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ESTUDO ANATMICO E HISTOQUMICO EM FOLHAS DE Plantago major L. E Plantago australis Lam. (PLANTAGINACEAE) JOECILDO FRANCISCO ROCHA1 MARIA MERCEDES TEIXEIRA DA ROSA1 CTIA CRISTINA MOFATO FRADE2 EDUARDO MARCELO DIERSMANN2 ABSTRACT: ROCHA, J.F.; ROSA, M.M.T. da; FRADE, C.C.M. & DIERSMANN, E.M. Anatomical and histochemical study in the leaves of Plantago major L. and Plantago australis Lam (Plantaginaceae). This paper presents the foliar anatomy and histochemical data of the Plantago major and Plantago australis. These species with medicinal property were cultivated and collected in the Botanic Garden of the Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Brazil. The leafs of the both species have a dorsiventral mesophyll, anomocytic stomata, glandular and nonglandular trichomes. An endodermis was also observed in two species. Collateral and bicollateral vascular bundles occur in Plantago major while in Plantago australis occur only collateral vascular bundles. Alkaloids, mucilage and phenolics compounds were detected in several tissues. KEY WORDS: Plantago; leaf anatomy; medicinal plant.

INTRODUO Os estudos relacionados com a medicina popular tm merecido cada vez maior ateno, devido a gama de informaes e esclarecimentos que fornecem Cincia contempornea (Silva et al.1992). Nota-se um nmero crescente de pessoas interessadas no conhecimento de plantas utilizadas como medicinais. Faz-se necessrio, portanto, o estudo detalhado das mesmas, visando avaliar a atividade fitoterpica indicada popularmente, bem como analisar o potencial de diversos taxa como matria prima na obteno de novos frmacos. O gnero Plantago L. (Plantaginaceae), cujas plantas so conhecidas vulgarmente como tansagem, lngua-de-vaca,

Departamento de Botnica, Instituto de Biologia, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Km 47 da Antiga Estrada Rio-So Paulo, Seropdica, RJ, Brasil. 23.850-000. 2 Bolsistas de Pr-Iniciao Cientfica - UFRRJ.
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tanchagem, etc., apresenta cerca de 16 espcies distribudas no territrio nacional (Barroso, 1991). Vrias espcies deste gnero possuem propriedades medicinais, com diversas indicaes teraputicas, dentre elas destaca-se a utilizao contra inflamao da boca e garganta (Correa Jr. et al. 1991 e Lorenzi, 1991). No presente trabalho so apresentados dados da anatomia foliar e histoqumica de Plantago major L. e Plantago australis Lam., espcies comumente utilizadas na fitoterapia popular. Atravs do levantamento bibliogrfico, foi possvel constatar que, embora caracteres anatmicos da famlia Plantaginaceae tenham sido estudados por Solereder (1908) e Metcalfe & Chalk (1957, 1989) as espcies do gnero Plantago carecem de estudos anatmicos e histoqumicos. Espera-se que tais estudos possam fornecer subsdios, que contribuam para melhor conhecimento do gnero, da famlia e sobretudo, para a avaliao das indicaes teraputicas citadas para as espcies aqui estudadas.

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Os resultados apresentados fazem parte do projeto de estudos anatmicos de plantas medicinais desenvolvido no Departamento de Botnica da UFRRJ. MATERIAIS E MTODOS O material utilizado neste estudo constou de folhas adultas coletadas de espcimes cultivadas no Jardim Botnico da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Parte do material coletado foi utilizado a fresco e outra parte foi fixada em lcool a 70o GL e FAA 50% (Johansen, 1940). Para a identificao da espcie, o material foi herborizado e encontra-se depositado no Herbrio do Departamento de Botnica da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (RBR), sob os nmeros, Plantago australis Lam. (RBR) - 4187 e Plantago major L. (RBR) - 4188 e 4189. Para o estudo anatmico, foram feitas seces transversais e longitudinais nas regies mediana do pecolo e no tero mdio da lmina foliar, utilizando-se o micrtomo de Ranvier e manualmente. As seces foram clarificadas em soluo comercial de hipoclorito de sdio a 50%, neutralizadas em gua actica a 1:500, lavadas em gua destilada e coradas com mistura de azul de astrasafranina (Bukatasch, 1972). Aps esse processamento, as seces foram montadas em glicerina a 50% (Strasburger, 1924), e as lminas foram lutadas com esmalte incolor. Para o estudo das epidermes, em vista frontal, foi empregado o mtodo de raspagem descrito por Metcalfe (1960). Aps a separao, estas foram clarificadas pela soluo de hipoclorito de sdio a 50%, neutralizadas em gua actica a 1:500, lavadas em gua destilada, coradas com safranina aquosa e montadas em glicerina a 50% (Johansen 1940). Para os testes histoqumicos foram feitos cortes a mo livre, em material fresco, submetidos a reagentes especficos: Sudan III e IV (Jensen, 1962), para

