PRCTICA N 4

HONGOS

INTEGRANTES: DAZ GRAJALES WALTER GONZLEZ GONZLEZ BEROLINA MONSERRAT LEN GORDILLO ALEJANDRA MORENO MENDOZA MARTHA ALEJANDRA RAMREZ PREZ JORGE IVN VILLATORO TOLEDO ISABEL MICROBIOLOGA 04/12/2011 ING. BIOQUMICA 5 SEMESTRE

OBJETIVO
Identificar las caractersticas macroscpicas y microscpicas ms distintivas de algunas cepas de hongos, observando la organizacin de sus estructuras reproductoras. Para esto se deber utilizar la tcnica de inoculacin para hongos filamentosos, y para levaduras.

OBJETIVOS ESPECFICOS Diferenciar 3 hongos de acuerdo a su apariencia filamentosa. Diferencias 3 hongos a partir de su estructura microscpica, identificando sus componentes

INTRODUCCIN
El termino hongo designa a un grupo de organismos eucariotas entre los que se encuentran los mohos, las levaduras y las setas. Se clasifican en un reino distinto al de las plantas, animales y bacterias. Esta diferenciacin se debe, entre otras cosas, a que poseen paredes celulares compuestas por quitina, a diferencia de las plantas, que contienen celulosa y debido a que algunos crecen y/o actan como parsitos de otras especies. Actualmente se consideran como un grupo heterogneo, polifiltico, formado por organismos pertenecientes por lo menos a tres lneas evolutivas independientes. Los hongos ms conocidos, conforman el reino de los hongos verdaderos (Fungi o Eumycota). Otros se ubican en el mismo reino de las amebas, el llamado Protozoa, como es el caso de los hongos mucilaginosos; y otros ms, entre los que se cuentan ciertos mohos acuticos que parasitan peces, comparten un tercer reino, el denominado Chromista, con las diatomeas, esas particulares algas microscpicas de curiosa simetra. Los hongos tienen distintos hbitos de vida. Los hongos saprfitos, es decir descomponedores de materia orgnica, cumplen una funcin ecolgica de la mayor relevancia pues garantizan el reciclaje de la materia muerta y, por lo tanto, la recirculacin de sustancias nutritivas en los ecosistemas. Los hongos parsitos, que viven sobre o dentro de otros seres vivos, obtienen su alimento de stos y llegan a producir enfermedad en su hospedero. Los hongos simbiontes que se asocian de manera mutualista con otros organismos constituyen alianzas vivas de beneficio mutuo como por ejemplo los lquenes y las micorrizas, siendo estas simbiosis de gran importancia en la naturaleza en procesos de colonizacin de hbitats y de circulacin de nutrientes. Desde la perspectiva econmica, los hongos ofrecen mltiples servicios, pues se utilizan como alimentos, levaduras de la masa de pan, fermentadores en la produccin de vino y cerveza, en la maduracin de quesos y en el control biolgico de plagas agrcolas. Adems, como fuentes de sustancias que por su actividad biolgica pueden ser de enorme utilidad en medicina y en la bioindustria (eg. antibiticos) y como agentes para estimular el desarrollo de las plantas. Sin embargo, tambin son dainos cuando actan como parsitos de plantas y animales o cuando estropean estructuras. En sta prctica analizaremos 3 diferentes hongos; esto nos permite tener una idea ms clara de la gran diversidad de este reino.

MARCO TERICO
HONGOS
Los hongos son microorganismo eucariontes de mayor tamao y complejidad que las bacterias. Segn su morfologa los hongos se pueden dividir en dos grupos: mohos (hongos filamentosos) y levaduras. Las levaduras son unicelulares y generalmente presentan reproduccin asexual por gemacin (SHIRAI, 2011). Los mohos presentan una estructura vegetativa denominada micelio, el cual est formado por una serie de tubos rgidos ramificados, dentro de los cuales se encuentra el citoplasma multinucleado. Estos tubos reciben el nombre de hifas. De esta forma a partir de una espora en germinacin se desarrolla una hifa, esta se ramifica y forma un micelio (SHIRAI, 2011). El crecimiento del hongo se prolonga hasta que los nutrientes desaparezcan. Las hifas pueden ser de dos tipos: vegetativas que penetran el substrato con el fin de absorber nutrientes e hifas areas que son las portadoras de las estructuras reproductoras (SHIRAI, 2011).

