O ESTUDO DE GMEOS

Bernardo Beiguelman
Professor Titular da Faculdade de Cincias Mdicas da UNICAMP (Aposentado) Professor Visitante do Instituto de Cincias Biomdicas da USP Pesquisador 1-A do CNPq

Este livro dedicado memria do Dr. Luciano Heitor Beiguelman, meu amado filho.

Agradecimentos Para a preparao deste livro recebi o apoio irrestrito dos Professores Henrique Krieger e Erney Plessmann de Camargo, que me proporcionaram um ambiente de grande estmulo intelectual na Unidade de Epidemiologia Gentica do Departamento de Parasitologia do Instituto de Cincias Biomdicas da Universidade de So Paulo. Sua edio eletrnica no teria sido possvel sem a colaborao tcnica despreendida e generosa do Sr. Cassiano Pereira Nunes, da Dra. Rubiani de Cassia Pagotto e do Dr. Ricardo de Godoi Mattos Ferreira .

NDICE
INTRODUO CAPTULO 1. BIOLOGIA DA GEMELARIDADE
Ovognese e ovulao A fecundao do ovcito A formao do embrio A formao de gmeos A formao de teratpagos Gmeos monozigticos discordantes quanto ao sexo Superfecundao heteropaterna A razo de sexo dos gmeos Fatores que influenciam o nascimento de gmeos O quimerismo nos gmeos dizigticos Durao da gestao Peso e estatura ao nascer ndice de Apgar Mortalidade perinatal

CAPTULO 2. O DIAGNSTICO DA ZIGOSIDADE

Emprego de caracteres monognicos O gentipo dos gmeos e de sues pais conhecido O gentipo dos pais conhecido, mas no o dos gmeos Somente se conhece o fentipo dos pais e dos gmeos No se conhece o gentipo ou o fentipo dos genitores dos gmeos Impresses dgito-palmares e diagnstico da zigosidade O mtodo diferencial de Weinberg A organizao de um cadastro de gmeos

CAPTULO 3. O ESTUDO DE CARACTERES QUANTITATIVOS EM GMEOS

O coeficiente de correlao intraclasse A comparao de caracteres quantitativos em gmeos A investigao da herdabilidade de caracteres quantitativos em gmeos

CAPTULO 4. O ESTUDO DE CARACTERES QUALITATIVOS EM GMEOS

INTRODUO
Vinte e cinco anos antes da redescoberta dos trabalhos do pai da Gentica (Gregor Johann Mendel,1822-1884), Francis Galton (1822-1911), que lanou as bases da Biometria, j participara Anthropological Society of London que os gmeos podem ser estudados com a finalidade de avaliar a contribuio do que ele chamou de natura e nurtura na determinao dos caracteres quantitativos (Galton, 1876). Esse binmio passou, mais tarde, a ser designado por gentipo e ambiente, mas o princpio lgico estabelecido por Galton para o estudo de gmeos com a finalidade de investigar a participao do gentipo na variao fenotpica permaneceu, basicamente, o mesmo. De acordo com esse princpio, os fatores do ambiente que afetam as diferenas intrapar dos gmeos monozigticos, oriundos de um nico zigoto, seriam comparveis aos que afetam as diferenas intrapar dos gmeos dizigticos, os quais, do mesmo modo que os pares de irmos nascidos sucessivamente, so oriundos de dois zigotos. Ainda de acordo com ele, o valor das diferenas intrapar nos dois tipos de gmeos poderiam servir para estimar a importncia relativa do gentipo e do ambiente na determinao dos caracteres. A partir do trabalho inicial de Galton, o estudo de gmeos cresceu muito e passou a constituir uma especialidade, geralmente denominada Gemelologia (do latim,

gemellus = gmeo; logus = estudo). Ela , tambm, chamada de Didimologia por alguns autores de lngua inglesa, mas esse termo tem pouca adeso, talvez porque, em grego, ddimos usado, indiferentemente, com o significado de gmeos e de testculos. At o presente, o objetivo da maior parte dos trabalhos de pesquisa a respeito de gmeos continua sendo o estabelecido por Galton. Menor nmero de pesquisadores dedicaram-se ao estudo da prpria natureza dos nascimentos gemelares, isto , biologia da gemelaridade, trazendo, desse modo, contribuies importantes inclusive para a compreenso da biologia da reproduo humana. Nas pginas seguintes procurar-se- abordar esses dois campos de estudo dos gmeos.

CAPTULO 1. BIOLOGIA DA GEMELARIDADE

OVOGNESE E OVULAO A gametognese feminina, isto , a ovognese, muito precoce na espcie humana, quando comparada poca de incio da gametognese masculina, pois ela se d no perodo fetal, enquanto a espermatognese somente se inicia na puberdade. Assim, por volta do stimo ms de gestao, as clulas sexuais femininas esto no final da prfase I do processo meitico, isto , so todas ovcitos de primeira ordem (Ohno et al., 1962). Cada um dos ovcitos se apresenta rodeado por clulas foliculares, as quais produzem um polipeptdio de baixo peso molecular, que tem a capacidade de inibir a meiose (Tsafriri et al., 1976). por isso que se os ovcitos de primeira ordem no estiverem rodeados completamente por clulas foliculares, eles no sofrero a inibio da meiose, terminaro a prfase I e alcanaro a metfase I. Isso, entretanto, os levar degenerescncia, em decorrncia da prematuridade desse processo (Jirsek, 1976). A continuao da meiose na ovognese, isto , a maturao do ovcito, somente ter condies de ocorrer em ovcitos de folculos ovarianos maduros, pouco tempo antes de eles sofrerem ruptura. Tais folculos so denominados folculos de Graaf, em homenagem ao mdico holands Regnier de Graaf (1641-1673), que os descreveu pela primeira vez em 1672, pensando que eles eram os vulos. Foi somente em 1827 que, graas sua miopia, Karl Ernst von Baer (1792-1876), um naturalista estoniano, conseguiu visualizar, a olho nu, o ovcito dentro do folculo, onde ele encontrado rodeado por clulas foliculares, as quais constituem a chamada corona radiata. Essas clulas tambm costumam ser designadas por clulas do cumulus, por fazerem parte do cumulus oophorus que a estrutura que mantm o ovcito no interior do folculo ovariano (Fig.1.1).

Fig. 1.1 Seco histolgica de um ovrio humano. (Desenho esquemtico adaptado de Huettner, 1957). a-antro; co-cumulus oophorus; cr-corona radiata; e-epitlio; fG-folculo de Graaf; fs-folculo secundrio; mg-membrana granulosa; mv-membrana vtrea; o-ovcito de primeira ordem; te-teca externa; ti-teca interna; v = vaso sangneo; zp-zona pelcida.

Durante o intervalo entre o trmino de uma menstruao e o incio de outra (ciclo menstrual) normal que somente um dos folculos de Graaf de um dos ovrios atinja grau de maturidade maior do que os outros. O ovcito de primeira ordem desse folculo passa, ento fase de maturao, isto , termina a prfase I, passando, sucessivamente, pela metfase I, anfase I e telfase I. Por estar com o ncleo muito deslocado para a periferia, tem-se que, durante a telfase I, o citoplasma do ovcito de primeira ordem divide-se desigualmente, com a gerao de duas clulas de tamanho bem diferente, o ovcito de

segunda ordem, com tamanho semelhante clula original (cerca de 0,14 mm), e uma clula pequena, a ele aderida (primeiro polcito ou primeiro corpsculo polar). O ovcito de segunda ordem se apresenta envolvido por uma camada extracelular, denominada zona pelcida (do latim, pellucida = transparente), a qual inclui trs glicoprotenas importantes, designadas por ZP1, ZP2 e ZP3 (Rankin e Dean, 2000).. Durante o crescimento folicular, a zona pelcida, que uma barreira para impedir a entrada de espermatozides de um animal de outra espcie (Rudak et al., 1978), atravessada por finas projees emanadas das clulas do cumulus. Esse complexo cumulus-ovcito serve de comunicao entre o ovcito e o cumulus oophorus, para a passagem de ons e pequenas molculas (Gilula et al., 1978). O ovcito de segunda ordem inicia, ento, a meiose II, enquanto se rompe o folculo de Graaf maduro que o contm, sendo esse ovcito em metfase II, juntamente com o primeiro polcito e a corona radiata, expelido para o pavilho de uma das trompas uterinas. Essas trompas tambm so chamadas de trompas de Falpio, em homenagem a Gabriele Fallopio (1523-1562), anatomista e cirurgio italiano, que foi o primeiro a descrever os ovidutos humanos. Esse fenmeno da expulso do vulo para uma das trompas, denominado ovulao, tem a durao de alguns minutos e no decorre de um aumento da presso hidrosttica dentro do folculo, mas da ao de enzimas proteolticas, que fluem do antro para as tecas do folculo (Channing e Tsafriri, 1977). A supresso da ao do inibidor meitico produzido pelas clulas foliculares est associada regulao hormonal do ciclo menstrual. Ao ter incio um novo ciclo menstrual, isto , logo depois que termina uma menstruao, aumenta o nvel de hormnio folculoestimulante (FSH) produzido pela hipfise. Em resposta ao FSH, um grupo de folculos de Graaf intensifica seu crescimento e aumenta, gradativamente, a produo de estrgenos. Antes da ovulao, porm, o aumento da produo de estrgenos deixa de ser gradativo, para atingir um pico. Por existir um mecanismo de retroalimentao negativo entre os nveis de estrgeno e o FSH, tem-se que, medida que aumenta o nvel de estrgenos diminui o nvel de FSH. Um outro hormnio produzido pela hipfise, o hormnio luteinizante (LH) tem, ao contrrio do FSH, uma retroalimentao positiva com os estrgenos, de modo que, medida que aumenta o nvel de estrgenos tambm aumenta o nvel de LH e o aumento 6

acentuado do nvel de LH durante o perodo pr-ovulatrio que elimina o estmulo inibitrio da meiose, por determinar a ruptura do complexo ovcito-cumulus e diminuir no ovcito a concentrao do fosfato de adenosina, tambm chamado de cido 5- adenlico ou AMP cclico (Shoham et al., 1993). Se, entretanto, o ovcito for retirado do folculo, juntamente com o cumulus oophorus, a sua maturao ocorrer, apesar da ausncia de LH, porque o processo inibitrio da meiose cessa quando o ovcito est fora do ambiente folicular (Gmez et al., 1993).

A FECUNDAO DO OVCITO Se o ovcito de segunda ordem, liberado para o pavilho de uma das trompas, no for fecundado, ele degenerar, juntamente com o primeiro polcito (Whittingham, 1979). Durante muito tempo acreditou-se que o ovcito permanecia fecundvel por um perodo de apenas 10 a 12 horas, aps as quais perdia essa capacidade. Entretanto, as tcnicas de fertilizao in vitro permitiram constatar que os ovcitos podem ser mantidos por at 36 horas sem perder a capacidade de serem fecundados (Dandekar et al., 1991). No caso de ocorrer a fecundao, a penetrao do espermatozide no ovcito se dar enquanto ele est na trompa. Em todos os mamferos estudados so bem poucos os espermatozides que, em condies naturais, esto prximos ao ovcito no momento da fertilizao in vivo (Yanagimachi, 1994). Por isso, no mais aceita a explicao de que, para os espermatozides atravessarem a corona radiata, seria necessrio um nmero elevado deles, a fim haver grande liberao de enzimas proteolticas, que propiciariam o afastamento das clulas que rodeiam o ovcito. O que se sabe, ao certo, que os espermatozides devem estar ntegros e capacitados para atravessar os espaos intercelulares da corona radiata, a fim de que um deles consiga penetrar no ovcito de segunda ordem. At o presente no se conhecem as bases moleculares da capacitao dos espermatozides, isto , das alteraes funcionais que os tornam candidatos a fecundar um ovcito. Sabe-se, entretanto, que ela resulta da remoo ou da alterao de protenas que revestem os espermatozides, e que so oriundas do epiddimo e do fluido seminal. A capacitao dos espermatozides, que tem como principal conseqncia o aumento da sua motilidade, ocorre naturalmente no interior dos dutos femininos, por influncia do muco 7

cervical, mas ela pode ser feita in vitro de modo muito fcil (Yanagimachi, 1994). A capacitao do espermatozide, entretanto, no suficiente para que ele penetre no ovcito. Para isso ainda necessrio que o acrossomo, localizado distalmente na cabea do espermatozide e envolvendo parcialmente o ncleo (Fig.2.1), entre em atividade, havendo ruptura das membranas plasmtica e acrossmica, com a liberao de enzimas proteolticas de natureza lissmica (reao acrossmica). A reao acrossmica parece ser induzida pela zona pelcida do ovcito e pelas clulas do cumulus (Hoshi et al., 1993).

A
ca pi

C
a

n pp

p fs

c enr m fd

p fs

pf

mp

ax mp

Fig. 2.1 Esquema do espermatozide humano observado ao microscpio comum (A, B) e ao microscpio eletrnico (C, D). Em A e D o espermatozide observado em seco de perfil, e em B e C ele observado de frente. a-acrossomo; axaxonema; ccentrolo; ca-cabea; enrenvoltrio nuclear redundante; fd-fibras densas; fsfibras segmentadas; mmitocndrios; mpmicrotbulos perifricos; n-ncleo; p- pescoo ou pea de conexo; pi-pea intermediria; pf-pea final; pp-pea principal.

Depois que um espermatozide perfura a zona pelcida e atravessa a membrana do ovcito de segunda ordem, a zona pelcida torna-se impermevel custa de um material produzido na superfcie ovular. Essa impermeabilizao da zona pelcida evita, pois, a entrada de outros espermatozides, o que provocaria poliploidia (Dandekar e Talbot, 1992). A cauda do espermatozide somente se desprende quando ele est dentro do citoplasma do 8

ovcito. O ncleo do espermatozide aumenta de volume, passando a ser denominado proncleo masculino e seus cromossomos se duplicam, cada qual formando duas cromtides. O ncleo do ovcito, por sua vez, que est deslocado para a periferia, completa a meiose II. Essa localizao assimtrica faz com que da meiose II resulte um vulo e uma clula com pouco citoplasma, que fica entre a zona pelcida e o vulo, a qual denominada segundo polcito ou segundo corpsculo polar, porque o primeiro polcito resultado da meiose I. (Fig.3.1). O ncleo do vulo passa, ento, a ser denominado proncleo feminino.

cr p p p

e zp

1
p nf nm c p

Fig.3.1 A fecundao do ovcito na espcie humana. 1. ovcito de segunda ordem em metfase II, no momento em que expelido do folculo, com primeiro polcito (p), zona pelcida (zp) e rodeado de clulas foliculares da corona radiata (cr), que desaparecem uma dois dias depois da ovulao; 2. entrada de um espermatozide (e) no ovcito de segunda ordem e formao do segundo polcito (p); 3. vulo com o proncleo feminino (nf), o proncleo masculino (nm) e a cauda do espermatozide (c ) em seu citoplasma; 4. zigoto em metfase; 5. os dois primeiros blastmeros.

A singamia, isto , a unio do material dos proncleos masculinos se faz pela migrao desses ncleos para o centro do vulo e, no caso da espcie humana, pela dissoluo das membranas nucleares, sem que elas formem lbulos e os proncleos se interpenetrem, como em outras espcies de mamferos. Na espcie humana as membranas simplesmente desagregam (Yanagisawa, 1994), os dois conjuntos haplides (paterno e materno) de cromossomos duplicados e condensados se prendem ao fuso formado entre os 9

centrolos, sendo importante assinalar que as fibras do fuso comeam a irradiar a partir do centrolo introduzido no ovcito pelo espermatozide. Aqui parece interessante lembrar que, ao descrever, em 1876, a formao que irradiava da regio do proncleo masculino no momento em que ele ia se unir com o proncleo feminino, Oscar Hertwig (1849-1922) mencionou que, naquela ocasio, surgira, para completar o fenmeno, um sol dentro do ovo, indicando, assim, de uma forma potica, o aparecimento de uma fora natural maior que a simples soma de duas clulas (Weidling, 1991). A prtica de fertilizao assistida, com injeo intracitoplasmtica do

espermatozide, permitiu demonstrar que a capacidade fecundante do espermatozide depende, tambm, da condensao do seu material nuclear, porque a integridade do DNA est associada condensao. De fato, nos espermatozides com material nuclear bem condensado, a proporo daqueles com DNA fragmentado significativamente mais alta (25%) do que naqueles em que o DNA est descondensado (6%) (Lopes et al., 1998), sendo interessante assinalar que a compactao do DNA dos espermatozides difere da observada nas clulas somticas. Assim, nos espermatozides o DNA no se apresenta rodeando as histonas e formando solenides, porque, durante a espermatognese, as histonas so substitudas por protaminas, ricas em arginina, serina e cistena, e, em vez de solenides, o DNA dos espermatozides se apresenta compactado como se fosse uma rosquinha. Essa compactao se d custa da oxidao dos grupos sulfidrila das protaminas (os grupos SH passam a -S-S-) durante o perodo de maturao dos espermatozides no epiddimo. Depois de fertilizar o ovcito, a descompactao do DNA se faz pelo efeito redutor do glutatio sobre os grupos sulfidrila oxidados (Ward, 1993).

A FORMAO DO EMBRIO

Na espcie humana a singamia no produz um novo ncleo, pois o material cromossmico do zigoto entra diretamente na metfase da diviso mittica, da qual resultam duas clulas denominadas blastmeros (do grego, blasts = broto; meros = parte), que continuam a se dividir por mitoses sucessivas. At o estgio de dezesseis clulas o processo de celularizao ou clivagem do zigoto tem continuidade numa das trompas de Falpio e considerado holoblstico (do grego, hlos = completo) porque, alm de os 10

blastmeros se dividirem completamente, as clulas resultantes so, aproximadamente, do mesmo tamanho (Fig. 4.1 a-d). Tanto o estgio de oito quanto o de dezesseis blastmeros so denominados mrula (do latim, morum = amora; ula um diminutivo) e custa dos movimentos peristlticos das trompas de Falpio e dos batimentos ciliares do epitlio que forra esses dutos que a mrula levada em direo ao tero.

Fig. 4.1 Primeiros estgios da segmentao do zigoto e desenvolvimento do blastocisto. a-d segmentao, durante os quatro primeiros dias, para a produo da mrula; e blastocisto livre, no quinto dia; f blastocisto no incio de sua implantao, no oitavo dia; g, h - principais alteraes ocorridas no blastocisto a partir da segunda semana. A-mnio; B- blastocele; C- citotrofoblasto; CA- cavidade amnitica; CE- celoma extraembrionrio; CO- crion; EC- ectoderme primitiva ou epiblasto; EN- endoderme primitiva ou hipoblasto; M- mesoderme; MI- massa celular interna; N- ndulo embrionrio; P- pedculo embrionrio; SI- sinciciotrofoblasto; SV- saco vitelino; T- trofoblasto; ZP- zona pelcida;

As observaes feitas em mrulas de camundongos e de seres humanos revelam que, normalmente, o DNA dos mitocndrios paternos podem ser detectados, no mximo, at a fase de oito clulas, sendo, pois, essa a razo pela qual os mamferos herdam somente os mitocndrios maternos. Na espcie humana, a persistncia do DNA mitocondrial paterno est associada a alteraes que provocam aborto espontneo ou bito precoce (Houshmand 11

et al., 1997; Cummins et al., 1998; St John et al., 2000). curioso que, em cruzamentos interespecficos de camundongos (Mus musculus Mus spretus) o DNA mitocondrial paterno no destrudo, sendo detectado em todos os recm-nascidos. Isso sugere que no citoplasma dos ovcitos existe um mecanismo espcie-especfico que reconhece e elimina os mitocndrios do espermatozide (Kaneda et al., 1995). tambm durante a mrula de oito blastmeros que os produtos gnicos maternos desaparecem do citoplasma dessas clulas. Em outras palavras, desse momento em diante o genoma do zigoto que ativado e passa a controlar o desenvolvimento do futuro ser. Quando a mrula est prestes a chegar ao tero, suas clulas comeam a se diferenciar numa camada perifrica, a trofectoderme ou trofoblasto (do grego, trof = nutrio), a qual rodeia o conjunto de blastmeros do interior, a massa celular interna. Por volta do quinto ao sexto dia, desenvolve-se no interior da massa celular interna uma cavidade cheia de um lquido aquoso denominada blastocele (do grego, cilos = oco). Na espcie humana e em outros mamferos esse estgio do desenvolvimento do zigoto recebe o nome de blastocisto (Fig. 4.1 e). Quando o blastocisto chega ao tero, o que acontece entre o quinto e o stimo dia aps a fertilizao, ele se liberta da zona pelcida, que desaparece, e comea a aumentar de volume. At essa ecloso do blastocisto o zigoto celularizado s havia sofrido aumento de superfcie, mas no de volume, em razo das clivagens sucessivas que determinam a produo de blastmeros. Por volta do oitavo ou nono dia aps a fertilizao do ovcito tem incio o fenmeno da nidao do blastocisto na mucosa uterina, a partir de sua aderncia. superfcie do endomtrio, rica em uma secreo viscosa produzida sob o estmulo da progesterona. Essa aderncia seguida da proliferao intensa da trofectoderme em contato com a mucosa uterina. Produz-se, assim, um sinccio, denominado sinciciotrofoblasto, com grande atividade citoltica sobre as clulas do endomtrio, resultando dessa atividade o afundamento do blastocisto na mucosa uterina. Ao redor do blastocisto forma-se um meio que lhe serve de nutrio, o embritrofo, o qual rico em detritos celulares, restos de capilares e fibrina. O processo de nidao termina quando o epitlio da mucosa uterina cicatriza sobre o blastocisto e, nessa ocasio, o sinciciotrofoblasto j no mais apenas uma formao localizada em um dos polos do blastocisto, mas um grande sinccio lacunoso, que envolve 12

toda trofectoderme celularizada que lhe deu origem, a qual passa a ser denominada citotrofectoderme ou citotrofoblasto (Fig. 4.1 f-h). O sinciciotrofolasto o precursor da placenta, a qual fica bem delimitada somente a partir do terceiro ms de gestao. O esquema da circulao placentria esboado pelo sinciciotrofoblasto quando este, graas sua atividade proteoltica destri os capilares da mucosa uterina, que passam a se abrir em suas lacunas (Fig. 5.1-1,2). Na Fig. 5.1 tambm fica claro que, na placenta, as correntes sangneas materna e fetal so distintas e feitas em vias circulatrias diferentes, de sorte que parece lgico falar em circulao placentria materna e circulao placentria fetal. Ao invadir a mucosa uterina, o sinciciotrofoblasto estabelece, pois, entre o ser em gestao e sua me uma conexo de algum modo semelhante de um enxerto heterlogo em um receptor, com a diferena que, durante a gestao, existe uma separao entre a circulao fetal e materna.
M S U V V L A C M L M S U

1
U

A M

2
U

V S CI Vu S CI V

A C

Fig.5.1 Diversos estgios evolutivos das vilosidades placentrias. A-mnio; C-citotrofoblasto; CI-cmara intervilosa; L-lacuna; M-mesnquima; S-sinciotrofoblasto; U-mucosa uterina; V-capilares da mucosa uterina; VU- capilares umblico-alantoideanos.

