Cromatografa de gases

La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografa, la fase mvil no interacta con las molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna. Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): la cromatografa gas-slido (GSC) y la cromatografa gas-lquido (GLC), siendo esta ltima la que se utiliza ms ampliamente, y que se puede llamar simplemente cromatografa de gases (GC). En la GSC la fase estacionaria es slida y la retencin de los analitos en ella se produce mediante el proceso de adsorcin. Precisamente este proceso de adsorcin, que no es lineal, es el que ha provocado que este tipo de cromatografa tenga aplicacin limitada, ya que la retencin del analito sobre la superficie es semipermanente y se obtienen picos de elucin con colas. Su nica aplicacin es la separacin de especies gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como fase estacionaria molculas de lquido inmovilizadas sobre la superficie de un slido inerte. La GC se lleva a cabo en un cromatgrafo de gases. ste consta de diversos componentes como el gas portador, el sistema de inyeccin de muestra, la columna (generalmente dentro de un horno), y el detector. Gas portador El gas portador cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los componentes de la muestra, y crear una matriz adecuada para el detector. Un gas portador debe reunir ciertas condiciones: -Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la fase estacionaria) -Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa

-Fcilmente disponible -Econmico -Adecuado al detector a utilizar

puro

El gas portador debe ser un gas inerte, para prevenir su reaccin con el analito o la columna. Generalmente se emplean gases como el helio, argn, nitrgeno,hidrgeno o dixido de carbono, y la eleccin de este gas en ocasiones depende del tipo de detector empleado. El almacenaje del gas puede ser en balas normales o empleando un generador, especialmente en el caso del nitrgeno y del hidrgeno. Luego tenemos un sistema de manmetros y reguladores de flujo para garantizar un flujo estable y un sistema dedeshidratacin del gas, como puede ser un tamiz molecular. Generalmente la regulacin de la presin se hace a dos niveles: un primer manmetro se sita a la salida de la bala o generador del gas y el otro a la entrada del cromatgrafo, donde se regula el flujo. Las presiones de entrada varan entre 10 y 25 psi, lo que da lugar a caudales de 25 a 150 mL/min en columnas de relleno y de 1 a 25 mL/min en columnas capilares. Para comprobar el caudal se puede utilizar un rotmetro o un simple medidor de pompas de jabn, el cual da una medida muy exacta del caudal volumtrico que entra a la columna. La pureza de los gases es sumamente importante, se requieren niveles 4.5 o mayores es decir 99.995 % de pureza. Sin embargo, debido al cuidado que se debe tener con la fase activa de la columna, se hace completamente necesario la instalacin de trampas a la entrada del Gas carrier, estas trampas obviamente tienen una capacidad limitada, pero son importantsimas al momento de usar el Cromatografo. Estas trampas evitan el ingreso de Hidrocarburos, agua, CO entre otros. Sistema de inyeccin de muestra La inyeccin de muestra es un apartado crtico, ya que se debe inyectar una cantidad adecuada, y debe introducirse de tal forma (como un "tapn de vapor") que sea rpida para evitar el ensanchamiento de las bandas de salida; este efecto se da con cantidades elevadas de analito. El mtodo ms utilizado emplea una microjeringa (de capacidades de varios microlitros) para introducir el analito en una cmara de vaporizacin instantnea. Esta cmara est a 50 C por encima del punto de ebullicin del componente menos voltil, y est sellada por una junta de goma de silicona septa o septum.

Inyector de muestra para un GC Si es necesaria una reproducibilidad del tamao de muestra inyectado se puede usar una vlvula de seis vas o vlvula de inyeccin, donde la cantidad a inyectar es constante y determinada por el tamao del bucle de dicha vlvula.

Un muestreador automtico para emplear la tcnica de Espacio de Cabeza o Head Space para GC (accesorio).

