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TEMA 1: INTRODUCCION

I. CONCEPTOS Microbiologa es una Ciencia experimental que se ocupa del estudio de los microorganismos y de sus interacciones con otros organismos y con el medio ambiente. Microbiologa Industrial estudia todos aquellos aspectos de los microorganismos que tienen una aplicacin industrial, tanto en la transformacin de productos empleados en la alimentacin como en la produccin de sustancias tales como antibiticos, vitaminas, enzimas, as como en la obtencin de masa microbiana (protena unicelular, vacunas, fertilizantes microbianos, biopesticidas). Fruto del conocimiento de las capacidades que poseen los microorganismos ha sido, y sigue siendo, su inmediato aprovechamiento para estos fines y, as, a los mtodos tradicionales de produccin de sustancias por fermentacin se han unido recientemente las tcnicas de manipulacin gentica de los mismos que han permitido obtener, de forma masiva, nuevos productos de inters prctico que los microorganismos normalmente no sintetizan tales como insulina, hormona de crecimiento humana e interfern. Biotecnologa es la aplicacin de los principios cientficos y tcnicos en el procesamiento de los materiales por agentes biolgicos para obtener bienes y servicios. Actualmente, se denomina Biotecnologa Molecular a la aplicacin de las tcnicas del DNA recombinante en los seres vivos para la obtencin de productos de inters industrial. II. OBJETIVOS DE LA MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL Desde un punto de vista industrial, lo que se pretende es que se obtenga el mayor rendimiento posible de producto a partir del sustrato utilizado. Estos altos rendimientos se obtienen en la sntesis qumica; en la biosntesis, la energa obtenida se utiliza no slo para la obtencin del producto deseado sino que se aplica en todos los procesos metablicos que van a permitir a ese ser vivo crecer. Cuanto ms complejo sea el ser vivo, ms energa requerir para crecer y por lo tanto menor rendimiento obtendremos del producto deseado. De ah que siempre que se puede se utilizan microorganismos. No obstante existen una serie de productos que, en la actualidad, no pueden ser sintetizados por los microorganismos; de ah que se recurra primero a las plantas y sino a los animales. Por consiguiente, en la obtencin de productos industriales la primera va es la sntesis qumica, si no funciona se recurre a los microorganismos, plantas y finalmente animales. Los productos de inters industrial producidos por los microorganismos se encuadran en 7 categoras principales: 1.- Las clulas microbianas propiamente dichas. 2.- Las macromolculas que sintetizan, por ejemplo enzimas. 3.- Los productos de su metabolismo, tanto primario (compuestos esenciales para su crecimiento) como secundario (compuestos no esenciales para su desarrollo). En trminos generales, los metabolitos tienen un peso molecular bastante bajo (menos de 1500 Daltons) si lo comparamos con el peso molecular de los enzimas que vara desde 10000 hasta varios millones de Daltons. 4.- Se acude tambin a las clulas microbianas para llevar a cabo conversiones biolgicas a travs de las cuales un compuesto se transforma en otro estructuralmente relacionado por intervencin de uno o varios enzimas aportados

por las clulas. 5.- La obtencin de los derivados lcteos, cerveza, vino, pan, etc. constituyen alguno de los procesos biotecnolgicos ms antiguos donde la intervencin de los microorganismos es crucial. 6.- Ciertos microorganismos se hallan detrs de un proceso metalrgico que se remonta, al parecer, hasta la poca romana: la lixiviacin bacteriana de minas de bajo contenido para extraer de ellas metales. En la actualidad se utilizan microorganismos, Thiobacillus, para extraer hierro, cobre y zinc de minas sin contaminar la atmsfera. 7.