SEMINARIO PET

AAALISE DE JIAHOS
POR
CROMA1OCRAFIA CASOSA
AOME: FLAJIO SOARES SILJA
CROMATOGRAFIA
Histrico
M. TSWEET (1903): Separao de misturas de
pigmentos vegetais em colunas recheadas com
adsorventes slidos e solventes variados.
ter de
petrleo
CaCO
3
mistura de
pigmentos
pigmentos
separados
Cromatografia =
kroma cor] + graph escrever]
(grego)
CROMATOGRAFIA
!rincpio Bsico
Separao de misturas por interao diferencial dos seus
componentes entre uma SE ESTCIONRI (lquido ou
slido) e uma SE MVEL (lquido ou gs).
CROMATOGRAFIA
odalidades e Classificao
FM = Lquido
FM = Gs
Cromatografia
Lquida
Cromatografia
Gasosa (CG)
m CG a F
pode ser:
$Oida
Lquida
Cromatografia
Gs-Slido (CGS)
Cromatografia
Gs-Lquido (CGL)
CROMATOGRAFIA GASOSA
plicabilidade
"uais misturas podem ser separadas por CG ?
Misturas cujos constituintes sejam
VOLTEIS (="evaporveis)
(para uma substncia qualquer poder ser
"arrastada por um fluxo de um gs ela
deve se dissolver - pelo menos parcialmente -
nesse gs)
DE ORM GERL:
CG aplicvel para separao e anlise
de misturas cujos constituintes tenham
PONTOS D &LO de at 300
o
C
e que termicamente estveis.
O Cromatgrafo a Gs
O Cromatgrafo a Gs

1 - Reservatrio de Gs e Controles de Vazo / Presso.

- Injetor (Vaporizador) de mostra.
- CoIuna Cromatogrfica e orno da CoIuna.
- Detector.
5 - letrnica de Tratamento (Amplificao) de Sinal.
6 - Registro de Sinal (Registrador ou Computador).
-servao: em vermeho: temperatura controada
INSTRUMENTAO
s de rraste
Requisitos:
CUSTO Gases de altssima pureza podem ser
muito caros.
COMPTVEL COM DETECTOR Cada detector
demanda um gs de arraste especfico para
melhor funcionamento.
C
U
S
T
O
PUREZ

C
= 99,995 % (4.5)
= 99,999 % (5.0)
C = 99,9999 % (6.0)
INSTRUMENTAO
njetor "on-column Convencional

1 - Septo (silicone)
2 - Alimentao de gs de arraste)
3 - loco metlico aquecido
4 - Ponta da coluna cromatogrfica
INSTRUMENTAO
njeo "on-column de lquidos

- Ponta da aguIha da microseringa introduzida no
incio da coIuna.
- mostra injetada vaporizada instantneamente
no incio da coIuna.
- "PIug" de vapor de amostra forado peIo gs de
arraste a fIuir peIa coIuna.
INSTRUMENTAO
icrosseringas para njeo
LQUIDOS Capacidades tpicas: 1 3L, 5 3L e 10 3L
HmboIo
corpo (pirex)
aguIha (inox )
Microseringa de 10 3
Microseringa de 1 3 (seo ampliada)
corpo
guia
HmboIo (fio de ao
soIdado ao guia)
aguIha
INSTRUMENTAO
Colunas: Definies Bsicas
EMPCOTD
X a mm
L 0, m a m
#echeada com slido pul-
verizado (FE slida ou FE
lquida depositada sobre
as partculas do recheio)
CPILR
X 0, a 0, mm
L m a 00 m
!aredes internas recober-
tas com um filme fino (fra-
o de 3 m) de FE lquida
ou slida
INSTRUMENTAO
%emperatura da Coluna
T
E
M
P
E
R

T
U
R

C
O
L
U
N

CONTROLE CONIVEL D TEMPERTUR

D COLUN ESSENCIL PR OTER
O SEPR@O EM CG
INSTRUMENTAO
!rogramao Linear de %emperatura
Misturas compexas (constituintes com
voatiidades muito diferentes)
separadas ISOTERMICMENTE:
T
COL
IX
- Componentes mais
voIteis so separados
- Componentes menos voI-
teis demoram a eIuir, saindo
como picos maI definidos
T
COL
LT
- Componentes mais voI-
teis no so separados
- Componentes menos voI-
teis eIuem mais rapidamente
INSTRUMENTAO
!rogramao Linear de %emperatura
temperatura do forno pode ser variada
inearmente durante a separao:
Consegue-se boa
separao dos
componentes da
amostra em menor
tempo
TMPO
T

