Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez

PRACTINA NO________ DETERMINACION DE FOSFATASA ALCALINA (ALP) INTRODUCCION La fo sfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo. Hidroliz a los monosteres del cido ortofosfrico en medio alcalino. En el adulto proviene en parte del higado (termoestable) y en parte de hueso, sistema reticuloendotelial y vascular (termolabil) dando lugar a distintas izoenzimas. La actividad serica de ALP sea, en condiciones normales alcanza su mayor actividad en los nios en edad de crecimiento, llegando a triplicar los niveles del adulto, debido a que esta izoenzima se localiza en los osteoblastos. Tambin es fisiolgico el aumento que se produce al final de primer trimestre de embarazo, a expensad de la izoenzima pla centaria que en este periodo alcanza niveles mximos. Entre las patologas que afect a la actividad srica de ALP se pueden citar: carcinomas metastticos en higado y hu eso, colestasis biliar, infarto al miocardio, pulmonar o renal. FUNDAMENTO La AL P hidroliza al p-nitrofenilfosfato, incoloro, produciendo fosftato y p-nitrofeni l a pH de 9.8, la velocidad de aparicion del anion p-nitrofenolto a 405nm, es pr oporcional a la actividad enzimatica en la muestra. La dietanolamina regula en p H de reaccion y actua como aceptor del fosftato liberado por la fosfatasa. ALP + p-NFF PO4 + p-Nitrofenol (pH 9.8) Esta prueba se realiza en el contexto de otra s pruebas hepticas (GOT, GPT, Bilirrubina, GGT) y se utiliza para evaluar problem as hepticos. Suele asociarse en la elevacin de GGT excepto en problemas seos donde solo se eleva la ALP. REACTIVO Buffer DEA : dietanolamina Sustrato pNFF MUESTRA Suero MATERIAL Espectrofotmetro y cubetas Bao maria Agua destilada Pipetas Esta r de calibracin Reactivos de ALP

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez PARAMETROS Longitud de onda Temperatura de reaccin Tiempo Vol final de reaccin 405nm 25, 30 o 37C 3 minutos 2.52mL PROCEDIMIENTO Colocar en cubeta a temperatura de Reaccion: Sustrato reconstituid o 2.5mL Preincubar unos minutos, despus agregar Muestra 20uL Leer absorbancia ini cial en espectro a 405nm, disparar cronmetro Registrar absorbancias despus de 1,2 y 3 minutos despus de la primera lectura. Determinar la diferencia promedio de Ab sorbancia / min (A/min), restando cada absorbancia y obteniendo el promedio. CALCULOS ALP (U/I) = A/min x 6812 RESULTADOS ALP= ______________ (U/I) VALORES DE REFERENCIA Adultos: Nios y adoles centes 25C = 40-190 U/I hasta 400 30C = 45-213 U/I hasta 450 37C = 65-300 U/I hasta 645 CONCLUSIONES

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez PRACTICA NO. ____ DETERMINACION DE CREATININA DEPURACION DE CREATININA INTRODUCC ION La determinacin de niveles sricos de creatinina, producto de la degradacin de l a creatina, se utiliza como ndice de funcionalismo renal, dado que su eliminacin s e efecta a travs del rin y casi exclusivamente por filtracin. FUNDAMENTO La creatinin a reacciona con el picrato alcalino, segn la reaccin de Jaff, para dar un cromgeno r ojizo. La cantidad de cromgeno que se forma bajo condiciones controladas, es dire ctamente proporcional a la concentracin de creatinina en la muestra y se mide fot omtricamente a 490-510nm. La reaccin de jaff es una reaccin no especfica para creatin ina, pero las otras sustancias que reaccionan con el picrato alcalino, lo hacen durante los primeros 30 segundo de iniciada la reaccin. MATERIAL REQUERIDO Espect rofotmetro Cubetas de lectura Material volumtrico Sistema de termostatizacion (2030C) Cronmetro PARAMETROS Longitud de onda Temperatura Ajuste a cero PROCEDIMIENTO Pipetear en cubetas Estandar Muestra espectrofotomtricas: Reactivo de Trabajo 2. 0mL 2.0mL Equilibrar a temperatura de trabajo y pipetear Estandar 0.4mL Muestra 0.4mL Mezclar inmediatamente y disparar el cronmetro A los 30 seg exactos de incu bacin registrar las lecturas de Abs de S1 y M1. A los 5 minutos exactos de incuba cion registrar las lecturas de Abs de S2 y M2. CALCULOS *SUERO Creatinina (mg/L) = (M2-M1) x f 500nm (490-510) 25C agua destilada f= 20mg/L S2-S1 *ORINA DE 24 HORAS Creatinina (g/24h) = (M2 M1) x f f= 0.020g/L x 50 x V S2-S1