A nidao do blastocisto feita, normalmente, na rea mediana ou superior do tero, mas existem situaes de exceo, as quais, dependendo das complicaes que, eventualmente, causam, podem requerer a interrupo da gravidez, pois podem provocar 13

bito materno (Maruri e Azziz, 1993). Quando a nidao do blastocisto se d fora da cavidade uterina, ela denominada gravidez ectpica e, dependendo do local de implantao do blastocisto, ela ser dita tubria, na maioria dos casos (98%) ou abdominal, uterina inferior, plvica ou ovariana, nos casos restantes (Fig. 6.1). A freqncia de internaes por gravidez ectpica da ordem de 1% nos Estados Unidos e da ordem de 2% em So Paulo, mas ela tende a diminuir em conseqncia da vulgarizao do uso de aparelhos de ultra-sonografia de boa resoluo, que permitem o diagnstico precoce dessa alterao (Franchi-Pinto, 1996).
2 3 2 2 1 4 5

Fig.6.1 reas de nidao do blastocisto. Em pontilhado assinalou-se a rea normal. As reas de nidao anmala foram numeradas de 1 a 5. 1-ovrica; 2-tubria; 3-abdominal; 4-plvica; 5-uterina inferior, que pode produzir placenta prvia.

No oitavo ou nono dia aps a fertilizao, o blastocisto apresenta a massa celular interna concentrada em um de seus polos, sendo ela, por isso, tambm denominada ndulo embrionrio (do grego, embriin = inchar dentro). Nessa ocasio, as clulas da massa celular interna que limitam a blastocele se diferenciam, sendo essa camada denominada hipoblasto ou endoderme primitiva (Fig. 4.1 f). Enquanto a nidao prossegue, a massa celular interna sofre maiores alteraes ao aparecer em seu interior uma cavidade, a cavidade amnitica, cujo assoalho constitudo por clulas altas que formam a camada denominada epiblasto ou ectoderme primitiva A abbada dessa cavidade tem nome especial (mnio), mas tambm de origem ectodrmica. O hipoblasto e o epiblasto formam 14

uma placa circular achatada, que chamada, por isso, de disco embrionrio(Fig. 4.1 g). O hipoblasto, por sua vez, prolifera formando uma camada que forra a blastocele, a qual passa a se denominar saco vitelino primitivo que, ao contrrio do que ocorre nos vertebrados inferiores, no contm vitelo. Alm disso, essa endoderme primitiva produz uma camada de tecido conjuntivo frouxo, um mesnquima, denominado mesoderme ou mesoblasto extra-embrionrio, que acaba por envolver o saco vitelino e o mnio. As lacunas formadas nesse mesnquima, depois de unidas constituem o celoma extraembrionrio, cuja continuidade interrompida pelo pedculo embrionrio, que o local onde a mesoderme extra-embrionria no sofre separao em duas camadas (Fig. 4.1 h). A parte do mesnquima que fica aderida ao citotrofoblasto constitui, junto com ele, o crion. No incio da terceira semana de gestao o epiblasto se diferencia, ento, em trs folhetos embrionrios, denominadas ectoderme, mesoderme e endoderme. nessa ocasio que o disco embrionrio passa a constituir o embrio propriamente dito, a partir do qual se desenvolver o futuro ser humano, e a tendncia atual denominar de gstrula a esse estgio de desenvolvimento. A FORMAO DE GMEOS Se no momento da ovulao forem expelidos dois ovcitos, ao invs de um, e se ambos forem fecundados, os zigotos resultantes daro origem a gmeos dizigticos (DZ). Esses gmeos, em mdia, no apresentam maior similaridade gentica entre si do que pares de irmos gerados sucessivamente porque, tanto os pares DZ quanto os pares de irmos sucessivos so oriundos de pares de zigotos distintos. Os pares DZ so, por isso, considerados como irmos da mesma idade e, em conseqncia, tambm denominados gmeos fraternos (do latim, frater = irmo). Por terem origem biovular, os pares DZ podem ter o mesmo sexo, isto , serem ambos do sexo masculino (MM) ou ambos do sexo feminino (FF) ou, ainda, discordantes quanto ao sexo (MF). Nem sempre, porm, os pares DZ apresentam duas placentas distintas, pois, em decorrncia de uma eventual proximidade excessiva dos locais de implantao dos blastocistos que do origem aos gmeos DZ, as placentas podem, aparentemente, fundir-se em uma nica. Quando isso acontece, somente o exame microscpico na regio de unio das placentas mostrar a presena da chamada zona T, composta de quatro lminas (um mnio de cada lado e dois crions no meio). Entre os dois 15

crions ser possvel observar a presena do trofoblasto e vilosidades corinicas atrofiadas (Benirschke, 1994). Um outro tipo de gmeos, os pares monozigticos (MZ), formado no perodo entre um e 14 dias depois da fertilizao, quando um nico zigoto sofre desenvolvimento irregular, dando origem a dois indivduos que so considerados idnticos do ponto de vista gentico, pois possuem o mesmo patrimnio gentico, visto que so oriundos de uma nica clula-ovo ou zigoto. Os gmeos MZ so do mesmo sexo, isto MZMM ou MZFF, e, freqentemente so denominados gmeos idnticos, apesar de essa denominao no ser muito apropriada, visto que a identidade, aqui, se refere ao gentipo e no ao fentipo, havendo casos em que os pares MZ apresentam grandes diferenas fenotpicas. Segundo Benirschke (1994), cerca de 30% dos pares MZ se originam da separao dos blastmeros num perodo muito precoce, isto , at o terceiro dia aps a fecundao, quando o zigoto segmentado ainda est no estado de mrula. Em conseqncia disso, formam-se dois blastocistos e os gmeos resultantes mostraro, ao nascer, dois crions, dois mnios (diamniticos dicorinicos) e, dependendo da proximidade dos locais em que estavam implantados no tero, duas placentas bem separadas ou unidas (Fig. 7.1- 1). Os outros 70% de pares MZ so o resultado de alteraes que ocorrem entre o quarto at o 14o dia aps a fecundao do ovcito. Essas alteraes podem provocar a diviso da massa celular interna (Fig. 7.1-2), o que propicia o nascimento de gmeos com dois mnios e um crion (diamniticos monocorinicos) e uma placenta. No caso de essas alteraes serem mais tardias, elas provocam a diviso do disco embrionrio (Fig. 7.1-3), disso resultando o nascimento de gmeos com um nico mnio e um nico crion (monoamniticos monocorinicos) e placenta nica. Essas alteraes tardias tambm podem provocar uma repartio desigual do material embrionrio e, por conseguinte, a produo de maiores diferenas entre os pares MZ.

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1
M M M

2
M

3
M

E A G A G

E A G A G

E A G

E A G E A G E G G

E E A E G

P P

Fig.7.1 Formao de gmeos monozigticos: 1. por produo de dois blastocistos, em conseqncia da separao precoce dos blastmeros; 2. por diviso da massa celular interna; 3. por diviso do disco embrionrio. A-cavidade amnitica; C-crion; E-disco embrionrio; G-saco vitelino; M-massa celular interna; Pplacenta.

As maiores diferenas entre os elementos de um par MZ, ocorrem naqueles que so monocorinicos, porque neles mais provvel a manifestao da sndrome da transfuso entre gmeos idnticos, em conseqncia de anastomoses placentrias artrio-venosas, que podem permitir o estabelecimento de um fluxo sangneo preferencial de um gmeo para outro. O feto receptor passa a ser hipervolmico e a produzir um excesso de fluido amnitico, enquanto o doador, ao contrrio, se torna hipovolmico e com pouca quantidade de fluido amnitico. Se a sndrome da transfuso entre os gmeos MZ se iniciar antes de 26 17

semanas de gestao haver alto risco de mortalidade fetal. Atualmente o melhor recurso para enfrentar essa situao a interrupo da comunicao circulatria placentria pela utilizao de laser durante fetoscopia (Ville et al., 1992). Estima-se que cerca de 22% dos pares MZ mostram uma diferena de 35% ou mais de hemoglobina. Se o gmeo que recebe menos hemoglobina nascer com uma diferena de peso igual ou superior a 300 g em relao ao gmeo mais pesado, ele, freqentemente, ter quociente de inteligncia (QI) inferior ao que nasceu com mais peso (Munsinger, 1977). A hiptese de que a sndrome da transfuso entre gmeos idnticos a responsvel pela diferena de QI entre os pares MZ encontra apoio no fato de tal diferena no ocorrer entre os gmeos DZ, mesmo quando o peso ao nascer desses gmeos diferiu em 300 g ou mais, porque nesses gmeos as circulaes fetais quase nunca esto conectadas. Dos comentrios feitos a respeito da placenta pode-se concluir que ela tem pouco valor para o diagnstico da zigosidade ao nascimento, pois as placentas dos gmeos DZ podem se apresentar aparentemente unidas, alm do que, os pares MZ diamniticos dicorinicos (cerca de 30%) apresentam duas placentas. J a presena de um nico mnio ou de um nico crion serve para rejeitar a hiptese de dizigosidade, apesar de a presena de dois crions ou de dois mnios no servirem para excluir a hiptese de monozigosidade. Dentre os partos mltiplos, os de trigmeos so menos freqentes que os de gmeos, sendo mais raros, ainda, os de quadrigmeos e de quntuplos. Muito esporadicamente assinala-se o nascimento de um nmero de gmeos superior a cinco, mas no h registro confivel de que tenham sobrevivido. A exemplo do que ocorre com os pares de gmeos, tem-se que a origem dos trigmeos, tetragmeos e quntuplos pode ser monozigtica ou resultar de mais de uma clula-ovo. Assim, por exemplo, no caso de trigmeos, eles podem ser trizigticos, dizigticos ou monozigticos se oriundos, respectivamente, de trs zigotos, dois zigotos ou de um nico zigoto. A Fig. 8.1 mostra, esquematicamente, os vrios tipos de trigmeos e tetragmeos quanto sua zigosidade.

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Z IG O TO S T R IG M E O S
T R IZ IG T IC O S D IZ IG TIC O S M O N O Z IG T IC O S

Z IG O TO S TETRAGM EOS
T E T R A ZIG T IC O S T R IZ IG T IC O S D IZ IG TIC O S D IZ IG TIC O S M O N O Z IG T IC O S

Fig.8.1 Representao esquemtica dos vrios tipos possveis de trigmeos e tetragmeos quanto sua zigosidade.

A FORMAO DE TERATPAGOS Se a separao do material embrionrio for incompleta durante a formao de um par MZ, os gmeos resultantes podero apresentar-se ligados por intermdio de uma estrutura comum, que permitir a comunicao de seus sistemas circulatrios. Tais tipos de gmeos so denominados teratpagos, o que no um termo muito apropriado pois, em grego, tras = monstro; pagos = unido, mas a designao mais freqentemente utilizada para indicar a unio fsica de gmeos, que j foi notada inclusive em trigmeos e em quadrigmeos (Schinzel et al., 1979). Dentre os fatores associados formao de teratpagos, destaca-se a histria de tireoideopatia e de tratamento para infertilidade das gestantes. Na Hungria notou-se tambm uma associao entre o nascimento de teratpagos e o uso freqente de esterides sexuais no incio da gestao (International Clearinghouse for Birth Defects Monitoring Systems, 1991). Na imprensa leiga os teratpagos so, geralmente, chamados de irmos siameses, em aluso a um caso que ganhou repercusso mundial no sculo dezenove, e que dizia respeito a um par de gmeos ligados entre si por uma ponte que ia da cartilagem ensiforme at o umbigo comum a ambos. Esses gmeos nasceram no Sio (atual Tailndia), em 1811, e faleceram nos Estados Unidos da Amrica do Norte, em 1874, onde residiram a partir de 1829. O bito de um desses gmeos (Chang) foi conseqncia de pneumonia. O outro (Eng), de acordo com o relato de parentes, faleceu vtima de violento terror, algumas horas depois da morte do irmo, enquanto aguardava a vinda do mdico que deveria proceder a separao cirrgica dos corpos. A autpsia desses irmos revelou que a ligao entre eles 19

continha tecido heptico, que unia o fgado de Chang ao de Eng. Na literatura sobre gmeos que nascem unidos existem abundantes exemplos de pares ligados por outras partes do corpo, com duplicao total ou parcial dos rgos. Tais gmeos so classificados em trs grandes grupos, conforme a ligao entre eles seja feita pela parte inferior do corpo (teratpagos cataddimos, do grego, cata = para baixo), por uma parte superior (teratpagos anaddimos, do grego, ana = para cima), ou apenas por uma regio mediana do corpo (teratpagos anacataddimos) (Fig. 9.1). Nem sempre, porm, os gmeos teratpagos constituem um par com o mesmo desenvolvimento, pois um dos gmeos pode apresentar desenvolvimento rudimentar. Nesse caso, o menos desenvolvido recebe a denominao de parasitrio. Cada um desses grupos admite subclassificaes, de acordo com o tipo de unio dos gmeos. Assim, dentre os teratpagos cataddimos, aqueles que apresentam duas faces em uma cabea ligada a um nico corpo so denominados diprsopos (do grego, prsopon = rosto) ou com cabea de Janus, em aluso divindade romana simbolizada em portes e arcos por uma cabea com duas faces, uma das quais, geralmente, barbada e a outra glabra.

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Fig. 9.1 Teratpagos cataddimos (A-D), anaddimos (E-G) e anacataddimos (H-J). A-diprsopos; B-dicfalos; C-isquipagos; D-pigpagos; E-cranipagos; F-sincfalos; G-dpigos; H-teratpagos; I-onfalpagos; J-raqupagos.

Os que apresentam duas cabeas ligadas a um nico corpo so denominados dicfalos (do grego, kefal = cabea). Atualmente, porm existe a tendncia de no considerar os dicfalos como resultantes de separao incompleta de gmeos MZ, mas de uma diviso da regio que forma a cabea do embrio, o que daria origem a dois plos ceflicos em um nico corpo (International Cliearinghouse for Birth Defects Monitoring Systems, 1991). Os isquipagos (do grego, squion = quadril), por sua vez, so os gmeos ligados pelas margens inferiores da regio sacrococcigeana, mantendo as colunas vertebrais em sentidos 21

opostos, segundo um mesmo eixo. Quando os gmeos esto ligados pela superfcie psterolateral da regio sacro-coccigeana, eles so denominados pigpagos (do grego, pig = ndega).(Fig. 9.1 A-D). Os teratpagos anaddimos congregam os cranipagos, que so ligados por uma regio da abbada craniana, os sincfalos, ligados pela face, e os dpigos, que apresentam duas cinturas plvicas e quatro membros inferiores ligados a um tronco e cabea nicos (Fig. 9.1 E-G). Finalmente, os teratpagos anacataddimos incluem os gmeos toracpagos, que apresentam parte da regio torcica em comum, os onfalpagos (do grego, onfals = umbigo) que, como os irmos siameses Cheng e Eng, mencionados acima, so unidos por uma ponte de tecido que vai desde o umbigo at a cartilagem xifide, e os raqupagos, que so unidos pela coluna vertebral em qualquer rea acima da regio sacro-coccigena. (Fig. 9.1 H-J). Os toracpagos e os onfalpagos so, tambm, freqentemente denominados de irmos xifpagos em aluso ao esterno e apndice xifide (do grego, xfos = espada). As estatsticas internacionais a respeito dos teratpagos mostram que 51% desses gmeos so do tipo anacataddimo, a maioria (72%) toracpagos. Os teratpagos cataddimos correspondem a 32% e mostram maioria de dicfalos (61%), enquanto os anaddimos constuem 12% dos casos, sendo os 5% restantes parasitrios (International Clearinghouse for Birth Defects Monitoring Systems, 1991). Esses levantamentos mostram, ainda, que a natimortalidade bastante alta entre os teratpagos (47%), mas importante assinalar, aqui, que a definio de natimorto , infelizmente, muito varivel, pois nem todos os pases consideram como natimortos os bitos de recm-nascidos com mais de 500g, o que corresponde a uma idade gestacional entre 20 e 22 semanas. Assim, por exemplo, na Noruega j so considerados como natimortos os conceptos cujo bito ocorreu aps a 16a semana. Muitos desses bitos, portanto, seriam classificados como abortos no Brasil. Na Amrica Latina, a incidncia de teratpagos foram obtidas por Castilla e colaboradores (1988), com base em observaes feitas a respeito de 1.714.952 recmnascidos no perodo entre 1967 a 1986 em 95 maternidades de 11 pases (Argentina, Bolvia, Brasil, Chile, Colmbia, Costa Rica, Equador, Paraguai, Peru, Uruguai e Venezuela). De acordo com esses autores, a incidncia de teratpagos nas populaes latinomaericanas pode ser estimada em 1:75.000, j que, entre os recm-nascidos 22

estudados, eles detectaram 23 desses gmeos (1 diprsopo, 3 dicfalos, 1 isquipago, 5 pigpagos, 3 sincfalos, 9 toracpagos e 1 onfalpago). A separao cirrgica dos toracpagos, que so os teratpagos mais freqentes e melhor estudados do ponto de vista clnico-cirrgico e radiolgico, tem suscitado grandes debates entre mdicos e telogos de diversas religies, tendo em vista os problemas ticos implicados em grande nmero de casos. De fato, uma alta proporo desses gmeos apresenta um corao muito complexo (62%) ou apenas duplicao dos ventrculos (13%). Em conseqncia disso, somente nos casos em que h dois coraes independentes (25%), uma interveno cirrgica para separar os toracpagos pode dar esperana de sobrevida aos dois elementos do par. Nos casos restantes, tal interveno significa, obrigatoriamente, a morte de um desses gmeos para que o outro, eventualmente, se salve.

GMEOS MONOZIGTICOS DISCORDANTES QUANTO AO SEXO Os gmeos MZ so sempre do mesmo sexo, mas existem casos muito excepcionais que, por isso, mereceram registro na literatura pertinente. Assim, Turpin et al. (1961) e Dallapiccola et al. (1985) descreveram gmeos MZ heterocariticos, isto , gmeos MZ com caritipos diferentes, que eram discordantes quanto ao sexo, porque compostos por um indivduo do sexo masculino com caritipo normal (46,XY) e por outro, do sexo feminino, com sndrome de Turner (45,X), em conseqncia de perda de um cromossomo Y no incio do desenvolvimento embrionrio. Tambm j foram descritos pares MZ heterocariticos discordantes quanto ao sexo, em que o gmeo do sexo masculino tinha caritipo normal 46,XY, ao passo que o do sexo feminino era um mosaico 45,X/46,XY (Schmidt et al., 1976; Arizawa et al., 1988). O caso mais curioso foi relatado por Edwards et al. (1966) a respeito de um par MZ heterocaritico em que o gmeo do sexo feminino era um mosaico 45,X/46,XY e o masculino tinha caritipo 45,X. Sabendo-se, entretanto, que, para o desenvolvimento de testculos, essencial a presena de um cromossomo Y no cartipo, pode-se supor que, na realidade, pelo menos no incio de seu desenvolvimento, o gmeo do sexo masculino teria sido, igualmente, mosaico 45,X/46,XY. Casos mais raros, de gmeos MZ que, apesar de apresentarem caritipo idntico, isto de serem isocariticos, eram discordantes quanto ao sexo, foram descritos por alguns autores. Assim, Karp et al. (1975) e Reindollar et al. (1987) descreveram discordncia em 23

relao ao sexo em pares MZ com mosaicismo 45,X/46,XY. Fujimoto et al. (1991), por sua vez, assinalaram um caso de gmeos MZ discordantes quanto ao sexo que eram mosaicos 45,X/46,X,idic(Y), ao passo que Kurosawa et al. (1992) descreveram essa discordncia em um par MZ com mosaicismo 45,X/47,XYY. Nesses casos, a explicao mais plausvel para a discordncia quanto ao sexo a de distribuio desigual na linhagem germinativa de clulas com caritipo 45,X e daquelas exibindo pelo menos um cromossomo Y, indutor do desenvolvimento de testculos.

