CATEDRA: MICROBIOLOGA INFORME SOBRE ESTAFILOS

OBJETIVOS Identificar macroscpica y microscpicamente a las diferentes clases de estafilococos Conocer las pruebas de identificacin y sus reacciones Determinar la clase de estafilococo sembrado en la prctica MATERIALES Baja lenguas hisopos estriles Porta objetos Mechero Asas Tubos de ensayo Microscopio Aceite Suero fisiolgico

Agar sangre- Mack conkey Manitol salado Muller Hilton Perxido de oxigeno Tripticasa Plasma Cristal violeta Lugol Alcohol cetona

fucsina INTRODUCCIN

Morfolgicamente los estafilococos son cocos grampositivos. Los estafilococos crecen fcilmente sobre casi todos los medios bacteriolgicos, en cultivos su crecimiento es mejor en el medio sal manitol y agar sangre, es un coco anaerobio facultativo, esto significa que puede crecer tanto en condiciones con aire como carente de este. Su mayor velocidad de crecimiento es a 5 - 25 C; pero tambin se puede ver en activa fisin binaria entre 30 y 27 C. Adems, producen catalasa, lo que los diferencia de los estreptococos. Tiene importancia mdica principalmente el S. aureus, y en humanos adems de ste, el S. saprophiticus y el S. epidermidis. DESARROLLO TOMA DE MUESTRAS FARINGEA La muestra se debe obtener con hisopos con la ayuda de un depresor se inmoviliza la lengua, y se realiza la toma del rea amigdalar y faringe posterior, as como de cualquier zona inflamada o ulcerada. Es fundamental evitar rozar la torunda con la vula, la mucosa bucal, los labios o con la lengua, tanto antes como despus de la toma. La torunda se introducir en un tubo con medio de transporte tipo amies-stuart o realizar inmediatamente el inoculo en la caja. NASAL Se debe de obtener mediante la utilizacin de hisopos se los introduce hacia el fondo de las fosas nasales se realiza movimientos, para que la muestra se pueda adherir se saca e inmediatamente se procede a hacer el inoculo en la caja o se coloca en un medio de transporte. CULTIVO Se lo debe realizar en agar sangre y mack conkey, se debe realizar un inoculo en un borde de la caja con el hisopo luego procedemos a esterilizar el asa. Vamos a realizar las estriaciones con asa de platino plana, tratando de que la muestra se esparza y por cada estriacin esterilizar el asa.

CARACTERSTICAS DE CULTIVO Las colonias son visibles fcilmente, con forma redonda y aplanada, bordes netos, superficie lisa y brillante, consistencia variable, sin olor y en algunas ocasiones, hemolticas. ESTAFILOCOCOS S.AUREUS CAR.MACROSCOPICAS - Colonias redondas - C: Blanco, amarillo, dorado - Pequeas , brillantes - Bordes uniformes - Presentan hemolisis - Colonias redondas -C: gris o blanco - Pequeas uniformes - No hay hemolisis - Colonias redondas -C: gris amarillo o blanco - Pequeas uniformes C.MICROSCOPICAS -

S.EPIDERMIDIS

S. SAPROFITICUS

-Mide de 1-1.5 u -Cocos grampositivos -Se agrupan en racimos en forma de uvas. -Cocos grampositivos -Se agrupan en racimos en forma de uvas.

S.LUGDINENSIS

MICROCOCUS

- No hay hemolisis - Colonias redondas -C: amarillo - Bordes regulares - Presentan hemolisis - Colonias de bordes redondos - C: anaranjado - Segn su color su nombre - Mide de 1-2 mm - No hay hemolisis

-Cocos grampositivos -Se agrupan en racimos

-Cocos grampositivos - Cocos de 2u -Se agrupan en pares

FROTIS Aqu empleamos la tcnica del palillo es decir solo formamos una pequea lnea sobre el porta, adherimos la muestra flameando la placa, dejamos enfriar y procedemos a hacer la tincin de Gram Las bacterias pertenecientes a esta especie son cocos, con forma casi esfrica. Forman masas arracimadas, vindose como bacterias Gram positivas. En los cultivos viejos los estafilococos pueden aparecer como bacterias Gram negativas.

PRUEBA DE CATALASA Bacterias que viven en ambientes aerobios requieren de catalasa para convertir el perxido de hidrogeno en agua y oxigeno molecular. Es positiva la prueba cuando se ponen en contacto una bacteria con actividad catalasa con H2O2 3% y se producen burbujas de oxigeno. Y es negativa cuando no hay reaccin.