- La actividad microbiana se aplica tambin a la detoxificacin y degradacin de las aguas residuales y desechos industriales. Las mareas negras y el vertido de lastres y aguas de lavado de los petroleros son otros tantos problemas que plantean los residuos, cuya solucin quizs est en manos de la Microbiologa ya que se han aislado muchos microorganismos capaces de consumir componentes del petrleo. III. DESARROLLO HISTORICO 1.- Emprico El arte de la fermentacin, definido tcnicamente en su sentido ms amplio como la transformacin qumica de compuestos orgnicos con la ayuda de enzimas (sobre todo los producidos por microorganismos), es muy antiguo. La capacidad de las levaduras para producir alcohol en forma de cerveza la conocan ya los Sumerios y Babilonios antes del ao 6000 a.c. Ms tarde, aproximadamente hacia el ao 4000 a.c., los Egipcios descubrieron que el CO2 generado por la accin de las levaduras (Saccharomyces) poda fermentar el pan. Referencias al vino, otro antiguo producto de fermentacin, se hallan en el Gnesis, donde consta que No consuma algo ms de lo debido. Hacia el siglo XIV d.c., la destilacin de bebidas alcohlicas a partir de grano fermentado, prctica originaria de China, era comn en muchas zonas del mundo (Francia-Brandy; Escocia-Whisky). Los microorganismos proporcionaron alimentos y bebidas durante ms de 8000 aos, sin que se tuviera nocin de su existencia. Leeuwenhoek, en el siglo XVIII, fue la primera persona que los describi en detalle al observar, a travs de su propio microscopio simple, el sedimento de vinos. Sin embargo, estas observaciones no condujeron a ninguna investigacin acerca de las posibles actividades de los microorganismos descritos. El papel de las levaduras como agentes fermentadores no fue reconocido hasta mediados del siglo XIX por Pasteur que descubri que las levaduras transforman el azcar en alcohol en ausencia de aire. A este proceso anaerobio se le conoce como fermentacin alcohlica. A finales del siglo XIX y gracias al desarrollo de las tcnicas de cultivos puros, s aisla y distribuye la primera cepa de levadura vnica, la Steinberg 92, para su uso comercial en la produccin del vino. Anteriormente, en 1883, Emil Christian Hansen obtuvo el primer cultivo puro de levadura cervecera que denomin Saccharomyces carlsbergensis. Con estos trabajos y los de Pasteur, la fermentacin pasa de ser un arte (resultados imprevisibles) a ser una ciencia (resultados previsibles). 2.- Cientfico Los progresos realizados en investigacin bioqumica bsica partir del descubrimiento de los enzimas por Buchner en 1897 fue considerable, pero no

comenzaron a aplicarse en la fermentacin industrial hasta la primera guerra mundial (1914).En el lado alemn, la obtencin de glicerol para la fabricacin de explosivos se convirti en una necesidad urgente. El bloqueo martimo britnico cort la importacin de aceites vegetales, la materia prima tradicional en la produccin de glicerol. Pero algunos aos antes, el bioqumico alemn Carl Neuberg haba vuelto a considerar cierta observacin de Pasteur: en la fermentacin alcohlica se solan originar pequeas cantidades de glicerol (fermentacin gliceropirvica -----> lgrima del vino). Avanzando en su estudio, Neuberg descubri que la adicin de bisulfito sdico al tanque de fermentacin favoreca la produccin de glicerol a expensas de la de alcohol. Este descubrimiento fue desarrollado rpidamente por los alemanes en una fermentacin industrial que produca 1000 toneladas de glicerol al mes. Los ingleses, por su parte, andaban escasos de acetona para la fabricacin de municiones. Dificultad de la que sali al paso un qumico de origen ruso, Chain Weizmann. Weizmann desarroll la fermentacin butanol-acetona que depende de la bacteria anaerobia Clostridium acetobutylicum. El descubrimiento de Weizmann jug un papel determinante en el desarrollo de la guerra. Al finalizar sta, rehus todos los honores que le propuso el gobierno Britnico. Sin embargo, utiliz su influencia para que el gobierno Britnico ayudar a establecer el estado Judo en Palestina. En 1949, Weizmann