MORFOLOGA DE LOS HONGOS

Hongos filamentosos (MOHOS)

Las hifas pueden ser: Hifas septadas, debido a que poseen unos tabiques o septos de separacin que las dividen en clulas uninucleadas (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010). Hifas no septadas, en este caso las hifas crecen formando una masa de ramificacin y su conjunto se llama Micelio. Los micelios pueden ser a su vez: Micelio vegetativo, en relaccin con la nutricin o Micelio areo, lugar donde se dan las estructuras para la reproduccin (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010).

LEVADURAS

Son hongos unicelulares con forma oval o esfrica. Se pueden multiplicar mediante la llamada fisin binaria o por gemacin o divisin asimtrica. Pseudohifa es una nueva clula que no se separa y que adquiere forma filamentosa (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010).

Los hongos dimrficos son algunos hongos que pueden presentar forma de moho o de levadura (dimorfismo). Su forma suele depender de factores ambientales tales como; Temperatura, as son levaduriformes a 37 C y filamentosos a temperatura ambiente. Otros factores son por ejemplo la concentracin de CO2, crecimiento en suero, etc. (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010).

CULTIVO Los hongos crecen bien en medios artificiales y tienen requerimientos nutritivos simples, una fuente de carbono orgnico, generalmente azcar, y de nitrgeno suelen ser los elementos suficientes para obtener un buen crecimiento. Junto a ellos, un soporte slido, el agar, permite a los hongos filamentosos el desarrollo del micelio areo, donde se localizan las estructuras reproductoras y el desarrollo de colonias en el caso de las levaduras. El medio de cultivo ms utilizado para los hongos es el medio Sabouraud que rene estas caractersticas y un pH de 5-6, que dificulta el crecimiento bacteriano (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010). No es cierto que los hongos requieran necesariamente para su crecimiento ser cultivados en el medio de Sabouraud, la mayor parte de medios de cultivo utilizados en bacteriologa permiten su desarrollo, pero su utilizacin est consagrada por la costumbre. De hecho, la mayora de las descripciones de crecimiento y caractersticas morfolgicas de las colonias fngicas se han hecho sobre el medio Sabouraud (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010).

La adicin al medio de antibiticos como el cloranfenicol o la gentamicina,, que inhiben el crecimiento bacterias contaminantes, o antifngicos especiales (como la actidiona o cilohexamida) que inhiben el crecimiento de muchos hongos no patgenos, transforman al medio de Sabouraud en un medio ms selectivo (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010). Los medios de cultivo despus de sembrados, se incuban en aerobiosis y la temperatura ptima suele ser 25-30 C para los que producen infecciones profundas (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010). IDENTIFICACIN Un hongo se identifica en primer lugar por la morfologa macroscpica de la colonia, color, textura y velocidad de crecimiento. Para observar la estructura microscpica puede tomarse un pequeo fragmento de cultivo y montarlo entre cubre y portaobjeto, en fresco o contrastado con un colorante para su posterior observacin, lo que permitir confirmar la sospecha de hongo levaduriforme o filamentoso basada en la morfologa colonial (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010). Los hongos filamentosos se identifican a nivel de gnero especie por la morfologa del micelio, pero sobre todo por las caractersticas microscpicas de sus esporas asexuales y los elementos que las originan. Para conseguir la produccin de esporas a veces se requieren medios de cultivo especiales que facilitan la esporulacin. Las estructuras reproductivas asexuadas (conidioforos) son muy frgiles y para poder observarlas al microscopio sin distorsionarlas o destruirlas se emplean tcnicas especiales (microcultivo) (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010). Las resiembras de colonias de hongos levaduriformes se realizan como las de las bacterias, pero para resembrar hongos filamentosos debe cortarse con el asa micolgica un fragmento de micelio de la colonia y transferirlo a otro tubo; por lo que es difcil obtener cultivos puros (PRATS, 2007). Los hongos no esporulados (micelio estril) son difcilmente identificables. Los hongos levaduriformes se identifican mediante pruebas metablicas, de modo semejante a las bacterias (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010).

Morfologa macroscpica

Los hongos levaduriformes dan lugar a colonias semejantes a las bacterias, cremosas, opacas, con un dimetro de 3 a 7 mm, y en general de crecimiento relativamente rpido (24-72 horas) (PRATS, 2007).