M
P

R
A
T
&
R
A
t
INI
t
IM
T
INI
T
IM
R
!armetros de uma programao de temperatura:
T
INI
Temperatura IniciaI
T
IM
Temperatura inaI
t
INI
Tempo Isotrmico IniciaI
t
IM
Tempo inaI do Programa
R VeIocidade de quecimento
INSTRUMENTAO
Detectores
Dispositivos que examinam continuamente o
material eluido, gerando sinal quando da pas-
sagem de substncias que no o gs de arraste
Grfico $ina x Tempo = #MAT#AMA
deamente: cada su-stncia separada aparece
como um P no cromatograma.
INSTRUMENTAO
Detectores
Mais mportantes:
DETECTOR POR CPTUR DE ELTRONS
(DCE OU ECD) $upresso de corrente
causada pea a-soro de eFtrons por
euatos atamente eetroficos.
DETECTOR POR CONDUTIVIDDE TRMIC
(DCT OU TCD) Variao da condutividade
tFrmica do gs de arraste.
DETECTOR POR IONIZ@O EM CHM (DIC
OU ID) ons gerados durante a queima
dos euatos em uma chama de H
2
+ ar.
DETECTOR POR ESPECTOMETRI DE
MSSS (MS OU SM) Feixe de eFtrons que
atinge a moecua
TEORIA BSICA
%empo de Reteno justado, t
R
`
t
R
TEMPO
S
I
N

L
t
R
Tempo de Reteno (tempo decorrido entre a in-
jeo e o pice do pico cromatogrfico)
O parmetro diretamente mensurvel de
reteno de um analito o
TEMPO DE RETEN@O USTDO, t
R
':
FASES ESTACIONRIAS
F Lquidas: Absoro
fenmemo fsico-qumico responsvel pela
interao analito + FE lquida a SOR@O
absoro ocorre no interior do fiIme de E
Iquida (fenmeno INTRfaciaI)
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de F Lquidas
- TCN
- DichIoram
- Lindano
- PCN
- PentacIoroaniIina
- RoniIano
7 - ntor
8 - pp'-DDE
9 - RovraI
0 - Cypermetrin
- Decametrin
CoIuna CP-SiI ( m x 0, mm x 0, 3m)
T
COL
9
o
C (, min) / 9
o
C a 7
o
C (0
o
C.min
-
)
Gs de rraste He mLmin
-
Detector TSD
17 min
$E!A#A DE !E$TIIDA$
DE AM$T#A DE VINH
ETECTORES
Definies Gerais
Dispositivos que geram um sinal eltrico
proporcional quantidade eluida de um analito
= 0 detectores j usados em CG
= equipam cromatgrafos comerciais
respondem peIa maior parte das apIicaes
TCD
Detector por
Condutividade
Trmica
FD
Detector por
Ionizao em
Chama
CD
Detector por
Captura de
EIetrons
MS
Detector Es-
pectromtrico
de Massas
TSD
Detector
Termoinico
ETECTORES
Parmetros sicos de Desempenho
SENSIILIDDE ReIao entre o incremento de
rea do pico e o incremento de massa do anaIito
MSS

R
E

ator de
Resposta, S
incIinao da
reta rea do pico
x Massa do
analito
o mesmo incremento
de massa causa um
maior incremento de
rea
$ensi-iidade
S
Na ausncia de erros determinados:
ETECTORES
Parmetros sicos de Desempenho
IX LINER DINMIC IntervaIo de massas
dentro do quaI a resposta do detector Iinear
MSS

R
E

A partir de
certo ponto o
sinal no
aumenta mais
linearmente
fim da zona de linearidade pode ser detectado
quando a razo (rea / Massa) diverge em mais de 5
% da inclinao da reta na regio linear:
MSS

R
E

/


M

S
S

0,9 S
,0 S
ETECTORES
Detector de Nitrognio - Fsforo
Altamente seletivo para compostos orgnicos
nitrogenados e fosforados
ProIa de saI de metaI
aIcaIino #bl (normal),
Kl
SeIetividade S para fosforados ou
nitrogenados 0.000 x - 00.000 x
em reIao a hidrocarbonetos
simiIares
0, pg a 0 pg (N) e 0, a pg (P)
Pesticidas Triaznicos usando DNP
1 Desetilatrazina
2 Desisopropilatrazina
3 Atraton
4 Atrazina
5 Trietazina
6 $ecbumeton
7 $ebutilazina
8 $imetrin
9 Dipropretrina
10 Dimetametrina
11 Metroprotrina
(00 pg cada)
ANLISE QUALITATIVA
Conceitos Gerais
Fontes de Informaes
Qualitativas
RETEN@O Uso de dados de reteno
de um anaIito para sua identificao
DETEC@O Detectores que fornecem
informaes estruturais sobre as
substncias eIudas
!ara anlise qualitativa confivel
por recomendvel
combinao de dados provenientes
de pelo menos duas fontes
!olifenis no vinho
potente antiinflamatrio;
efeito anticancergeno;
inibe eventos celulares
associados com a iniciao,
promoo e progresso de
tumores cancergenos.
trans-resveratrol
ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
Comparao de t'
R
usando dopagem ("spiking")
da amostra com o anaIito suspeito aumento da
confiabiIidade de identificao.
Amostra de vinho.
Talve: Tr do trans-
resveratrol sefa em
19,52min
omparao com
cromatograma da
amostra dopada permite
identificao mais
confivel do
desconhecido
ANLISE QUALITATIVA
Mtodos de Deteco "ualitativos
Mtodos de deteco que fornecem informaes
qualitativas sobre os analitos eludos:
Cromatografia Gasosa com Deteo
spectromtrica por Absoro no nfra-
Vermelho (CG-V)
Cromatografia Gasosa com Deteo
spectromtrica de Massas (CG-M)
Cromatografia Gasosa com Deteo
spectromtrica por misso Atmica
(CG-A)
Identificao muito confivel quando combinados a
tcnicas de identificao baseadas em reteno
ANLISE QUALITATIVA
spectrometria de Massas
PRINCPIO A amostra fragmentada e ionizada em
um padro caracterstico da espcie qumica.
MoIcuIas da amostra so bombardeadas por eItrons
(electron impact EI) ou ons (chemical ionization CI)
CDE + e
-
F CDE
.
+
+ e
-
O on formado se fragmenta
CDE
.
+
F
.
+ CDE
+
CDE
.
+
F
+
+ CDE
.
CDE
.
+
F
+
+ CDE
.
Os fragmentos inicos formados so separados
magneticamente de acordo com suas massas
moIecuIares e contados

