"Prctica Biofuel" Actividade 1:

1. Observaches algn cambio na reaccin enzimtica ou nos tubos cnicos de control mentres tia lugar a reaccin? Non, non haba cambios aparentes. 2. Que pasou coa disolucin en cada cubeta logo de engadir a mestura enzima/sustrato disolucin de paro? As disolucins que conteen enzima viran amarelo, ste coller un cor mis intenso canto mis tempo estn reaccionando a enzima e o sustrato. 3. Escribe a reaccin qumica que ten lugar nesta prctica. O sustrato artificial usado na reaccin o p-nitrofenol--D-glucopiranos. O enzima, a celobiasa, rompe a ligazn glicosdica dando lugar a -D-Glucosa e p-nitrofenol. p-nitrofenol- -D-glucopiranosa + H2O --celobiosa--> -D-Glucosa + p-nitrofenol. 4. Compara a concentracin de producto producido na reaccin catalizada pola enzima coa dos controis nos que non se engadiu enzima. A reaccin con enzima produce en torno s 100 nmol de producto despois de 8 minutos, sen embargo non hay producto no tubo no que non se engadiu enzima. 5. Se tomaras unha medida a 15 minutos, cres que se teran producido mis productos que en 8 minutos? Razona a resposta. A concentracin producida de producto aunmento co tempo. O producto prodcese segundo unha taxa constante ata que se tea unha concentracin de sustrato limitada. Se a concentracin de sustrato en 8 mins non limitada, entn seguirase producindo porducto ata chegar a ese punto. 6. Como se pode estimar a concentracin de producto (en nmol) producida pola enzima? Por comparacin a simple vista da intensidade da cor amarela das mostras coa dos patrns de concentracin coecida. 7. Por que a cantidade de luz absorbida pola mostra proporcional concentracin de producto producido? O espectrofotmetro mide a cantidade de luz que absorbe a mostra. Canto maior a intensidade da cor amarela (maior a concentracin), maior cantidade de luz absorbida.

8. Determina a taxa inicial de aparicin de productos a partires dos valores de absorbancia. 75,9mnmol/min 9. a taxa de produccin do producto constante no tempo? A pendente da recta adoita ser constante durante un certor tempo, o que significa que a taxa de formacin de producto constante durante ese tempo. Cando a reaccin se leva chega ao final a taxa cae a cero

Actividade 2
1. Como se pode determinar a taxa inicial da reaccin para cada temperatura? A taxa inicial igual a cantidade de absorbancia entre o tempo 0 e 2 minutos dividido por 2. Exprsase, como a produccin de producto por minuto (nmol p-nitrofenol/min) 2. A que temperatura cres que esta enzima traballa mellor? Como chegas a esa conclusin? A enzima semella traballar mellor a 37C, a esa temperatura temos a maior taxa de produccin de produccin de producto. 3. Por que as reaccins qumicas ocurren mis rpidamente a temperaturas mis altas e mis lentamente a temperaturas mis baixas? A enerxa cintica das molculas maior a temperaturas mas altas. 5. Por qu a meirande parte das reaccins enzimticas son mis lentas a temperaturas moi altas? A meirande parte das enzimas son protenas e se desnaturalizan a temperaturas moi elevadas. 6. Se traballaras nu laboratorio no que se pretende usar esta enzima para producir industrialmente glucosa, que temperatura pensas que se tera que escoller para a reaccin? A enzima traballa mellor a 37C. 7. Segundo esta actividade, en que tipo de ambiente pensas que vive un organismo que produza esta enzima in vivo? Xustifica a resposta. Como a enzima do ensaio estable a temperatura alta, posible que o organismo viva en medios clidos. Pa nota 1. Que tipos de ligazns dos implicados na estabilizacin da estructura terciaria dunha enzima partirn a alta temperaturas? Cales non partirn? As pontes de hidrxeno, as ligazns inicas e as forzas de Van Der Walls.

2. Establcense ligazns covalentes entre as cadeas laterais dos aminocedos? S, as pontes disulfuro. 3. Cal pode ser a desvantaxe de usar a temperatura mis alta que rinda unha taxa de formacin de producto mis rpida? Requrese moita enerxa para subir a temperatura que ten lugar a reaccin.

Actividade 3
1. Como se pode determinar a taxa inicial da reaccin para cada pH? A taxa inicial de reaccin a concentracin de producto producida durante o intervalo inicial dividido por o nmero de minutos que comprende dito intervalo. Coincide coa pendente inicial da recta de produccin de productos en funcin do tempo. 2. A que pH semella traballar mellor este enzima? Como chegaches a esta conclusin? O pH ptimo do enzima est arredor pH 5. A ese valor a taxa inicial de produccin de producto a mis elevada. 3. Por que a meirande parte das reaccin enzimticas disminen a valores de pH moi altos e/ou moi baixos? Os valores extremos de pH poden producir a rotuta das ligazns que manteen estable a conformacin tridimensional do enzima. 4. Segundo esta actividade, en que tipo de ambiente pensas que vive un organismo que produza esta enzima in vivo? Xustifica a resposta. Un contorno cido.

Actividade 4
1. Pode a concentracin de enzima trocar a taxa inicial de reaccin? Xustifica a ta resposta. A taxa inicial de reaccin aumentar tempo que aumente a cantitade de enzima ata que exista exceso de enzima en relacin coa concentracin de sustrato. 2. Pode a concentracin de enzima trocar a concentracin final de producto, no suposto de comezar coa mesme concentracin de sustrato e deixando moito tempo para que a reaccin tea lugar? Non. a concentracin de sustrato a que determinar a concentracin de producto final.

3. Supn que traballas nun laboratorio no que se ten que determinar a [E] a utilizar na hidrlise da celulosa para a produccin de azucre, que vantaxe e que desvantaxe tera usar unha [E] alta? Unha concentracin de enzima elevada producir a mesma concentracin de producto mis rpidamente que unha concentracin menor. Se poden facer probas para establecer a [E] que render a taxa mxima de produccin sen chegar a estar en exceso. Usar exceso de enzima un estrago, o que supn una reduccin da eficiencia do proceso.

Actividade 5
1. De que xeit pode a concentracin de sustrato presente cambiar a taxa inicial de reaccin? Incrementando a concentracin de sustrato incremntase a taxa de aparicin de producto ata que existe exceso de sustrato. Neste caso, un aumento na concentracin de sustrato non conduce a ningn aumento na taxa de formacin de producto. 2. Tes que lle explicar a un grupo de rapazes que visitan a fbrica na que traballas, como o cambio na [S] afecta taxa de formacin de producto. Pensa nunha anloxa ou crea unha tira cmica de banda deseada para iso. Un lugar de envalaxe. O sustrato son os obxetos sen envalar, o producto os obxetos envalados e as enzimas seran as persoas que teen que envalalos. Se temos poucos obxetos que envalar, haber persoas que non estn facendo traballo e a produccin ser lenta. Se imos aumentando o numero de obxetos a envalar, a produccin ir aumentando ata que chegamos ao punto no que todalas persoas estn traballando (estara gastandose toda a enzima), neste punto anda que sigamos aunmentando o numero de obxetos para envalar, a produccin serguir sendo a mesma xa que todolos traballadores estn ocupados. 3. Como pode a concentracin de sustrato cambiar a concentracin final de producto, no suposto de que a reaccin pode ter lugar durante un periodo moi prolongado de tempo? Si. A concentracin de sustrato ten un efecto directo sobre a concentracin de producto final. No caso da rotura da ligazn beta-D-glucosdica por parte da celobiasa, canta mis celobiasa se engade, mis glucosa se produce.