(Colonias de Hongo Geotrichum candidum) Los hongos filamentosos dan lugar a colonias de mayor tamao (10-30 mm) que crecen radicalmente de modo progresivo, de aspectos inconfundibles, vellosos, algodonosos o pulverulentos, de vistosos y variados colores, que deben ser observadas en el anverso y reversos, donde pueden verse si el pigmento difunde al medio. Su crecimiento suele ser ms lento que el de las levaduras (3-20 das), pero pueden llegar a invadir toda la superficie del medio de cultivo. El color, forma y tamao de las colonias puede variar segn el medio de cultivo utilizado (PRATS, 2007).

(Colonias Aspergillus Nger) Los hongos dimrficos dan lugar a colonias filamentosos cuando se incuban en medios usuales entre 25 y 30 C, y a colonias levaduriformes si se incuban en agar sangre a 37 C (PRATS, 2007).

(Colonias de Coccidioides spp., crecidas en agar Mycosel.)

Morfologa microscpica

Para confirmar la diferenciacin entre colonias de hongos levaduriformes o filamentosos, lo que habitualmente es innecesario por su aspecto tan caracterstico, basta efectuar un examen en fresco realizando una observacin microscpica (PRATS, 2007). El examen microscpico de los cultivos se efecta de modo diferente segn se trate de colonias pertenecientes a hongos levaduriformes o filamentosos (PRATS, 2007). En hongos levaduriformes se observan efectuando una suspensin de la colonia en un agota de solucin salina depositada sobre un portaobjetos y observndola en fresco, contrastndola con azul de lactofenol o fijndola y tindola por la tincin de Gram. Para la observacin de las colonias de hongos filamentosos, se toma un pequeo fragmento de las colonias, cortando con el asa micolgica, o se recoge parte del micelio areo tocando la superficie de la colonia con la cara adhesiva de un fragmento de cinta adhesiva transparente que se transfiere a un portaobjetos en el que se ha depositado una gota de azul de lactofenol para su coloracin. La tcnica de la cinta adhesiva permite una mejor observacin de la morfologa y la disposicin ptima de las estructuras de reproduccin asexual, resultando el mtodo de eleccin si se pretende la identificacin de los hongos filamentosos (PRATS, 2007). En productos fluidos en los que se sospecha la existencia de levaduras capsuladas, como el criptococo, puede depositarse en el portaobjetos una gota de material, y aadir una gota de tinta china, lo que permite observar la levadura con la cpsula (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010). Muchas veces el examen microscpico de las micosis de los tejidos y rganos profundos se hace por tcnicas histolgicas a partir de biopsias. La hematoxilinaeosina se til para examinar las lesiones inflamatorias que, en ciertas ocasiones, orientan el diagnstico, pero no permite la deteccin de elementos fngicos, que se tien mal por esta tcnica. La tincin de PAS colorea intensamente la pared polisacrida de los hongos y permite na deteccin rpida de los elementos fngicos en los tejidos. Las tinciones argnticas permiten igualmente reconocer los elementos fngicos ya que la pared se tie en negro. En los tejidos de los hongos pueden observarse como levaduras aisladas, o como filamentos ramificados infiltrantes (ARGELLES, DIAZ FREIRE, & MORN HEVIA, 2010).

METODOLOGA
CULTIVO DE LOS HONGOS RHIZOPUS NIGRICANS, ASPRGILLUS NIGER Y PENICILLIUM SP.

1.-Se peso el agar PDA para preparar 750ml.

2.-Se licuo y se meti a la auto clave para esterilizar.

3.- Despus se vaci en cajas petri y se incubaron.

6.- una vez que creci el hongo, se procedi a analizar sus estructuras macroscpicas y microscpicas.

5.-Utilizando un asa con punta en forma de L (con un ngulo de 90o); formando las aristas de un cuadrado se sembraron los hongos. Posteriormente se incubaron.

4.-Ya listo el agar se procedi a sembrar los hongos.

RESULTADOS
Morfologa macroscopica
HONGO COLOR Y APARIENCIA DEL MICELIO

Aspergillus niger Verde-amarillo obscuro de aspecto polvoriento. Reverso blanco y canela.

Penicillium sp.

Verdeazulado con micelio con un acho reborde blanco.

Rhizopus nigricans Micelio algodonoso blanco y posteriormente grisceo. Blanco grisceo al reverso.