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez Donde 50 es el valor de dilucin y V= vol de diuresis en litros en 24h. *DEPURACIO N DE CREATININA ENDOGENA D.C.E. ml/min = RESULTADOS Creatinina en Suero ________ ___________mg/L Creatinina en Orina ___________________g/24h D.C.E. ____________ _______ml/min VALORES DE REFERENCIA Suero 8-14mg/L Orina 8-23 mg/kg / 24h DCE 80 -140 ml/min CONCLUSION creatinina en orina (g/24h) Creatinina en suero (mg/L) x 694

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez PRACTINA NO___ CLORO FUNDAMENTO El cloro reacciona con el tiocianato de mercurio para formar un compuesto coloreado. REACTIVO Reactivo: formado por tiocianato d e mercurio, nitrato de hierro y cido nitrico. Estandar: Cloro MUESTRA Suero Plasm a heparinizado Orina PARAMETROS Longitud de onda Temperatura Cubeta Ajustar a ce ro PROCEDIMIENTO Blanco Reactivo 1mL Agua destilada 10Ul Estandar Muestra Mezcla r, incubar 5 minutos Leer abosrbancias (densidad optica DO) Color final estable 1 hora. CALCULO Muestra DO Estandar DO n= 100mEq/L 100mmol/L 335mg/dL RESULTADO Cloro = ___________mg/dL VALORES DE REFERENCIA Suero o plasma 98-107 mEq/L 98-10 7 mmol/L 348-380 mg/dL CONCLUSION xn Estandar 1mL 10uL 10uL Muestra 1mL 480nm 37C 1cm de paso de luz blanco de reactivo orina 110-250 mEq/24h 3900-8870 mg/24h

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez PRACTICA NO._____ TRIGLICERIDOS PRINCIPIO DEL METODO Los triglicridos son grasas que suministran energa a la clula, al igual el colesterol son transportados por LP L en la sangre. Una dieta alta en grasa eleva los triglicridos, cirrosis, hepatit is, obstruccin biliar, pueden estar relacionadas con esta enfermedad. Los triglicr idos son incubados con LPL, liberan glicerol y cidos grasos libres, el glicerol e s fosforilado por glicerofosfato deshidrogenada y ATP en presencia de glicerol q uinasa para producir glicerol 3 fosfato y ADP, el D3P es convertido en dihidroxi fosfato y perxido de Hidrgeno por GPO. Al final el H2O2 reacciona con 4-AF y p-clo rofeno por la enzima peroxidasa provocando coloracin roja. MUESTRA Suero o plasma PROCEDIMIENTO Longitud de onda Temperatura 37C o 15 a 20 C Ajustar el cero con ag ua destilada. 505nm Blanco Patron Muestra R ml 1mL 1mL 1mL Patrn uL 10uL Muestra uL 10uL Mezclar Incu bar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia del calirador, de la mues tra frente a blanco. Color estable 30 min. CALCULOS ABS muestra ABS Patron x 200 (conc) =__________mg / dL RESULTADO Triglicridos = ____________mg/dL VALORES DE REFERENCIA Hombres 40 a 160 mg/dL Mujeres 35 a 165 mg /dL CONCLUSION