U
N
D

N
C
I

MSS / CRG
grfico do nmero de
ons formados em funo
da razo Massa / arga
dos ons o E$!ET#
DE MA$$A$ do analito
ANLISE QUALITATIVA
spectrmetro de Massas

Cmara de Ionizao EIetrons gerados por um

fiIamento aquecido bombardeam a amostra. Os fragmentos
ionizados (carga +) so repeIidos peIo eIetrodo positivo e
conduzidos ao separador magntico.
Sada de Vcuo Todo o interior do EM deve estar sob
aIto vcuo (natm).
Separador Magntico ao do campo magntico
deixa apenas ons com determinada razo Massa / Carga
atravessar esta rea do equipamento.
Detector Uma vIvuIa fotomuItipIicadora ou um fotodiodo
gera um sinaI eItrico proporcionaI ao nmero de ons que
incide sobre o eIemento.
ANLISE QUALITATIVA
spectro de Massas
m/Z 8
m/Z 80
m/Z 79
- CO
- (CO + H)
m/Z 90
0 0 0 80 00 0 0
m / Z
ANLISE QUALITATIVA
Acoplamento CG - M
Interface cromatgrafo - espectrmetro:
CG EM
Vcuo
Separador MoIecuIar
O gs de arraste Ieve
(He) difunde mais
rapidamente que o
anaIito e tende a ser
drenado para o vcuo.
ANLISE QUALITATIVA
Acoplamento CG - M
$istema de ontrole e Aquisio de Dados:
MNDTRIO que
sistemas CG-EM sejam
totaImente controIados
por microcomputador.
$istema de ontrole e Aquisio de Dados:
Gerencia e monitora o funcionamento dos mduIos de
CG e EM.
CoIeta e arquiva espectros de massa em intervaIos
reguIares de tempo e constroi o cromatograma.
ps a corrida, compara espectros coIetados com
bases de dados para identificao dos eIuatos.
COMPUTDORES RPIDOS E COM GRNDE
CPCIDDE DE ESTOCGEM DE DDOS
ANLISE QUALITATIVA
dentificao de luatos
TEMPO
C
O
N
T

G
E
N
S
MSS / CRG
C
O
N
T

G
E
N
S
$eleo manual ou automtica do espectro de
massa correspondente a um eluato.
Interpretao manual do espectro e / ou com-
parao automtica com biblioteca de espectros
padro do equipamento.
ANLISE QUALITATIVA
dentificao de luatos
usca automtica em bibliotecas de espectros:
comparao estatstica ( ProbabiIity ased Matching )
ILIOTEC DE
ESPECTROS
ESPECTRO
DESCONHECIDO
PM
Lista com possveis
candidatos +
porcentagem de
confiabiIidade
# NOME RM. %
1 1-dodeceno C
12
H
24
99
2 1-dodecanol C
12
H
26
O 91
3 ciclododecano C
12
H
24
91
4 2-dodeceno C
12
H
24
66
5 1-undeceno C
11
H
22
35
6 8-metil-3-undeceno C
12
H
24
32
!M de um eluato
'desconhecido"
(1-dodeceno)
LIMIT@ES
Identificao pouco confiveI de es-
pectros muito simpIes
Limitada peIo tamanho da base de
dados (NIST .000 espectros)
Diferenas entre espectros gerados
por diversos EM
BIBLIOGRAFIA
hffp://quork.qmc.ufsc.br/qmcweb/orfigos/
vinho/enoIogio.hfmI ocessodo em
09/0b/Z004
www.chemkeys.com ocessodo em 09/0b/Z004
Quantitative determination of resveratroIs
in wine by GC/MS and eIementary study on
their physioIogicaI activity
Ma T, Li GK, Li XD, Tian XM, Zhang ZX, Bao
LJ, Zhou HT
CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE
UNIVERSITIES-CHINESE
21 (7): 1023-1027 JUL 2000
orris, DonieI. QUIMICA AMALTICA
QUATITATIVA.
COLIMS, CAPOL. ef oI-UMICAMP IMTPO-
DUO AOS METODOS CPOMATO0PAFICOS
AGRAECIMENTOS