evidenciao de compostos de natureza lipdica; lugol (Langeron, 1949), para identificao de gros de amido; soluo aquosa de sulfato ferroso e formalina (JOHANSEN, 1940), para evidenciao de compostos fenlicos; soluo de iodo, iodeto de potssio e Reativo de Dragendorff (Costa, 1982), para deteco de alcalides; soluo aquosa a 7% de acetato cprico (Johansen, l.c.), para evidenciao de resinas; cido fluordrico (Jones & Handreck, 1965; Vogel, 1981) e cristais de fenol e leo de cravo (Netolitzky 1963; Johansen, l.c.) para identificao e evidenciao de slica; vermelho de rutnio e azul de metileno (Langeron, l.c.), para evidenciao de mucilagens pcticas e celulsicas, respectivamente. As descries morfolgicas foram baseadas no trabalho de Pereira & Romanuic Neto (1993). No estudo anatmico adotou-se o critrio de descrever os detalhes estruturais de P. major L., destacando-se apenas as diferenas observadas para P. australis Lam. As fotomicrografias e respectivas mensuraes foram obtidas com o auxlio do microscpio Orthoplan de Leitz, com ocular micromtrica e equipamento fotogrfico Orthomat. RESULTADOS Plantago major L. DESCRIO MORFOLGICA Plantago major L. uma erva com raiz principal inconspcua e razes secundrias espessas, caule 0,5-1,5 cm de comprimento (Fig. 1A e B). Folhas obovadas, margens crenadas, glabras ou pilosas. Inflorescncia laxa, (6,0-)6,57,0(9,0) cm de comprimento: escapo 11,518,0 cm de comprimento, inconspicuamente sulcado, glabro; ovrio 2-locular, 3 a muitos vulos por lculo.

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Sementes 6 a muitas, irregulares, castanhoescuras, testa rugosa. DESCRIO ANATMICA LMINA FOLIAR EPIDERME Seces transversais da lmina foliar revelam uma epiderme uniestratificada, com clulas de formato e tamanho variado, tanto na face adaxial, quanto na abaxial (Fig. 2A). Suas paredes periclinais externas achamse revestidas por uma cutcula delgada. Em vista frontal, ambas as faces apresentam clulas com paredes sinuosas, o que lhes confere formatos variveis. As folhas so anfiestomticas com estmatos do tipo anomoctico (Fig. 2B e C). Tricomas tectores e secretores so observados esparsamente em ambas as faces. Os tricomas tectores so unisseriados, pluricelulares e apresentam paredes espessas e clula basal de formato circular a elptico. Observa-se ainda, que as clulas epidrmicas que circundam tais tricomas dispem-se radialmente (Fig. 2C). Os tricomas secretores so pluricelulares e exibem uma cabea constituda por duas clulas de paredes delgadas (Fig. 2B). Sobre as nervuras as clulas epidrmicas, de ambas as faces, apresentam paredes mais espessas, retas ou levemente curvas dispostas em fileiras paralelas (Fig. 2D). MESOFILO Seces transversais da lmina foliar revelam um mesofilo com organizao dorsiventral. O parnquima palidico constitudo por um a dois estratos de clulas largas e curtas, deixando entre elas espaos intercelulares conspcuos. O parnquima lacunoso apresenta-se compacto, devido ao tamanho pouco desenvolvido das lacunas, suas clulas tm formas variadas e pouco ramificadas (Fig. 2A).

