Disciplina de BIOQUMICA do Ciclo Bsico de MEDICINA Universidade dos Aores 1 Ano

ENSINO PRTICO

4 AULA PRTICA

CONCEITO DE SOLUES TAMPO, pH E pK

1. Conceito de solues tampo (pH e pK) 2. Principais tampes fisiolgicos 3. Efeito tampo e sua eficincia

 Importncia da concentrao de H+ nos sistemas biolgicos

O io de hidrognio (H+) , de entre todos os ies inorgnicos, talvez aquele que exerce maior influncia na clula, por unidade de concentrao. Muitas das molculas das estruturas celulares e dos vrios sistemas de enzimas, ionizam-se e existem em equilbrio com os protes livres da clula. Se representarmos os grupos ionizados destas estruturas e enzimas por R-, poderemos representar o equilbrio com H+ pela seguinte equao:
KA

RH

R- + H+

(1)

em que KA representa a constante de dissociao do cido. A concentrao de H+ determina, portanto, as concentraes de R- e RH, que representam, respectivamente, as molculas dissociadas e em combinao com H+. Deve notar-se que a associao de H+ com R para formar RH determina tambm a concentrao de H+ livre e que, quanto maior for a afinidade de R- por H+, menor ser a concentrao de H+ livre.
-

Muitas reaces que ocorrem na clula dependem da carga elctrica das molculas dos sistemas envolvidos. Por exemplo, a actividade das enzimas, a permeabilidade da membrana plasmtica, o transporte activo de substncias concentradas selectivamente na clula, so dependentes da concentrao de H+, provavelmente porque este io determina a carga elctrica das molculas e estruturas celulares. Geralmente, existe uma concentrao ptima de H+ para cada mecanismo celular. Concentraes inferiores ou superiores a essa concentrao so, em geral, inibidoras, como se indica no caso especfico das actividades enzimticas (Fig. 1).

Actividade enzimtica

pH ptimo

(% do mximo) 100

50

0
4 5 6 7 8 9 10

pH Fig. 1. Relao entre o pH do meio e a actividade enzimtica

O pH ptimo da enzima representada na figura de aproximadamente 7,0. Apesar do pH ptimo de actuao de uma variedade de enzimas ser de aproximadamente 7, existem excepes significativas; por exemplo, a enzima pepsina, uma protease do estmago, tem um pH ptimo de 1,5. O pH do estmago bastante cido (pH = 1), podendo a enzima funcionar neste meio.

Um aumento do pH (reduo de [H+]) aumenta a dissociao das substncias, nomeadamente das protenas, e aquelas com um pK relativamente baixo, dissociam-se primeiro. Normalmente, ao pH das clulas ( 6,5 - 7,0), as protenas possuem uma carga predominantemente negativa e podem, portanto, absorver ies H+ produzidos pelo metabolismo da clula. Esta reaco entre as protenas ou outras substncias capazes de absorverem H+ (por ex., HPO42- e HCO3-) rpida e , portanto, responsvel por evitar flutuaes na concentrao de H+ na clula durante a sua actividade. Porm, torna-se, eventualmente, necessrio dispor de ies H+, temporariamente absorvidos pelas vrias substncias que entram em combinao com este io.

cidos e Bases
Um cido, segundo a definio de Bronsted, uma substncia dadora de H+, enquanto que uma base absorve H+. Na descrio que se segue, faremos referncia somente aos cidos, especialmente cidos fracos, que se dissociam parcialmente e existem em equilbrio, em soluo com o H+ e A- produzidos pela dissociao: KA H+ + A(2)

HA

onde HA representa o cido, A- a quantidade do cido que se dissociou e KD representa a constante de dissociao, a qual se pode expressar pela equao (3): [ H+] [A-] Ka = [HA] (3)

Em relao s bases, as consideraes so idnticas s que foram descritas para os cidos.

Os cidos fortes, tais como o HCl, dissociam-se completamente e, portanto, em gua, a concentrao de H+ ou Cl- igual concentrao original do cido. Assim, 0,1 M de HCl produz 0,1 M de H+ e 0,1 M de Cl-. No caso dos cidos fracos, tais como o cido actico, a concentrao de H+ produzida pelo cido em soluo aquosa inferior concentrao original do cido, porque s parte do H+ do cido se dissocia. A concentrao de H+ dissociado pode calcular-se pela equao (3), que pode ser representada como se segue: [HA] [H ] = Ka
+

(4) [A-] [HA] (5) [A-]

ou - log [H+] = - log KD - log

A [H+] geralmente indicada pelo valor do pH que definido como o negativo do logaritmo da concentrao de [H+]. Portanto: [HA] pH = - log KA - log [A-] (6)

Verifica-se na equao (6) que, quando as concentraes de HA e A- so iguais, o pH igual a - log KD. O valor de - log Ka uma constante caracterstica de cada cido e definida como o pH a que as concentraes de HA e A- so iguais.