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez PRACTICA NO._____ COLESTEROL Los esteres de colesterol se hidrolizan por la accin de la colesterol ester hidrolasa para liberar colesterol y cidos grasos. El cole sterol libre exisente junto con el producido por esta reaccin se oxida por la acc in de colesterol oxidasa en 4-colestenona y perxido de hidrgeno. Este ultimo, en pr esencia de peroxidasa, oxida el sistema cromgeno (4-aminoantipirina/fenol) en un compuesto de color rojo. PRECAUCIONES toxico! El estandar coniene 2-mettoxietanol , evitese la exposicin, nocivo por inhalacin, ingestin o contacto con la piel. Infl amable. Puede perjudicar la fertilidad, riesgo durante el embarazo de efectos ad versos para el feto. MUESTRAS Suero Plasma heparinizado PROCEDIMIENTO Longitud d e onda Temperatura Cubeta Leer contra blanco de reactivo Reactivo Agua destilada Estandar Muestra Blanco 1mL 10uL 500nm (492-550) 37C 1cm de paso de luz Estandar 1ml 10uL Muestra 1mL 10uL Mezclar, y tras una incubacin de 5 min, leer la densidad ptica (DO) El color final se mantiene estable durante 1 hora. CALCULOS Muestra DO *n = Estandar DO n= con centracin de std, 200mg/dL 2g/L 5.17mmol/DL RESULTADO CHOL= ___________mg/dL VALORES DE REFERENCIA 150-260 mg/dL 1.5 2.6 g/L 3.87 6.71 mmol/L CONCLUSION

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez PRACTINA NO______ BILIRRUBINA Significado Clnico La bilirrubina es un compuesto d e degradacin de la Hemoglobina, captada por el hgado para su conjugacin y excretada en la bilis. Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provo car su aumento (hiperbilirrubinemia). La determinacin de la bilirrubina srica en n ios recien nacidos es de gran importancia, ya que aumenta con un consecuente ries go de difucin al sistema nervioso, esto se debe a que en la eritroblastosis fetal o anemia hemoltica del recien nacido, patologa provocada por incompatibilidad mat erno-fetal, se produce una destruccin excesiva de glbulos rojos. Fundamento del Mto do La bilirrubina reacciona con el cido sulfanlico diazotado originando un product o color rojovioleta (azobilirrubina), que se mide a 530nm. La bilirrubina direct a reacciona con el diazorreactivo , pero la indirecta requiere de un desarrollad or acuoso. De manera, que para que reaccione la Bilirrubina Total (directa e ind irecta) de la muestra, es necesario agregar benzoato de cafena al medio de reaccin . Reactivos Desarrollador solucin acuosa de Benzoato de cafeina 0.13mol/L Nitrito de Sodio Reactivo Sulfanlico Bilirrubina STD (no provista) Agua destilada (no pr ovista) Muestra Suero o Plasma heparinizado. Libre de hemolisis. Estable 48 hora s de 2 a 10C. la accin de la luz puede destruir en una hora el 50% de la bilirrubi na, es necesario proteger. Material Espectrofotmetro Pipetas y micropipetas Reloj Condiciones de Reaccin Longitud de Onda Temperatura de Reaccion Tiempo de Reaccin Vol Muestra Vol final de Reaccion PROCEDIMIENTO Colocar en tubos separados Blan co Muestra 200Ul Agua destilada 2.5mL Desarrolador Reactivo Sulfanlico 200uL Diaz orreactivo 530nm en espectrofotmetro Ambiente 5 min 200uL 2.9mL Directa 200uL 2.5mL 200uL Total 200uL 2.5mL 200uL

