ENZIMAS USADAS EN BIOLOGIA MOLECULAR Enzimas de restriccin

Enzimas de restriccin
Corte: - Extremo cohesivo - Extremo romo

ENZIMAS USADAS EN BIOLOGIA MOLECULAR

Enzimas de restriccin ADN polimerasa : Sntesis de ADN in vitro, secuenciacin (Taq polimerasa: PCR) ADN ligasa

Ligasa

ENZIMAS USADAS EN BIOLOGIA MOLECULAR

Enzimas de restriccin ADN polimerasa ADN ligasa Transcriptasa inversa Polinucletido kinasa Fosfatasa alcalina, etc. (Taq polimerasa)

ENZIMAS USADAS EN BIOLOGIA MOLECULAR

Tcnicas de clonado de ADN

In vivo In vitro (PCR)

Clonado

Vectores de clonado
Plsmidos

Vectores de clonado
Plsmidos Bacterifagos

Bibliotecas

Bibliotecas

Vectores de clonado
Plsmidos Bacterifagos Construccin de genotecas: - genmicas - de cDNA

Vectores de clonado
Plsmidos Bacterifagos Csmidos

Transferencia de material gentico a bacterias - Conjugacin - Transduccin - Transformacin

Conjugacin

Transduccin

Vectores de clonado procariotas

Plsmidos Bacterifagos Csmidos

Vectores de clonado eucariotas

Baculovirus YACs Virus de mamferos (ej.: vectores retrovirales)

Tcnicas de clonado de ADN

In vivo

In vitro (PCR)

Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Electroforesis

Electroforesis

Mtodos de deteccin
- Hibridacin de cidos nucleicos - PCR

Hibridacin de cidos nucleicos Southern-blot

Southern-blot - Sustrato: ADN Sonda: ADN o ARN Northern-blot - Sustrato: ARN Sonda: ADN o ARN

Western-blot - Sustrato: protena Deteccin mediante anticuerpos

Hibridacin

in situ

Hibridacin in situ fluorescente (FISH)

Whole mount

in situ

hybridization

GFP (protena fluorescente verde)

Hidromedusa Aequorea victoria

Transgnesis
-Integracin estable de ADN extrao dentro del genoma del husped, confiriendo nuevas propiedades al mismo. -Muy usada para estudiar la funcin de los genes en un organismo vivo.

Individuos transgnicos
Individuos que tienen secuencias insertadas en forma estable a travs de manos humanas. Animales transgnicos pueden ser creados por microinyeccin o infeccin viral de embriones, o por la manipulacin en cultivo de clulas madre embrionarias (ES cells) que son subsecuentemente incorporadas nuevamente al embrin. Plantas transgnicas pueden ser creadas por inoculacin de Agrobacterium (plsmido Ty) o por particle bombardment.

Principales aplicaciones
- Biomedicina -Produccin animal y vegetal (resistencia a enfermedades, mejora en la calidad, etc.) - Pharming - Produccin de protenas recombinantes de
inters comercial en animales (cabras, vacas) y plantas
Ej.: antitrombina humana III, activador de plasmingeno, anticuerpos monoclonales, antgenos para malaria, tela de araa, factores de crecimiento

Knock out

Modelos de Ratn Knock-out

Comparacin de ratones normales contra knock-out Spag6-/-