SUPERFECUNDAO HETEROPATERNA Um parto mltiplo pode ser o resultado da fertilizao de dois ou mais ovcitos expelidos simultaneamente, mas pode resultar, tambm, de superfecundao, isto , da fecundao de ovcitos emitidos em ovulaes sucessivas durante um nico ciclo menstrual. No caso de mulheres monogmicas impossvel saber se um parto mltiplo resultou de poliovulao ou de superfecundao. Sabe-se, porm, que a superfecundao existe, em decorrncia de observaes sobre superfecundao heteropaterna, isto , casos de mulheres com mais de um parceiro sexual, as quais geraram gmeos com pais diferentes, isto , gmeos dizigticos que eram, de fato, meio-irmos. Apesar de esses casos serem pouco mencionados na literatura pertinente (Sorgo, 1973; Terasaki et al., 1978; Spielmann & Khnl, 1980; Phelan et al., 1982; Wenk et al., 1986, 1992), possvel que sua freqncia esteja em asceno nas sociedades modernas, que propiciam aumento da freqncia de parceria sexual mltipla e concomitante, com conseqente aumento da freqncia de coitos, que parecem induzir ovulao secundria (James, 1984; Forrest e Singh, 1990).

A RAZO DE SEXO DOS GMEOS As observaes de alguns autores favoreceram a concluso de que a razo de sexo dos gmeos menor do que a dos recm-nascidos de parto nico, isto , nasceriam menos gmeos do sexo masculino (Stocks, 1952; Barr e Stevenson, 1961; Susanne e Corbisier, 1969; Czeizel, 1974; Araujo e Salzano, 1975: James, 1975; Bertranpetit e Marin, 1988; Beiguelman e Villarroel-Herrera, 1992). Essa concluso no , entretanto, apoiada por dados de outros autores (Pedreira et al.,1959; Rola-Janicki, 1974).

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Um amplo estudo a respeito da razo de sexo em gmeos, realizado por Beiguelman, Franchi-Pinto, Dal Colletto e Krieger (1995), levando em conta 1385 pares nascidos durante o perodo entre 1984 a 1993, alm de mostrar que a diferena entre a razo de sexo dos gmeos (101,7 meninos: 100 meninas) e a observada nos recm-nascidos de parto nico (104,5 meninos: 100 meninas) foi pequena, serviu para realar um aspecto bastante curioso a respeito da variao anual da razo de sexo. De fato, esse estudo conseguiu demonstrar que, ao contrrio da pequena variao anual da razo de sexo dos recm-nascidos de parto nico, a variao observada nos gmeos foi muito grande, talvez por causa da proporo varivel de pares MZ. Por causa de sua identidade gentica, que lhes confere o mesmo sexo, os pares MZ poderiam distorcer os resultados em pequenas amostras de gmeos, j que uma variao aleatria poderia provocar um excesso de meninos ou, ao contrrio, de meninas. Esses resultados sugerem, pois, que os estudos sobre a razo de sexo de gmeos, mormente os que se referem a amostras pequenas, levem sempre em conta a possibilidade de os dados estarem distorcidos por causa dos gmeos MZ.

FATORES QUE INFLUENCIAM O NASCIMENTO DE GMEOS O nascimento de gmeos DZ depende, evidentemente, da ocorrncia de poliovulao, a qual, por sua vez, depende do nvel de hormnio folculo-estimulante (FSH). O nvel de FSH, por sua vez, depende de causas genticas, sendo mais alto em mulheres negrides do que em caucasides, alm do que as mes de gmeos possuem, em mdia, nvel mais elevado de FSH do que as de parto nico (Nylander, 1981). A produo de FSH est, ainda, correlacionada ao tamanho da hipfise, cujo peso mximo atingido aos 40 anos de idade (Milham, 1964). Essas informaes explicam, pois, o fato de o nascimento de gmeos DZ ser influenciado pela raa, sendo as mulheres negrides as mais predispostas ao nascimento de DZ, seguidas das caucasides e das mongolides, nessa ordem. Tambm deve ser, por isso, que o nascimento de gmeos DZ depende da idade materna e, antes do advento de mtodos anticoncepcionais eficientes, era mais comum em mulheres muito fecundas, ou seja, com maior paridade. Essas mulheres no davam luz gmeos DZ por uma questo probabilstica, isto , no era porque o maior nmero de filhos aumentava a probabilidade 25

de nascimento de gmeos, e sim porque a poliovulao est associada a maior fecundidade. Nessa poca, as mes de gmeos DZ mostravam vantagem reprodutiva em relao s outras mes por necessitarem menos tempo de acasalamento para a concepo do que as outras mulheres (Allen e Schachter, 1971). Antes do uso de anovulatrios orais, essas mulheres seriam responsveis pelo aumento da incidncia de gmeos em perodos de aumento da freqncia de coitos, como foram os perodos de ps-guerra (Jeanneret e MacMahon, 1962; Elwood, 1973; Brackenridge, 1977; Parisi e Caperna, 1982). Por estar a idade materna correlacionada ao nmero de filhos, poder-se-ia supor que a correlao entre a incidncia de gmeos DZ e a paridade fosse, na realidade, conseqncia da correlao entre a incidncia desses gmeos e a idade materna. Entretanto, j se demonstrou que a incidncia de gmeos DZ est correlacionada positivamente com a paridade, independentemente da idade das mes (Bulmer, 1959; Nylander, 1981; Chen et al., 1987; Picard et al., 1989; Allen e Parisi, 1990). Em um estudo feito por Franchi-Pinto (1996), que incluiu 763 mes de gmeos nascidos no perodo entre 1984 e 1993, em Campinas, SP, foi possvel constatar que a proporo de pares DZ gerados por aquelas que tinham paridade inferior a 4 (52,1%), isto , mulheres que antes do parto tiveram 0, 1, 2 ou 3 filhos era significativamente menor do que a de pares DZ gerados por mes de gmeos com paridade igual ou superior a 4 (68,4%). A Tabela 1.1, por sua vez, demonstra que a incidncia de pares DZ aumenta com a idade materna e que nas mulheres negrides essa incidncia maior do que nas caucasides, qualquer que seja o grupo etrio tomado para comparao.

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Tabela 1.1 Incidncia do total de gmeos e dos pares DZ por mil partos e segundo o grupo etrio entre os filhos de 25.932 parturientes caucasides e 4.962 negrides atendidas na Maternidade de Campinas (Campinas, SP). Grupo Caucasides Negrides etrio Partos Gmeos DZ Partos Gmeos DZ <20 2.689 5,9 0,7 838 10,8 4,8 20-25 8.360 8,6 4,3 1.634 13,4 11,0 25-30 7.526 11,5 8,2 1.304 17,6 10,7 7.357 18,1 13,3 1.186 23,6 18,5 30 por isso que a diminuio da idade materna e da paridade, em conseqncia do amplo uso de mtodos anticoncepcionais eficientes na limitao da prole, bem como a diminuio da proporo de mes negrides em certas populaes, tm sido usadas para explicar a queda da incidncia de gmeos DZ (Moraes, Beiguelman e Krieger, 1989; Beiguelman e Villarroel-Herera, 1993; Beiguelman, Franchi-Pinto, Krieger e Magna, 1996). Em Campinas, SP, por exemplo, a idade mdia das mes, que era estimada em 26,4 anos no perodo de 1925 a 1949, baixou para 24,9 anos no perodo de 1984 a 1993. Nesses mesmos perodos o nmero mdio de partos decresceu de 3,02 para 1,94. No concernente composio tnica da populao, constatou-se que, nessa cidade, a proporo de mes negrides diminuiu bastante no perodo entre 1925 e 1965, ao passar de 24% para 9,6%. Sabendo-se que, em Campinas, a incidncia de pares DZ, era estimada em 15,2 por mil partos no perodo entre 1925 e 1929, sendo reduzida a um valor quase quatro vezes inferior (4,1 por mil partos) nos anos de 1990 a 1994, , pois, bastante plausvel atribuir essa reduo ao conjunta da diminuio da idade materna, da paridade e da proporo de mes negrides na populao. Parisi e Caperna (1982) sugeriram que, em decorrncia do stress sofrido pelas pessoas que vivem em grandes aglomerados urbanos, seria possvel ocorrer a diminuio da concentrao e da qualidade espermtica. Esse fenmeno, aliado aos distrbios da ovulao sofrido pelas mulheres, tambem por causa desse stress, poderia ser, pois, includo entre os fatores capazes de diminuir a incidncia de gmeos DZ . As sugestes de que tambm existiriam fatores genticos capazes de influenciar o nascimento de gmeos DZ so antigas (Lewis et al., 1996). Assim, j em 1909, Weinberg havia sugerido que a tendncia herditria gestao de gmeos DZ transmitida por 27

intermdio das mes e que ela seria provavelmente recessiva. Um estudo genealgico feito em mrmons falou a favor da hiptese de transmisso recessiva (Wyshak e White, 1965), enquanto que, em oposio, o estudo de ocorrncia espontnea de gmeos DZ em genealogias feito por Meulemans et al. (1996) falou a favor de herana dominante monognica. O trabalho de Busjahn et al. (2000), entretanto, foi contrrio possibilidade de existncia de efeito materno e, segundo esses autores, a dizigosidade dependeria de um gene do cromossomo 3 (PPARG), que codifica o receptor ativado do proliferador de peroxisoma (PPAR), o qual influencia efeitos relacionados insulina, ao metabolismo de lipdios e massa corporal, que so importantes para o processo de crescimento. De acordo com Busjan et al. (2000) esse gene contribuiria para a sobrevivncia intrauterina dos gmeos DZ, entre os quais a perda fetal sabidamente alta. De fato, estima-se que cerca de 40% das gestaes de gmeos DZ resultam em parto nico (Landy e Keith, 1998) e, em casos de fertilizao assistida, cerca de 30% das implantaes mltiplas de embries resultam em parto nico (Kelly et al., 1991). Outra demonstrao da participao de fatores genticos no nascimento de gmeos DZ foi dada por Hasbargen et al. (2000), os quais demonstraram que as mulheres que possuem o alelo determinador da deficincia de redutase de metilenotetra-hidrofolato (MTHFR) tm menor probabilidade de gerar gmeos DZ. Nas gestaes gemelares a demanda de cido flico fica muito aumentada. Por ser a deficincia de MTHFR responsvel pela pouca produo de 5-metiltetra-hidrofolato e elevao da concentrao plasmtica de homocistena, o alelo que a causa essa deficincia diminui a probabilidade de gestao gemelar. De acordo com Hasbargen et al. (2000), a freqncia desse alelo em parturientes de recm-nascidos nicos foi 30%, enquanto que em mes de gmeos essa freqncia foi, praticamente, a metade (16%). O emprego de tcnicas de fertilizao assistida, para ajudar casais com problemas de esterilidade, tem aumentado a freqncia de nascimento de gmeos DZ porque, essas tcnicas incluem tratamento que estimula a sper-ovulao. Considerando que, regra geral, no Brasil, somente as camadas economicamente mais favorecidas da populao tm acesso fertilizao assistida, a qual ainda muito cara, evidente que a freqncia de partos gemelares na populao no sofre muita influncia dessa prtica. Entretanto, em 28

maternidades que atendem a mulheres daquelas camadas sociais mais favorecidas, a freqncia de nascimento de pares DZ altssima, chegando nos ltimos anos notvel incidncia de 19,5 por mil partos, quando na maior parte da populao ela no ultrapassa 5,5 por mil. Do mesmo modo, a incidncia de trigmeos nessas maternidades (2,13 por mil partos) extraordinariamente alta, quando se sabe que, em geral, essa incidncia no ultrapassa 0,2 por mil partos (Colleto, Segre e Beiguelman, 2001). Bem mais difcil do que detectar os fatores que determinam a poliovulao, que a condio sine qua non para o nascimento de gmeos DZ, o reconhecimento de fatores que influenciam a gestao de pares MZ. A hiptese mais plausvel para explicar o nascimento de pares MZ a diminuio da motilidade tubria e(ou) as alteraes da mucosa do endomtrio e(ou) do epitlio tubrio, que so fatores capazes de retardar a implantao do embrio na mucosa uterina. De fato, o retardamento experimental da ovulao em coelhos, entre os quais no ocorre monozigosidade, foi capaz de induz-la (Bomsel-Helmreich e Papiernik-Berkhauer, 1976). Alm disso, as fmeas dos tatus da famlia Dasypodidae, nas quais o retardamento da implantao do embrio uma caracterstica constitucional, sempre do origem, em cada ninhada, de 4 a 6 pares de gmeos do mesmo sexo, por serem todos MZ. A popularidade dessa observao foi, inclusive, registrada pelo grande zologo brasileiro Rodolfo von Ihering (1953), ao recolher a seguinte quadra originria do Rio Grande do Sul: O tatu mais a mulita a lei da sua criao: Sendo macho no pode ter irm, Quando fmea no pode ter irmo. Essa hiptese para justificar o nascimento de gmeos MZ tambm encontra apoio numa observao epidemiolgica a respeito da incidncia desses gmeos, que era constante em todas populaes, variando entre 3 e 4 por mil, e que passou a aumentar naquelas em que o uso de anovulatrios orais foi vulgarizado (Bressers et al., 1987; Beiguelman, Franchi-Pinto, Krieger e Magna, 1996). As indicaes que permitem supor serem os anovulatrios orais os responsveis pelo aumento da incidncia de pares MZ decorrem do conhecimento de que a depresso da motilidade tubria, bem como as alteraes das mucosas do endomtrio e tubria, esto includas entre os efeitos residuais do uso desses 29

anticoncepcionais (Bressers et al., 1987). Por outro lado, tambm freqente o retardamento da ovulao no primeiro ciclo menstrual aps a suspenso do uso de anovulatrios orais (Pinkerton, 1976). O uso desses anticoncepcionais poderia, pois, ser responsabilizado pelo aumento da incidncia de pares MZ, pois eles contribuiriam para o retardamento da implantao do embrio, o que, como foi demonstrado experimentalmente, um fator importante da monozigosidade. A predominncia de pares MZ entre as mes muito jovens que do luz gmeos (Tabelas 1.1 e 2.1) encontraria uma explicao na irregularidade do ciclo menstrual entre elas. Tabela 2.1 Porcentagem de pares MZ em 1306 partos gemelares segundo o grupo etrio das mes (Beiguelman, Franchi-Pinto, Dal Colletto & Krieger, 1995). Idade No. de gmeos MZ < 20 77 66,2 20 25 289 55,7 25 30 444 43,7 30 35 339 39,2 35 40 123 38,2 34 41,1 40 No concernente a influncias genticas na induo de predisposio ao nascimento de gmeos MZ, existem evidncias de que mulheres gmeas MZ tm maior probabilidade de gerar esse tipo gmeos, mas a investigao de um efeito paterno semelhante em favor do nascimento desses gmeos mostrou resultado negativo (Lichtenstein et al., 1998). Em outras palavras, se existir um componente gentico que favorece a diviso do embrio para a produo de gmeos MZ, esse componente se expressa apenas nas mes e no nos zigotos. A fertilizao assistida tambm tem favorecido o aumento da incidncia de gmeos MZ por razes que ainda no so claras. Esse fenmeno foi atribudo principalmente delgadeza e(ou) micromanipulao da zona pelcida (Alikani et al., 1994). Entretanto, Sills et al. (2000) no observaram diferena na proporo de gmeos MZ nascidos de fertilizao in vitro sem o emprego e com o emprego dessa manipulao. Alm disso, devese lembrar que Derom et al. (1987) j haviam notado aumento da taxa de nascimento de gmeos MZ por simples induo da ovulao.

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O QUIMERISMO NOS GMEOS DIZIGTICOS Durante a vida intra-uterina dos pares DZ possvel a ocorrncia de anastomoses placentrias devido proximidade das placentas, e, assim, haver trocas de clulas circulatrias nucleadas entre os gmeos. Por ser essa troca de clulas feita antes do desenvolvimento da imunocompetncia, cria-se entre os gmeos um estado de tolerncia imunolgica permanente, de modo que eles se desenvolvem como quimeras, isto , como indivduos nos quais coexistem populaes celulares geneticamente diferentes, pois so originrias de zigotos distintos. Em conseqncia dessa tolerncia imunolgica, em tais tipos de gmeos no ocorrer rejeio de enxertos recprocos eventualmente feitos neles. Em macacos bugios que, freqentemente, do origem a gmeos DZ, demonstrou-se tolerncia de enxertos recprocos de pele por mais de um ano (Porter, 1968), em decorrncia de seu quimerismo. Em gmeos DZ bovinos a tolerncia desses enxertos tambm a regra (Rogers e Allen, 1955). Essas observaes abalaram profundamente a idia, divulgada por muito tempo, de que a aceitao de enxerto recproco de pele em gmeos humanos serviria para rejeitar a hiptese de que eles seriam DZ. A existncia de quimerismo em gmeos DZ j vinha sendo demonstrada desde a dcada de 50, com a constatao, em alguns deles, de uma heterogeneidade na populao de hemcias quanto aos grupos sangneos (Race e Sanger, 1975). Assim, verificou-se a existncia de casos em que um dos indivduos do par, ou ambos, apresentavam uma populao de hemcias do grupo O e outra do grupo A ou B, ou ainda, populaes diferentes de hemcias quanto aos grupos sangneos do sistema Rh. Entretanto, a demonstrao citogentica da existncia desse fenmeno foi feita, pela primeira vez, em 1963, por Chown e colaboradores, que constataram nas culturas de leuccitos de um par DZ em que os gmeos eram discordantes quanto ao sexo, que 30% das clulas da menina apresentavam caritipo masculino (46,XY), enquanto que 22% das clulas do menino mostravam caritipo feminino (46,XX). At o presente no existe uma explicao para o fato de que, tanto nos humanos quanto nos macacos bugios, os gmeos DZ discordantes quanto ao sexo e com placenta aparentemente nica e, portanto, com possibilidade de trocas celulares durante a vida intrauterina, no apresentam um fenmeno semelhante ao que se observa no gado bovino, em 31

carneiros, cabras e porcos, isto , que as gmeas de machos possam desenvolver-se como fmeas maninhas (do latim ibrico, manan = estril). Tais fmeas que, em ingls, so denominadas freemartins, possuem genitais externos femininos, mas so estreis por possurem ovrios atrofiados, sem crtex, alm do que, o tero e as trompas so pouco desenvolvidos. Durante muitos anos, a maninhez foi interpretada como sendo uma conseqncia de influncias hormonais do feto masculino sobre o feminino. Entretanto, tal explicao foi derrubada pela demonstrao de que a testosterona injetada nos fetos incapaz de reduzir os derivados dos dutos de Mller, que do origem s trompas, tero e parte superior da vagina, e no afeta o desenvolvimento dos ovrios (Jost et al., 1963). Passou-se, por isso, a pensar que a mistura de clulas masculinas e femininas pudesse condicionar o efeito que era atribudo, anteriormente, aos hormnios (Goodfellow et al., 1965; Herschler e Fechheimer, 1967). Essa hiptese, contudo, tambm teve que ser rejeitada quando se verificou no ser possvel demonstrar, de modo regular, o encontro de clulas com cromossomos sexuais XY nem nas gnadas, nem em outros tecidos slidos de fmeas maninhas. Alm disso, essa hiptese no explica o fato de, nos seres humanos e nos bugios, as clulas com cromossomos XY no terem atuao nas gmeas que apresentam quimerismo. Outra hiptese que teve de ser afastada foi a de que, nos seres humanos e nos bugios, a fuso das vilosidades corinicas nos gmeos dizigticos com placenta aparentemente nica poderia ocorrer mais tardiamente do que no gado bovino, o que livraria os primeiros da atuao precoce de agentes exteriores sobre suas gnadas. Entretanto, de acordo com Benirschke (1972), a fuso das vilosidades nos bugios ocorre antes da angiognese e, poca da diferenciao genital, as anastomoses interplacentrias j esto bem estabelecidas. O problema, portanto, continua sem soluo.