Si la columna empleada es rellena, el volumen a inyectar ser de unos 20 L, y en el caso de las columnas capilares dicha cantidad es menor, de 1 L, y dependiendo del tipo de columna capilar (ya que existen columnas con distinto dimetro interno) es que si se utiliza todo el volumen de muestra inyectado. Para obtener menor cantidad de volumen, se utiliza un divisor de flujo (la inyeccin se conoce como modo "Split") a la entrada de la columna que desecha parte del analito introducido. Si se utiliza todo el volumen de muestra la inyeccin es de tipo "Splitless". El modo Splitless, se emple ms para determinar pequeas cantidades o trazas (determinaciones ambientales). Si se inyecta 1 microlitro de solvente, por ejemplo agua al pasar a la fase vapor su volumen se multiplicar por mil. Es decir, un microlitro de agua pasara a ser 1 mL de agua en gas, como el volumen del puerto de inyeccin es limitado, se emplean split pulsado u otras configuraciones para garantizar el ingreso adecuado de las muestras. En caso de muestras slidas, simplemente se introducen en forma de disolucin, ya que en la cmara de vaporizacin instantnea el disolvente se pierde en la corriente de purga y no interfiere en la elucin. Segn las curvas de Van Demter (HEPT vs. Velocidad Lineal), el mejor gas a usar en la columna cromatogrfica como portador de los analitos es el hidrgeno, sin embargo dada su peligrosidad, es ms usado como gas de encendido en el detector FID, junto con el aire. Luego vienen, respectivamente, helio y nitrgeno. El gas hidrgeno es el mejor carrier y los flujos que manejan los cromatgrafos no son peligrosos, adems a la salida de estos generalmente existen restrictores de llama que evitan la propagacin de un posible incendio. Se puede recomendar el uso de hidrogeno debido a, primero por su bajo precio respecto a los otros gases y por la resolucin de los picos que se muestran en los cromatogramos. La relacin para la ignicin entre hidrgeno y aire es de 4,1% para el limite inferior y del 74,8% para el superior a 101,3Kpa y 298K (Safety Standard for Hydrogen and Hydrogen Systems, NASA), y se tiene que estar en presencia de una chispa o zona de calentamiento alta (desde 520C). COLUMNAS Y SISTEMAS DE CONTROL DE TEMPERATURA En GC se emplean dos tipos de columnas: las empaquetadas o de relleno y las tubulares abiertas o capilares. Estas ltimas son ms comunes en la actualidad (2005) debido a su mayor rapidez y eficiencia. La longitud de estas columnas es variable, de 2 a 60 metros, y estn construidas en acero inoxidable, vidrio, slice fundida o tefln. Debido a su longitud y a la necesidad de ser introducidas en un horno, las columnas suelen enrollarse en una forma helicolidal con longitudes de 10 a 30 cm, dependiendo del tamao del horno. La temperatura es una variable importante, ya que de ella va a depender el grado de separacin de los diferentes analitos. Para ello, debe ajustarse con una precisin de dcimas de grado. Dicha temperatura depende del punto de ebullicin del analito o analitos, como tambin la mxima temperatura de funcionamiento de la columna (fase estacionaria), y por lo general se ajusta a un valor igual o ligeramente superior a l. Para estos valores, el tiempo de elucin va a oscilar entre 2 y 30-40 minutos. Si tenemos varios componentes con diferentes puntos de ebullicin, se ajusta la llamada rampa de temperatura con lo cual sta va aumentando ya sea de forma

continua o por etapas. En muchas ocasiones, el ajustar correctamente la rampa puede significar separar bien o no los diferentes analitos. Es recomendable utilizar temperaturas bajas para la elucin ya que aunque a mayor temperatura la elucin es ms rpida, se corre el riesgo de descomponer el analito. DETECTORES El detector es la parte del cromatgrafo que se encarga de determinar cundo ha salido el analito por el final de la columna. Las caractersticas de un detector ideal son:


      

Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisin cundo sale analito y cuando sale slo el gas portador. Tienen sensibilidades entre 10-8 y 10-15 g/s de analito. Respuesta lineal al analito con un rango de varios rdenes de magnitud. Tiempo de respuesta corto, independiente del caudal de salida. Intervalo de temperatura de trabajo amplio, por ejemplo desde temperatura ambiente hasta unos 350-400 C, temperaturas tpicas trabajo. Estabilidad y reproducibilidad, es decir, a cantidades iguales de analito debe dar salidas de seal iguales. Alta fiabilidad y manejo sencillo, o a prueba de operadores inexpertos. Respuesta semejante para todos los analitos, o Respuesta selectiva y altamente predecible para un reducido nmero de analitos.

Algunos tipos de detectores:

    

Detector de ionizacin de llama (FID, Flame Ionization Detector). Detector de conductividad trmica (TCD, Thermical Conductivity Detector). Detector termoinico (TID, ThermoIonic Detector). Detector de captura de electrones (ECD, Electrn-Capture Detector). Detector de emisin atmica (AED, Atomic Emission Detector).

Vista de un detector GC del tipo FID (desmontado).

