Fundamentos y tcnicas de anlisis microbiolgicos Laboratorio de Diagnstico Clnico.

2 curso

Desinfeccin y esterilizacin - 1 U.T. 6 - 1 Bloque temtico I

Limpieza, desinfeccin y esterilizacin

A lo largo de este bloque hemos ido comprobando cmo los microorganismos estn presentes prcticamente en casi todos los lugares de nuestro organismo, as como de nuestro entorno cercano. El cambio de las condiciones ambientales o de las defensas del individuo puede provocar un crecimiento excesivo de determinadas especies microbianas, algunas oportunistas, que finalmente puede provocar una enfermedad infecciosa. Evitar el crecimiento incontrolado de estos microorganismos y eliminarlos total o parcialmente de aquellos productos o lugares que nos interesen, es una labor muy importante, tanto en nuestra vida cotidiana como en nuestra actividad laboral o docente. Diariamente nos lavamos para evitar el excesivo crecimiento de microorganismos sobre nuestra piel, con las consecuencias que ello provoca. Estamos acostumbrados a tomar nuestros alimentos libres de microorganismos. Cualquier producto que vayamos a introducir en nuestro organismo debera estar libre de grmenes. Las superficies de trabajo, los suelos, la ropa, los enseres deben estar limpios para garantizar nuestra salud. Es muy importante conocer las diferencias entre los tres conceptos que dan ttulo a este tema, sobre todo en aquello relacionado con el control y eliminacin de microorganismos. Limpiar es cualquier proceso mecnico, fsico o qumico que tiene por objeto disminuir las sustancias externas depositadas o adheridas sobre una superficie, sean microorganismos o no. Generalmente entendemos por limpieza cualquier proceso que arrastre y elimine la suciedad (escoba, gamuza, plumero). En ocasiones utilizamos agua en el proceso para aumentar las posibilidades de arrastrar partculas de menor tamao (fregona, bayeta) Sin embargo, algunas partculas que quedan adheridas a las superficies, como las grasas, son difcilmente eliminadas por friccin o por el agua. Para ello se utilizan los jabones o los detergentes. No obstante, la utilizacin de jabones no evita la necesidad de seguir realizando un proceso de arrastre o frotado de las superficies que queramos limpiar. Es necesario comprender que un proceso de limpieza nunca elimina totalmente los microorganismos presentes, sino que tan solo disminuye su cantidad absoluta. Para eliminar la viabilidad de dichos microorganismos, hemos de someter a los productos y materiales a un proceso final de desinfeccin o esterilizacin. Entendemos por desinfeccin el proceso que tiene por objeto destruir todos los microorganismos, patgenos o no, que existan sobre personas, animales, ambiente, superficies o cosas, aunque al destruir estos se eliminen tambin gran cantidad de microorganismos saprofitos o residentes, pero no asegurando la eliminacin de las formas de resistencia (esporas) Si pretendemos destruir toda forma de vida, saprofita o simbionte, vegetativa o de resistencia (esporas) utilizaremos la esterilizacin, basada en mtodos fsicos o qumicos. La esterilizacin es necesaria en todos los procedimientos de laboratorio donde sea imprescindible asegurar la ausencia de cualquier microorganismo, as como en objetos que vayan a penetrar en el organismo atravesando la superficie corporal, o que penetren en cavidades estriles. En el laboratorio debemos tener las manos limpias, las superficies de trabajo desinfectadas y los medios de cultivo y reactivos utilizados, estriles. Asimismo deben esterilizarse todos los residuos biolgicos generados en el proceso analtico microbiolgico. Se denomina desinfectante, segn la FDA a "aquella sustancia qumica capaz de destruir en 10-15 min. los microorganismos depositados sobre cualquier material, vivo o inerte, alterando lo menos posible el sustrato donde residen, y abarcando todas las formas vegetativas de las bacterias, hongos y virus". El trmino antisptico se usa para aquellas sustancias que evitan la existencia o desarrollo de grmenes sobre la piel o mucosas, heridas, abrasiones, etc.
Gustavo A. Daz Martn Profesor Tcnico de F. P. CFP Instituto Villaverde CC: 28062126 Curso 2009-2010 2 Curso L. D. C.

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Desinfeccin y esterilizacin - 2 U.T. 6 - 1 Bloque temtico I

Clasificacin de agentes utilizados en el control del crecimiento microbiano

Ebullicin Pasteurizacin Tindalizacin Vapor de agua Flameado Incineracin Aire caliente Estufa I.R.
Fluente A presin

Hmedo

Calor

Temperatura

Agentes fsicos:

Seco Refrigeracin Congelacin

Fro

Humedad Radiaciones

Desecacin Liofilizacin Infrarrojos Ultravioletas Ionizantes Ultrasonidos Cepillado Filtracin

Mercurio Plata Cobre Halgenos
Merthiolato Nitrato de Ag Sulfato de cobre Clorados Yodados
Lejia Hipocloritos Cloraminas Povidona yodada

Agentes mecnicos
Acidos y lcalis

Inorgnicos

Sales minerales

Oxidantes
Otros

Agentes qumicos:

Agua oxigenada Permanganato potsico Etilenglicol Cresoles Hexaclorofeno

Alcoholes Fenoles

Etlico Glicoles Fenol Deriv. monofenlicos Deriv. bifenlicos Clorhexidina Formaldehdo Glutaraldehido Violeta de genciana Azul de metileno Aninicos Catinicos Anfteros Neutros

Orgnicos

Biguanidinas Aldehdos Colorantes

Detergentes

Jabones Der. amonio cuaternario

Lauril-sulfato sdico Cloruro de benzalconio

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Desinfeccin y esterilizacin - 3 U.T. 6 - 1 Bloque temtico I

Mecanismo de accin de los agentes fsicos y qumicos

El efecto desfavorable de los agentes fsicos y qumicos sobre los organismos unicelulares, eucariotas o procariotas, se debe a mecanismos muy variados y no del todo conocidos. Por su intensidad, cualquier agente se puede clasificar en bacteriosttico, cuando impide su multiplicacin, o bactericida, si el efecto es mortal e irreversible. No siempre ambos mecanismos son diferentes; la mayor parte de las veces, el que se alcance uno u otro efecto, depende de la intensidad con que se aplique el agente. Segn el mecanismo de accin y la estructura sobre la que acten, los agentes fsicos y qumicos actan de maneras diferentes, aunque algunos de ellos puedan hacerlo por varios a la vez: Agentes que actan sobre la pared celular: - Por hidrlisis de la pared bacteriana (lisozima) Agentes que actan sobre la membrana citoplasmtica: - Por alteracin de los mecanismos de transporte activo (cidos, lcalis y detergentes) - Por inhibicin de la cadena transportadora de electrones (hexaclorofeno) Agentes que actan sobre las protenas y las enzimas: - Coagulacin y desnaturalizacin de protenas (calor, formol y alcohol) - Efecto txico sobre las enzimas, debido a la oxidacin de sus radicales libres (Cl, H2O2) - Formacin de compuestos con los radicales libres (mercurio, formol, glutaraldehdo) Agentes que actan por alteracin del ncleo: - Por combinacin con los grupos sulfhidrilos (oxidantes) - Por interferencia en la replicacin del ADN (radiaciones) Los antimicrobianos tambin actan sobre el crecimiento de los microorganismos, y aunque no tienen el mismo mecanismo de accin, los lugares sobre los que actan son muy parecidos. Vamos a ver algunas diferencias entre dichos mecanismos de accin

Mecanismos de accin de los antimicrobianos

Agentes que actan sobre la pared celular: - Por inhibicin de la sntesis de la pared bacteriana (Beta lactmicos) Agentes que actan sobre la permeabilidad de la membrana citoplasmtica: - Por aumento de la permeabilidad de la membrana (Polimixinas) Agentes que actan sobre la sntesis de protenas (y enzimas): - Inhibiendo la sntesis de protenas a nivel de la subunidad 50 S (Macrlidos) - Inhibiendo la sntesis de protenas a nivel de la subunidad 30 S (Aminoglucsidos) Agentes que inhiben la actividad enzimtica (antimetabolitos): - Inhibiendo la actividad de los enzimas por bloqueo de su centro activo (Trimetoprim) - Desplazando al sustrato natural por inhibicin competitiva (Sulfonamidas) Agentes que actan por alteracin de los cidos nuclicos: - Por inhibicin de la replicacin actuando sobre la DNA girasa (Quinolonas) - Por inhibicin de la transcripcin bloqueando la ARN polimerasa (Rifampicina) - Por rotura directa del ADN (Metronidazol)

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Desinfeccin y esterilizacin - 4 U.T. 6 - 1 Bloque temtico I

Control de esterilizacin
Los procesos de esterilizacin deben ser cuidadosamente controlados, comprobando en cada ocasin, si es posible, la temperatura, la presin y el tiempo de actuacin de cada agente. Generalmente estos parmetros estn monitorizados y son almacenados en un sistema que permite su lectura en cualquier momento. No obstante, aunque se alcancen tericamente las condiciones de esterilizacin, deberemos comprobarlo en cada proceso mediante procedimientos qumicos y biolgicos. Indicadores qumicos: Son unas tiras individuales o impresas en los envoltorios del material esterilizado que cambian de color cuando han sido alcanzadas las condiciones requeridas para la esterilizacin (temperatura, presin y tiempo). El cambio de color del indicador no demuestra que el material est estril. Controles biolgicos: Son los nicos que informan realmente sobre el proceso de esterilizacin. Para ello se utilizan esporas muy resistentes de ciertas bacterias. Pueden utilizarse esporas de Bacillus subtilis para el control de esterilizacin por xido de etileno o Bacillus stearotermophilus para el control de esterilizacin por autoclave. Estos controles biolgicos, incluidos con el material que se quiera esterilizar y sometidos al proceso de esterilizacin, son cultivados al finalizar el ciclo para comprobar que todas las esporas son inviables, y el proceso de esterilizacin ha funcionado correctamente. La concordancia de los resultados de los parmetros fsicos, indicadores qumicos y controles biolgicos, nos informan sobre la calidad de los procedimientos de esterilizacin.

Gustavo A. Daz Martn Profesor Tcnico de F. P.

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