DURAO DA GESTAO Os gmeos nascem com menos semanas de gestao que os recm-nascidos de parto nico. Num estudo feito em Campinas, SP, com 640 pares de gmeos (504 nascidos de mes caucasides e 136 de mes negrides) e 1119 recm-nascidos de parto nico (924 de mes caucasides e 195 de mes negrides) Beiguelman, Franchi-Pinto e Magna (1997) 32

verificaram que o grupo racial das mes no teve influncia sobre a idade gestacional dos recm-nascidos, o que tambm j havia sido observado por Luke et al. (1991) nos Estados Unidos. Essa similaridade permitiu estudar os gmeos e os nascidos de parto nico sem distino de raa e constatar que, em mdia, os gmeos tiveram idade gestacional de 36,6 semanas, ao passo que a idade gestacional dos nascidos de parto nico foi de 39,5 semanas, o que d uma diferena mdia de trs semanas a menos para os partos gemelares. Esses valores so muito semelhantes s estimativas obtidas na Europa em diferentes pocas e pases (McKewon e Record, 1952; Powers, 1973; Gedda et al., 1981; Bonnelykke et al., 1987). A durao das gestaes nicas considerada normal quando o nascimento se d no perodo entre 37 e 42 semanas completas de amenorria, isto , de ausncia de menstruao (recm-nascidos a termo). Quando esse tempo de gestao inferior a 37 semanas completas de amenorria, os recm-nascidos so considerados prematuros ou recmnascidos pr-termo. Se a durao da gestao for igual ou superior a 42 semanas completas de amenorria, o recm-nascido ser dito ps-termo. Se esse critrio, consagrado para os partos nicos, for estendido aos partos gemelares, a proporo de gmeos classificados como prematuros passa a ser altssima. De fato, nos gmeos brasileiros a proporo de partos gemelares com menos de 37 semanas completas de amenorria foi de 45%, enquanto que nos partos nicos a porporo de prematuros no atingiu 10%. Nos gmeos brasileiros a proporo de partos a termo (37 a 42 semanas) foi de 53%, enquanto entre os partos nicos essa proporo atingiu 81%. A proporo de ps-maturidade (42 semanas ou mais) entre os gmeos foi de apenas 2%, enquanto entre os partos nicos foi de 9,5%. Aqui interessante assinalar que essas propores so muito semelhantes s observadas nos Estados Unidos (Keith, 1994) e na Gr Bretanha (Buckler e Buckler, 1987). Papiernik et al. (1985), conseguiu diminuir a proporo de gmeos pr-termo para 34%, aps submeter as gestantes a um programa especial de cuidados pr-natais. Entretanto, no so poucos os que consideram que a prematuridade dos gmeos no um fenmeno patolgico, mas mera conseqncia mecnica da distenso excessiva e eretismo da musculatura uterina, e do aumento da mobilidade fetal (Benirschke e Kim, 1973; Gedda et al., 1981). Gedda et al. (1981) consideraram provvel que as gestaes gemelares 33

estejam associados com o aumento da produo fetal de protenas com efeito oxitcicomimtico. Um trabalho realizado por Beiguelman, Dal Colletto, Franchi-Pinto e Krieger (1998), levando em conta o desenvolvimento intra-uterino de 1.158 pares de gmeos nascidos em trs maternidades brasileiras, mostrou que, em comparao com a taxa de crescimento de fetos nicos, a taxa de crescimento fetal dos gmeos retardada, independentemente do nvel scio-econmico da populao examinada. Entretanto, a idade gestacional em que comea esse atraso parece estar relacionada ao nvel econmico das mes, pois entre as mais pobres o atraso do crescimento fetal comea mais cedo. Em qualquer situao, porm, depois de 28 semanas de gestao, o crescimento dos fetos femininos foi levemente, mas consistentemente, inferior aos dos fetos masculinos.

PESO E ESTATURA AO NASCER Em decorrncia do menor tempo mdio de gestao, os gmeos apresentam menor peso e menos estatura ao nascer que os recm-nascidos de parto nico. Assim, por exemplo, um estudo feito em Campinas, SP, por Beiguelman e Franchi-Pinto (2000) permitiu constatar em recm-nascidos vivos do sexo masculino, que 711 gmeos mostraram peso mdio de 2331 616 g, enquanto 750 nascidos de parto nico pesaram, em mdia, 3212 527. Entre os recm-nascidos do sexo feminino a diferena foi da mesma ordem de grandeza, pois 728 gmeas pesaram, em mdia, 2246 611 g, enquanto as nascidas de parto nico tiveram peso mdio de 3127 477 g. Quando esses recm-nascidos foram distribudos em apenas duas classes de peso (menos de 2500 g, o que considerado peso baixo ao nascer, e com 2500 g ou mais), constatou-se que a proporo de crianas com menos de 2500 g foi impressionantemente mais alta nos gmeos (61%) do que nos recmnascidos de parto nico (7,9%). Ao promover a distribuio dos recm-nascidos em uma classe inferior a 1500 g (peso muito baixo ao nascer) e com 1500 g ou mais, praticamente 10% dos gmeos foram classificados na primeira classe, enquanto que, praticamente, apenas 1% dos recm-nascidos de parto nico foram includos entre os recm-nascidos de peso muito baixo. Em outro estudo, tambm realizado em Campinas, SP (Beiguelman, Franchi-Pinto e Magna, 1997), pde-se observar que a estatura mdia entre os recm-nascidos do sexo 34

masculino foi de 45,1 3,3 cm para os 671 gmeos analisados e 48,6 2,2 cm para os 750 nascidos de parto nico. Entre os do sexo feminino, verificou-se que 712 gmeas mediram 44,6 3,2 cm, ao passo que as 765 nascidas de parto nico tiveram 47,9 2,4 cm de estatura. Ao serem distribudos em duas classes de estatura (menos de 44 cm e com 44 cm ou mais), a proporo de crianas com menos de 44 cm tambm foi significativamente mais alta nos gmeos (28%) do que nos recm-nascidos de parto nico (3%). Os dados a respeito do peso de recm-nascidos em Campinas, SP, so semelhantes aos verificados em outras populaes brasileiras (Arajo e Salzano, 1975) ou na frica do Sul (Essel e Opai-Tetteh, 1994). Entretanto, tanto o peso quanto a estatura dos recmnascidos brasileiros, gmeos ou no, foram menores do que os constatados em recmnascidos da Europa, Estados Unidos e Israel (Armitage et al., 1967; Gedda et al., 1981; Alfieri et al., 1987; Ramos-Arroyo et al., 1988; Blickstein e Weissman, 1990; Voorhorst et al., 1993). De acordo com Luke (1996), o menor peso ao nascer associado menor idade gestacional dos gmeos resulta em efeito benfico para eles. Assim, nos Estados Unidos, a menor taxa de bitos fetais em gmeos foi observada naqueles com 2500 a 2800 g ao nascimento e idade gestacional de 36 a 37 semanas, enquanto a menor taxa de bito entre os recm-nascidos de parto nico ocorreu entre aqueles que apresentaram 3700 a 4000 g ao nascimento e idade gestacional de 40 a 41 semanas. As observaes de Luke (1996) concordam com as anteriores de Gedda et al. (1981), que afirmaram ser o peso baixo de gmeos ao nascer uma entidade distinta do peso de recm-nascidos de parto nico, por afetarem diferentemente o crescimento e a sobrevivncia das crianas. Gedda et al. (1981) tambm recomendaram que, na anlise da relao entre o peso ao nascer e a mortalidade perinatal, os dados a respeito dos gmeos e dos nascidos de parto nico deveriam ser avaliados separadamente e no em conjunto, como, geralmente, se faz.

NDICE DE APGAR Em 1953, Virginia Apgar props um mtodo para avaliar o estado clnico dos recm-nascidos por intermdio de um ndice, que representa a soma de vrios achados. Esse mtodo foi idealizado, originalmente, para ser empregado um minuto aps o

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nascimento (Apgar de 1 min.). Posteriormente, porm, passou-se a empreg-lo pelo menos mais uma vez, cinco minutos aps o nascimento (Apgar de 5 min.). O ndice de Apgar leva em conta cinco sinais que podem ser facilmente determinados e que no interferem com os cuidados que o recm-nascido necessita (freqncia cardaca, esforo respiratrio, irritabilidade reflexa, tnus muscular e cor da pele). Cada um desses sinais subclassificado em trs resultados que recebem nota zero, um ou dois, de modo que a soma dessas notas d um total (ndice de Apgar), que pode variar de zero a 10. As notas so as seguintes: 1) Freqncia cardaca: 0 = nenhum batimento pode ser visto, sentido ou ouvido; 1 = menos de 100 batimentos por minuto; 2 = mais de 100 batimentos por minuto. 2) Esforo respiratrio: 0 = apnia aps o nascimento; 1 = todos os tipos de esforos respiratrios; 2 = choro forte. 3) Irritabilidade reflexa : 0 = ausncia de resposta; 1 = movimentos faciais; 2 = caretas, tosse e espirro. 4) Tnus muscular: 0 = flacidez muscular completa; 1 = alguns movimentos de flexo de membros; 2 = movimentao ativa dos membros e resistncia extenso. 5) Cor da pele: 0 = cianose; 1 = cianose somente das extremidades; 2 = cor da pele rosada. O ndice 10 indica que o estado clnico do recm-nascido considerado excelente, mas os ndices de Apgar de 7 a 9 tambm so aceitos como bom prognstico de baixo risco de complicaes respiratrias ou do desenvolvimento neuropsicomotor. ndices de 4 a 6 indicam asfixia moderada, o que requer algum tipo de ressuscitao para o recm-nascido. ndices entre 3 e zero indicam estado grave e esto associados a alto risco de bito e paralisia cerebral (Fanaroff e Martin, 1992). Se o ndice de Apgar de 5 min for menor do que 7, o recm-nascido passa a ser reavaliado em intervalos de 5 minutos at que haja normalizao clnica (Fanaroff e Martin, 1992), porque a correlao entre o desenvolvimento neurolgico e o ndice de Apgar aumenta medida que aumenta o tempo decorrido entre o nascimento e o exame do recmnascido (Grothe e Rtgers, 1985; Committee on Fetus and Newborn, 1986). Um estudo feito em Campinas, SP, por Franchi-Pinto, Dal Colletto, Krieger e Beiguelman (1999) a respeito do ndice de Apgar de 604 pares de gmeos mostrou que 36

aqueles que nascem em primeiro lugar apresentam, em mdia, melhor estado clnico do que os gmeos que nascem em segundo lugar. De fato, entre os primeiros a proporo de ndices de Apgar de 1 min inferiores a 7 (17,5%) foi significativamente menor do que aquela observada entre os gmeos nascidos em segundo lugar (29,8%). Em qualquer caso, a proporo de ndices de Apgar de 1 min. inferior a 7 foi significativamente maior nos gmeos do que em 1522 conceptos nicos nascidos na mesma maternidade (9,2%).

MORTALIDADE PERINATAL Os bitos perinatais incluem os natimortos, isto , os conceptos com peso superior a 500 g ou com mais de 22 semanas completas de gestao que, ao nascimento, no manifestam qualquer sinal vital, e os bitos neonatais precoces, isto , os conceptos que nascem com vida, mas que vo a bito na primeira semana aps o nascimento (Belitzky et al., 1978). Em decorrncia dos avanos teraputicos, as causas de natimortalidade de origem materna, como diabetes mellitus, pr-eclmpsia e isoimunizao, tendem a ser menos freqentes, dando lugar ao predomnio da natimortalidade de origem fetal, geralmente decorrente da prematuridade. Em todas as populaes humanas estudadas, a taxa de mortalidade perinatal de gmeos maior do que a de nascidos de parto nico (Lumme e Saarikoski, 1988; Chen et al., 1992; Keith, 1994). No Brasil, essa situao no diferente. De fato, ao analisar dados a respeito de 116.699 partos (1.062 gemelares e 115.637 nicos) ocorridos no perodo entre 1984 e 1996 na maior maternidade da cidade de Campinas, SP, Beiguelman e Franchi-Pinto (2000) constataram que, a despeito da baixa incidncia de nascimentos gemelares (9 por mil partos), as taxas de bitos neonatais precoces (55 por mil recm-nascidos) e de natimortos (19 por mil recm-nascidos) entre os gmeos foram responsveis por 10,7% dos bitos neonatais precoces e 3,5% dos natimortos. Em relao aos recm-nascidos de parto nico (8,4 bitos neotatais precoces e 10 natimortos por mil nascimentos), as probabilidades de mortalidade neonatal precoce e de natimortalidade foram,

respectivamente, 6,5 e 1,9 vezes maior. A taxa de bitos perinatais dos recm-nascidos do sexo masculino foi mais alta do que a dos recm-nascidos do sexo feminino tanto entre os gmeos quanto entre os nascidos de parto nico.

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No concernente ao perodo crtico para os bitos perinatais precoces, os dados desse trabalho contradisseram observaes feitas em outras populaes, nas quais se considera que esse perodo est limitado ao primeiro dia aps o nascimento (Barr e Stevenson, 1961; Doherty, 1988), visto que, em Campinas, tal perodo crtico abrangeu os trs primeiros dias aps o nascimento tanto no caso dos gmeos quanto no dos recm-nascidos de parto nico (Beiguelman e Franchi-Pinto, 2000). Alm disso, ficou claro que a mortalidade perinatal incidiu mais freqentemente nos pares masculinos (MM), os quais foram seguidos pelos pares femininos (FF), sendo menos freqentes nos pares discordantes quanto ao sexo (MF). No fcil explicar essa distribuio. Assim, se a maior vulnerabilidade dos conceptos masculinos fosse a causa do maior nmero de bitos nos gmeos MM, dever-seia esperar que os pares MF tivessem mais bitos do que os FF, o que no ocorreu. Por outro lado, se os pares MZ, que so, reconhecidamente, mais vulnerveis do que os DZ (Chen et al., 1992), fossem a causa de maior mortalidade, dever-se-ia esperar equivalncia da taxa de bitos entre os pares MM e FF, o que tambm no ocorreu. Em vista disso, parece plausvel supor que o gradiente de bitos perinatais na seqncia MM>FF>MF decorra de uma associao de trs fatores, a saber: maior vulnerabilidade dos conceptos masculinos, monozigosidade e concordncia de bitos perinatais, isto , o bito de um dos elementos do par poderia facilitar a ocorrncia do bito do outro elemento. Outra constatao feita nesse trabalho que a taxa de bitos perinatais vem decrescendo em Campinas, tanto nos gmeos quanto nos nascidos de parto nico, podendo essa tendncia ser atribuda melhoria da assistncia pr- e perinatal nessa cidade, que conta com duas Faculdades de Medicina de alto nvel. curioso, porm, que o decrscimo de bitos perinatais est sendo feito de modo mais acentuado nos recm-nascidos do sexo feminino.

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CAPTULO 2. O DIAGNSTICO DA ZIGOSIDADE

EMPREGO DE CARACTERES MONOGNICOS A atribuio de monozigosidade ou de dizigosidade aos gmeos pode ser feita por intermdio da investigao da concordncia dos gmeos em relao a marcadores genticos, os quais podem ser polimorfismos de DNA, como os genes de locos de minisatlites, tambm conhecidos pela sigla STR (do ingls, short tandem repeat), usados mais modernamente, e(ou) polimorfismos genticos clssicos como os grupos sangneos eritrocitrios, os grupos do sistema HLA, as haptoglobinas, os grupos Gm etc. Quaisquer que sejam os marcadores, o mtodo utilizado para investigar a zigosidade dos gmeos tem, como princpio bsico, que essa investigao somente necessria em pares de gmeos do mesmo sexo, j que os discordantes quanto ao sexo so, regra geral, dizigticos (DZ), pois, como j vimos no captulo anterior, so rarssimos os gmeos monozigticos (MZ) compostos por um elemento do sexo masculino e outro do sexo feminino. O mtodo utilizado para a investigao da zigosidade probabilstico e tem por objetivo calcular a probabilidade de um par de gmeos, ainda que DZ, ser concordante em relao a uma srie de caracteres. Se essa probabilidade for muito pequena, o que equivaler a uma grande probabilidade de monozigose, rejeitar-se- a hiptese de dizigosidade em favor da de monozigosidade. Nesse mtodo, a primeira situao a ser levada em conta diz respeito freqncia com que os pares DZ e os MZ ocorrem entre os gmeos da populao da qual se originam, pois essas freqncias so tomadas como estimativas da probabilidade de ocorrncia desses pares. Assim, se a investigao da zigosidade for feita em um lugar onde a proporo de DZ e de MZ entre os gmeos , respectivamente, 55% e 45%, admitiremos que um par de gmeos concordantes quanto ao sexo tem probabilidade igual a 55% de ser um par DZ e que a probabilidade de esse par ser MZ 45%. Se a investigao da zigosidade for feita em uma localidade onde 70% dos gmeos so DZ e 30% so MZ claro que admitiremos a priori que um par de gmeos do mesmo sexo tem probabilidade igual a 70% de ser DZ.

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A segunda situao que levada em conta nesse mtodo a probabilidade de concordncia do par de gmeos DZ quanto ao sexo. Se aceitarmos que a probabilidade de nascer um indivduo do sexo masculino , praticamente, a mesma de nascer um do sexo feminino, tem-se que a probabilidade de um par de gmeos DZ ser do mesmo sexo igual a 0,5 ou 50 %. Em relao aos pares MZ, essa probabilidade , evidentemente, sempre 1 ou 100 %, pois aceitamos que, com certeza, os pares MZ so concordantes quanto ao sexo.

Quando os polimorfismos genticos utilizados para a comparao dos gmeos so os marcadores genticos clssicos, devemos considerar quatro situaes diferentes (Beiguelman, 1971a), conforme se conhea: a) o gentipo dos gmeos e o de seus pais; b) o gentipo dos pais, mas no o dos gmeos; c) somente o fentipo dos gmeos e o de seus pais; d) somente a constituio genotpica ou fenotpica dos gmeos; mas, quando se trabalha com mini-satlites, temos que levar em conta apenas a primeira e a ltima dessas situaes (a e d), porque, a investigao do DNA sempre permite a determinao do gentipo dos indivduos examinados.

a) O gentipo dos gmeos e de seus pais conhecido Quando se conhece a constituio genotpica dos gmeos e a de seus pais, o diagnstico da zigosidade muito simples. Para exemplificar, consideremos, inicialmente, os resultados da investigao dos alelos pertencentes a oito locos STR de um casal caucaside e de suas filhas gmeas (Tabela 1.2) e admitamos que, na populao de origem desse casal, a freqncia de pares DZ entre os nascimentos gemelares estimada em 55%. Os dados da Tabela 1.2 permitem concluir que uma criana gerada pelo casal em estudo tem probabilidade igual a 50% de ser 9-10 no loco F13B, 50% de ser 5-5 no loco CD4, 25% de ser 11-14 no loco PLA2A1, 25% de ser 10-12 no loco CSF1PO, 25% de ser 6-9 no loco THO1, 50% de ser 8-11 no loco TPOX, 25% de ser 6-18 no loco vWA e 25% de ser 11-11 no loco LPL. Como conseqncia, pode-se concluir que, dado que o gentipo de uma filha de um casal como o da Tabela 1.2 9-10 no loco F13B, a probabilidade de sua gmea ter o mesmo gentipo, apesar de ser DZ, 50%. De fato, por se tratar de probabilidade condicional, tem-se P(9-10. 9-10 | 9-10) = 0,50 0,50 = 0,50. De modo 0,50

anlogo, chegamos concluso que dado que o gentipo de uma filha de um casal como o

50

da Tabela 1.2 11-14 no loco PLA2A1, a probabilidade de sua gmea DZ ter o mesmo gentipo 25% porque P(11-14. 11-14 | 11-14) = 0,25 0 ,25 = 0,25, e assim por diante. 0 ,25

Tabela 1.2 Resultados da investigao dos alelos presentes em oito locos STR de um casal e de suas filhas gmeas. Loco F13B CD4 PLA2A1 CSF1PO THO1 TPOX vWA LPL Pai 8-9 5-5 14-15 11-12 6-7 8-8 16-17 11-13 Me 10-10 5-10 11-15 10-11 7-9 9-11 17-18 10-11 Gmeas 9-10 5-5 11-14 10-12 6-9 8-11 16-18 11-11

Com base no exposto, podemos, pois, estimar que a probabilidade conjunta de as gmeas da Tabela 1.2, mesmo que DZ (probabilidade de 55 %, isto , P = 0,55), serem concordantes quanto ao sexo (P = 0,50) e quanto aos gentipos 9-10 do loco F13B (P = 0,50), 5-5 do loco CD4 (P = 0,50), 11-14 do loco PLA2A1 (P = 0,25), 10-12 do loco CSF1PO (P = 0,25), 6-9 do loco THO1 (P = 0,25), 8-11 do loco TPOX (P = 0,50), 16-18 do loco vWA (P = 0,25) e 11-11 do loco LPL (P = 0,25) o produto de todas essas probabilidades, o que d, como resultado, P = 0,0000336. Por outro lado, estimando-se que a probabilidade de ocorrncia de um par MZ entre os gmeos dessa populao 45% e que, por princpio, se aceita que os pares MZ tm o mesmo sexo e so concordantes em relao a todos os marcadores genticos estudados, teremos que a probabilidade conjunta de as gmeas da Tabela 1.2, em sendo MZ (P = 0,45), serem concordantes quanto ao sexo e aos gentipos analisados (P = 1) , pois, igual a 0,45. Tais estimativas permitem, agora, calcular a probabilidade de as gmeas em questo serem DZ em 0,007% e a de elas serem MZ em 99,993% porque:

51

P(DZ) =
P(MZ) =

0,0000336 = 0 ,00007 0,45 + 0,0000336

0 ,45 = 0,99993 ou P(MZ) = 1- 0,00007 = 0,99993 0 ,45 + 0 ,0000336 Diante dessa altssima probabilidade de monozigosidade, evidentemente, pela aceitao da hiptese de que as gmeas so MZ.