Otros detectores minoritarios son el detector fotomtrico de llama (PFD), empleado en compuestos como pesticidas e hidrocarburos que contengan fsforo o azufre. En este detector se hace pasar el gas eluido por una llama hidrgeno/oxgeno donde parte del fsforo se convierte en una especie HPO, la cual emite a = 510 y 526 nm, y simultneamente el azufre se convierte en S2, con emisin a = 394nm. Dicha

radiacin emitida se detecta con un fotmetro adecuado. Se han podido detectar otros elementos, como algunos halgenos, nitrgeno, estao, germanio y otros. En el detector de fotoionizacin (PID), el gas eluido al final de la columna se somete a una radiacin ultravioleta con energas entre 8,3 y 11,7 eV, correspondiente a una = 106-149 nm. Mediante la aplicacin de un potencial a la celda de ionizacin se genera una corriente de iones, la cual es amplificada y registrada. COLUMNAS Y TIPOS DE FASES ESTACIONARIAS


Columnas de relleno

Las columnas de relleno o empacadas consisten en unos tubos de vidrio, metal (inerte a ser posible como el acero inoxidable, Niquel, Cobre o Aluminio) o tefln, de longitud de 2 a 3 metros y un dimetro interno de unos pocos milmetros, tpicamente de 2 a 4. El interior se rellena con un material slido, finamente dividido para tener una mxima superficie de interaccin y recubierto con una capa de espesores entre 50 nm y 1 m. Para que puedan introducirse en el horno, se enrollan convenientemente. El material de relleno ideal consiste en pequeas partculas, esfricas y uniformes, con una buena resistencia mecnica, para tener una mxima superficie donde interaccionar la fase estacionaria y el analito. La superficie especfica mnima ha de ser de 1 m/g. Como todos los componentes de columnas para GC, debe ser inerte a altas temperaturas (~400 C) y humectarse uniformemente con la fase lquida estacionaria durante el proceso de fabricacin. El material preferido actualmente (2005) es la tierra de diatomeas natural, debido a su tamao de poro natural. Estas especies, ya extinguidas, utilizaban un sistema de difusin molecular para tomar nutrientes del medio y expulsar sus residuos. Por tanto, debido a que el sistema de absorcin superficial del analito y la fase estacionaria es parecido, son materiales especialmente tiles. El tamao es crtico a la hora de darse el proceso de interaccin del analito, y a menores tamaos la eficacia de la columna es mejor. Pero existe el problema de la presin necesaria para hacer circular un caudal estable de gas portador por la columna, ya que dicha presin es inversamente proporcional al cuadrado del dimetro de dichas partculas. As, el tamao mnimo para usar presiones mximas de 50 psi es de 250 a 149 m.


Columnas capilares

Las columnas capilares son de dos tipos bsicos: las de pared recubierta (WCOT) y las de soporte recubierto (SCOT). Las WCOT son simplemente tubos capilares donde la pared interna se ha recubierto con una finsima capa de fase estacionaria. Las columnas SCOT tienen en su parte interna una fina capa de material absorbente como el empleado en las columnas de relleno (tierra de diatomeas) donde se ha adherido la fase estacionaria. Las ventajas de las SCOT frente a las WCOT es la mayor capacidad de carga de esta ltima, ya que en su fabricacin se emplean mayores cantidades de fase estacionaria, al ser la superficie de intercambio mayor. Por orden de eficacia, en primer lugar estn las WCOT, luego las SCOT y por ltimo las columnas de relleno. Las columnas WCOT se fabrican a partir de slice fundida, conocidas como columnas tubulares abiertas de slice fundida o FSOT. Estas columnas se fabrican a partir de slice

especialmente pura, sin apenas contenido de xidos metlicos. Debido a la fragilidad inherente a este material, en el mismo proceso de obtencin del tubo se recubre con una capa depoliimida, de esta forma la columna puede enrollarse con un dimetro de unos pocos centmetros. Estas columnas, con propiedades como baja reactividad, resistencia fsica y flexibilidad, han sustituido a las WCOT clsicas. Las columnas FSOT tienen dimetros internos variables, entre 250 y 320 m (para columnas normales) y 150-200 m para columnas de alta resolucin. Estas ltimas requieren menor cantidad de analito y un detector ms sensible, al eluir menor cantidad de gas. Existen asimismo columnas macrocapilares con dimetros de hasta 530 m, que admiten cantidades de analito comparables a las de relleno pero con mejores prestaciones. En estas columnas existe un problema debido a la absorcin del analito sobre la superficie de la slice fundida, adsorcin debida a la presencia de grupos silanol (Si-OH), los cuales interaccionan fuertemente con molculas polares orgnicas. Este inconveniente se suele solventar inactivando la superficie por sililacin con dimetilclorosilano (DMCS). La absorcin debida a los xidos metlicos se ve paliada en gran parte por la elevada pureza de la slice empleada.