Esta constante (-log Ka) representa-se pelo smbolo pKa. Portanto:

[A-] pH = pKa + log [HA] (7)

Esta equao a equao de Henderson-Hasselbalch, a qual muito til para calcular o pH de solues de cidos fracos.

Dissociao da gua A gua actua como um cido e como uma base, uma vez que produz H+ e OH : Ke H2O
-

H+ + OH-

(8)

onde Ke a constante do equilbrio da reaco. A concentrao de H+ produzido pela gua relativamente baixa e igual concentrao de OH-. O valor de Ke : [H+] Ke = [OH-] (9)

[H2O]

Como a concentrao da gua [H2O] relativamente alta e constante ( igual ao nmero de gramas de H2O num litro, dividido pelo peso molecular da gua, ou seja 1000/ 18 = 55,55 M), o produto Ke [H2O] pode expressar-se pela constante Kw (produto inico da gua). Portanto:

Kw = [H+] [OH] = 10-14

(10)

Se expressarmos esta equao em termos dos logaritmos dos valores representados: pKw = pH + pOH = 14 (11)

onde pOH tem o valor do - log [OH] por analogia com o valor de pH definido acima.

Uma vez que consideraremos somente cidos e bases fracos em gua, o produto das concentraes de [H+] e [OH-] ser igual a 10-14 (ou a soma pH + pOH = 14). Portanto, se a concentrao de H+ dum cido fraco em gua for de 10-5 M, a concentrao de OH- nessa mesma soluo ser de 10-9 M. Esta relao vlida para valores de pH entre 0 e 14. Apesar da concentrao de H+ poder ser expressa em termos de normalidade (N) ou molaridade (M), um pouco inconveniente, uma vez que se tem de recorrer ou a potncias (ex.: 10-6 M) ou a decimais (ex.: 0,000001 M). Assim, para evitar esta dificuldade Sorensen escolheu arbitrariamente expressar a concentrao de H+ como o negativo do seu logaritmo e designou esta funo de pH: pH = - log10 [H+]
-

(12)

Na tabela I indica-se a relao entre concentrao de H+, de OH e o pH.

TABELA I . Relao entre concentrao de H+ expressa em normalidade e o pH [H+]

1N 0,1 N 0,001 N 0,000 01 N 0,000 000 1 N 0,000 000 001 N 0,000 000 000 01 N 0, 000 000 000 000 01 N

[ OH-]
100 N 10- 1 N 10-3 N 10-5 N 10-7 N 10-9 N 10-11 N 10-14 N

log [H ]
+

- log [H ] = pH
+

10-14 N 10-13 N 10-11 N 10 -9 N 10-7 N 10-5 N 10-3 N 10-0 N

-0 -1 -3 -5 -7 -9 - 11 - 14

0 1 3 5 7 9 11 14

Tampes
Um tampo , geralmente, uma mistura dum cido fraco e do seu sal, capaz de

absorver ou libertar H+, de modo a evitar alteraes na concentrao deste io. Um termo mais descritivo para este sistema seria amortecedor, pois o seu efeito manter um meio constante, no que diz respeito concentrao de H+, em face de produo ou gasto deste io por qualquer reaco a nvel celular. Eficincia do Tampo A eficincia dum sistema tampo, refere-se eficcia do sistema para manter a concentrao de H+, constante. Quantos moles de H+ (ou OH-) podem ser adicionados a um meio contendo um sistema tampo para alterar significativamente a concentrao de H+? Claro que o nmero de moles necessrio tanto maior quanto mais eficiente for o sistema tampo.

Pela equao de Henderson-Hasselbalch, pode verificar-se que a alterao do valor de pH (e portanto da concentrao de H ) depende da razo [A-]/ [HA], isto , depende das concentraes do cido, [HA], e do sal do cido, [A-]. Uma anlise cuidadosa da equao revela tambm que o sistema tampo (isto , mistura do cido e do seu sal) mais eficiente na manuteno do pH constante, quando [HA] = [A-] e, portanto, quando pH = pKa. Na
+

prtica, utiliza-se um tampo para manter o pH constante. Este mais eficiente na gama de valores de pH situados entre uma unidade inferior e uma unidade superior ao valor do pKa do cido fraco (ou base fraca) que serve de tampo. Fora desta gama, a eficincia do tampo muito reduzida, como se pode verificar na fig. 2, que representa a titulao do cido actico e do amnio com NaOH.