fue elegido el primer presidente de Israel. El proceso alemn de obtencin de glicerol desapareci de la escena al final del conflicto. Destino que no sufri el proceso butanol-acetona; ste persisti como fuente de acetona durante muchos aos, hasta que al principio de los 50 lo desplazaron otros procesos que se fundamentan en el petrleo. La produccin de cido ctrico por microorganismos tambin tiene su origen en la primera guerra mundial. Hasta entonces el cido ctrico se extraa de los ctricos, siendo Italia el mayor productor. Cuando los hombres fueron llamados a filas, los cultivos se desatendieron y al final del conflicto la industria estaba en ruina aumentando el precio del cido ctrico. Todo esto favoreci la introduccin en 1923 de un proceso microbiano para su obtencin. El organismo usado para la obtencin de cido ctrico, Aspergillus niger, es un aerobio obligado, por lo que debe cultivarse en presencia de oxgeno, justo lo contrario de Clostridium acetobutylicum.Para ello se desarrollaron los cultivos en superficie y as poder mantener al microorganismo en contacto con el aire. En 1928, Alexander Fleming observ que el hongo Penicillium notatum mataba sus cultivos de la bacteria Staphylococcus aureus. Tras cultivar el hongo en medio lquido y separar el lquido de las clulas, encontr que el lquido celular poda inhibir el crecimiento de muchas especies bacterianas. Llam al ingrediente activo del lquido con el nombre de penicilina, aunque no continu los estudios debido a que no posea conocimientos qumicos (era mdico) para aislarla. En la dcada de 1930, cierto nmero de qumicos britnicos intentaron aislar la penicilina. Pero fracasaron debido a su inestabilidad. Por ltimo, un estudio comenzado en 1939 en la Universidad de Oxford por Howard Florey, Ernst Chain y colaboradores condujo a la preparacin con xito de una forma estable de penicilina y a la demostracin de su impresionante actividad antibacteriana, primero en cobayas y despus en el hombre. El primer ensayo clnico con una preparacin de penicilina se llev a cabo el 12 de febrero de 1941. El paciente era un polica de Oxford que

se estaba muriendo por una infeccin con Staphylococcus (septicemia). Al administrarle penicilina se observ un mejoramiento espectacular, pero 5 das despus, cuando se les acab la penicilina, la infeccin volvi a emerger y el paciente muri. Este ensayo clnico fall debido a que no se poda obtener una produccin a gran escala de penicilina. En este punto (1940-1941), los britnicos estaban inmersos en la segunda guerra mundial. Florey y su colega Heatley consideraron que las condiciones de una Inglaterra en guerra no eran las adecuadas para el desarrollo de un proceso industrial de produccin del antibitico. Y as fue como se trasladaron a los Estados Unidos, en 1941, en busca de apoyo. Con la ayuda del Departamento de Agricultura y de varias compaas farmacuticas y Universidades se hizo posible la produccin a gran escala de Penicilina un ao despus. Al igual que Aspergillus niger, microorganismo utilizado en la produccin de cido ctrico, Penicillium notatum es aerobio obligado y por lo tanto deba ser crecido en cultivos en superficie, lo que favoreca la contaminacin y por lo tanto disminua el rendimiento de penicilina. La necesidad de utilizar tcnicas aspticas llev al desarrollo de los fermentadores con agitacin que actualmente son los que ms se utilizan para cultivar a gran escala los microorganismos. Las condiciones aspticas se conseguan esterilizando todo el equipo con vapor antes de la inoculacin y manteniendo la presin del interior del fermentador superior a la atmosfrica. El oxgeno se introduca a travs de aire estril y se distribua en el medio por agitacin. Otra contribucin al desarrollo de la biotecnologa moderna que se realiz dentro del programa de la penicilina fue el desarrollo de las tcnicas de seleccin de cepas. El Penicillium notatum original produca 2 mg de penicilina por litro de