La fase estacionaria

Las propiedades necesarias para una fase estacionaria lquida inmovilizada son: 1. Caractersticas de reparto (factor de capacidad ' y factor de selectividad ) adecuados al analito. 2. Baja volatilidad, el punto de ebullicin de la fase estacionaria debe ser al menos 100 C mayor que la mxima temperatura alcanzada en el horno. 3. Baja reactividad. 4. Estabilidad trmica, para evitar su descomposicin durante la elucin. Existen como mucho una docena de disolventes con estas caractersticas. Para elegir uno, debe tenerse en cuenta la polaridad del analito, ya que a mayor polaridad del analito, mayor polaridad deber tener la fase estacionaria. Algunas fases estacionarias utilizadas actualmente (2005) son:
     

Polidimetilsiloxano, fase no polar de uso general para hidrocarburos, aromticos, polinucleares, drogas, esteroides y PCB. Poli(fenilmetildifenil)siloxano (10% fenilo), para steres metlicos de cidos grasos, alcaloides, drogas y compuestos halogenados. Poli(fenilmetil)siloxano (50% fenilo), para drogas, esteroides, pesticidas y glicoles. Poli(trifluoropropildimetil)siloxano, para aromticos clorados, nitroaromticos, bencenos alquilsustituidos. Polietilenglicol,sirve para compuestos polares, tambin para compuestos como glicoles, alcoholes, teres, aceites esenciales. Poli(dicianoalildimetil)siloxano, para cidos grasos poliinsaturados, cidos libres y alcoholes.

Generalmente, en columnas comerciales, la fase estacionaria se presenta enlazada y entrecruzada para impedir su prdida durante las operaciones de elucin o lavado. De

esta forma se obtiene una monocapa adherida qumicamente a la superficie de la columna. La reaccin implicada suele ser la adicin de un perxido al lquido a fijar, inicindose una reaccin por radicales libres que tiene como resultado la formacin de un enlace carbono-carbono que adems incrementa su estabilidad trmica. Otra forma es la irradiacin con rayos gamma. Otro tipo de fase estacionaria son las quirales, lo cual permite resolver mezclas enantiomricas. Este tipo de fases suelen ser aminocidos quirales o algn derivado adaptado al trabajo en columna. El grosor de la pelcula vara entre 0,1 y 5 m; el grosor depende de la volatilidad del analito. As, un analito muy voltil requerir una capa gruesa para aumentar el tiempo de interaccin y separar ms efectivamente los diferentes componentes de la mezcla. Para columnas tpicas (dimetros internos de 0,25 o 0,32 mm) se emplean grosores de 0,25 m, y en las columnas macrocapilares el grosor sube hasta 1 m. El grosor mximo suele ser de 8 m APLICACIONES La GC tiene dos importantes campos de aplicacin. Por una parte su capacidad para separar mezclas orgnicas complejas, compuestos organometlicos y sistemas bioqumicos. Su otra aplicacin es como mtodo para determinar cuantitativa y cualitativamente los componentes de la muestra. Para el anlisis cualitativo se suele emplear el tiempo de retencin, que es nico para cada compuesto dadas unas determinadas condiciones (mismo gas portador, rampa de temperatura y flujo), o el volumen de retencin. En aplicaciones cuantitativas, integrando las reas de cada compuesto o midiendo su altura, con los calibrados adecuados, se obtiene la concentracin o cantidad presente de cada analito. MONTAJE DE TECNICAS El montaje de una tcnica analtica de CG es netamente emprica, el perfil de los analitos que se quiera determinar, la eleccin de la fase mvil, los tiempos de retencin (elucin) estarn dados exclusivamente por las condiciones particulares de la columna (fase estacionaria) frente al equipo. Las rampas de temperatura a seleccionar bien pueden isotrmicas o escalonadas. La eleccin del gs depender del tipo de detector, la eleccin de la columna (fase estacionaria) depender de la polaridad de los compuestos a separar, el detector depender del tipo de compuestos a detectar. Usualmente una tcnica analtica de GC consumir muchas horas de un cromatografista en ser desarrollada e instalada por el mtodo del ensayo y error antes de ser validada como real. La eleccin de los estndares es fundamental en el desarrollo de la tcnica. La estabilizacin de la lnea base de la fase mvil en la fase estacionaria ( posterior al frente del solvente) a travs del tiempo es fundamental para establecer un mtodo. Una lnea de base (solvente) poco estable o irregular que cambia de intensidad frente al detector a medida que eluye debe ser afinada y estabilizada antes de introducir los analitos.

El layout de los parmetros del rango de temperatura del horno, la adecuada eleccin de la columna y su fase estacionaria (incluye, tipo, largo y dimetro), la eleccin adecuada del tipo de detector, las temperaturas del detector e inyector, los volmenes de analito, debern ser establecidas de modo tal que se obtenga la mayor eficacia en separar los analitos, y con la mejor resolucin posible. La pureza de la muestra depender de la preparacin previa de la misma. La CG es una metodologa altamente efectiva y su perfomance permite una amplia gama de posibiidades para la qumica analtica en compuestos orgnicos. Una derivacin de esta tcnica es la Cromatografa HPLC que funciona en base a la afinidad del analito por la fase mvil lquida en vez de gaseosa. La sensibilidad de la tcnica GC puede incluso detectar microgramos del analito si est bien montada. La cuantificacin se basa en clculos del rea bajo la curva que es proporcional a la concentracin del analito. Comnmente se usa en estndar interno de trabajo. CROMATOGRAFO DE GASES

http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Cromatografo_de_gases_diagrama.png http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_de_gases Cromatografa Keulemans ha definido la cromatografa como un mtodo fsico de separacin en el cual los componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye la fase estacionaria, de gran rea superficial, y la otra es un fluido (fase mvil) que pasa a travs o a lo largo de la fase estacionaria.