PRUEBA DE MANITOL SALADO Medio selectivo y diferencial para el aislamiento e identificacin de S. aureus. NaCl 7,5% le proporciona lo selectivo ya que solo estos microorganismos osmotolerantes pueden multiplicarse en el. Manitol es el nico azcar fermentado por las cepas patgenas de este gnero bacteriano. La produccin de cidos proveniente de la fermentacin del manitol es detectada por el viraje del indicador de pH presente en el medio (rojo fenol) a amarillo. Staphylococcus epidermidis no fermenta el manitol, da lugar a colonias pequeas rodeadas de un halo purpura.

PRUEBA DE COAGULASA EN TUBO Permite diferenciar Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) del resto de especies de Staphylococcus (coagulasas negativos). La tcnica en tubo detecta coagulasa libre y ligada. Mecanismo de accin de la coagulasa libre: procoagulasa (enzima extracelular bacteriana) reacciona con un factor activador presente en el plasma sanguneo similar a la protrombina, dando lugar a un complejo anlogo a la trombina (coagulasa propiamente dicha) que reacciona con fibringeno formando un cogulo de fibrina en ausencia de Ca2+. La coagulasa ligada o factor de agregacin acta directamente sobre el fibringeno y lo convierte en fibrina. No requiere la presencia de activadores plasmticos.

PRUEBA DE COAGULASA EN PLACA Permite hacer una prueba rpida de la que se utiliza en el tubo, se coloca una gota de suero fisiolgico, una o dos colonias, y una gota de plasma, realizamos unos leves movimientos para que se mezclen los elementos y observamos a la luz del microscopio, si hay aglutinaciones es positivo, y si no pasa nada es negativo. PRUEBA DE OF DE GLUCOSA Esta prueba sirve para estudiar simultneamente la reaccin de oxidacin o fermentacin de glucosa y la reduccin de nitratos a nitritos, por bacilos Gram negativos de fcil desarrollo. Esta prueba es til para diferenciar especies bacterianas. PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD Para realizar esta prueba utilizamos el medio de tripticasa en el cual colocamos colonias y dejamos incubar por 24 horas, con este medio introducimos un hisopo y recogemos un poco de la muestra. En el agar de muller Hilton realizamos estriaciones con el hisopo que tiene la muestra en tres direcciones en toda la caja y luego colocamos discos que nos van a mostrar la susceptibilidad de la muestra. Los discos que utilizamos fueron, Nb (Noboviosina) y B. ANTIBIOGRAMA Igualmente que en la otra prueba vamos a utiliza muller-Hilton, hacemos las estriaciones en 3 direcciones en toda la caja con el hisopo introducido en la preparacin de tripticasa, y procedemos a colocar los discos de la siguiente manera: (Si se sospecha que es un s. aureus)

En la colocacin de los discos hay que tener siempre en cuenta que la eritro y la clinda siempre tienen que estar juntas. S.AUREUS SENCIBLE RESISTENTE FOX= 22 E= 6 OX=24 CC=6 CIP=24 CN=6 SXT=20 P= 6 VA=20 RESULTADOS

1. CULTIVO En el agar sangre se pudo observar colonias redondas con bordes uniformes de color blanco. Tambin se observo la presencia de hemolisis

2. FROTIS Al observar al microscopio se encontr cocos en racimos y en cadenas, es decir se pudo observar estreptos y estafilococos:

3. CATALAZA Aqu hubo la presencia de burbujas por ende se concluye que es positiva.

4. MANITOL SALADO La caja se la dividi, en un lado se coloco micrococus y en el otro la muestra de nuestra caja, en este caso se obtuvo manitol positivo, ya que su pigmento cambio a amarillo.

5. COAGULASA EN PLACA Al terminar de mover para que se mesclen las colonias se pudo observar a la luz del microscopio que existi aglutinaciones, es decir fue positivo.

6. COAGULASA EN TUBO Despus del periodo de incubacin el resultado fue coagulasa positiva por la formacin del coagulo.

7. PRUEBA DE OF DE GLUCOSA Esta prueba sirve para estudiar simultneamente la reaccin de oxidacin o fermentacin de glucosa y la reduccin de nitratos a nitritos, por bacilos Gram negativos de fcil desarrollo. Esta prueba es til para diferenciar especies bacterianas.

8. P.SUCEPTIBILIDAD B=6, resistente Nb= 23, sensible

9. ANTIBIOGRAMA

CONCLUSIONES Se puede que con la las pruebas se concluye que de un estafilococo aureus.

confirmacin de todas se encontr la presencia

BIBLIOGRAFIA ATLAS VIRTUAL DE MEDICINA http://www.telmeds.org/AVIM/Abacterio/cocos%2520gram%2520positivos/images/CatalaseResults1. http://www.ferato.com/wiki/index.php/Estafilococo http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/staphylococcalinfections.html