cultivo. El muestreo de diferentes Penicillium llev a la identificacin de una cepa superproductora de Penicilina, Penicillium chrysogenum. Para incrementar el rendimiento de esta cepa, se someti posteriormente y de una forma sistemtica a una variedad de agentes mutgenos, de tal manera que los supervivientes superproductores se seleccionaban y se sometan a otra ronda de mutaciones. Combinando las mejoras en la fermentacin con el uso de mutantes, hoy en da el rendimiento se ha incrementado hasta los 20 g/L. El advenimiento de la penicilina seal el comienzo de la era de los antibiticos. Siguieron pronto los descubrimientos de Selman Waksman quien aisl Streptomyces gryseus que produce estreptomicina. A partir de entonces se hizo prctica estndar el muestreo de un gran nmero de aislamientos del suelo, consiguindose obtener numerosos antibiticos nuevos a partir fundamentalmente de un grupo de bacterias denominadas Actinomicetos. 3.- Ingeniera Gentica Despus de la introduccin de la fermentacin de la penicilina no hubo prcticamente ningn desarrollo significativo en la microbiologa industrial durante 30 aos. La mayora de las compaas se dedicaban a la bsqueda de microorganismos que produjeran metabolitos o actividades deseadas, para posteriormente, realizar una seleccin de cepas superproductoras y desarrollar la fermentacin. Al final de los 60 se gener cierto revuelo ante las expectativas de utilizarlas clulas microbianas (biomasa) como una fuente de protenas, lo que se denomina

Single Cell Protein (SCP). Sin embargo, la introduccin de la SCP no tuvo el xito esperado debido a que coincidi con un rpido incremento del precio del petrleo y con el desarrollo de variedades de cultivos con alto rendimiento con lo que los pases desarrollados no necesitaban SCP y los pases subdesarrollados no podan construir plantas industriales para obtener SCP. El desarrollo en Biotecnologa, como en otras reas, est sujeto a presiones polticas y econmicas (en el mundo de los negocios existe poco altruismo). En 1973 Stanley Cohen, Herbert Boyer y sus colaboradores desarrollaron la metodologa necesaria para transferir la informacin gentica (genes) de un organismo a otro. El desarrollo de la tecnologa del DNA recombinante ha cambiado la naturaleza de la biotecnologa ya que la ingeniera gentica provee la capacidad para crear (ms que aislar) cepas superproductoras. El 15 de octubre de 1980, a los 20 minutos de comenzar la sesin en la bolsa de Nueva York, las acciones de la compaa Genentech subieron de 35$ a 89 $. Fue, hasta la fecha, la mayor subida de acciones en la historia de la bolsa de Nueva York. Era la primera vez que esta compaa cotizaba en bolsa. Cientficos de esta compaa, 2 aos antes (1978), haban conseguido producir insulina humana en la bacteria Escherichia coli con lo que poda ser usada por aquellos diabticos que eran alrgicos a la insulina disponible hasta la fecha (Insulina de cerdo). IV. FUTURO Las perspectivas futuras pueden llevar a los siguientes beneficios: Diagnstico, prevencin o cura de enfermedades infecciosas y genticas. Aumento del rendimiento de cultivos creando plantas resistentes a insectos, hongos y virus. Desarrollo de microorganismos que producirn compuestos qumicos, polmeros, aminocidos, enzimas y varios aditivos de alimentos. Facilitar la eliminacin de contaminantes y residuos txicos del medio ambiente. Aunque es importante enfatizar los aspectos positivos de los nuevos avances, tambin es necesario considerar las consecuencias sociales que pueden derivarse del uso de esta tecnologa: Puede ser algn organismo modificado genticamente perjudicial para otros organismos o el medio ambiente? Puede el desarrollo y uso de los organismos modificados genticamente reducir la diversidad gentica natural? Deben modificarse genticamente a los hombres? Los nuevos diagnsticos invadirn la privacidad de las personas? Deben tener propietario los organismos creados por ingeniera gentica?