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez CALCULOS Bilirrubina Total (mg/L) = Bilirrubina Directa Bilirrubina Indirecta (l ibre) Factor RESLTADOS Bilirrubina Directa Bilirrubina Indirecta Bilirrubina Tot al (T B) x f (D B) x f BR Total Br Directa Calclar con en el Estandar de bilirru bina ____________mg/L ____________mg/L ____________mg/L VALORES NORMALES Adultos Directa hasta 2mg/L Total hasta 10mg/L Recien Nacidos S angre de cordon 24 horas 48 horas 3 a 5 dias CONCLUSION A termino 25mg/L 60mg/L 75mg/L 120mg/L prematuros 80mg/L 120mg/L 230mg/L

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez PRACTICA NO.______ ELECTROLITOS EN SUERO CALCIO El calcio tiene numerosas funcio nes dentro del cuerpo, no solo es factor estructural de huesos y dientes sino qu e tambin se encuentra en la sangre y en la funcin neuromuscular. INCREMENTOS Hiper calemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hip erparatiroidismo, el incremento se debe al aumento de la reabsorcin en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales. DECREM ENTO Hipocalemia METODO Arsenazo III El Arsenazo III se combina con los iones de l calcio a pH de 6.75 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directa mente proporcional a la concentracin de calcio en la muestra. Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros catio nes que se encuenran en suero, plasma u orina. Reactivo El reactivo esta listo p ara su uso Muestra Suero, plasma heparinizada u orina. Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8C y seis meses en congelacin. PARAMETROS Longitud de Onda Volu men de la muestra Volumen de Reactivo Incubacin Concentracin STD Blanco 630nm 10/2 0 uL 500-1000uL 1 min a 37C 10mg/dL Reactivo STD 1000 20 20 MUESTRA 1000 PROCEDIMIENTO Pipetear dentro de BLANCO tubos marcados Reactivo 1000 Agua destil ada 20 Estndar Muestra Mezclar y leer absorbancia a 630nm CALCULOS Calcio mg/dL = ABS M / ABS STD X (Concentracin STD) = RESULTADO Calcio = _______________mg/dL

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez MAGNESIO El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino, proporcional a la concentracin de Mg en la muestra. Es el segundo cation mas numeroso en el organismo. Niveles altos de Mg se hallan en uremia, f allo renal o enfermedad de Addison. REACTIVOS Reactivo 1 Reactivo 2 Magnesium ca l amino metil propanol - EGTA Calmagita Patron de Mg MUESTRA Suero o plasma heparonizado libre de hemolisis, estable 7 dias a tempera tura de 2 a 8C. tambien puede utilizarse orina. PROCEDIMIENTO Longitud de onda Te mperatura Ajustar Pipetear en cubeta Rt Ml Patron uL Muestra uL CALCULOS ABS M / ABS P X 2 (CONC PAT) = mg / dL de Mg. RESULTADO Magnesio : _______________mg/dL Blanco 1 520 nm 371C o 15-20 con agua destilada Patron 1 10 Muestra 1 10 VALORES NORMALES Suero o plasma Orina 1.5 a 2.5 mg/ dL 24 a 244 mg /dL

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez FOSFORO INTRODUCCION El fsforo es esencial para la formacin de tejido oseo y en el metabolismo energtico celular. Aprox. El 85% se encuentra en hueso y dientes. Ni veles bajos se deben a hipervitaminosis D, hipertiroidismo, desordenes renales, mala absorcin. Niveles altos se atribuyen a la dieta, metstasis de huesos, alcohol ismo, diarreas, alteraciones de hgado. FUNDAMENTO Mtodo para deteccin de fsforo inor gnico. El Pi reacciona en medio cido con molibdato amnico formando un complejo fosf omolibdico de color amarillo, de intensidad proporcional a la concentracin de Pi presente en la Muestra. REACTIVO R molibdico Phosphorus Cal MUESTRA Suero o plas ma libre de hemolisis Orina PARAMETROS Longitud de onda Cubeta Temperatura Ajust ar a cero 340nm 1cm 37-30-25C con agua destilada PROCEDIMIENTO Pipetear en una cubeta Blanco Patrn Reactivo 1Ml 1mL Patrn 10uL Mues tra Mezclar e incubar 5 min Leer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactiv o. CALCULOS Suero ABS M x 5 (conc. P) = mg/dL ABS P Orina 24h ABS M ABS P x 5 x Vol (dL) orina /24h = mg/24h Muestra 1mL 10uL RESULTADO Fsforo = _____________mg/dL VALORES NORMALES Suero o plasma Orina Nios 4 -7mg/dL Adultos 2.5-5mg/dL 0.4-1.3g/24h