Figura 1 - A) Plantago major L. cultivado no Horto de plantas medicinais do Jardim Botnico da UFRRJ. B) Habitus de Plantago major L.

Figura 2 - Lmina Foliar de Plantago major. A) Seco transversal do mesofilo. Barra= 40,6m. B) Vista frontal da epiderme adaxial, registrando estmatos e tricoma secretor. Barra= 23,3m. C) Vista frontal da epiderme abaxial, destacando tricoma tector e estmatos. Barra= 61,6m. D) Vista frontal da epiderme abaxial sobre a nervura mediana com tricoma tector. Barra= 62,5m.

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Nota-se ainda, que o mesofilo em alguns trechos, principalmente nas proximidades da nervura mediana, no apresenta suas clulas diferenciadas em palidico e lacunoso. Suas clulas tm formas variadas, bem como seus espaos intercelulares (Fig. 3A). Ao longo de todo mesofilo, nota-se nervuras de diferentes calibres, dispostas esparsamente.

NERVURA MEDIANA O tecido de revestimento mostra caractersticas semelhantes as descritas para o restante da folha, Difere, no entanto, por apresentar maior espessamento parietal e cuticular, principalmente na face abaxial (Fig. 3B). Logo abaixo da epiderme abaxial notase um estrato de colnquima. Ao longo da nervura, tanto na face adaxial, quanto na abaxial, nota-se um parnquima fundamental, formado por clulas heterodimensionais de seco arredondadas ou elpticas, com paredes delgadas, deixando entre elas espaos intercelulares de dimenses variadas (Fig. 3B). Em relao ao sistema vascular notase a presena de apenas um feixe do tipo bicolateral (Fig. 3C). Fibras de paredes celulsicas, podem ser vistas, junto ao floema e ao xilema (Fig. 3D). Envolvendo todo o feixe vascular, observa-se uma endoderme com estrias de Caspary (Fig. 3C). Gros de amido podem ser vistos nas clulas endodrmicas. PECOLO Seces transversais revelam que este exibe formato cncavo-convexo, sendo que a parte convexa apresenta-se lobada. A epiderme uniestratificada, com paredes espessas (Fig. 4A). Estmatos podem ser vistos em ambas as faces, bem como tricomas secretores pluricelulares semelhantes aos j descritos anteriormente, so observados esparsamente por toda epiderme. Logo abaixo da epiderme abaxial, notase um a trs estratos de colnquima angular e lamelar (Fig. 4A). Tal tecido interrompido em alguns trechos, sendo substitudo por clulas parenquimticas. Observa-se ainda o colnquima nas extremidades das expanses laterais do pecolo (Fig. 4B). Preenchendo todo o crtex do pecolo, nota-se um parnquima

Figura 3 - Lmina Foliar de Plantago major em Seco Transversal. A) Mesofilo nas proximidades da nervura principal. Barra= 62,5m. B) Detalhe da face abaxial da nervura mediana, destacando a epiderme, colnquima e parnquima. Barra= 64,2m. C) Feixe vascular bicolateral da nervura mediana com endoderme. Barra= 62,5m. D) Pormenor do feixe vascular. Barra= 27,0m.

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aerfero com lacunas de tamanhos muito variados (Fig. 4C). O sistema vascular est representado por numerosos feixes colaterais (Fig. 4D). Fibras pericclicas de paredes celulsicas podem ser vistas, junto ao floema e xilema. Uma endoderme com estrias de Caspary e gros de amido, observada circundando os feixes vasculares, como j descrito para a nervura mediana (Fig. 4D). Plantago australis Lam. DESCRIO MORFOLGICA Plantago australis uma erva com raiz principal inconspcua, as secundrias espessas, caule (0,2-)0,4-0,7(-0,9) cm de comprimento (Fig. 5). Folhas espatuladas, margens inteiras, membranceas, pubescentes, tricomas, alvos, na base das folhas. Inflorescncia laxa, (11,0-)13,023,0(-32,0) cm de comprimento; escarpo (18,0-)19,0-25,0(-33,0) cm de comprimento, inconspicuamente sulcado, pubescente, tricomas alvos; ovrio 3-locular, 1 vulo por lculo. Sementes 3, castanhas, testa fovelada. DESCRIO ANATMICA Seces transversais, longitudinais e o estudo da epiderme em vista frontal, revelam que o pecolo e a lmina foliar de P. australis (Fig. 6A, B e C) muito semelhante s caractersticas observadas e descritas para P. major. Entretanto, podem ser destacadas algumas diferenas na estrutura foliar de P. australis que a distingue de P. major, entre elas podemos citar: - Tricomas tectores e secretores mais abundantes em ambas as faces da folha. - O pecolo exibe seco plano-convexa, podendo apresentar-se ligeiramente lobado em ambas as faces. - O pecolo apresenta tricomas tectores em grande quantidade na face abaxial e