conclumos,

Consideremos, agora, que, em vez da investigao dos alelos dos locos STR, o casal e suas filhas gmeas, bem como duas outras filhas do mesmo casal, nascidas de partos sucessivos, tivessem sido estudadas quanto aos grupos sangneos dos sistemas ABO, MNSs, P, Rh, Kell, Duffy, Kidd e Xg, obtendo-se os resultados apresentados na Tabela 2.2. Graas s filhas do grupo O (gentipo OO), P2 (gentipo P2P2) e Xg(a-) (gentipo XgXg), tais resultados permitem inferir que o casal tem constituio genotpica AO no sistema ABO e P1P2 no sistema P, e que a me tem gentipo XgaXg no sistema Xg, Os dados da Tabela 2.2 tambm permitem constatar, facilmente, que uma criana gerada pelo casal em estudo tem probabilidade igual a 25% de ser OO, 25% de ser MS/Ms, 25% de ser P2P2, 25% de ser CDe/cDE, 50% de ser Kk, 50% de ser FyaFyb, 50% de ser Jkakb e, quando do sexo feminino, 50% de ser XgXg. Tabela 2.2 Constituio genotpica quanto aos grupos sangneos de vrios sistemas, de uma famlia que inclui um par de gmeas. Sistema ABO MNSs P Rh Kell Duffy Kidd Xg Pai AO MS/NS P1P2 CDe/cde Kk Fybyb JkbJkb XgY Me AO Ms/Ns P1P2 CDe/cDE Kk FyaFyb Jkakb XgaXg Gmeas OO MS/Ms P2P2 CDe/cDE Kk FyaFyb Jkakb XgXg Filha OO MS/Ms P1 CDe/CDe kk FyaFyb JkbJkb XgaXg Filha A Ms/NS P2P2 CDe/CDe Kk Fybyb Jkakb XgXg

Pode-se, agora, empregar o mesmo raciocnio utilizado em relao aos dados da Tabela 1.2, para estimar a probabilidade conjunta de as gmeas da Tabela 2.2 serem DZ (probabilidade de 55 %, isto , P = 0,55) e, mesmo assim, serem concordantes quanto ao sexo (P = 0,50) e quanto aos gentipos OO (P = 0,25), MS/Ms (P = 0,25), P2P2 (P = 0,25), CDe/cDE (P = 0,25), Kk (P = 0,50), FyaFyb (P = 0,50), JkaJkb (P = 0,50) e XgXg 52

(P =0,50). Desse modo, obtm-se 0,000067, que o produto de todas essas probabilidades. Por outro lado, estimando-se que a probabilidade de ocorrncia de um par MZ entre os gmeos dessa populao 45% e que, por princpio, se aceita que os pares MZ tm o mesmo sexo e so concordantes em relao a todos os marcadores genticos estudados, teremos que a probabilidade conjunta de as gmeas da Tabela 2.2, em sendo MZ (P = 0,45), serem concordantes quanto ao sexo e aos gentipos analisados (P = 1) igual a 0,45. Tais estimativas permitem, agora, calcular a probabilidade de as gmeas em questo serem DZ em 0,01%, a qual uma probabilidade muito baixa diante da probabilidade de elas serem MZ (99,9%) porque: P(DZ) = P(MZ) = 0 ,000067 = 0,0001 0 ,45 + 0 ,000067 0, 45 = 0,9999 ou P(MZ) = 1- 0,0001 = 0,9999 0,45 + 0,000067

Como se v, quando se conhece o gentipo dos genitores e dos gmeos, os sistemas genticos clssicos tambm permitem o diagnstico da zigosidade com a mesma preciso que os polimorfismos de DNA. Os locos dos mini-satlites tm, entretanto, a vantagem de fornecer sempre o gentipo dos indivduos examinados, isto , a vantagem de seus alelos serem sempre codominantes, o que nem sempre ocorre com os polimorfismos genticos clssicos. Alm disso, os mini-satlites tm maior probabilidade de serem informativos para o diagnstico da zigosidade do que os polimorfismos gentico clssicos, porque a probabilidade de heterozigose nos locos STR sempre alta, variando entre 70% a 80% em qualquer populao. De fato, a homozigose de ambos os genitores um entrave ao diagnstico da zigosidade. Assim, se tanto o pai quanto a me dos gmeos forem, por exemplo, homozigotos OO ou MS/MS ou P2P2, est claro que os gmeos e quaisquer outros filhos desse casal tero, com certeza, essa mesma constituio genotpica. Tais gentipos no sero, pois, informativos, para o diagnstico da zigosidade. Do mesmo modo, se tanto o pai quanto a me dos gmeos forem, por exemplo, 5-5 no loco CD4 ou 11-11 no loco PLA2A1 ou 12-12 no loco CSF1PO, evidente que, tambm esses locos, no sero informativos para concluir a favor ou contra a hiptese de dizigosidade.

53

Quando um pesquisador interessado no diagnstico da zigosidade de gmeos tiver limitaes quanto ao nmero de locos STR a serem investigados, ele poder valer-se do recurso alternativo de combinar os resultados alcanados com o estudo de DNA com os obtidos com polimorfismos genticos clssicos. Uma observao que parece pertinente diz respeito probabilidade inicial que levada em conta no clculo da zigosidade. Alguns autores preferem seguir a orientao de Maynard-Smith e Penrose (1955) que, em vez de considerar as propores de DZ e MZ entre os gmeos como as estimativas das probabilidades de ocorrncia desses tipos de gmeos, usaram a relao entre essas propores. Assim, se numa populao as estimativas forem 55% de DZ e 45% de MZ, a relao a favor dos DZ ser 1,222:1 porque 0,55 = 1,222 . Se as estimativas das propores de DZ e MZ forem, respectivamente, 70% e 0 ,45 30%, a relao a favor dos DZ ser, evidentemente, 2,333:1 porque 0 ,70 = 2 ,333 . 0 ,30

Quando essa orientao seguida, o resultado final exatamente o mesmo, mas as frmulas utilizadas para obter as probabilidades de dizigosidade e de monozigosidade so diferentes. Para exemplificar, tomemos, inicialmente, os dados da Tabela 1.2, a respeito de gmeos que pertencem a uma populao na qual as propores de DZ e MZ entre eles so, respectivamente, 55% e 45%. Se segussemos o que preconizaram Maynard-Smith e Penrose (1955), a probabilidade conjunta que calcularamos para um par DZ concordante em relao ao sexo e a todos os caracteres estudados seria: 1,222 0,5 0,5 0,5 0,25 0,25 0,25 0,50 0,25 0,25 = 0,000746 enquanto que para um par MZ a probabilidade conjunta seria igual a 1. Isso permitiria calcular a probabilidade de dizigose em 0,007% e a de monozigose em 99,993% porque: P(DZ) = 0,0000746 1 = 0,00007 e P(MZ) = = 0,99993 . 1 + 0 ,0000746 1 + 0 ,0000746

Em relao aos gmeos cujos dados esto expressos na Tabela 2.2 teramos a seguinte probabilidade conjunta para um par DZ : 1,222 0,50 0,25 0,25 0,25 0,25 0,50 0,50 0,50 0,50 = 0,000149 o que permitiria obter P(DZ) = 0,01% e P(MZ) = 99,99%, como anteriormente, porque: P(DZ) = 0,000149 1 = 0,0001 e P(MZ) = = 0,9999 1 + 0 ,000149 1 + 0 ,000149 54

b) O gentipo dos pais conhecido, mas no o dos gmeos. Quando, mesmo conhecendo a constituio genotpica dos genitores, somente se consegue o fentipo dos gmeos, a estimativa da probabilidade de monozigosidade diminui, em relao obtida levando em conta a constituio genotpica dos pais e filhos (Beiguelman, 1971a). Realmente, se nos dados da Tabela 2.2 os grupos sangneos das gmeas fosse A e P1, em vez de O e P2, sua constituio genotpica no poderia ser determinada em relao a esses dois fentipos. Tendo em mente que uma criana gerada por um casal como o da Tabela 2.2 tem probabilidade igual a 75% de ser do grupo A (25% de ser AA e 50% de ser AO) e, do mesmo modo, 75% de ser do grupo P1 (25% de ser P1P1 e 50% de ser P1P2), pode-se aceitar que a probabilidade conjunta de um par de gmeas filhas de um casal como o da Tabela 2.2 ser DZ e, apesar disso, ser concordante quanto ao sexo e aos gentipos e fentipos estudados (A, MS/Ms, P1, CDe/cDE, Kk, FyaFyb, JkaJkb e XgXg) passaria a ser 0,550,50,750,250,750,250,50,50,50,5 = 0,000604. Em conseqncia, a probabilidade de essas gmeas serem DZ seria estimada em 0,13 % e a de serem MZ em 99,87 %, pois: P(DZ ) = 0 ,00604 = 0 ,0013 0 ,45 + 0 ,000604

P(MZ) = 1 0,0013 = 0,9987 ou P(MZ) = 0,45 = 0,9987 0,45 + 0,000604

c) Somente se conhece o fentipo dos pais e dos gmeos Quando se conhece somente o fentipo dos pais e dos gmeos, a estimativa da probabilidade de monozigosidade menor do que a do item precedente. Assim, por exemplo, se o casal da Tabela 2.2 no tivesse gerado outras filhas, alm das gmeas, e se os grupos sangneos dessas gmeas fossem A e P1, no teramos como saber se o gentipo do casal AA ou AO, ou se ele P1P1 ou P1P2.. Deveramos, pois, considerar que o casal

55

poderia ser AA AA, AA AO ou AO AO e, de modo anlogo, P1P1P1 P1, P1P1 P1P2 ou P1P2P1P2. Designando por p e r as freqncias dos genes A e O do sistema ABO, tem-se que, na populao em equilbrio de Hardy e Weinberg, os indivduos AA so encontrados com freqncia p2 e os indivduos AO com freqncia 2pr. Desse modo, a freqncia dos casais AA AA ser p4, a dos casais AOAO ser 4p2r2 e a dos casais AA AO ser 4p3r pois, neste ltimo caso, temos que somar a freqncia dos casais em que o marido AA e a esposa AO (2p3r) com a daqueles em que o marido AO e a mulher AA (2p3r). Sabendo que na populao caucaside do Estado de So Paulo as estimativas das freqncias dos genes A, B e O do sistema ABO so, respectivamente, p = 0,242, q = 0,069 e r = 0,689 (Beiguelman, 1983), podemos estimar que a freqncia populacional dos casais em apreo: AA AA = 0,0034 AA AO = 0,0391 AOAO = 0,1112 Total = 0,1537

Muitos autores seguem a recomendao de Maynard-Smith e Pensrose (1955) e usam essas estimativas para calcular a proporo de cada um desses trs tipos de casais entre os casais A A, operando como abaixo: AA AA = 0,0034 0,1537 = 0,0221 AA AO = 0,0391 0,1537 = 0,2544 AOAO = 0,1112 0,1537 = 0,7235 Em seguida, levando em conta que os casais AA AA e os casais AA AO podem gerar somente filhos do grupo sangneo A (probabilidade igual a 1) e os casais AOAO tm probabilidade ou 75% de gerar um filho do grupo A, estimam as probabilidades de cada um desses casais gerar um filho do grupo sangneo A e de gerar dois filhos com esse mesmo grupo como abaixo:

Casal AA AA AA AO AOAO Total

Um filho A 1 0,0221 = 0,0221 1 0,2544 = 0,2544 0,75 0,7235 = 0,5426 0,8191

Dois filhos A 0,0221 0,2544 (0,75)2 0,7235 = 0,4070 0,6835

56

Com base nesses totais calculam a probabilidade de um par de gmeos DZ gerados por um casal do grupo sangneo A (A A) ser concordante quanto a esse grupo, dado que um desses gmeos A em 83,4 % porque P(A.A|A) = 0,6835 = 0,834. 0 ,8191

As operaes preconizadas por Maynard-Smith e Penrose (1955) com a finalidade de calcular a proporo desses casais , entretanto, desnecessria, porque chegamos exatamente ao mesmo resultado final quando essas operaes no so feitas. De fato, empregando as freqncias dos casais AA segundo o gentipo calculamos as probabilidades de esses casais gerarem um filho e dois filhos do grupo A como abaixo e, igualmente, P(A.A|A) = chegamos concluso de que P(A.A|A) = 83,4% porque

0,10505 = 0,834. 0 ,1259

Casal AA AA AA AO AOAO Total Um filho A 1 0,0034 = 0,0034 1 0,0391 = 0,0391 0,75 0,1112 = 0,0834 0,1259 Dois filhos A 0,0034 0,0391 2 (0,75) 0,1112 = 0,06255 0,10505

Aplicando o mesmo raciocnio aos grupos sangneos do sistema P e aceitando para as populaes caucasides do Estado de So Paulo as freqncias estimadas para os genes P1 e P2 nas populaes europias (Race e Sanger, 1975), isto p = 0,54 e q = 0,46, podemos estimar que a freqncia populacional dos casais P1 P1, segundo seu gentipo como abaixo: Casal P1P1 P1P1 P1P1 P1P2 P1P2 P1P2 Freqncia p4 = 0,0850

4p3q = 0,2897 4p2q2 = 0,2468

Visto que os casais P1P1 P1P1 e P1P1 P1P2 podem gerar somente filhos do grupo sangneo P1, enquanto que os casais P1P2 P1P2 tm 75% de probabilidade de gerar um filho P1, pode-se, com base nos dados do quadro abaixo, calcular a probabilidade de um 57

par de gmeos DZ gerado por um casal P1 P1 ser concordante quanto ao grupo sangneo P1, dado que um desses gmeos P1 em 91,7% porque P(P1.P1|P1) = Casal P1P1 P1P1 P1P1 P1P2 P1P2 P1P2 TOTAL Um filho P1 1 0,0850 = 0,0850 1 0,2897 = 0,2897 0,75 0,1851 = 0,1851 0,5598 0,5135 = 0,917. 0,5598

Dois filhos P1 0,0850 0,2897 2 (0,75) 0,1851 = 0,1388 0,5135

Uma soluo mais geral para estimar a probabilidade de as gmeas de nosso exemplo serem DZ e concordantes quanto ao grupo sangneo A, dado que uma delas tem esse grupo sangneo, foi apresentada h algum tempo pelo autor e parte do princpio de que a probabilidade de um P(A.A) = p4+ 4p3r+ (3 ) 4p2r2. 4
2

casal A A gerar um filho do grupo A

P(A) = p4+4p3r+ 3 4p2r2 e que a probabilidade de tal casal gerar dois filhos do grupo A 4

Da se conclui que, dado que uma filha de um casal AA do grupo A, a probabilidade de sua gmea DZ ter, tambm, grupo A calculada por intermdio de: p 4 + 4 p 3 r + (3 ) 4 p 2 r 2 p 2 + 4 pr + 2 ,25r 2 4 P(A.AA) = = p 4 + 4 p 3r + 3 4 p 2 r 2 p 2 + 4 pr + 3r 2 4
2

Substituindo p e q pelos valores estimados para a populao caucaside do Estado de So Paulo, isto , por p = 0,242, q = 0,069 e r = 0,689 (Beiguelman, 1983), pode-se, aps resolver a frmula acima, estimar a probabilidade P(A.AA) como, anteriormente, em 83,4 %. Em relao ao sistema P, a frmula de clculo da probabilidade de concordncia dos gmeos dizigticos no grupo P1 ainda mais simples porque levamos em conta apenas os alelos P1 e P2, com freqncias p e q, respectivamente, sendo p = 1- q. Em vista disso, a frmula abaixo, P(P1.P1P1) = p 4 + 4 p 3 q + (3 ) 4 p 2 q 2 4 4 3 p + 4 p q + 3 4 p2q2 4
2

aps simplificao, pode ser expressa da seguinte maneira (Beiguelman, 1971a):

58

P(P1.P1P1) = 1 -

0,75q 2 1 + 2q

Aceitando para as populaes caucasides do Estado de So Paulo, as freqncias estimadas para os genes P1 e P2 nas populaes europias (Race e Sanger, 1975), isto , p = 0,54 e q = 0,46, tem-se, aps substituio nessa ltima frmula, que a gmea DZ da filha P1 de um casal P1P1 como o da Tabela 2 tem probabilidade igual a 91,7 % de ter o mesmo grupo sangneo. Para chegar a esse resultado poderamos, ainda, ter seguido outro raciocnio (Beiguelman, 1971a). De fato, em relao ao grupo sangneo P1, poderamos ter considerado, inicialmente, que a probabilidade de um indivduo da populao qual pertencem os gmeos ter o gentipo P1P2, dado que ele do grupo P1 P( P1 P2 P1 ) =
2pq p + 2pq
2

2q 1+ q

. Se um par de gmeos do grupo P1 tem genitores com esse

fentipo (P1P1), pode-se considerar a probabilidade de ambos os genitores serem heterozigotos P1P2, isto 1+ 2q homozigoto P1P1,

( 2q ) e a de que pelo menos um desses genitores ser 2q isto , 1- (1+ 2q ) . Se ambos os genitores forem heterozigotos P P , a
2 2

1 2

probabilidade de eles gerarem um filho do grupo P1 ser, evidentemente, igual a , mas se pelo menos um deles for homozigoto P1P1, ter-se- a certeza de que seus filhos somente podero ser do grupo P1. Por conseguinte, a probabilidade de um casal P1P1 gerar um filho

( 2q ) (1+22qq ) e a de gerar dois filhos do grupo P 2q 2q P(P .P ) = 1- (1+ 2q ) () (1+ 2q ) . Por isso, dado que o filho de um casal P P do grupo
2 2

do grupo P1 P(P1) = 1- 1+ 2q
2

P1, a probabilidade de seu gmeo DZ tambm o ser, pode ser obtida por meio de 2q 3 2q 1 + 2 1 + 2 q 4 1 + 2 q = 1 0 ,75q . P(P1.P1P1) = 2 2 1 + 2q 2q 3 2q + 1 1 + 2 q 4 1 + 2q No concernente aos genes do sistema ABO, em que o casal AA e os gmeos tambm so do grupo A, a frmula de clculo da probabilidade de concordncia dos pares 59
2 2 2

DZ quanto a esse grupo no pode ser to simplificada porque, como j vimos, levamos em conta dois dos trs alelos (A, B e O), isto , os genes A e O, com freqncias p e r. Nesse caso, a probabilidade de concordncia dos DZ no grupo A seria obtida por intermdio de: 2r 3 2 r 1 + p + 2r 4 p + 2 r = P(A.AA) = 2 2 2r 3 2 r 1 + p + 2r 4 p + 2 r
2 2 2 2 p 2

+ 4 pr + 2 ,25 r 2 + 4 pr + 3r 2

Qualquer que seja o modo de se obter essas probabilidades, tem-se que a probabilidade conjunta de as gmeas de nosso exemplo serem DZ e concordantes quanto ao sexo e aos gentipos e fentipos estudados seria, nesse caso, estimada em 0,00082 porque: 0,550,50,8340,250,9170,250,50,50,50,5 = 0,00082 Isso permite estimar as probabilidades de dizigosidade e de monozigosidade dessas gmeas em 0,18 % e 99,82 %, respectivamente, porque: P(DZ) = P(MZ) = 0,00082 = 0,0018 0,45 + 0,00082 0,45 = 0,9982 0,45 + 0,00082

Se em nosso exemplo um dos cnjuges e as gmeas manifestassem o fentipo dominante e o outro cnjuge o fentipo recessivo, isto , se, por acaso, o marido e as gmeas fossem do grupo A e a esposa do grupo O, o clculo da probabilidade de concordncia das gmeas quanto ao fentipo teria que ser diferente. De fato, nesse caso teramos que levar em conta os casais compostos por marido AA (p2) e esposa OO (r2), cuja freqncia na populao p2r2, e os casais compostos por marido AO (2pr) e esposa OO (r2), cuja freqncia na populao 2pr3. Sabendo que os casais marido AA esposa OO podem gerar somente filhos do grupo sangneo A e que os casais marido AO esposa OO tm probabilidade igual a ou 50% de gerar um filho do grupo A e ()2 ou 25% de gerar dois filhos com esse grupo sangneo, poderemos escrever que a probabilidade de um casal composto por marido do grupo A e mulher do grupo O gerar um filho do grupo A P(A) = p2r2 + 0,5 2pr3 = p2r2+ pr3. A probabilidade de um casal desse tipo gerar dois filhos do grupo A , pois, P(A.A) = p2r2+ 0,25 2pr3 = p2r2+ 0,5pr3. Disso resulta que a probabilidade de um par de gmeas DZ geradas por um casal composto por 60

marido A e esposa O ser concordante no grupo A dado que uma delas tem esse grupo pode ser obtida por intermdio de: P(A.A.|A) = p + 0,5r p 2 r 2 + 0 ,5 pr 3 = 2 2 3 p+r p r + pr