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez PRACTICA NO.____ ALBUMINA FUNDAMENTO La albmina se une al azul de bromocresol a p H ligeramente cido produciendo coloracin amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracin de la albmina en la muestra. La albmina es una protena plasmtica import ante producida por el hgado, sus niveles se alteran en enfermedades hepticas, desn utricin, dermatitis. REACTIVO Verde bromocresol pH 4.2 Patrn primario acuoso de al bmina MUESTRA Suero o plasma libre de hemlisis Estable 1 mes a 2-8C. PARAMETROS Lon gitud de onda Temperatura Cubeta Ajustar a cero PROCEDIMIENTO Blanco Patrn Muestr a Reactivo 1mL 1mL 1mL Patron 5uL Muestra 5uL Mezclar, incubar 10 minutos a temp eratura ambiente. Leer absorbancia de Patrn y Muestra contra blanco, color establ e 1 hora. CALCULOS ABS M X 5 (conc. Patrn) = g/dL ABS P 630nm 15-25C 1cm agua dest ilada RESULTADO Albmina = _______________g/dL VALORES NORMALES 3.5 a 5 g/dL CONCLUSIONES

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez PRACTICA NO.____ PROTENAS TOTALES En medio alcalino las protenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre, la intensidad es proporcional a la conc entracin de la protena total en la muestra. Las protenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte. Se dividen en dos fr acciones: Albmina y Globulina Se deteccin es util para deteccin de: Hiperproteinemi a Hipoproteinemia. REACTIVO Reactivo de Biuret T protein Cal MUESTRA Suero o pla sma heparinizado. Estable un mes en nevera a 2-8C PARAMETROS Longitud de onda Cub eta Temperatura Ajustar a cero PROCEDIMIENTO Reactivo Patron Muestra 25uL Mezcla r, incubar 5 min a 37C o 10 minutos a temperatura ambiente. Leer absorbancia de P atrn y Muestra contra blanco, color estable 30 min. CALCULOS Abs M Abs P x 7 (con c. P) = g/dL Blanco 1ml Patrn 1mL 25uL Muestra 1mL 540nm 1cm 37C/15-25C con agua de stilada RESULTADOS Proteinas Totales = ___________g/dL VALORES NORMALES Adultos : 6.6-8. 3 g/dL Recien Nacidos : 5.2-9.1 g/dL CONCLUSIONES

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PRACTICA NO__ AST ASPARTATO AMINOTRASMINASA INTRODUCCION La AST tiene una alta c oncentracin en el msculo cardiaco, las clulas hepticas, las clulas msculo esqueltico en menores grados en otros tejidos. Aunque un nivel elevado se AST en el suero n o es especifico de la enfermedad heptica, se utiliza principalmente para diagnost icar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la A LT, ALP y bilirrubina) Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con l os ataque cardiacos, pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DH L para este propsito. MUESTRA Suero sin hemolisis Plasma EDTA Reactivo 1 L- aspar tato LDH Acida sodica Reactivo 2 a-cetogluterato NADH azida sodica PARAMETROS 340 nm longitud de onda 30-37C Cubeta de 1 cm paso de luz Blanco agua destilada PROCEDIMIENTO Procedimiento de un reactivo Reactivo de trabajo Muestra 1 ml 100 ul Mezclar uncubar un minuto, medir cambio de densidad ptica durante 3 min. Procedim iento de dos reactivos Reactivo 1 1mL Muestra 100uL Mezclar y esperar 1 minuto R eactivo 2 100uL Mezclar, incubar 1 minuto, y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutos Obtener Diferenta promedio de Densidad Optica. CALCULOS 340nm : activ idad U/L = cambio DO/ min x 334mn : actividad U/L = cambio DO/ min x 365mn : act ividad U/L = cambio DO/ min x RESULTADO AST = _______________ U/L VALORES NORMAL ES 30C hasta 30 U/L 37C hasta 46 U/L CONCLUSION: Un reactivo 2 reactivos 1.746 1.7 80 3.235 1.942 3.529 1.905