Figura 4 - Pecolo de Plantago major. A) Seco transversal registrando a epiderme abaxial, colnquima e parnquima. Barra= 67,5m. B) Seco transveral da expanso lateral do pecolo, observando-se colnquima. Barra= 65,6m. C) Detalhe do parnquima aerfero. Barra= 100m. D) Feixe vascular colateral. Barra= 67,5m.

raramente na face adaxial e tricomas secretores somente na face abaxial. - As expanses laterais do pecolo so mais longas e preenchidas por um parnquima com paredes espessadas (Fig. 7A). - O parnquima cortical apresenta menor nmero de lacunas com menores dimenses (Fig. 7B). - Na nervura mediana, observa-se que o feixe vascular do tipo colateral (Fig. 7C).

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Figura 5 - Habitus de Plantago australis.

Figura 7 - Seco transversal da folha de Plantago australis. A) Expanso lateral do pecolo com parnquima. Barra= 61,8m. B) Detalhe do pecolo registrando epiderme adaxial e parnquima. Barra= 124,6m. C) Detalhe do feixe vascular do tipo colateral, na nervura mediana. Barra= 36,0m.

TESTES HISTOQUMICOS DE Plantago major E P. australis COMPOSTOS MUCILAGINOSOS encontrados nos tricomas secretores e na clula basal dos tricomas tectores. COMPOSTOS FENLICOS - nos tricomas secretores, nas clulas fundamentais da epiderme, no colnquima, no parnquima do xilema e mesofilo. COMPOSTOS ALCALODICOS - em todos os tecidos da folha. COMPOSTOS LIPDICOS - nos tricomas secretores, na cutcula e nas paredes das clulas endodrmicas. GROS DE AMIDO - nas clulas da endoderme e no parnquima do xilema. LIGNINA - nas paredes celulares dos

Figura 6 - Lmina Foliar de Plantago australis. A) Seco transversal do mesofilo. Barra= 38,4m . B) Vista frontal da epiderme adaxial com tricoma secretor e estmatos. Barra= 39,6m. C) Vista frontal da epiderme abaxial, registrando tricoma tector e estmatos. Barra= 67,5m. D) Vista frontal da epiderme abaxial, evidenciando tricoma secretor e estmatos. Barra= 25,7m.

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elementos condutores do xilema. CELULOSE - nas paredes celulares dos tecidos do sistema drmico, sistema fundamental e nas clulas do floema. DISCUSSO Plantago major e Plantago australis so espcies que apresentam grande similaridade anatmica. Entretanto destacamos como caractersticas principais para diferenci-las, a presena do feixe colateral na nervura mediana, expanses laterais do pecolo longas preenchidas com parnquima e tricomas tectores e secretores mais abundantes em ambas as faces da folha em P. australis, contrapondo com o feixe bicolateral na nervura mediana, expanses laterais do pecolo curtas preenchidas por colnquima e tricomas tectores e secretores menos abundantes em ambas as faces da folha. Ao tratar o sistema de revestimento, Metcalfe & Chalk (1957) citam para o gnero Plantago, estmatos do tipo anomoctico, ocorrendo em ambas as faces da epiderme, tricomas secretores e tectores pluricelulares. As caractersticas foram encontradas em P. major e P. australis, espcies aqui estudadas. Embora taxonomistas como, Pereira & Romaniuc Neto (1993) tenham descrito tricomas unicelulares nas folhas de P. australis e folhas glabras em P. major, registramos aqui, tricomas pluricelulares tectores e secretores em ambas as espcies. Compostos mucilaginosos e fenlicos foram identificados nos tricomas secretores e na clula basal dos tricomas tectores. Volkens (apud Gregory & Baas, 1989) sugere que a mucilagem reduz a transpirao, enquanto FAHN (1979) assinala que as mucilagens constituem um complexo de polissacardeos que aumentam a capacidade de reteno de gua pelas clulas. Corra et al. (1998) citam atividade farmacolgica como cicatrizante para P. major e referem-se a presena de taninos e mucilagens na sua

