Aula 2

Biologia Molecular Avanada Genes: Replicao e Expresso

Genes: Replicao e Expresso

Marcella Novaes Franco Nathlia Soares Ferreira Vinicio Barbosa S. Santos Andrew Macrae Laboratrio de Biotecnologia Sustentvel e Bioinformtica Microbiana Departamento de Microbiologia Geral IMPPG/UFRJ
http://www.ufsm.br/blg220/geneticamolecular.htm 22/12/2005

Replicao do DNA

http://www.genelex.com/paternitytesting/paternityslide1.html 22/12/2005

Caractersticas Principais da Replicao

- Ocorre desenrolamento e sntese simultneos do DNA em um local denominado forquilha de replicao. - Em E.coli a replicao comea com o desenrolamento do local oric (nica origem de replicao em E.coli). - Os filamentos parentais tm sentidos opostos e a replicao do DNA semiconservativa. - Ambos os filamentos so sintetizados no sentido 53. - Um filamento de DNA feito de fragmentos (lagging), o outro sintetizado de modo contnuo (leading).

http://oak.cats.ohiou.edu~ballardhpbio475HeredityHeredity.htm 22/12/2005

Enzimas da Replicao
dnaA dnaB (helicase) Primase Reconhece a origem e abre a dupla fita em stios especficos. Desenrola o DNA. Sintetiza os primers de RNA.

Single Strand Binding Se liga fita simples de DNA, evitando que as (SSB) pontes de hidrognio se refaam. DNA Polimerase III DNA Polimerase I DNA Ligase DNA girase Sntese da fita nova. Retira os primers e preenche as lacunas. Liga os fragmentos de Okasaki. Alivia a tenso torsional gerada pela abertura da dupla-fita.

DNA Polimerase I:
. A DNA Polimerase I foi a primeira enzima dirigida por um molde a ser descoberta. . Tem importante papel na replicao e reparo do DNA. . Catalisa a adio passo a passo de unidades de desoxirribonucleosdeos ponta 3 de uma cadeia de DNA. . Para que possa iniciar a replicao necessrio um molde de cadeia (primer) com uma 3 OH livre. . uma exonuclease revisora 35 com funo de reviso na polimerizao.

www.iq.usp.br/wwwdocentes/chsfarah/aula3_Replicacao.ppt 22/12/2005

DNA Polimerase I
. uma exonuclease 53 corretora de erros. . A atividade de exonuclease 53 tem papel importante na replicao pois remove o primer de RNA. . Possui baixa capacidade de polimerizao 5 3 relacionada a seu papel de enzima preenchedora de espaos e de reparo.

. A DNA polimerase I tem trs atividades enzimticas em uma nica cadeia polipeptdica.

DNA Polimerases II e III

. So similares a DNA Polimerase I em vrios aspectos: . Catalisam uma sntese de DNA dirigida por molde. . necessrio um primer com uma 3OH livre. . A sntese no sentido 53. . Elas possuem atividade de exonuclease 3 5.

DNA Polimerase II:

Participa do reparo do DNA mas no necessria para a replicao pois possui uma capacidade de polimerizao baixssima.

DNA Polimerase III:

A DNA polimerase III a principal responsvel pela sntese das fitas de DNA devido sua alta capacidade de polimerizao, potncia cataltica (1000 nucleotdeos adicionados por segundo, enquanto a polimerase I adiciona apenas 10 por segundo) e fidelidade.

Replicao

Autoria: Arsnio Fialho Disponvel em http://www.e-escola.pt/site-bin/licao_frame.asp?tema_id=81&mat_id=173&dif_id=2&pag_id=678 22/12/2005

Mutaes

So produzidas por vrios tipos de alteraes nas seqncias de bases do DNA.

Tipos de Mutaes
. Substituio de um par de bases por outro (transio ou transverso).

http://www.virtual.epm.br/cursos/genetica/htm/mutacao.htm 22/12/2005

. Deleo de um ou mais pares de bases. . Insero de um ou mais pares de bases.

Vantagens e Desvantagens das Mutaes

Vantagens . A mutao poder ser benfica se a enzima alterada codificada pelo gene mutante possui uma atividade nova ou aumentada que beneficie a clula. . A mutao responsvel pela variabilidade gnica. . Ela fornece a matria prima para o processo evolutivo e, em algumas situaes fundamental para o melhoramento, cujo sucesso depende da existncia de variabilidade. Desvantagens . A alterao nas seqncias de bases de um gene algumas vezes causa uma alterao no produto codificado por aquele gene. . A alterao do gentipo pode ser desvantajosa ou mesmo letal, se a clula perde uma caracterstica que ela necessita.