Substituindo p e r pelas estimativas de suas freqncias na populao, isto , respectivamente, por 0,242 e 0,689, verificaremos que essa probabilidade de 63%. Quando se leva em conta dois alelos apenas, essa frmula geral fica ainda mais simplificada. De fato, consideremos um casal composto por marido do grupo sangneo P1 e esposa do grupo P2 cujas filhas gmeas so do grupo P1. Em relao a esse tipo de casal sabemos que o marido pode ter gentipo homozigoto P1P1 ou heterozigoto P1P2 e que os casais marido P1P1 esposa P2P2, que ocorrem na populao com freqncia p2q2, podem gerar somente filhos do grupo sangneo P1, enquanto que os casais marido P1P2 esposa P2P2, que ocorrem na populao com freqncia 2pq3, podem gerar um filho do grupo P1 com probabilidade igual a ou 50% e dois fillhos com esse grupo com probabilidade igual a ()2 ou 25%. Isso permite escrever que a probabilidade de um casal composto por marido P1 e esposa P2 gerar um filho do grupo P1 P(P1)= p2q2 + pq3 e que a probabilidade de tal casal gerar dois filhos do grupo P1 P(P1.P1) = p2q2 + pq3. Disso resulta que a probabilidade de um par de gmeas DZ geradas por um casal composto por marido P1 e esposa P2 ser concordante quanto ao grupo P1 dado que uma delas manifesta esse grupo pode ser calculada a partir de P(P1.P1|P1) = p 2 q 2 + 0,5 pq 3 . Essa frmula, depois de p 2 q 2 + pq 3

simplificada, e lembrando que p + q = 1, passa a ser escrita como P(P1.P1|P1) = p + 0,5q. Substituindo p e q por suas estimativas encontradas em Race e Sanger (1975) tem-se P(P1.P1|P1) = 0,54 + 0,23 = 0,77. d) No se conhece o gentipo ou o fentipo dos genitores dos gmeos Quando conhecemos apenas a constituio fenotpica ou genotpica dos gmeos, por no ser possvel o exame de seus genitores, a determinao da probabilidade de dizigosidade e de monozigosidade um pouco mais elaborada e devemos analisar separadamente os sistemas diallicos e poliallicos. Para entender o clculo da probabilidade de concordncia de pares DZ em relao a 61

um carter diallico, consideremos um par de alelos autossmicos A,a, com freqncias iguais, respectivamente, a p e q = 1 - q. Aceitemos, ainda, que os gentipos AA, Aa e aa so encontrados na populao com freqncias iguais, respectivamente, a p2, 2pq e q2, isto , que a populao est em equilbrio de Hardy e Weinberg quanto a esses gentipos. Se no houver relao de dominncia entre esses alelos, existiro trs alternativas para os gmeos de um par DZ serem concordantes, pois ambos podero ser AA, ambos Aa ou ambos aa. Dentre os casais que podem originar filhos AA (AAAA, AAAa e AaAa), um deles, AAAA, que ocorre com freqncia p4, capaz de gerar somente filhos com o gentipo AA. Os casais AAAa, que ocorrem com freqncia 4p3q, tm probabilidade de gerar um filho com o gentipo AA, ao passo que os casais AaAa, que ocorrem com freqncia 4p2q2, tm probabilidade de gerar um filho com gentipo AA. Isso permite escrever que a probabilidade de ocorrncia na populao de um par de irmos DZ que sejam ambos AA ser obtida por intermdio de: P(AA.AA) = p4 + ()2 4p3q + ()2 4p2q2 Tal frmula, depois de simplificada, levando em conta que q = 1 - p, pode ser escrita como: P(AA.AA) = p 2 (1 + p ) 4
2

Em vista do exposto, tem-se que a probabilidade de um par de gmeos DZ ser concordante em relao ao gentipo AA, dado que um dos elementos do par tem esse gentipo, estimada por intermdio de

(1 + p )2 , porque:
4
2

2 (1 + p ) p 2 (1 + p ) P(AA.AAAA) = = 2 4 4p

Para calcular a probabilidade de um par de irmos DZ ser concordante em relao ao gentipo Aa, deve-se ter em mente que indivduos com esse gentipo podem ser gerados por casais AAAa, AAaa, AaAa e Aaaa, os quais ocorrem na populao com freqncias iguais, respectivamente, a 4p3q, 2p2q2, 4p2q2 e 4pq3. Com exceo dos casais AAaa, que somente podem gerar filhos Aa, todos os outros tm probabilidade de gerar

62

um filho Aa. Por isso, a probabilidade de ocorrer na populao um par de irmos DZ concordantes quanto ao gentipo Aa ser obtida por intermdio de: P(Aa.Aa) = ()2 4p3q + 2p2q2 + ()2 4p2q2 + ()2 4pq3 = pq(1+ pq). Em conseqncia, podemos escrever que a probabilidade de um par de gmeos DZ ser concordante quanto ao gentipo Aa, dado que um dos gmeos tem esse gentipo, obtida por intermdio de 1 + pq , porque: 2 P(Aa.AaAa) = pq(1 + pq ) 1 + pq = . 2 pq 2

O clculo da probabilidade de um par de irmos DZ ser concordante em relao ao gentipo aa segue o mesmo raciocnio utilizado para o gentipo AA, isto , leva-se em conta que so trs os tipos de casais capazes de ger-los, AaAa, Aaaa e aaaa, os quais ocorrem na populao com freqncias iguais, respectivamente, a 4p2q2, 4pq3 e q4. Evidentemente, os casais AaAa, que ocorrem na populao com freqncia 4p2q2, tm probabilidade de gerar um filho aa, os casais Aaaa, cuja freqncia na populao 4pq3, tm probabilidade de gerar um filho com esse gentipo, enquanto os casais aaaa, que ocorrem com freqncia q4, somente podem gerar filhos aa. Isso permite calcular a probabilidade de ocorrncia na populao de um par de irmos DZ por intermdio de q 2 (1 + q ) , porque: 4
2

P(aa.aa) = ()2 4p2q2 + ()2 4pq3 + q4 =

q 2 (1 + q ) . 4
2

Em vista disso, pode-se escrever que a probabilidade de um par de gmeos DZ ser concordante quanto ao gentipo aa dado que um dos gmeos exibe esse gentipo pode ser estimada por intermdio de

(1 + q )2 , porque:
4 P(aa.aaaa) =
2 (1 + q ) . q 2 (1 + q ) = 2 4 4q 2

Nas situaes em que h dominncia, o que no acontece quando se estudam locos de STR, a probabilidade de concordncia dos DZ quanto ao fentipo recessivo aa no se altera. No concernente ao fentipo dominante A_ deve-se levar em conta que os casais 63

AAAA, AAAa e AAaa somente geram filhos com fentipo A_, e que os casais AaAa Aaaa geram indivduos A_ com probabilidades iguais a e , respectivamente. Da se conclui que a probabilidade de encontro na populao de um par de irmos DZ que seja A_ pq 2 (3 + q ) obtida a partir de p(1 + q ) , porque: 4 pq 2 (3 + q ) P(A_.A_) = p +4p q + 2p q + () 4p q + () 4pq = p(1 + q ) . 4
4 3 2 2 2 2 2 2 3

Pode-se, por isso, escrever que a probabilidade de um par de gmeos DZ ser concordante quanto ao fentipo A_ dado que um dos gmeos exibe esse fentipo, encontrado na populao com probabilidade P(A_) = p2 +2pq = p(1+q), pode ser estimada por intermdio de: P(A_.A_ A_) = 1 q 2 (3 + q ) . 4(1 + q )

Para os caracteres poliallicos o raciocnio empregado o mesmo e, em relao aos homozigotos, as frmulas de clculo so exatamente as dos sistemas que levam em conta apenas um par de alelos, porque sempre podemos representar o alelo homozigoto por A, e todos os outros do sistema poliallico por no-A ou . Entretanto, em relao aos heterozigotos, o clculo para a obteno das probabilidades de concordncia trabalhoso, pois necessrio levar em considerao a freqncia de todos os tipos de casais que podem gerar filhos com um determinado fentipo ou gentipo e a contribuio de cada um deles para a gerao seguinte. Assim, por exemplo, quando no conhecemos o gentipo ou o fentipo dos pais de gmeos que so concordantes quanto ao grupo sangneo A do sistema ABO, devemos levar em conta que qualquer um dos casais AAAA, AAAO, AAOO, AABO, AAAB, AOAO, AOBO, AOOO, ABAO, ABBO, ABAB e ABOO poderia ger-los. Em vista disso, podemos escrever que a probabilidade de ocorrncia na populao de um par de irmos DZ concordantes quanto ao grupo sangneo A obtida por intermdio de: P(A.A) = p4 + 4p3r + 2p2r2 + ()24p2qr + ()24p3q + ()24p2r2 + ()22pqr2 + ()24pr3 + +()28p2qr + ()28pq2r + ()24p2q2 + ()24pqr2 . Com base nessa frmula e no conhecimento de que as freqncias dos genes A, B e O do sistema ABO podem ser estimadas como p = 0,242, q = 0,069 e r = 0,689 na 64

populao caucaside do Estado de So Paulo (Beiguelman, 1983), poderamos, pois, aceitar que, nesse Estado, a probabilidade de encontro de um par de irmos caucasides concordantes quanto ao grupo sangneo A P(A.A) = 0,2585 ou 25,85%. Ora, sabendo que no Estado de So Paulo, a probabilidade de encontrar um caucaside com grupo sangneo A estimada em P(A) = p2 + 2pr = 0,3920 ou 39,2%, conclumos que a probabilidade de um par de gmeos DZ caucasides desse Estado ser concordante quanto ao grupo sangneo A dado que um deles tem esse grupo 65,94% porque P(A.AA) = 0,2585/0,3920 = 0,6594. Para populaes europias, como o caso da populao inglesa, existem tabelas (Maynard-Smith e Penrose, 1955; Race e Sanger, 1975) que informam qual a probabilidade de concordncia de gmeos DZ em relao aos sistemas sangneos eritrocitrios ABO, MNSs, P, Rh, Lutheran, Kell, Duffy, Lewis, Kidd, Yt, Dombrock, Colton e Xg, o que, evidentemente, facilita muito o trabalho de diagnstico da zigosidade quando no se conhece o gentipo ou o fentipo dos pais dos gmeos. Com o emprego desses marcadores genticos pode-se, mesmo desconhecendo a constituio genotpica ou fenotpica dos pais obter altos valores de probabilidade de monozigose. Quando se deseja fazer o clculo da probabilidade de concordncia de um par DZ heterozigoto em relao a um loco STR, a situao se torna mais complicada do que no caso dos sistemas sangneos eritrocitrios ou outros polimorfismos genticos clssicos, porque cada um desses locos contm muitos alelos. Em compensao, esse clculo torna-se desnecessrio se a investigao da zigosidade de um par de gmeos, sem informaes a respeito de seus genitores, for feita por intermdio do exame de mais de seis locos STR, porque, nesse caso, se o par de gmeos for concordante em todos os locos, poder-se- atribuir monozigosidade. Mesmo a discordncia em relao a um alelo no servir para rejeitar a hiptese de monozigosidade, porque sempre possvel a ocorrncia de uma mutao, mas duas discordncias falaro a favor da rejeio dessa hiptese, porque aceitamos ser muito pouco provvel que duas discordncias sejam conseqncia de duas mutaes nesses locos.

65

IMPRESSES DGITO-PALMARES E DIAGNSTICO DA ZIGOSIDADE As impresses dgito-palmares permitem, entre outras observaes, a contagem do nmero total de linhas dermatoglficas nos dez dedos (TRC, do ingls, total ridge count), do nmero de linhas a-b, do nmero de linhas A-d e a medida do ngulo atd. Para a contagem do TRC empregam-se os critrios estabelecidos por Bonnevie (1924), segundo os quais, os arcos so considerados como tendo zero linhas. Nas presilhas simples conta-se o nmero de linhas que interceptam o segmento de reta traado do centro da presilha ao centro do trirrdio, enquanto que nos verticilos e nas presilhas duplas, que possuem dois trirrdios, somente se leva em conta o lado que apresentar maior nmero de linhas. O nmero de linhas a-b o nmero de linhas dermatoglficas palmares, contadas nas duas mos, que atravessam o segmento de reta traado para unir o centro do trirrdio palmar a, sob o dedo indicador, com o trirrdio palmar b, sob o dedo mdio. O nmero de linhas A-d refere-se ao nmero de linhas dermatoglficas palmares, contadas nas duas mos, entre o trirrdio palmar d, sob o dedo mnimo, e a linha palmar A. O ngulo atd, por sua vez, o ngulo formado pelos segmentos de reta que unem os trirrdios da base do dedo indicador (a) e do dedo mnimo (d) ao trirrdio palmar axial (t). Para mais detalhes, o leitor interessado poder consultar o captulo sobre O exame dos dermatglifos de Beiguelman (1982). De acordo com Lamy et al. (1957), nenhum dentre 272 pares de gmeos MZ apresentou diferena intrapar igual ou superior a 50 linhas quanto TRC, enquanto 26,5% dentre 185 pares DZ do mesmo sexo ultrapassou essa cifra (Tabela 3.2).

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Tabela 3.2 Distribuio, em porcentagem, de 272 pares MZ e 185 DZ segundo a diferena intrapar do nmero de linhas dermatoglficas na falange distal dos dedos (Lamy et al., 1957).

Diferena 0-10 10-20 20-30 30-40 40-50 50-60 60-70 70-80 80-90 90-100 100

MZ 54,0 32,0 10,3 2,6 1,1

DZ 21,1 20,0 9,2 14,6 8,6 4,3 6,5 5,4 2,2 4,9 3,2

No concernente ao nmero de linhas a-b e de linhas A-d (Tabelas 4.2 e 5.2), tem-se que, numa investigao feita em 38 pares MZ, no se constatou, em nenhum desses pares, diferena maior que 12 linhas a-b ou maior do que 17 linhas A-d. Nos 90 pares DZ analisados no mesmo estudo, 25,6 % mostraram diferena intrapar superior a 12 linhas a-b e 46,7% ultrapassaram 17 linhas A-d de diferena (Beiguelman, 1971b).
Tabela 4.2 Distribuio, em porcentagem, de 38 pares MZ e 90 DZ segundo a diferena intrapar do nmero de linhas a-b (Beiguelman, 1971b)
Diferena 0-3 3-6 6-9 9-12 12-15 15-18 18-21 21 MZ 31,6 31,6 31,6 5,2 DZ 22,2 17,8 14,4 20,0 6,7 4,4 5,6 8,9

Tabela 5.2 Distribuio, em porcentagem, de 38 pares MZ e 90 pares DZ segundo a diferena intrapar do nmero de linhas A-d (Beiguelman, 1971b).
Diferena 0-5 5-9 9-13 13-17 17-21 21-25 25-29 29 MZ 50,0 28,9 15,8 5,3 DZ 20,0 8,9 15,5 8,9 13,3 8,9 6,7 17,8

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Em relao soma dos ngulos atd observados nas duas mos, sabemos, por intermdio de Maynard-Smith e Penrose (1955), que, em 80 pares MZ, no foi possvel encontrar, nesses pares, uma diferena intrapar superior a 45 graus (Tabela 6.2). Em conseqncia do exposto, pode-se, pois, dizer que, se um par de gmeos do mesmo sexo apresentar diferena intrapar de TRC igual ou superior a 50 linhas e(ou) 12 ou mais linhas a-b e(ou) 17 ou mais linhas A-d e(ou) mais de 45 graus de ngulo atd, tal par poder ser classificado como DZ. Para diferenas intrapar inferiores a esses limites, as porcentagens com que ocorrem as diferenas assinaladas nas Tabelas 3.2 a 6.2 podem ser consideradas como estimativas da probabilidade de essas diferenas serem detectadas em gmeos MZ e DZ.
Tabela 6.2 Distribuio, em porcentagem, de 80 pares MZ e de 310 pares de irmos, segundo a diferena intrapar dos ngulos atd (Maynard-Smith & Penrose, 1955).
Diferena 05 5 - 10 10 15 15 - 20 20 - 25 25 - 30 30 - 35 35 - 40 40 - 45 45 - 50 50 MZ 42,50 31,25 8,75 11,25 1,25 1,25 2,50 1,25 Irmos 23,23 25,16 15,48 11,61 9,68 4,84 2,26 1,61 0,97 1,29 3,87

Para exemplificar, suponhamos que um par de gmeos do mesmo sexo tenha mostrado diferena intrapar de 8 linhas quanto TRC, 2 linhas a-b, 3 linhas A-d e 4 graus quanto ao ngulo atd. Se os gmeos pertencerem a uma populao onde a proporo de MZ 45 % e a de DZ 55 %, poderemos, com base nas Tabelas 3.2 a 6.2, calcular a probabilidade conjunta a favor dos DZ como sendo 0,000598, porque: 0,55 0,50 0,211 0,222 0,20 0,2323 = 0,000598 e a favor dos MZ como sendo 0,016317, porque: 0,45 1 0,54 0,316 0,50 0,425 = 0,016317 Tais informaes permitem estimar a probabilidade de dizigosidade dos gmeos de nosso exemplo em 3,5% e a de monozigosidade em 96,5 % porque:

P( DZ ) =

0,000598 = 0,035 0,016317 + 0,000598

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P(MZ) = 1 - 0,035 = 0,965 Os dados a respeito das diferenas dermatoglficas podem ser combinados com os de concordncia de marcadores genticos, o que aumenta a preciso do diagnstico da zigosidade. Assim, no exemplo dado no item c, a respeito das gmeas que mostravam uma probabilidade conjunta de 0,00082 de serem DZ concordantes quanto ao sexo e aos gentipos e fentipos A, MS/Ms, CDe/cDE, P1, Kk, FyaFyb, JkaJkb e XgXg, consideremos que se soubesse que elas diferiam em 11 linhas quanto TRC, em 6 linhas a-b, em 7 linhas A-d e em 5 graus do ngulo atd. De acordo com as Tabelas 3.2 a 6.2, essas diferenas dermatoglficas podem ser encontradas em pares DZ com uma probabilidade conjunta de 0,2000,1780,0890,2516 = 0,000797 e em pares MZ com uma probabilidade conjunta de 0,3200,3160,2890,3125 = 0,009132. Em decorrncia disso, a nova probabilidade conjunta de concordncia dos DZ em relao aos caracteres estudados passaria a 0,000820,000797 = 0,000000654 e a nova probabilidade conjunta dos MZ em relao a esses mesmos caracteres passaria a ser estimada em 0,450,009132 = 0,0041094. Esses dados permite concluir que a probabilidade de as gmeas serem MZ ficaria ainda mais alta, pois, aumentaria de 99,82% para, praticamente, 100%, pois: P(DZ) = 0,000000654 = 0,00016 0,0041094 + 0,000000654 P(MZ) = 1 0,00016 = 0,99984

O MTODO DIFERENCIAL DE WEINBERG Mesmo quando no se faz a investigao da zigosidade, possvel obter uma estimativa do nmero de pares MZ e DZ em uma amostra de gmeos, bastando para isso, aplicar o clssico mtodo diferencial de Weinberg (1901), que se baseia em duas premissas. A primeira delas a de que, na prtica, a probabilidade de nascimento de um menino idntica de nascimento de uma menina, isto , 0,5 ou 50% em cada caso. A segunda premissa a de que, em cada par DZ, o sexo de um dos gmeos independente do de outro. Em conseqncia disso, passa-se a estimar as probabilidades de constituio de um par DZ

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do sexo masculino, de um par DZ do sexo feminino e de um par DZ discordante quanto ao sexo, respectivamente, por: P(DZMM) = 0,5 0,5 = 0,25 ou 25 % P(DZFF) = 0,5 0,5 = 0,25 ou 25 % P(DZMF) = 2 0,5 0,5 = 0,50 ou 50 % Da se conclui, tambm, que a probabilidade de os gmeos de um par DZ serem do mesmo sexo estimada em 50%, pois P(DZMM) + P(DZFF) = 0,25 + 0,25 = 0,5, o que eqivale a dizer que a probabilidade de os gmeos de um par DZ terem o mesmo sexo a mesma de eles serem discordantes quanto ao sexo. Em vista do exposto, para estimar a proporo de pares DZ e MZ em uma amostra de gmeos bastar conhecer o nmero de pares de gmeos discordantes quanto ao sexo (MF). De fato, de acordo com o mtodo diferencial de Weinberg, o nmero total de pares DZ ser estimado como sendo o dobro do nmero de pares discordantes quanto ao sexo, enquanto o nmero de pares MZ ser obtido pela diferena entre o total de gmeos e a estimativa do nmero de pares DZ. Para tornar mais clara a aplicao desse mtodo, tomemos um exemplo tirado de um trabalho de Beiguelman, Franchi-Pinto, Dal Colletto e Krieger (1995) a respeito de 763 pares de gmeos nascidos na Maternidade de Campinas num perodo de 10 anos, dentre os quais 205 eram discordantes quanto ao sexo (277 MM, 281 FF e 205 MF). Nesse caso, estimaramos que, no perodo estudado, 410 dentre os 763 pares de gmeos, isto , 53,7% dos pares deveriam ser DZ e que 763 410 = 353 ou 46,3% deveriam ser MZ. Uma apresentao mais geral do mtodo diferencial de Weinberg considera que a freqncia de recm-nascidos do sexo masculino e a de recm-nascidos do sexo feminino podem ser aceitas como estimativas das probabilidades p e q de nascimento dessas crianas. Desse modo, P(DZMM) = p2, P(DZMF) = 2pq e P(DZFF) = q2. Por ser p + q = 1, evidente que p2+2pq+q2 tambm igual a 1 ou 100 %, pois essa expresso igual a (p + q)2. Visto que 2pq a freqncia esperada dos pares DZ discordantes quanto ao sexo, pode-se escrever DZMF DZMF = 2pq, de onde se tira que DZ = . DZ 2pq

Nas populaes em que p e q so semelhantes, pode-se considerar p = q = 0,5 , enquanto o nmero total de pares DZ passa a ser estimado como sendo o dobro do nmero 70

de pares discordantes quanto ao sexo, pois o total de DZ ser o nmero de pares discordantes quanto ao sexo dividido por 0,5. James (1979, 1984b) contestou a validade do mtodo diferencial de Weinberg para estimar a proporo de pares DZ e MZ em amostras de recm-nascidos, porque sabido que o sexo dos zigotos humanos depende da poca em que ocorreu a inseminao durante o ciclo menstrual (Guerrero, 1970, 1974; James, 1971, 1976). O sexo de um dos zigotos de um par DZ no seria, pois, independente, do de outro. Ainda de acordo com James (1979, 1984), entre os pares DZ, os do mesmo sexo excederiam aqueles discordantes quanto ao sexo na proporo de 8:7. Por isso, segundo esse autor, o nmero de pares DZ em uma amostra de gmeos no deveria ser estimado como no mtodo diferencial de Weinberg, isto , por intermdio de 2DZMF, mas por intermdio de claro que DZ = 15 DZMF.. 7 15 DZ DZMF 8 DZMF . De fato, se = 7 DZMF 7

Aplicando a frmula de James aos dados de Campinas mencionados acima, teramos que a estimativa do nmero de pares DZ seria um pouco mais alta, porque obteramos DZ = 439 ou 57,5 %.