La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido dispuesto sobre un slido que acta como soporte, de gran rea superficial. La fase mvil es un fluido (puede ser gas, lquido o fluido supercrtico) que se usa como portador de la mezcla. En la cromatografa ocurren dos fenmenos muy importantes y que son prcticamente los rectores del proceso de separacin: la adsorcin y la absorcin. La adsorcin es la retencin de una especie qumica en los sitios activos de la superficie de un slido, quedando delimitado el fenmeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial. Esta retencin superficial puede ser fsica o qumica. La adsorcin depende de la naturaleza de la substancia adsorbida, de la temperatura, de la naturaleza y estado de subdivisin del adsorbente, y de la concentracin. La absorcin es la retencin de una especie qumica por parte de una masa y depende de la tendencia que tiene sta a formar mezcla o reaccionar qumicamente con la misma. Existen muchas maneras de clasificar los mtodos cromatogrficos. Segn, Giddings, se puede clasificar la Cromatografa por sus variantes:  Fase Mvil (puede ser gaseosa, lquida fluido supercrtico)  Fase Estacionaria  Mecanismo de Retencin (tipos de equilibrios implicados en la transferencia de los solutos entre las fases).  Forma de Contacto entre las fases (columna superficie plana)  Dimensionalidad  Escala Fsica  Gradientes Teoras del proceso Cromatogrfico El proceso cromatogrfico, aparentemente simple en prctica, es en realidad una compleja unin de fenmenos tales como hidrodinmica, cintica, termodinmica, qumica de superficie y difusin. Hasta la fecha se han propuesto muchas teoras, que incluyen complejos modelos matemticos para poder explicar el comportamiento de los solutos en las columnas cromatogrficas. Las ms estudiadas son: La Teora de los Platos Tericos (Martin y Synge), la Teora Cintica (Van Deemter, Zuiderweg, Klinkenberg y Sjenitzer) y la Teora Desarrollada (Golay) para Columnas Capilares. Segn la Teora de los Platos, una columna cromatogrfica est constituda por una serie de platos que contiene una fase estacionaria. Supone que el volmen de fase

estacionaria en cada plato es constante; que el volmen de fase mvil es constante de plato a plato; que en cada plato las dos fases estn en equilibrio, y que el valor del Coeficiente de Distribucin es constante e independiente de la concentracin del soluto. La principal desventaja de la Teora de los Platos Tericos es la falta de conexin entre la eficiencia de la columna cromatogrfica, el tamao de la partcula, la difusin, la velocidad de flujo y la temperatura. La otra desventaja es que utiliza un modelo basado en muchas suposiciones. La Ecuacin que rige esta teora es: N = 16(tr/w)2

La Teora Cintica considera el proceso cromatogrfico en funcin de los factores cinticos que intevienen en l. Siendo estos factores:  Las mltiples trayectorias (diferentes rutas) que toma un soluto durante su movimiento (migracin) a travs del empaque de la columna, provocando variaciones en la velocidad del flujo.  La Difusin Axial o Longitudinal del soluto en la fase mvil.  La cintica de la resistencia a la transferencia de masa entre las fases mvil y estacionaria.  La Ecuacin de Van Deemter, HETP H = A + B/u + Cu donde u= L(cm)/ traire(seg)

COLUMNA Es el lugar donde ocurre la separacin. Se dice que es el corazn de un cromatgrafo. Los materiales con los cuales generalmente se pueden elaborar las columnas son: cobre, aluminio, acero inoxidable, vidrio tefln. El relleno puede ser un slido, un lquido recubriendo un slido. Podemos clasificar las columnas segn el propsito del proceso cromtografico:  Empacadas  Analtica  Preparativas

 Capilares  W.C.O.T. (Wall Coated Open Tubular)  S.C.O.T. (Support Coated Open Tubular) FACTORES QUE AFECTAN LA EFICIENCIA DE UNA COLUMNA           Longitud de la Columna Dimetro de la Columna (1/4", 1/8", 1/16" de dimetro externo) Tamao de las partculas del relleno Naturaleza de las fases Cantidad de fase estacionaria Temperatura de la columna Velocidad del gas portador Cantidad de muestra inyectada Material del cual est elaborada la columna Enrollado de la columna