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez ALT ALANINA AMINO TRANSAMINASA INTRODUCCION Este examen se usa para determinar s i un paciente tiene lesin heptica. La ALT es una enzima que involucrada en el meta bolismo del aminocido alanita y se encuentra en varios tejidos, pero presenta con centraciones mayores en el hgado. Cualquier lesin en el hgado hace que se libere es ta enzima a la sangre. MUESTRA Suero sin hemlisis Plasma EDTA PARAMETROS 340nm lo ngitud de onda 30-37C Cubeta de 1 cm paso de luz Blanco agua destilada PROCEDIMIE NTO Procedimiento de un reactivo Reactivo de trabajo Muestra Reactivo 1 L-alanin a LDH Azida sodica Reactivo 2 a-cetogluterato NADH azida sodica 1ml 100ul Mezclar, incubar un minuto, medir cambio de densidad optica durante 3 min. Procedimiento de dos reactivos Reactivo 1 1ml Muestra 100uL Mezclar y esperar 1 minuto Reactivo 2 100uL Mezclar, incubar 1 minuto, y medir cambio de Densidad Op tica por 3 minutos Obtener Diferenta promedio de Densidad Optica. CALCULOS 340nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 334nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 365nm : actividad U/L = cambio DO/ min x RESULTADOS ALT = ___________ _______UL VALORES NORMALES 30C hasta 35 UL 37C hasta 49 UL CONCLUSION un reactivo 1.746 1.780 3.235 2 reactivos 1,905 1,942 3,529

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez PRACTICA NO_____ LIPASA FUNDAMENTO La lipasa en una enzima que se usan en el org anismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorb er. La enzima se encuentra en la leche materna y, segn estudios bioquimicos, es i dntica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancretica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancretico y llega a las glndulas mam arias a travs de la circulacin sangunea. La lipasa gstrica, producida por las glndula s gstricas, reduce los triglicridos, u tipo de lpidos presentes en la leche, a cidos grasos y glicerol. REACTIVOS Reactivo de trabajo Patron de lipasa MUESTRA Suero PROCEDIMIENTO 1. Precalentar reactivo de trabajo a 37C durante unos minutos 2. Pi petear a una cubeta Reactivo de trabajo Muestra/Patron 750 ul 15 ul 3. Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37C. poner el cron ometro en marcha, a los 3-5 minutos aadir: Reactivo C 250uL Mezclar 4. leer y anotar abs orbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5. Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales, obtener incremento de absorbencia por minuto promed io (A/min) CALCULOS (A/min)MUESTRA (A/min)PATRON X Concentracin del patron = U/L RESULTADOS Lipasa = _________________U/L VALORES NORMALES 7-59 U/L

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez AMILASA INTRODUCCION La amilasa es una enzima que tiene la funcin de dirigir el g licgeno y el almidn para formar azucares simples, se produce principalmente en las glndulas salivares ( glndulas partidas) y en el pncreas. Cuando una de estas glndul as se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anlisi s de la amilasa serica. MUESTRA Suero Plasma heparinizado Orina diluida una part e en dos de agua PROCEDIMIENTO Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37 C Cubeta 1 cm Blanco Ag ua destilada REACTIVO MUESTRA 30C 1mL 25uL 37C 1mL 15uL Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (A/min) CALC ULOS Actividad Cambio Densidad Optica / min X 2715 a 30C Cambio Densidad Optica / min X 4640 a 3 7C RESULTADOS Amilasa = _______________ U/L VALORES DE REFENCIA En suero: <67 U/L a 30C <86 U/L a 37C CONCLUSION