Morfologa microscpica Hongos Aspergillus niger Color y apariencia del micelio Filamentoso con conidiforos cortos, de pared lisa incoloros o ligeramente verdosos, tiene una corona de esterigma en forma de redoma, los conidios son redondos formando cadenas largas que no se ramifican, permanecen unidos formando columnas y las hifas septadas.

Penicillium sp

Forma conidios en una estructura ramificada, que termina en clulas conidiogenas llamadas fialides. Sus ramificaciones forman versculos, presentan hifas septadas y no es tabicado.

Rhizopus nigricans

Tiene numerosos estalones en el micelio, conectando el grupo de esporangiforos, No estn ramificados. Tiene hifas llamadas rizoides y aseptadas.

Tambin se observo la morfologa microscpica de una levadura.

MICROMORFOLOGIA
LEVADURA. APARIENCIA

Saccharomyces Cerevisiae Ascomiceto unicelular. Blastoconidios. Ascosporas. Clulas globosas y elpticas.

CONCLUSIN
Gracias a esta prctica nosotros pudimos extender nuestro conocimiento acerca de los hongos, desde cmo se pueden inocular en un medio de cultivo hasta como poder diferenciarlos, ya sea por su morfologa macroscpica, en el cual podemos notar el color que presentan las colonias, como fue el caso Aspergillus que fue verde-amarillo, el aspecto del micelio si es: algodonosa, aterciopelada, arenosa, vellosas, hmeda, seca; adems de la consistencia que presentan estas como si son: carbnaceas, blandas, pergamino, coriceos, carnosos, gelatinosos y leosos; y principalmente por el punto de vista microscpico, ya que es aqu donde nosotros podemos observar con detenimiento la estructura del hongo, ya sea por el tipo de hifa que tiene, tabicada (Aspergillus) o no tabicada (Rhizopus), la forma y tamao de las esporas (conidios), los esporangios, conidiforos si son simples o ramificados como Penicillium que son terminados por los racimos de fialides en forma de botella al igual que Aspergillus pero la diferencia recae en que Penicillium, las esporas se producen en cadenas ramificadas y secas de las extremidades de los fialides, con la espora ms joven en la base de la cadena y Aspergillus en el extremo de la hifa que est compuesta por una vesicula se rodea por la corona de filides directamente insertadas sobre la vesicula y no tienen ramificacin en sus esporas; tambin podemos notar la presencia o no de rizoides, como lo fue Rhizopus; en fin se necesita de mucha observacin para poder identificar todas estas caractersticas que contienen los hongos. En conclusin podemos resumir que: El ambiente adecuado influye en el cultivo de los hongos, y es muy importante tener un control del PH y de la temperatura ya que estos crecen a temperatura entre 22-28 C y a PH entre 5-6. En base a su funcin los medios de cultivo ms usuales para hongos los clasificamos en: Enriquecidos, Selectivos y de Produccin Para preparar un buen medio de cultivo que sea selectivo para hongos se debe de tener en cuenta que clase de hongo se desea cultivar, se adiciona antibiticos que inhiben bacterias y especialmente hacen que las colonias de los hongos no crezcan muy grandes para poder ser apreciados, adems de los nutrientes necesarios para estos como la quitina y sales minerales. Los hongos son organismos hetertrofos. Su reproduccin puede ser asexual y sexual. Las clulas que componen a los hongos pueden ser unicelulares (levaduras), pluricelulares o dimrficos. Los hongos tienen importancia en la industria de alimentos por que algunos son transformadores y producen olores que se emplean en algunos alimentos, tienen importancia medica por ser causantes de algunas enfermedades diversas, adems de ser productores de antibiticos, tienen importancia en la agricultura ya que pueden tener control microbiolgico de algunas plagas en algunas plantas; al igual que algunas especies pueden producir alteraciones en cultivos.

BIBLIOGRAFA
ARGELLES, A., DIAZ FREIRE, P., & MORN HEVIA, M. (2010). wikispace. Recuperado el 02 de DICIEMBRE de 2011, de MICOLOGIA GENERAL: http://microral.wikispaces.com/5.+Micolog%C3%ADa+general. PRATS, G. (2007). MIDROBIOLOGIA CLINICA. MADRID: EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA . SHIRAI, K. (s.f.). LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL. Recuperado el 02 de DICIEMBRE de 2011, de CULTIVO DE HONGOS FILAMENTOSOS: http://docencia.izt.uam.mx/smk/233155/practicas/Practica%205.pdf