SOPORTE La funcin bsica del soporte es la de "mantener" (sostener, retener) la fase estacionaria. Idealmente debera ser un material inerte que "mantiene" la fase estacionaria sobre su superficie como una pelcula delgada. La mayora de los soportes cromatogrficos est hecha de diatomita. Qumicamente es casi todo slice, con algunas impurezas. Tambin se conoce como Tierras Diatomceas Kiselguhr (palabra alemana). Domina el campo de los soportes debido a su estructura, superficie y disponibilidad. Hay que tener en cuenta dos cosas a la hora de escoger un soporte: La Estructura, Caractersticas Fsicas (contribuye a la eficiencia de la columna cromatogrfica):     y la Qumica de Superficie Caractersticas Superficiales (gobierna la participacin del soporte en los resultados de la separacin).
o o Grupos silanoles activos Iones metlicos

Tamao de partcula Dimetro del poro Densidad rea Superficial

Adems de las caractersticas anteriores, la seleccin del soporte va a depender tambin de:
y y la naturaleza de la muestra la naturaleza de la Fase Lquida o el uso que se le va a dar a la columna: General- Especfico

Precio

Podemos resumir que un buen soporte debe reunir las siguientes caractersticas:
Elevada Superficie por unidad de volmen Estabilidad Trmica Dureza mecnica suficiente para que pueda resistir los procedimientos de revestimientos y relleno Inactividad qumica o de adsorcin Baja resistencia al paso de la fase mvil

La eliminacin reduccin de los sitios activos de adsorcin (tambin conocido como Desactivacin de la Supeficie) de un soporte cromatogrfico puede efectuarse de varias maneras:
    Remocin por lavado con cido (NAW AW) Eliminacin Remocin por reaccin del Grupo Silanol Saturacin de la superficie con una fase lquida Impregnando recubriendo con material slido inerte

FASE ESTACIONARIA LQUIDA Al hablar de fase estacionaria lquida entramos en contacto con dos palabras trminos: Polaridad y Selectividad. Las fases lquidas podemos clasificarlas segn sus polaridades cromatogrficas, nos valemos de unas constantes que determinan dicha polaridad. Existen dos sistemas:
 Constante de Rohrchneider  Constante de McReynolds

Existen muchas discusiones sobre este tema para poder definir y describir el parmetro polaridad en cromatografa, podemos decir que la polaridad de una fase estacionaria lquida se refiere a las interacciones intermoleculares que involucra dipolos permanentes. Selectividad es definida como las diferentes atracciones intermoleculares Varias cualidades ha de reunir un lquido para servir como fase estacionaria:
1. Viscosidad 2. Tensin Superficial 3. Tensin de Vapor

4. Selectividad respecto a los componentes de la fase mvil 5. Reversibilidad del Reparto 6. Estabilidad Trmica

GAS PORTADOR El gas portador cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los componentes de la muestra, y crear una matriz adecuada para el detector. Un gas portador debe reunir ciertas condiciones: o Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la fase estacionaria) o Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa o Fcilmente disponible y puro o Econmico o Adecuado al detector a utilizar DETECTORES Un detector es un dispositivo para revelar la presencia de las sustancias eludas a la salida de la columna cromatogrfica. Podemos expresar que el detector son los "ojos" de un cromatgrafo. El Detector es un dispositivo capaz de convertir una propiedad fsica, no medible directamente, en una seal elaborable y ofrecernos informacin sobre la naturaleza y magnitud de la propiedad fsica. En cromatografa un detector funciona comparando una propiedad fsica entre el gas portador puro y el mismo gas portador llevando cada uno de los componentes que previamente se han separado en la columna, esta accin se traduce en una seal tipo elctrica, que posteriormente se amplificar mediante un registrador grfico integrador permitiendo indicar el momento que salen de la columna los componentes. CLASIFICACIN DE LOS DETECTORES Estos pueden ser clasificados:
y

Detectores segn su Grado de Selectividad :

o o

Universales. Responde a la mayora de los solutos que pasan por l. Especficos Selectivos. Exhibe una gran respuesta a un grupo particular de substancias con un mnimo de respuesta a otras.

Detectores Destructivos y No destructivos. Esta clasificacin, obviamente, es en referencia a si la muestra es destruda o no.

Detectores segn su Modo de Respuesta:

o

Dependientes del Flujo Msico. Producen una seal que es proporcional a la cantidad de soluto que pasa a travs de l en la unidad de tiempo pero es independiente del volmen de gas portador requerido para la elucin. Dependiente de la Concentracin. Dan una seal proporcional a la cantidad de soluto por unidad de volmen de gas portador que pasa a travs de l.

Detectores segn el proceso de deteccin Ionizacin, ptico-espectroscpico, Electroqumico, etc.

