del aceite esencial y si se considera adecuado, el sabor.

Identificacin: La identificacin de los aceites esenciales debe efectuarse mediante el perfil cromatogrfico por cromatografa de gases. En su defecto puede utilizarse la TLC.
www.usac.edu.gt/investigacion/iiqb/ponencia9.pdf

Ensayos

Densidad relativa
Indice de refraccin

Poder rotatorio
Acidos grasos y aceites esenciales resinificados Residuo de evaporacin Agua Solubilidad en alcohol

Presencia de steres extraos

Ensayos para detectar falsificaciones (GC; TLC)
www.usac.edu.gt/investigacion/iiqb/ponencia9.pdf

FLUORIMETRA
Se fundamenta en las propiedades de algunos compuestos de emitir fluorescencia. En los alcaloides la fluorescencia es proporcional a la concentracin. Se emplea para la valoracin de la quina y quinidina, aprovechando sus propiedades fluorescentes en medio sulfrico. La absorcin al ultravioleta tiene el inconveniente que requiere extractos muy purificados. Permite valorar simultneamente mezclas de alcaloides de forma independiente. para ello es preciso que cada uno cumpla la ley de Lambert-Beer: absorciones mximas diferentes, absorciones aditivas.

NDICE DE REFRACCIN
Las determinaciones del ndice de refraccin son especialmente tiles para el establecimiento de la pureza de esencias y aceites fijo y mucho de su valores indican en las farmacopeas. Por ejm: ndice de refraccin de menta (Mentha piperita) es 1,459- 1,45 y el de la esencia de lavanda inglesa (Lavandula officinalis Chaix ex Villars) es de 1,460 1,474.

PODER ROTATORIO
La mayora de los aceites esenciales tienen componentes pticamente activos y su pureza puede deducirse del sentido del poder rotatorio y de su magnitud. As el poder rotatorio de la esencia de limn (Citrus limon L.) es mayor de 57y menor de 65 o el de la esencia de menta (Mentha piperita L.) no es menor de -16 ni mayor de -3

3 CONTROL DE PUREZA
- Ausencia de elementos extraos - Determinacin de pesticidas - Determinacin de metales pesados - Determinacin de sustancias radiactivas - Determinacin de contaminacin microbiana

PUREZA
Materia extraa: consiste en realizar al ojo y estereoscopicamente las caractersticas de la muestra en anlisis ya sea contaminacin animal, vegetal, mineral, etc. Materia extraa <5% tallos/ <2% materia extraa. <7%tallos/ <3% . materia extraa Referencia Ph Helv Vll Ph Helv Vll

Mentha piperita Ocimum basilicum

Perdida por secado:Contenido de humedad que contienen la planta determinada por desecacin de la muestra, expresado en % m/m
% Humedad Eucalyptus sp. <10% Ocicum basilicum <12% Anethum graveolen <13% Referencia DAB 10 Ph Helv Vll DAB 10

DETERMINACIN DE PESTICIDAS

DETERMINACIN DE METALES PESADOS ANLISIS DE PESTICIDAS

Se procesan las muestras mediante la metodologa establecida en estndares internacionales. Se utiliza la Cromatografa Gaseosa con detector de captura electrnica (organoclorados) o detector de nitrgeno fsforo para rgano fosforados. Tambin puede trabajarse acoplando a espectrometra de masa.

CONTAMINANTES METLICOS El mtodo mas empleado es el de Absorcin Atmica

DETERMINACIN DE SUSTANCIAS RADIOACTIVAS

Desastre nuclear de Chernbil

La normativa oficial de la Unin Europea permite unos niveles mximos de contaminacin radioactiva de 600 beq/Kg (alimentos)

Contaminacin microbiolgica
Las plantas son contaminadas por microorganismos presentes en la tierra, en el ambiente, etc. Esta contaminacin varia por lo general entre 103 y 106 UFC por gramo de planta.
Detectndose a veces la presencia de estreptococos fecales, pseudomonas y enterobacterias. Las plantas se contamina en la recoleccin, disminuyendo la tasa de contaminacin con el secado.

BIBLIOGRAFA
Capasso R, Borreli F, Longo R, Capasso F. Farmacognosia Aplicatta: Controllo di Qualit de lle Droghe Vegetali. Italia. Springer. 2007 Villar del Fresno. Farmacognosia General. Madrid. Edit. Sntesis. 1999. OMS. Quality control method for medicinal plant materials. 1998. Disponible en: http://apps.who.int/medicinedocs/fr/d/Jh1791e/ Farmacopea de las plantas medicinales del Caribe. Disponible en: http://www.funredes.org/tramil/espanol/ Arbo M, Gonzlez A. Botnica Morfolgica: Morfologa de las plantas vasculares. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. 2005. Disponible en: www.hiperbotanica.net