Por que as Mutaes Ocorrem?

Vrios fatores atuam influenciando seqncias de bases do DNA. So eles:
Mutgenos Qumicos: Substncias que atuam danificando ligaes qumicas, ou mesmo substituindo nucleotdeos normais por molculas anlogas.

modificaes

nas

Mutgenos Fsicos: Radiao ionizante capaz de destruir as ligaes qumicas entre os nucleotdeos e raios UV que formam ligaes covalentes nocivas entre as bases.

Mutgenos Biolgicos: ao de vrus e bactrias, que injetam parte de seu DNA na clula hospedeira ocasionalmente integrando-a cadeia de DNA do hospedeiro. Tambm podem haver mutaes por falhas de ordem gentica.

Formao de Dmeros de Pirimidina

http://www2.uah.es/biomolq/BM/Esquemas/imagenes/Transparencias%20Tema%204%20BM1/Diapositiva5.JPG 22/12/2005

Mecanismos de Reparo
O DNA danificado por uma variedade de agentes fsicos e qumicos, portanto todas as clulas possuem mecanismo de reparo.

O reparo possvel pois a informao gentica armazenada em ambos os filamentos da dupla hlice e sendo perdida em um filamento pode ser recuperada pelo outro.

Rearranjos Gnicos
Troca de genes entre duas molculas de DNA, para formar novas combinaes de genes.

Tipos de Rearranjos
. Recombinao homloga: A troca pode ocorrer entre qualquer par de seqncias homlogas nas molculas de DNA parental atravs da quebra e unio de segmentos homlogos. . Transposio: Movimento de um gene de um cromossomo para outro, ou de um local para outro no mesmo cromossomo. . Transposons: Elementos genticos mveis que possibilitam aos genes o movimento entre locais no homlogos no DNA.

www.icb.ufmg.br/~lbcd/prodabi3/grupos/grupo2/program/rearranjo10.html# 2 22/12/2005

Exemplo: Plasmdios Fator R Grupo de transposons de importncia mdica pois tornam as bactrias resistentes a vrios antibiticos

Tipos de Rearranjos
Recombinao stio-especfica:
Troca de duas seqncias de DNA especficas, no necessariamente homlogas. Ocorre quando o DNA circular do FAGO se insere no cromossomo bacteriano entre locais especficos em ambas as molculas de DNA. Nesse tipo de rearranjo, no necessrio DNA unifilamentar. Exemplo: O material gentico do fago lambda se integra ao DNA bacteriano atravs do ciclo lisognico.

Recombinao Homloga x Recombinao Sitio-Especfica

. A recombinao stio especfica, ao contrrio da recombinao homloga, orientada primariamente por protenas que reconhecem seqncias particulares do DNA e no por homologia de seqncias. . O DNA unifilamentar necessrio para iniciar a recombinao homloga mas a stio especfica no.

Elementos Genticos Mveis em Bactrias

Plasmdios: Portam genes para inativao de antibiticos, metabolismo de produtos naturais e produo de toxinas.

Os plasmdios so replicons. Contm sua prpria origem de replicao

http://www.ufv.br/dbg/trab2002/TRANSG/TRG001.htm 22/12/2005

Elementos Genticos Mveis em Bactrias

Tipos de Plasmdios:
. Fator F (Fertilidade): Confere masculinidade, transmissvel por conjugao. . Fator F: Carregam genes de E.coli alm dos genes de Fator F. . Fator R: Carregam genes de resistncia drogas. Alguns carregam genes para conjugao. . Fator Colinognico: Carregam genes para colicina (toxina), alguns carregam genes para conjugao.

Elementos Genticos Mveis em Bactrias

Fagos lisognicos: Lambda - Poder carregar genes de E.coli (gal ou bio) alm de genes virais. Mu - Todos os mu carregam pequeno trecho do genoma de E.coli. Seqncia de insero: So os transposons existentes mais simples, apresentando tipicamente 1kb de comprimento. Podero se mover para qualquer local em um cromossomo.

http://www.icampus.ucl.ac.be/SBIM2520/document/genemol/biomolespa/faslambda/fagos-01.jpg 22/12/2005