CARACTERSTICAS DE LOS DETECTORES

y

Sensibilidad. Medida de la efectividad de un detector para convertir la muestra en una seal elctrica medible. Linealidad. Rango de masa concentracin de muestra sobre el cual el detector mantiene una sensibilidad constante sin una desviacin arbitraria. El significado prctico de la linealidad del detector es el que le indica al analista la concentracin para la cual el detector es confiable. Hay dos lmites en la curva de linealidad:
o

El lmite de concentracin inferior, que es dado por el lmite de deteccin y, El lmite Superior, definido por un porcentaje de desviacin arbitrario de la curva de linealidad, normalmente se toma un 5% de desviscin.

Rango Dinmico Lineal.Rango sobre el cual la sensibilidad del detector es constante. Ruido. Es cuantificado por el promedio de la amplitud pico-pico de la seal. El significado de conocer el nivel de ruido de un detector es un factor determinante en la determinacin de la cantidad mnima detectable y el lmite inferior del rango lineal. Lmite de Deteccin. Est definido como la mnima cantidad de substancia que puede producir una seal que sea el doble del nivel de ruido. Corriente de Fondo. Seal constante de salida generada por el proceso en el que un detector est operativo sin que alguna substancia pasa a travs de l. Esta seal es muy importante, ya que permite diagnosticar el buen o mal funcionamiento del detector.

DETECTORES MS USADOS EN CROMATOGRAFA DE GASES

y

Detector de Conductividad Trmica. Mide la conductividad trmica del gas portador, ocasionada por la presencia de substancias eludas. Detector de Ionizacin a la Llama. Basado en la medida de las variaciones de la corriente de ionizacin en una llama oxgeno-hidrgeno debido a la presencia de substancias eludas. Detector de Captura Electrnica. Basado en la electronegatividad de las substancias eludas, y su habilidad para formar iones negativos por captura de electrones. Detector de Fotometra a la Llama. Basada en la medida de la intensidad de la emisin molecular de la fluorescencia de heterotomos en las molculas orgnicas. Detector de Ionizacin de Llama Alcalina

Detector de Espectrometra de Masas CROMATOGRAMA Y SU INTERPRETACIN Los siguientes trminos son los utilizados en un cromatograma tpico y recomendados por la IUPAC:
Line Base Pico Cromatogrfico Base del Pico rea del Pico Altura del Pico Ancho del Pico Ancho del Pico a la mitad de la Altura

Medida de la Altura rea de Pico

y

Altura del Pico: Medida que se efecta, para cada pico de inters, desde la lnea base hasta el mximo del pico.

Los errores de malas mediciones se pueden atribuir a:

o o o Insuficiente Resolucin Variaciones en la lnea base Picos extremadamente pequeos

Las desviaciones en la lnea base se pueden compensar por interpolacin de sta entre el principio y el final del pico.

REA DEL PICO. Existen varias tcnicas para la determinacin del rea de un Pico Cromatogrfico: Integracin Manual Mtodos Geomtricos Triangulacin: En esta tcnica se trazan lneas tangentes a cada lado del pico. La altura se mide desde la lnea base hasta la interseccin de las dos tangentes. El ancho se mide tomando la interseccin de las dos lneas tangentes con la lnea base. Luego se utiliza la frmula A=1/2*Altura del Pico* Base del Pico. Las limitaciones de esta tcnica estan en el trazado de las lneas tangentes, un pequeo error al trazar las tangentes puede afectar la medida de la altura. Altura por ancho a la mitad de la Altura: Mtodos Mecnicos Planimtricos Corte y Pesada: Esta tcnica requiere recortar el pico del cromatograma, luego pesarlo en una balanza analtica. El recorte y pesada depende mucho de la habilidad del operdor. Pueden introducirse errores por cambios en la humedad del papel, la grasa de las manos del operador, homogeneidad del papel. Generalmente se recomienda utilizar una fotocopia del cromatograma para no destruir el original. Integracin Automtica Electromecnica Electrnica Anlisis Cualitativo Los procedimientos para identificacin de los picos cromatogrficos podemos dividirlos en dos categoras: Identificacin Cromatogrfica
o o Por Datos de Retencin Por Serie Homlogas (Indices de Retencin de Kovacs)

Identificacin No Cromatogrfica Anlisis Clsicos Identificacin por:

 Adicin de Estndar

 Formacin de Derivados  Sustraccin de un Componente

Identificacin con Tcnicas Auxiliares: UV, IR, MS, RMN Anlisis Cuantitativo Existen varios mtodos para cuantificar un pico cromatogrfico:
Normalizacin de rea Normalizacin de rea con Factores de Respuesta Estandarizacin Externa