composio qumica. Tais autores mencionam ainda, que a parte utilizada da planta so as folhas. Solereder (1908) e Meltcalfe & Chalk (1957) citam a presena de estruturas isobilateral, dorsiventral e a ocorrncia de tecido homogneo nas folhas de espcies da famlia Plantaginaceae. Em P. major e P. australis foi registrada a presena de estrutura dorsiventral, bem como um tecido homogneo em alguns trechos do mesofilo, principalmente prximo a nervura mediana. Os testes histoqumicos evidenciaram compostos fenlicos em diferentes tecidos da folha, podendo ser vistos tambm no mesofilo. Tais substncias so citadas por Esau (1985) e Fahn (1979) como um grupo heterogneo de substncias presentes em quase todos os tecidos vegetais, dissolvidos no vacolo, em formas de gotas no citoplasma ou impregnando a parede celular. Os autores mencionados referem que tais substncias esto relacionadas com a proteo quanto ao dessecamento, aparecimento e ataque de animais, embora ainda haja dvidas quanto a totalidade de suas funes. Ao longo de toda a folha, associadas ao floema e ao xilema, notam-se fibras pericclicas de paredes celulsicas alm da presena de uma endoderme conspcua, circundando os feixes vasculares. Esclernquima no lignificado e uma endoderme com estrias de Caspary, so citados por Trapp (1933) e Metcalfe & Chalk (1957) para a famlia Plantaginaceae. Um parnquima aerfero com lacunas de tamanho variado foi registrado no pecolo de ambas as espcies, sendo que em P. australis as lacunas apresentam-se com menores dimenses e em menor nmero. As espcies estudadas tm seu habitat, preferencialmente em solos muito midos ou at mesmo encharcados. A presena de um tecido com lacunas pode ser interpretada como sendo uma caracterstica adaptativa ao tipo de ambiente em que as espcies habitam. Do exposto, podemos concluir que em

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relao anatomia foliar das espcies de Plantago aqui estudadas, os caracteres anatmicos descritos, de um modo geral, esto de acordo com as descries feitas para a famlia Plantaginaceae pelos autores anteriormente referidos. Os testes histoqumicos evidenciaram a presena de substncias que justificam a indicao teraputica das espcies na fitoterapia popular, como antinflamatrios e cicatrizantes. AGRADECIMENTOS Agradecemos professora La de Jesus Neves do Laboratrio de Anatomia Vegetal do Museu Nacional - UFRJ, pelo uso do fotomicroscpio. LITERATURA CITADA BARROSO, G. M. 1991. Sistemtica das Angiospermas do Brasil. Vol. 3. Imprensa Universitria UFV. Viosa, Minas Gerais. Brasil. 326 p. BUKATASH, F. 1972. Bemerkungem zur doppel far burng Astrablau- Safranin. Mikrokosmos. 6 (8): 255 p. CORREA Jr.; MING, L. C. & SCHEFFER, M. C. 1991. Cultivo de plantas medicinais, condimentares e aromticas. Curitiba, EMATER-PR. 162 p. CORRA, A. D.; SIQUEIRA-BATISTA, R. & QUINTAS, L. E. M. 1998. Plantas Medicinais: do cultivo teraputica. Editora Vozes. Petrpolis, RJ. 246 p. COSTA, A. F. 1982. Farmacognosia. 2a. ed. Vol. 3. Lisboa, Fundao Calouste Gulbekian. 1032 p. ESAU, K. 1985. Anatomia Vegetal. Barcelona, Omega. 779 p.

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