A ORGANIZAO DE UM CADASTRO DE GMEOS

Os pesquisadores interessados em empregar gmeos para estudos que visam avaliao do efeito relativo do ambiente e do gentipo na manifestao de caracteres fsicos e mentais tm necessidade de organizar um cadastro desses pares. Evidentemente, a organizao desses cadastros ser muito onerosa se a investigao da zigosidade tiver que ser feita pelo estudo do DNA dos gmeos ou pela anlise da concordncia dos pares em relao a muitos polimorfismos. Entretanto, se os gmeos estiverem, pelo menos, em idade escolar, pode-se empregar um mtodo muito econmico que permite o diagnstico da zigosidade com grande preciso e que facilita a obteno de grandes amostras de gmeos (Beiguelman, 1971a). De acordo com esse mtodo deve-se, inicialmente, tentar rejeitar a hiptese de monozigosidade dos gmeos do mesmo sexo com base em alguns critrios objetivos, j que os discordantes quanto ao sexo so imediatamente catalogados como pares DZ. Os critrios 71

objetivos dizem respeito s impresses dgito-palmares e aos grupos sangneos eritrocitrios de apenas trs sistemas, cujos anti-soros so fceis de obter (sistemas ABO, MNSs e Rh). As impresses dgito-palmares serviro para contar o nmero total de linhas dermatoglficas nos dez dedos, o nmero de linhas a-b, o nmero de linhas A-d e o ngulo atd. Como j foi visto no tpico sobre o emprego das impresses dgito-palmares para o diagnstico da zigosidade, pode-se classificar como DZ, de imediato e sem necessidade de outros exames, um par de gmeos do mesmo sexo que apresentar diferena intrapar de TRC igual ou superior a 50 linhas e(ou) 12 ou mais linhas a-b e(ou) 17 ou mais linhas A-d e(ou) mais de 45 graus de ngulo atd. Desse modo, o exame dos grupos sangneos somente ser feito nos pares de gmeos do mesmo sexo, em relao aos quais a hiptese de monozigosidade no pde ser rejeitada com base no exame dermatoglfico. A sistemtica, nesse caso, a mesma, isto , tenta-se afastar a hiptese de monozigosidade inicialmente pelo exame dos grupos sangneos do sistema ABO, pois os anti-soros necessrios determinao desses grupos so mais baratos. A determinao dos grupos sangneos do sistema MNSs somente feita nos pares concordantes no sistema ABO, do mesmo modo que a investigao dos grupos sangneos do sistema Rh feita apenas nos gmeos em relao aos quais a hiptese de monozigosidade no pde ser rejeitada aps o exame dermatoglfico e dos grupos sangneos do sistema ABO e MNSs. Os pares triados desse modo constituem uma amostra altamente selecionada de gmeos, em relao aos quais grande a probabilidade de se diagnosticar corretamente a zigosidade. Realmente, de acordo com Jablon et al. (1967), que fizeram um estudo detalhado de 257 pares de gmeos adultos do sexo masculino, nos quais investigaram nove sistemas polimrficos (ABO, MNSs, P, Rh, Kell, Duffy, Secretor, Hp e Gm) e caracteres quantitativos, o erro de diagnstico da zigosidade ser de apenas 3,2 % se ele for emitido com base somente na anlise da diferena intrapar de TRC, em conjunto com dados a respeito da concordncia dos gmeos quanto cor dos olhos e dos cabelos, diferenas de estatura e peso corporal, bem como na opinio que os prprios gmeos tm a respeito de sua zigosidade. Alis, segundo Jablon et al. (1967), o diagnstico da zigosidade baseado apenas na opinio dos prprios gmeos est sujeito a um erro to somente de 4,3 %.

72

Em vista do exposto, se a amostra de gmeos a respeito da qual a hiptese de monozigosidade no pde ser afastada com base em critrios objetivos for, agora, avaliada com base em critrios subjetivos, a probabilidade de erro de diagnstico poder diminuir muito. Tais gmeos devero, pois, ser examinados quanto ao seu aspecto fsico, para que o pesquisador possa emitir sua opinio a respeito da zigosidade dos gmeos, levando em conta a cor dos olhos e dos cabelos, o tipo de cabelo, a forma do nariz, da boca, dentes, estatura, peso etc. Por outro lado, o pesquisador dever saber o que pensam os prprios gmeos a respeito de sua similaridade, perguntando-lhes se eles se acham mais parecidos do que outros pares de irmos e se seus parentes, colegas, professores e vizinhos tm ou tiveram dificuldade em disting-los. Tal tipo de informao deve ser complementada, quando possvel, com a dos familiares, sendo de muita valia a opinio da me dos gmeos.

73

REFERNCIAS

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75

CAPTULO 3. O ESTUDO DE CARACTERES QUANTITATIVOS EM GMEOS

A utilizao de gmeos em estudos para avaliar a importncia do gentipo na determinao de caracteres quantitativos baseia-se, fundamentalmente, no fato de que a similaridade genotpica dos pares DZ , em mdia, aquela apresentada por pares de irmos gerados sucessivamente, pois, do mesmo modo que eles, so oriundos da unio de pares de gametas distintos, produzidos pelos mesmos genitores. Essa a razo pela qual os pares DZ tm, em mdia, metade de seus genes idnticos, por terem origem comum. No caso dos gmeos MZ, cada par oriundo de um nico zigoto, de sorte que os elementos de um par MZ so geneticamente idnticos, isto , possuem o mesmo gentipo. Alis, na espcie humana, os pares MZ constituem a nica srie isognica. Nos estudos gemelares para avaliar a importncia do gentipo na determinao do fentipo as seguintes premissas so aceitas, desde que no haja distores de averiguao: 1. Os gmeos so uma amostra da populao geral, o que equivale a dizer que entre os gmeos todos os caracteres se distribuem da mesma maneira que na populao geral. 2. Os gmeos so uma amostra de todos os gmeos. 3. Os elementos de cada par de gmeos esto sujeitos s mesmas influncias do ambiente. 4. O meio ambiente dos gmeos , em mdia, igual ao dos elementos da populao geral. 5. As variveis que atuam sobre os gmeos MZ, provocando diferenas fenotpicas intrapar, so as mesmas que agem sobre os pares DZ. Ao aceitar essas premissas, aceita-se, tambm, que, nos pares MZ, as diferenas intrapar de caracteres quantitativos so determinadas unicamente pelos fatores do ambiente, ao passo que as diferenas intrapar observadas nos pares DZ so causadas pelos fatores responsveis pelas diferenas nos pares MZ acrescidas da diversidade genotpica que existe em pares de irmos, os quais diferem, em mdia, em metade de seus genes. A premissa de que os elementos de cada par de gmeos esto sujeitos ao mesmo ambiente baseia-se no fato de que, na fase pr-natal, os gmeos recebem as mesmas 76

influncias da idade materna, da paridade, das condies de sade da gestante e do efeito da ingesto de medicamentos e outras substncias. Como se v, esse postulado no leva em conta que, na fase intra-uterina, possvel que um dos elementos de um par MZ receba suprimento de sangue maior do que o outro ou que, em pares MZ, possa haver repartio desigual do material embrionrio que lhes deu origem. Alm disso, possvel que os elementos de um par de gmeos, MZ ou DZ, tenham espaos desiguais para o seu desenvolvimento. Ainda que tais influncias possam ser minimizadas, est fora de dvida que a diversificao do ambiente dos gmeos se acentua com a idade, sendo maior na idade adulta. A premissa de que o ambiente dos gmeos , em mdia, igual ao dos elementos da populao geral tambm passvel de crticas, porque os gmeos esto sujeitos a condies mais adversas do que os conceptos nicos, no s durante a gestao mas, tambm, no momento do parto e no perodo neonatal. Isso alis, contribui para o fato de os gmeos apresentarem maior taxa de mortalidade perinatal do que os recm-nascidos de parto nico (Beiguelman e Franchi-Pinto, 2000). Tambm passvel de crticas a premissa de que as variveis do ambiente que atuam sobre os pares MZ so as mesmas que agem sobre os pares DZ, porque, em conseqncia de sua maior similaridade, os pares MZ tendem a ser tratados de modo mais semelhante do que os DZ, pelo menos na infncia. Por outro lado, visto que o nascimento de gmeos DZ est correlacionado idade materna e que o aumento da idade das mes est associado a condies de gestao que so, em mdia, piores do que as de mes jovens, e a maior risco de anomalias congnitas decorrentes ou no de aberraes cromossmicas, pode-se supor que o ambiente intra-uterino mais adverso para uma parcela dos gmeos DZ do que para os MZ. Essas ltimas crticas tm sido refutadas com base em dados que permitem aceitar serem os fatores de distoro apontados contrabalanados por outros, que tendem a acentuar as diferenas entre os elementos de uma parte dos pares MZ e a diminuir as existentes entre os elementos dos pares DZ, mormente se apresentarem quimerismo.

77

O COEFICIENTE DE CORRELAO INTRACLASSE Para avaliar a participao do gentipo na variao quantitativa, por intermdio do estudo de gmeos, importante o clculo do coeficiente de correlao intraclasse (ri) das medidas feitas nos pares MZ e DZ. Essa a razo pela qual teceremos algumas consideraes suscintas a respeito do seu clculo. O leitor interessado nas dedues das frmulas aqui apresentadas poder consultar outra obra do autor (Beiguelman, 1994). No modelo terico para o clculo do coeficiente de correlao intraclasse, a respeito de uma varivel x com distribuio normal, presume-se que lidamos com uma populao de pares, em relao aos quais no se reconhece uma ordem entre nem dentro desses pares. Os gmeos se adaptam bem a esse modelo quando lidamos com amostras do mesmo grupo etrio e do mesmo sexo, extradas de uma nica populao. Desse modo, alm de no exisitirem critrios para classific-los segundo a idade ou procedncia, tambm no ser possvel designar qual o gmeo nmero 1 e qual o nmero 2 de cada par, como se faz, normalmente, em pares como pai-filho, marido-esposa, irmo mais velho-irmo mais novo. Evidentemente, se um carter depender da idade e os gmeos no pertencerem a um mesmo grupo etrio, poderemos, por anlise de regresso, fazer o ajustamento dos dados para idade, anulando, assim, seu efeito. Se, alm da idade, o carter depender do sexo, tambm se poder fazer o ajustamento para essa varivel, a fim de anular seu efeito. Tendo em vista o exposto, quando estudarmos um carter quantitativo em gmeos e distinguirmos, em cada par, uma medida x e outra x, isso ser feito meramente para diferenciar as medidas de cada par, mas no para indicar uma ordem dentro dos pares. por isso, tambm, que no se deve falar em desvio padro de x, isto , sx, e desvio padro de x, ou seja, sx, porque, por hiptese, sx no pode diferir de sx. Em conseqncia, no caso do coeficiente de correlao intraclasse, sua frmula geral no pode ser escrita como ri = cov xx' covxx' e sim como ri = . 2 s x . s x' sx
2 2 Designando a varincia entre os pares por s E e a varincia dentro dos pares por s D , e 2 2 sE + s D , fica claro que o coeficiente de 2 2 s 2 sD correlao intraclasse pode ser calculado por intermdio de ri = E . 2 2 sE + s D 2 2 sE sD 2

lembrando que covxx =

enquanto sx2 =

78

Para obtermos as frmulas de clculo das varincias entre e dentro dos pares, consideremos que retiramos de uma populao a amostras de n = 2 indivduos no ordenados. Cada par fornecer uma mdia x = de vrias maneiras, pois X = x + x' . A mdia geral ( X ) pode ser obtida 2

(x + x' ) x + x' x = = . Nessas frmulas, e nas 2a 2a a

a i =1

seguintes, o smbolo de somatrio () significa, na realidade, ou seja, a soma de todas as amostras, desde a primeira at a ltima a amostra, cada amostra a sendo constituda por n = 2 indivduos, isto , um par de gmeos. Visto que n = 2 gmeos de um par, as frmulas gerais das somas de quadrados entre (SQE) e dentro (SQD) podero ser escritas como abaixo: SQE = n ( x X ) = 2 ( x X ) 2 SQD = [( x x )2 + ( x' x )2 ] as quais, depois de desenvolvidas, fornecem as seguintes frmulas de clculo: ( x + x' ) ( x + x' ) SQE = 2 2a
2 2 2

( x x' ) SQD = 2

A soma de quadrados total pode ser obtida a partir da adio SQE + SQD ou a partir de SQT = ( x X )2 + ( x' X ) 2 que, depois de desenvolvida fornece a seguinte frmula de clculo: SQT = x 2 + x' 2 ( x + x' )2 2a

Sabendo-se que SQE tem a1 graus de liberdade, que SQD tem (2-1)a, isto , a graus de liberdade e que SQT tem 2a-1 graus de liberdade, as estimativas das varincias
2 entre, dentro e total so calculadas, respectivamente, a partir de s E =

SQE SQD 2 , sD = a 1 a

2 e sT =

SQT . 2a 1

79

Para

sabermos

se

coeficiente sE s
2 D 2

de

correlao

intraclasse

se

desvia

significativamente de zero, calcula-se F = graus de liberdade.

, que comparado ao F crtico com a-1 e a

Para exemplificar, consideremos os dados da Tabela 1.3, a respeito das linhas dermatoglficas palmares A-d tomadas em 10 pares de gmeos MZ do sexo masculino, todos de escolas primrias de Campinas, SP, caucasides e do mesmo grupo etrio (Beiguelman, 1971).

Tabela1.3 Nmero de linhas dermatoglficas palmares A-d contadas em 10 pares de gmeos monozigticos. Par x x 1 106 111 2 111 117 3 104 104 4 113 111 5 102 104 6 109 111 7 155 143 8 114 112 9 103 114 10 102 104 Designando o primeiro valor de cada par de dados por x e o segundo por x , calculamos, inicialmente os valores abaixo: x = 1.119 x= 1.131 x + x= 2.250
2

x2 = 127.461

x 2= 129.089
2

( x + x' ) 2 = 253.125 2a

( x + x' ) =256.377 2

( x x' ) = 173 2

Com esses dados podemos organizar um quadro de anlise da varincia como o da Tabela 2.3, que serve para calcular o coeficiente de correlao intraclasse. De acordo com os dados da Tabela 2, a contagem de linhas A-d nos gmeos MZ possuem coeficiente de correlao alto (ri = 0,91) e significativamente diferente de zero, pois

F(9;10) = 20,89 tem P < 0,005. Tabela 2.3 Clculo do coeficiente de correlao intraclasse entre o nmero de linhas dermatoglficas palmares A- d em 10 pares de gmeos monozigticos. 80

Variao G.L. Entre Dentro Total 9 10 19

SQ

s2

ri

F(9;10) 20,89 P<0,005

3252 361,33 0,91 173 17,30

3425 180,26

As estimativas das variveis necessrias ao clculo do coeficiente de correlao intraclasse, inclusive a prpria estimativa desse coeficiente, podem vir acompanhadas dos respectivos desvios padro. De acordo com Kempthorn e Osborne (1961), o desvio padro
2 da varincia entre obtido por intermdio de s E

2 e o desvio padro da varincia a +1

2 dentro obtido por meio de s D

2 . Os desvios padro da covarincia e da varincia a+2

2 2 1 ( s E )2 ( s D ) 2 + , ao passo que o desvio padro do 2 a +1 a+2

total so idnticos e fornecidos por

coeficiente de correlao intraclasse obtido pela resoluo de Em relao aos dados da Tabela 2 poderamos, pois, escrever:
2 sE 2 sD

s E .s D 2 ( s E + s2 )2 D

8( 2a + 3 ) . ( a +1 )( a + 2 )

= 361,33 154,07 = 17,30 7,06 77,12

covxx = 172,02 sx ri
2

= 180,26 77,12 = 0,91 0,05

81

A COMPARAO DE CARACTERES QUANTITATIVOS EM GMEOS Se uma amostra de gmeos MZ for comparada a uma amostra de pares DZ, em relao a um carter quantitativo, e se os gmeos em estudo pertencerem ao mesmo grupo etrio, tiverem sido extrados de uma populao homognea, no estiverem sujeitos a um processo seletivo diferencial, nem forem fruto de casamentos preferenciais, a varincia total desse carter nos pares MZ no dever diferir significativamente daquela observada nos pares DZ . Se o carter variar segundo o sexo deveremos obter:
2 2 s x MZMM = s x DZMM

s x MZFF = s x DZFF

Evidentemente, se isso no ocorrer, no dever haver diferenas significativas entre essas quatro varincias, isto : s x MZMM = s x DZMM = s x MZFF = s x DZFF Por outro lado, se o carter em estudo nos gmeos depender de um componente gentico importante, a varincia dentro dos pares MZ ser significativamente menor do que a dos pares DZ, tanto entre os pares masculinos quanto entre os femininos, isto , s D MZMM < s D DZMM
2 2 2 2 2 2

s D MZFF < s D DZFF

A covarincia e o coeficiente de correlao intraclasse mostraro uma relao oposta da varincia dentro, isto , nos pares MZ seus valores sero significativamente maiores do que nos pares DZ, o que permite escrever: covMZMM > covDZMM riMZMM > riDZMM e e covMZFF > covDZFF riMZFF > riDZFF

Para exemplificar, consideremos os dados relacionados na Tabela 3.3, a respeito das linhas a-b contadas nas palmas das duas mos de 38 pares MZ (20 do sexo masculino e 18 do sexo feminino) e 52 pares DZ (28 do sexo masculino e 24 do sexo feminino), todos do mesmo grupo etrio, caucasides e do mesmo nvel social, averiguados em escolas primrias de Campinas, SP (Beiguelman, 1971).

82

Tabela 3.3 Coeficientes de correlao intraclasse do nmero de linhas dermatoglficas a-b de 90 pares de gmeos e elementos utilizados para o seu clculo.

Estimativa sE sD covxx sx ri a
2 2 2

MZ 207,54 46,998 13,08 2,925 97,23 23,545

DZ 140,53 27,299 65,88 12,679 37,32 15,050

109,01 23,545 102,84 15,050 0,88 0,036 38 0,36 0,119 52

Visto que o nmero mdio de linhas a-b nos indivduos do sexo masculino (81,6; s = 10,94) no diferiu significativamente do nmero mdio dessas linhas nos indivduos do sexo feminino (80,7; s = 9,43), os gmeos MZ foram comparados aos DZ sem distino de sexo. Na Tabela 3.3 fcil constatar que a varincia total dos pares MZ no diferiu significativamente daquela observada nos DZ (F(75;103) = 109 ,01 = 1,06; P>0,05). J a 102 ,84

varincia dentro dos pares DZ foi significativamente maior do que a estimada para os pares MZ (F(54;38) = 65,88 = 5,04; P < 0,05). Em oposio, tanto a covarincia quanto o coeficiente 13,08

de correlao intraclasse foram maiores nos pares MZ do que nos DZ em ambos os sexos. Para averiguar se a covarincia dos gmeos MZ significativamente maior do que a dos DZ, calcula-se um t obtido pela diviso da diferena entre as covarincias pelo desvio padro dessa diferena. Com base nos dados da Tabela 3.3 tem-se, portanto, t= 97 ,23 37 ,32 (23,545) 2 (15,050) 2 + 75 103 = 19,345; G.L.=178; P <0,001.

Para investigar se o coeficiente de correlao intraclasse dos gmeos MZ significativamente maior do que o dos DZ, pode-se empregar um mtodo de Snedecor 1 + ri (1966), que requer o clculo da quantidade z = ln 1 r i para os pares MZ (z1) e para 83

os pares DZ (z2). No exemplo da tabela 3.3 tem-se que ri = 0,88 d origem a z1 = 1,3758 para os gmeos MZ, enquanto que z2 igual a 0,3769 para os gmeos DZ. A razo entre a diferena z1 z2 e o desvio padro dessa diferena fornecer um t com infinitos graus de liberdade. s z1 - s z2 = Sabendo-se que esse desvio padro obtido por intermdio de

1 1 + onde a1 o nmero de pares MZ e a2 o nmero de pares DZ, a1 3 a 2 3 1,3758 0,3769 = 4,516; G.L.= 84; P < 0,001. 1 1 + 35 49

podemos calcular t =

Em resumo, os dados da Tabela 3.3 permitem afirmar que o nmero de linhas dermatoglficas palmares a-b depende, indubitavelmente, de um componente gentico importante, pois os pares MZ mostram maior coeficiente de correlao intraclasse do que os DZ e todos os outros elementos que serviram para o clculo desses coeficientes de correlao so coerentes com a hiptese da existncia desse componente.