Estandarizacin Interna http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Gas.htm CROMATOGRAFA DE GASES 3.0. CARACTERISTICAS Y EQUIPOS DISPONIBLES 3.0.1. Caractersticas ms importantes Aplicaciones principales: Anlisis cuantitativo general de mezclas multicomponentes de orgnicos voltiles. Tcnica de separacin muy eficiente. Fenmeno molecular: Reparto entre una fase de vapor y el substrato Ventajas en el anlisis cualitativo: Separa materiales para su examen por medio de otras tcnicas. Ventajas en el anlisis cuantitativo: Aplicacin amplia a los materiales voltiles, anlisis de multicomponentes, alta sensibilidad en casos especiales. Muestra promedio deseable: 1 mg Limitaciones del mtodo: Identifica los materiales solo en casos especiales. Limitaciones para la muestra: Presin de vapor mayor de 1 torr. a la temperatura de entrada de la muestra. 3.0.2. Equipos disponibles en el departamento de Ingeniera Qumica y en los Servicios Tcnicos de Investigacin de la Universidad de Alicante Dpto de Ingeniera Qumica

Cinco cromatgrafos Shimadzu. Detectores de conductividad trmica, ionizacin de llama y captura electrnica. Sistemas de inyeccin para columnas empaquetadas convencionales y capilares en split y splitless. Un pirolizador Pyroprobe 1000. Vlvula de seis vas controlada automticamente para inyeccin de gases. Servicios Tcnicos de Investigacin Tres cromatgrafos de gases Hewlett-Packard y uno Fissons unidos a espectrmetros de masas. Detector de ionizacin de llama, detector de captura electrnica. Inyector capilar en split y en splitless. Sistema Purga trampa de O I Analytical. Sistema de inyeccin por desercin trmica de Gerstel

En cromatografa de gases (GC), la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil de un gas inerte, y a diferencia de la mayora de los tipos de cromatografia, la fase mvil no interacciona con las molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna. Existen dos tipos de cromatografa de gases: la cromatografa gas - slido (GSC) y la cromatografa gas-lquido (GLC). La cromatografa gas - lquido tiene gran aplicacin en todos los campos de la ciencia y su denominacin se abrevia normalmente como cromatografa de gases (GC). La cromatografa gas - slido se basa en una fase estacionaria slida en la cual se produce la retencin de los analitos como consecuencia de la adsorcin fsica. La cromatografia gas - slido ha tenido una aplicacin limitada debido a la retencin

semipermanente de las molculas activas o polares y a la obtencin de picos de elucin con colas (una consecuencia del carcter no lineal del proceso de adsorcin), de modo que esta tcnica no ha encontrado una gran aplicacin excepto para la separacin de ciertas especies gaseosas de bajo peso molecular. Es por ello que se trata slo brevemente en la final de este tema. La cromatografa gas - lquido se basa en la distribucin del analito entre una fase mvil gaseosa y una fase lquida inmovilizada sobre la superficie de un slido inerte. El concepto de cromatografa gas - lquido fue enunciado por primera vez, en 1941, por Martin y Synge, quienes fueron tambin los responsables del desarrollo de la cromatografa de distribucin lquido - lquido. Ms de una dcada tuvo que pasar, sin embargo, antes de que la importancia de la cromatografa gas - lquido se demostrara experimentalmente. Tres aos ms tarde, en 1955, apareci en el mercado el primer aparato comercial para cromatografia gas - lquido. Desde entonces, las aplicaciones de esta tcnica han crecido de una forma espectacular. Se ha estimado que unos 200 000 cromatgrafos de gases estn actualmente en uso por todo el mundo 3.1. DESCRIPCION DEL CROMATOGRAFO DE GASES Un cromatgrafo de gases consiste en varios mdulos bsicos ensamblados para: 1) proporcionar un gasto o flujo constante del gas transportador (fase mvil), 2) permitir la introduccin de vapores de la muestra en la corriente de gas que fluye, 3) contener la longitud apropiada de fase estacionaria, 4) mantener la columna a la temperatura apropiada (o la secuencia del programa de temperatura), 5) detectar los componentes de la muestra conforme eluyen de la columna, y 6) proveer una seal legible proporcional en magnitud a la cantidad de cada componente. Los mdulos del instrumento se

muestran esquemticamente en la Fig. 3.1 3.1.1. Sistemas de inyeccin de muestra El modo estndar, adecuado para aproximadamente 95% de las aplicaciones de las columnas empacadas (o empaquetadas), es la inyeccin directa. La muestra es inyectada con una jeringa hipodrmica a travs de un sptum de goma (o hule) de silicona autosellante, a un alineador de vidrio (glass insert) contenido en un bloque metlico, donde es vaporizada y barrida hacia la columna (Fig. 3.2). El bloque se calienta a una temperatura que se fija en un valor suficientemente alto para convertir prcticamente en forma instantnea la muestra lquida en vapor. La cantidad de muestra inyectada es del orden de L para lquidos y algo superior para gases.

Figura 3.1. Esquema de un cromatgrafo de gases Figura

http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8247/4/T3gascromat.pdf