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez PRACTICA NO. PRUEBAS SEROLOGICAS PROTEINA C REACTIVA Es una tecnica de aglutinacin en porta para la deteccin cualit ativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. Las particulas de latex recubie rtas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR present es en la muestra del paciente. La proteina C Reactiva es una proteina de fase ag uda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en proceso s infecciones bacterianos, virales, inflamacin, y neoplasias malignas. El increme nto se produce despus de unas horas de desarrollarse inflamacin alcanzando niveles de 300mg/L en 12-24h. Reactivos: Latex Control (rojo) Control (azul) Suspensin d e latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana. Suero humano Suero animal Muestra: Suero fresco estable 7 dias a 2-8C o 3 meses a -20. No hemolisadas ni li pmicas. PROCEDIMIENTO Cualitativo. 1. Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente. 2. en un portaobjetos, depositar 50uL de M, y una gota de los control es positivo y negativo. 3. homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y de positar una gota (50uL) junto a cada una de las gotas anteriores. 4. mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo. Con pali llos distintos. 5. situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y ag itar durante dos minutos sin exceso. Semicuantitativo. 1. realizar diluciones do bles de la muestra en solucin salina 9g/L 2. proceder para cada dilucin como la pr ueba cualitativa. LECTURA E INTERPRETACION Examinar microscpicamente presencia o ausencia de aglutinacin inmediatamente al retirar el agitador. Aglutinacin positiv a indica una concentracin de PCR igual o mayor a 6mg/L En el semicuantitativo, se define el titulo como la dilucin mayor que da resultado positivo. CALCULOS La co ncentracin de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula: 6 xTitulo de PCR = mg/L VALORES DE REFERENCIA Hasta 6mg/L RESULTADO Aglutinacin: __ ________________ CONCLUSION:

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez FACTORES REUMATOIDES PRINCIPIO DEL METODO FR Latex es una tecnica de aglutinacin en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoi des en el suero humano. Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina h umana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra. Los FR s on un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G. Su inters clnico es el diagnstico de la Artritis Reumatoides, aunque estan prese ntes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen. Reactivos Latex Control Rojo Control Azul suspensin de latex cubierto con gammaglobulina humana Suero hu mano Suero animal Muestra: Suero fresco estable 7 dias a 2-8C o 3 meses a -20. No hemolisadas ni li pmicas. PROCEDIMIENTO Cualitativo. 1. Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente. 2. En un portaobjetos, depositar 50uL de M, y una gota de los control es positivo y negativo. En circulos distintos. 3. Homogeneizar el reactivo FR La tex y depositar una gota junto a cada una de las gotas anteriores. 4. Mezclar la s gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo. Con pal illos distintos. 5. Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y a gitar durante dos minutos sin exceso. Semicuantitativo. 1. realizar diluciones d obles de la muestra en solucin salina 9g/L 2. proceder para cada dilucin como la p rueba cualitativa. LECTURA E INTERPRETACION Examinar microscpicamente presencia o ausencia de aglutinacin inmediatamente al retirar el agitador. Aglutinacin positi va indica una concentracin de FR Latex igual o mayor a 8UI/mL En el semicuantitat ivo, se define el titulo como la dilucin mayor que da resultado positivo. CALCULO S 8 X TITULO DE FR = UI/mL VALORES DE REFERENCIA Hasta 8 UI/ mL RESULTADO Agluti nacin: _____________________ CONCLUSIN