CH3COOH

CH3COO- + H+

Fig. 2. Curva de titulao de um cido fraco, o cido actico, com um pKa = 4,7 Analisando a curva de titulao do cido actico representada na figura 2 pode verificar-se no incio da curva que, a adio de 0,1 do equivalente de NaOH, causa uma alterao no pH de aproximadamente uma unidade. Porm, para valores de pH entre 3,76 e 5,75 (ou seja, uma unidade de pH inferior e uma unidade de pH superior ao pKa do cido) a adio de mais NaOH, aumenta mais lentamente o pH. Fora destes valores de pH, uma 7

pequena adio de NaOH causa um aumento relativamente grande no valor do pH. O cido actico pode, portanto, ser usado como tampo na gama de pH entre 3,76 e 5,76. Para se tamponizar uma soluo noutra gama de pH, necessrio usar-se um cido fraco (ou base fraca) cujo valor do pKa corresponda ao pH desejado. Para se preparar o tampo, titula-se o cido at se obter o pH desejado. Os tampes mais comuns, porque so eficientes a pH fisiolgico, so os de fosfato (preparados de cido fosfrico ou de sais de fosfato), histidina e imidazol. Todas estas substncias possuem pKa entre 6 e 8. Para o caso do cido fosfrico, com trs equivalentes de H+ por mole (H3PO4), existem trs valores de pKa. Este cido pode portanto, servir de tampo em trs regies de pH, correspondentes aos valores de pKa do cido (pKa1 = 2,1; pKa2 = 7,2; pKa3 = 12,3).

Fig. 3. Curva de titulao do cido fosfrico. No caso dos aminocidos, os grupos carboxlicos dissociam-se a um pH mais baixo do que o pH a que se dissociam os grupos amnicos (Tabela II):

Tabela II. Os grupos qumicos dos aminocidos e os seus valores de pKa.

Grupo das protenas Carboxlico Reaco de dissociao COOH + NH CH COO- + H+ + H+ pK 3 - 4,7

Imidazol

HC HC

HC HC

N CH

6,1

N H NH3+

N H NH2 + H+

Amnico

6,5 - 10,5

Um aminocido como a glicina tem dois grupos ionizveis, logo aprsentar as seguintes formas de ionizao, com duas regies com poder tampo:

H2C - COOH NH+3

PK1 = 2,3 H2C - COO- + H+ NH+3

pK2 = 9,6 H2C - COO- + H+ NH2

No caso de aminocidos com mais de um grupo carboxlico, a curva que representa a titulao do aminocido com uma base, apresenta uma regio tampo para cada grupo carboxlico, alm da regio tampo correspondente ao grupo amnico.

Como exemplo, apresenta-se a dissociao do cido asprtico:

COOH pK1 = 2,1 HC - NH+3 CH2-COOH

COOpK2 = 3,9 HC - NH+3 + H+ CH2-COOH-

COOpK3 = 9,8 HC - NH+3 + H+ CH2-COO-

COOHC - NH2 +H+ CH2-COO-

Carga elctrica (+1)

(0)

(-1)

(-2)

As protenas possuem vrios aminocidos e, portanto, grupos carboxlicos e amnicos, que se ionizam a diferentes valores de pH. Isto explica o facto de as protenas serem bons tampes contribuindo para a manuteno do pH nas clulas.

Regulao do pH nos sistemas biolgicos

No organismo humano existem diversos tipos de regulao do pH (Tabela III). Tabela III. Regulao da concentrao de pH nos sistemas biolgicos.
Tipo de regulao Funo Tempo necessrio

1. Tampes qumicos (Protenas, HCO3 , HPO4 ) 2. Respirao

+ 2-

Combinam-se com o H+ (Pr (protena) + H

+

milisegundos

PrH)
minutos

(H + HCO3 H2CO3 CO2 + H2O)

-

Eliminao de CO2 nos pulmes

3. Regulao renal

Secreo de H+ Reabsoro de HCO3- e HPO42-

horas

Para alm dos tampes qumicos, a respirao e a regulao renal tm um papel de relevo os sistemas respiratrio e renal.

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