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez REACCIONES FEBRILES INTRODUCCION Los antgenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella, Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19. Salmonella. La reaccin de Widal en un mtodo serolgico usado comnmente en el diagnstico de las fiebres tifoideas, entrica y ondulante, la reaccin mide el ttulo del suero contra una suspensin de microorganismo conocidos. La Salmonella s on bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos. Hay tres especies clnicamente importantes de Salmonella: enteritidis, choleraeauis y thyphi. Tres sndromes prin cipales, resultan de la infeccin por salmonella. 1. gastroenteritis ( la forma ms comn ). 2. fiebre tifoidea. 3. septicemia. Brucella. En esta prueba se detectan a nticuerpos contra Brucella, casi todas las infecciones humanas por Brucella, se deben a B abortus, B suis o B melitensis. La brucelosis es una enfermedad aguda o crnica que se manifiesta principalmente por escalofros, fiebre y debilidad, ocas ionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de fiebre ondulante de la enfermedad. Rickettsias. Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antignos idiotpicos con Proteus ( OX-19, OX-2 OX-K), esta relacin se us en el diagnstico de tifo. Las especies de Rickettsia son cocobaciolo s pequeos plemrfos que funcionan como parsitos intracelulares. La inmunidad por lo general es de larga duracin, con algunas excepciones. El tifus endmico puede causa r recaadas 10 o 20 aos despus de la aparente recuperacin (enfermedad de Grill Zinsee r). La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recadas. FUNDAMENTO. Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido p or agentes infecciosos, responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ell os los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especfico. El ttulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfer medad. Para que los resultados tengan un valor diagnstico el ttulo de ellos debe a umentar MUESTRA Suero libre de hemolisis REACTIVOS Paratifico A Paratifico B Tif ico O Tifico H Proteus OX Brucella PROCEDIMIENTO. Puede efectuarse por medio de dos maneras. Mtodo de aglutinacin rpida en placa. 1. Anotar el antgeno correspondien te en la placa de vidrio. 2. Depositar en cada cuadro 0.04ml de suero del pacien te para cada uno de los antgenos que se vayan a utiliza. 3. A cada gota de suero aadir una gota de cada antgeno. 4. Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un a plicador para cada antgeno. 5. Agitar suavemente la placa por rotacin (120 r.p.m) durante 2 3 minutos. 6. Observar la aglutinacin con ayuda de una lmpara. Cuando ha y reaccin positiva se repite la tcnica con diluciones las cuales se obtienen con e l uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma.

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez Mililitros de suero 0.08 0.04 0.02 0.01 0.005 Dilucin 1:20 1:40 1:80 1:160 1:329 INTERPRETACION Reportar el resultado, empleando la recproca de la dilucin ms alta q ue presenta aglutinacin. Grado de aglutinacin. 100% ++++ Sedimentacin de los grumos y el sobrenadante claro. 75% +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenad ante claro. 50% ++ sedimentacin marcada y sobrenadante ligeramente claro. Negativ o. Ninguna evidencia de aglutinacin, sobrenadante idntico al control. RESULTADO Pa ratifico A Paratifico B Tifico O Tifico H Proteus OX Brucilla __________________ __________________ __________________ __________________ __________________ ___ _______________ CONCLUSION

Qumica Clnica Manual de Prcticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermdez Chvez VDRL INTRODUCCION La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) cons tituye una tcnica serolgica con la suficiente sensibilidad y especificidad para co mplementar el diagnstico de sfilis y analizar la respuesta al tratamiento especfico . Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de tr asmisin sexual en grandes masas de poblacin.1-4 El Mdico de la Familia es el mximo r esponsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexua lmente trasmisibles; por tanto, entre sus funciones bsicas se encuentran la indic acin y la interpretacin a primera instancia de los resultados de sta.5,6 El VDRL es una tcnica de floculacin que utiliza el antgeno de cardiolipina para detectar anti cuerpos antitreponmicos inespecficos producidos por el individuo ante una infeccin sifiltica. Se practica normalmente en lmina de cristal, en la que se mezcla el sue ro del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento), con una s uspensin fresca de antgeno de cardiolipina; esta mezcla se agita de forma rotatori a y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacin utilizando un microsc opio de bajo aumento; sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cu antitativamente. MUESTRA Suero o plasma libre de hemolisis. PROCEDIMIENTO En un porta, depositar una gota (50uL) de suero del paciente, Aadir una gota de reactiv o y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circulo Observar el resultado. RESULTADO VDRL ____________________ CONCLUSION