INVESTIGAO DA HERDABILIDADE DE CARACTERES QUANTITATIVOS EM GMEOS Os coeficientes de correlao intraclasse calculados para os pares MZ e DZ estimam qual a proporo da varincia fenotpica total (V) que comum aos membros desses pares. Assim, designando a varincia aditiva por VA, a varincia dominante por VD e a varincia devido a efeitos familiais no-genticos sobre os gmeos por VNG , e desprezando a varincia episttica devido interao, ter-se-, de acordo com Falconer (1960) que: riMZ = riDZ = VA + VD + VNG V 0 ,5VA + 0 ,25VD + VNG V

Simbolizando a varincia gentica total por VG que, evidentemente, inclui a varincia aditiva e a dominante, pode-se escrever, tambm, riMZ = VG + VNG V

84

Se a VNG fosse nula, riMZ estimaria a razo

VG , que denominada coeficiente de V

determinao gentica por Smith (1974) e simbolizada por G. Essa razo tem sido chamada por outros autores, como Mather e Jinks (1984), de herdabilidade sensu lato, para diferenci-la da verdadeira herdabilidade (herdabilidade sensu stricto, h2), que mede a poro da varincia fenotpica devida varincia aditiva, isto , VA . No caso de VNG e V

VD terem valores muito baixos, tanto riMZ quanto 2riDZ poderiam estimar a herdabilidade, pois, nessa situao, riMZ = 2riDZ = VA = h2. Entretanto, pelo fato de no conhecermos VD V

nem VNG, as estimativas da herdabilidade podero ser bastante distorcidas. Por isso, para eliminar os efeitos familiais no genticos, Smith (1974) aceitou que eles so os mesmos para os pares MZ e DZ, e recomenda o clculo da expresso 2 (riMZ riDZ), que estima VA + 1,5VD , porque: V 2( VA + VD + VNG 0,5VA 0,25VD VNG ) VA + 1,5VD = V V Evidentemente, essa frmula de Smith (1974) tambm no boa, pois ela dar uma super-estimativa do coeficiente de determinao gentica (G) se VD ou a variao episttica forem importantes, e se aproximar da herdabilidade se VD for pequena. Uma postura mais razovel, embora pouco rigorosa, a de aceitar que a herdabilidade de um carter quantitativo estimada pelo estudo de gmeos deve estar por volta de riMZ ou 2riDZ. Assim, os dados da Tabela 3.3 permitiriam dizer que a herdabilidade (h2) do nmero de linhas dermatoglficas palmares a-b deveria estar entre 0,72 e 0,88 pois 2 riDZ = 0,72 e riMZ = 0,88. Em 1929 Holzinger props uma frmula para estimar a herdabilidade de caracteres quantitativos pelo estudo de gmeos, a qual tem sido amplamente utilizada, apesar das crticas que sofreu. Essa frmula expressa do seguinte modo: riMZ riDZ 1 riDZ

85

As crticas a essa frmula tm sentido, porque se riMZ e riDZ forem substitudos, respectivamente, por VA + VD + VNG 0 ,5VA + 0 ,25VD + VNG e , ela passar a significar V V

0,5VA + 0,75VD , no estimando, pois a herdabilidade. V (0,5VA + 0,25VD + VNG ) Por causa dessas objees, poder-se-ia, dizer que a frmula clssica de Holzinger (1929) estima uma herdabilidade aproximada, a qual poderia ser denominada herdabilidade ou h2, devendo ela ser aplicada separadamente para gmeos do sexo masculino e do sexo feminino, no caso de os caracteres em estudo sofrerem influncia do sexo. Se aplicarmos essa frmula aos dados da Tabela 3.3, poderemos dizer que a herdabilidadedo nmero de linhas a-b 0,81, porque h2 = 0,88 0,36 = 0,81. 1 0,36

Se a varincia total dos pares MZ puder ser considerada como idntica dos pares DZ, por no haver diferena significativa entre as suas estimativas, como o caso dos dados da Tabela 3.3, a frmula da herdabilidade de Holzinger pode ser transformada numa outra, que leva em conta apenas as varincias dentro dos pares MZ e DZ de cada sexo, e que pode ser apresentada como abaixo: s s h = DDZ 2 DMZ s DDZ
2 2

sE 2 sD 2 De fato, partindo de ri = , podemos escrever: sE 2 + sD 2

1 ri = 1

2 2 2 sE sD 2s = 2 D 2 2 2 sE + sD s E + sD

Essa expresso no se alterar se dividirmos por 2 tanto o numerador quanto o denominador, o que conduz a: s s 1 ri = 2 D 2 = D2 sE + sD sT 2
que permite escrever:
2 2

s ri = 1 D2 sT

86

Se a varincia total dos gmeos MZ for igual dos gmeos DZ, poder-se- escrever: riMZ riDZ 1 riDZ
2 2 s DMZ s DDZ 1 2 1 2 sT sT = 2 s 1 1 DDZ 2 sT

" h 2" =

2 2 = s DDZ s DMZ 2 s DDZ

Essa ltima frmula, preferida por muitos autores, como Clark (1956), deixa claro que a herdabilidade estimada pela frmula de Holzinger poderia ser definida como a proporo da varincia dentro dos gmeos DZ que deve ser atribuda a fatores genticos. Aplicando essa ltima frmula aos dados sobre a contagem das linhas a-b (Tabela 3.3), podemos constatar que o valor estimado da mesma ordem que o obtido pela frmula que leva em conta os coeficientes de correlao intraclasse dos pares MZ e DZ, pois h2 = 65,88 13,08 = 0,80. 65,88 Em qualquer caso, a demonstrao de que a herdabilidade difere

significativamente de zero ser feita por um F obtido pela diviso da varincia dentro dos pares DZ pela varincia dentro dos pares MZ. Nos dados da Tabela 3.3 tem-se, pois, F(52;38) = 5,04; P < 0,005 o qual indica que a herdabilidade das linhas a-b difere significativamente de zero nos indivduos de ambos os sexos. Uma estimativa aproximada da herdabilidade de caracteres quantitativos em amostras de gmeos sem diagnstico da zigosidade pode ser obtida a partir de uma frmula sugerida pelos Professores Newton E. Morton e Henrique Krieger (Franchi-Pinto, Dal Colletto, Krieger e Beiguelman, 1999). Para isso, leva-se em conta que, em uma amostra de gmeos, os pares discordantes quanto ao sexo (MF) so, seguramente, DZ. Se o nmero desses pares for subtrado do nmero de pares de gmeos do mesmo sexo (MM + FF), terse-, de acordo com a regra clssica de Weinberg (1901) que, o nmero restante estimar o nmero de pares MZ. Assim, por exemplo, em uma amostra de gmeos com 250 MM, 192 MF e 256 FF, a estimativa do nmero de pares MZ seria 314, porque (250+256) 192 = 314. Esses dados, por sua vez, permitiriam estimar a proporo de pares do mesmo sexo que so MZ em 62% porque 314 = 0,62. 506

Se aceitarmos que o coeficiente de correlao intraclasse de um carter quantitativo em pares MZ estima, aproximadamente, a herdabilidade, isto , que riMZ = h2, enquanto 87

entre os pares DZ esse coeficiente estima, aproximadamente, a metade da herdabilidade, isto , riDZ h2 = , os coeficientes de correlao intraclasse de pares concordantes (rc) e de 2

discordantes quanto ao sexo (rd) poderiam ser expressos como abaixo, onde c a proporo de pares MZ entre os gmeos do mesmo sexo: rc = ch2 + rd = ( 1 c )h 2 2 h2 2 ( 1 c )h 2 h2 + 2 2

Em vista do exposto, pode-se escrever a seguinte equao: rc + rd = ch2 + que pode ser convertida na seguinte expresso: h2 = rc + rd c 1+ 2

Num estudo de gmeos realizado por Franchi-Pinto, Dal Colletto, Krieger e Beiguelman (1999) nos quais o ndice de Apgar foi ajustado para a idade gestacional e sexo, constatou-se que esse ndice obtido no primeiro minuto aps o nascimento mostrou rc = 0,383 e rd = 0,169. Visto que, nesse estudo, c foi estimado em 0,62, isso permitiu estimar h2 como sendo igual a 0,42 Do exposto neste captulo pode-se concluir que os estudos de gmeos so timos para pr prova a hiptese de que um carter quantitativo depende de um componente gentico importante. Contudo, quando se trata de calcular a herdabilidade de um desses caracteres, eles so menos precisos do que os estudos familiais. Realmente, em estudos familiais podemos estimar o valor da herdabilidade por intermdio da regresso das mdias das medidas do carter quantitativo feitas nos filhos e nos genitores. Quando o nmero de famlias no grande e existe muita variabilidade em relao ao tamanho das irmandades, pode ser desejvel que a obteno das mdias das medidas tomadas nas irmandades seja ponderada com o nmero de elementos que ela contm (Kempthorne e Tandon, 1953; Reeve, 1955).

88

Se a regresso for feita entre a mdia das medidas obtidas em cada irmandade ( F ) sobre um dos genitores, isto , sobre o pai (P) ou sobre a me (M), os coeficientes de regresso bFP ou bFM estimaro, cada qual a metade da herdabilidade, isto , bFP = bFM = h2 e 2

h2 , pois cada um dos genitores transmite a metade de seus genes sua prole. Por 2

outro lado, se a regresso for feita entre a mdia das medidas tomadas em cada irmandade e a mdia das medidas verificadas nos genitores ( G ), o coeficiente de regresso bFG estimar a herdabilidade, isto , bFG = h 2 . Isso permite escrever: h 2 = 2 bFP h 2 = 2 bFM h 2 = b FG Apesar de qualquer um desses coeficientes de regresso servir para estimar a herdabilidade, considera-se que a melhor estimativa desse valor obtida por intermdio de uma combinao dos trs coeficientes. Para isso, pondera-se cada coeficiente com a quantidade de informao da estimativa, a qual a invarincia (I), isto , o inverso do quadrado do desvio padro do coeficiente de regresso). Desse modo, pode-se escrever I= 1 e expressar a frmula da estimativa combinada da herdabilidade como abaixo: 2 sb h2 = 2bFP .I FP + 2bFM . I FM + bFG .I FG I FP + I F M + I FG

Nos estudos familiais, o coeficiente de regresso das medidas tomadas nas mulheres sobre as obtidas nos maridos (bPM) permite, por sua vez, verificar se o meio comum exerce influncia importante sobre o carter quantitativo em estudo ou se existem casamentos preferenciais em relao a esse carter. Assim, se esse coeficiente no diferir significativamente de zero, aceitaremos a hiptese de que no existe influncia importante do meio sobre o carter em estudo, nem que h casamentos preferenciais em relao a esse 89

carter. Para exemplificar, consideremos os resultados da anlise de regresso para investigar a herdabilidade da distncia intercantal interna feita com base em medidas feitas na regio orbitria em pessoas pertencentes a 62 famlias brasileiras, aps ajustamento dos valores para idade e sexo (Tabela 4.3). Os valores de t expressos na Tabela 4.3 permitem concluir que: a) o coeficiente de regresso bPM no difere significativamente de zero, o que permite descartar a hiptese de que houve casamentos preferenciais em relao distncia intercantal interna ou a de que o meio intrafamilial comum exerceria influncia importante sobre esse carter quantitativo; b) todos os outros coeficientes de regresso so significativamente diferentes de zero e permitem estimar a herdabilidade da distncia intercantal interna em 31 % porque: h2 = ( 2 0 ,1574 285,7143 ) + ( 2 0 ,1551 243,9024 ) + ( 0 ,3045 151,5152 ) = 0,3109 285,7143 + 243,9024 + 151,5152

Os da Tabela 4.3 indicam, ainda, que no teramos cometido enganos graves caso tivssemos estimado a herdabilidade com base em apenas um dos trs coeficientes de regresso utilizados. Realmente, tanto 2 bFP = 0,3148 quanto 2 bF M = 0,3102 ou

bFG =0,3054 esto prximos do valor estimado (h2 = 0,3109).

Tabela 4.3 Dados para o clculo da herdabilidade da distncia intercantal interna em 62 famlias, aps ajustamento dos dados para idade e sexo (Raposo-do-Amaral, 1973).

B bPM = 0,0285 bFP = 0,1574 bFM = 0,1551 bFG = 0,3045

sb
0,1388 0,0594 0,0639 0,0813

I 285,7143 243,9024 151,5152

t 0,205 2,650 2,427 3,745

G.L. 60 60 60 60

P >0,80 <0,02 <0,02 <0,001

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REFERNCIAS
Beiguelman, B. Genetics of a-b and A-d ridge counts Rev. Bras. Pesq. Med. Biol.4: 337-342, 1971. Beiguelman, B. Curso prtico de Bioestatstica. Edies da Revista Brasileira de Gentica, Ribeiro Preto, 1994. Beiguelman, B. & Franchi-Pinto, C. Perinatal mortality among twins and singletons in a city in southeastern Brazil, 1984-1996. Genet. Molec. Biol. 23: 15-23, 2000. Clark, P.J. The heritability of certain anthropometric characters as ascertained from measurements of twins. Am. J. Hum. Genet. 8: 49-54, 1956. Falconer, D.S. Introduction to Quantitative Genetics. Oliver and Boyd, Edimburgh, 1960. Franchi-Pinto, C., Dal Colletto, G.M.D., Krieger, H. & Beiguelman, B. Genetic effect on Apgar score. Genet. Molec. Biol. 22: 13-16, 1999. Holzinger, K.J. The relative effect of nature and nurture influences on twins differences. J. Educ. Psychol. 20: 241-248, 1929. Kempthorne, O. & Tandon, O.B. The estimation of heritability by regression of offspring on parent. Biometrics, 9: 90-100, 1953. Kempthorne, O. & Osborne, R.H. The interpretation of twin data. Am. J. Hum. Genet. 13: 320-339, 1961. Mather, K. & Jinkjs, J.L. Introduo Gentica Biomtrica. Traduzido por F.A. Moura Duarte, F.M. Sene, H.A. Rothschild, R.B. Lbo, N. Mortari & A.P. Schlindwein. Sociedade Brasileira de Gentica, Ribeiro Preto, SP, Brasil, 1984. Raposo-do-Amaral, C.M. A herdabilidade das medidas da regio orbitria. Contribuio ao estudo do hipertelorismo e telecanto. Tese de Doutorado, Faculdade de Medicina, Universidade de So Paulo, 1973. Reeve, E.C.R. The variance of the genetic correlation coefficient. Biometrics, 11: 357-374, 1955. Smith, C. Concordance in twins: methods and interpretations. Am. J. Hum. Genet. 26: 454-466, 1974. Snedecor, W.G. Statistical methods. Iowa State Univ. Press, Ames, Iowa, 5a.ed, 9a. reimpresso, 1966. Weinberg, W. Beitrge zur Physiologie und Pathologie der Mehrlingsgeburten beim Menschen. Pflgers Arch. Ges. Physiol. 88: 346-430, 1901.

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CAPTULO 4. O ESTUDO DE CARACTERES QUALITATIVOS EM GMEOS

A investigao de um carter qualitativo em gmeos baseia-se na anlise da proporo de gmeos MZ e DZ nos quais apenas um dos elementos de cada par manifesta esse carter (pares discordantes) e de gmeos em que isso no ocorre (pares concordantes). Ela se baseia, tambm, no princpio de que, excetuando as anomalias relacionadas gestao e ao nascimento, os gmeos podem representar a populao geral, isto , a freqncia de um carter observado em gmeos no difere daquela observada nos indivduos da populao geral. Se o carter qualitativo que objeto de estudo for freqente na populao, ter-se-, numa amostra de gmeos colhida aleatoriamente, que os pares MZ e DZ concordantes incluiro tanto aqueles em que os dois elementos exibem o carter em estudo (++) quanto aqueles em que ambos no o manifestam (--). Se, entretanto, o carter for raro, como o caso de numerosas doenas constitucionais e degenerativas, a amostra de gmeos ser averiguada a partir de indivduos que manifestam esse carter, isto , por intermdio de propsitos, tambm chamados de casos ndice ou casos probantes. Em outras palavras, quando o carter raro, os pares concordantes incluem apenas aqueles em que esse carter se manifesta em ambos os elementos de cada par (++), visto que os pares sem o carter em estudo (--) no so averiguados. Visto que a amostra de gmeos colhida aleatoriamente para o estudo de caracteres freqentes, no haver, nesse caso, distores de averiguao, o que poder ocorrer no estudo de caracteres raros. Para corrigir as distores de averiguao nos dados a respeito de gmeos com caracteres qualitativos raros, como o caso de doenas, Allen (1970) recomendou que, nos levantamentos feitos em registros hospitalares, se leve em conta a proporo de pares concordantes averiguados independentemente ( I ), isto , aqueles em que os dois elementos do par foram registrados independentemente, diferenciando-os, assim, dos concordantes em que apenas um nico elemento do par apareceu no registro (U). Chamando de D a proporo dos pares discordantes, tem-se, segundo Allen (1970), que a proporo corrigida de propsitos concordantes obtida a partir de C= 2I + U 2I + U + D 92

Allen (1970) tambm demonstrou que para no haver distores em relao proporo de pares de gmeos concordantes, basta calcular CP = onde CP designa a concordncia de pares. Para exemplificar, consideremos que em um levantamento feito nos registros de um hospital tivessem sido encontrados 4 pares MZ concordantes em relao a uma anomalia, tendo sido ambos examinados (I = 4), enquanto que 32 MZ foram concordantes, mas apenas um tivesse sido examinado (U = 32). Suponhamos, ainda, que nos registros desse hospital, tivessem sido encontrados 20 pares MZ discordantes em relao anomalia (D = 20). Nesse caso, estimaramos que a proporo de concordncia de propsitos em 66,7% e a de concordncia de pares (CP) como sendo de 50%, pois C = 0,666 e CP = 0,5. Por serem os pares MZ geneticamente idnticos, pode-se inferir que, neles, a proporo de concordantes em relao a um carter qualitativo, ser tanto maior quanto menor for a participao do ambiente na expresso desse carter. por isso que, se um carter depender, fundamentalmente, do gentipo, 100% dos pares MZ sero classificados como concordantes. Assim, por exemplo, por ser a determinao dos grupos sangneos eritrocitrios dos sistemas ABO, Rh, MNSs e outros, praticamente no influenciada pelo ambiente, os pares MZ so sempre concordantes em relao aos grupos desses sistemas sangneos. medida que aumenta a participao do ambiente na manifestao de um carter, a concordncia nos pares MZ diminui. o caso, por exemplo, do lbio leporino associado ou no ao palato fendido, e da luxao congnita do quadril. Quando essas alteraes so investigadas em gmeos MZ nota-se uma proporo de concordncia ao redor de 40% em relao a cada uma delas, porque a influncia de fatores do ambiente na manifestao de ambas tem importncia relevante. A constatao de que a maioria ou a totalidade dos pares MZ concordante em relao a um carter qualitativo, entretanto, no , por si s, condio suficiente para enfatizar a importncia do gentipo na sua manifestao. Realmente, se um carter depender de fatores do ambiente que agem sobre a maior parte da populao, uma alta 93 2I + U 2I + U + 2D

proporo de gmeos MZ ser concordante, simplesmente porque o carter em estudo manifestado pela maioria dos indivduos que compem a populao estudada. Em vista disso, para demonstrar que o gentipo tem importncia na manifestao de um carter qualitativo necessrio provar que a proporo de pares concordantes em relao a esse carter significativamente maior nos pares MZ do que nos DZ, os quais, do mesmo modo que os irmos gerados sucessivamente possuem, em mdia, metade dos genes em comum. Evidentemente, se o carter qualitativo depender do sexo ou da idade, os pares monozigticos e dizigticos a serem comparados devero ser do mesmo sexo e pertencerem ao mesmo grupo etrio. Para exemplificar, consideremos um estudo de gmeos sobre sarampo, uma doena infantil que j foi muito freqente, no qual se observou concordncia em 96 dentre 98 pares MZ (98 %) e em 76 dentre 81 pares DZ (94 %). Apesar da alta proporo de concordncia da manifestao do sarampo nos gmeos MZ, esses dados no so suficientes para permitir a aceitao da hiptese de que o gentipo individual importante para a manifestao dessa infeco, porque essa proporo tambm foi alta nos pares DZ e no diferiu significativamente daquela observada nos pares MZ (2 = 2,015; G.L.= 1; 0,10 < P < 0,20). Na literatura pertinente so numerosos os trabalhos em que as propores de concordncia de caracteres qualitativos verificadas em pares MZ e DZ serviram para o clculo de um ndice arbitrrio (H), proposto por Holzinger (1929), e que foi denominado de ndice de herdabilidade de Holzinger. Se simbolizarmos as propores de concordncia nos pares MZ e nos pares DZ por CMZ e CDZ, respectivamente, o ndice de herdabilidade de Holzinger ser calculado por intermdio de H= C MZ C DZ 1 C DZ

Para ilustrar a aplicao dessa frmula, suponhamos uma reao serolgica de etiologia desconhecida, que positiva em 40% dos indivduos e negativa nos restantes, independentemente do sexo e da faixa etria dos indivduos. Se um pesquisador estiver interessado em investigar, por intermdio do estudo de gmeos, se essa reao depende ou no de um componente gentico importante, ele no ter necessidade de procurar indivduos que apresentam reao positiva que possuem um irmo gmeo, porque o carter em estudo freqente na populao. Bastar pesquisar a reao serolgica em questo em 94

uma amostra de gmeos coletada aleatoriamente, na qual a zigosidade ser investigada para a classificao dos pares em MZ e DZ. Consideremos que a amostra de gmeos coletada incluiu 90 pares e que, dentre eles, 38 eram MZ e 52 DZ. Se os gmeos MZ mostrarem 95% de concordncia quanto presena (++) ou ausncia (--) da reao serolgica, enquanto os DZ apresentarem 40% de concordncia (++ e --) e 60% de discordncia (+-), o ndice de herdabilidade de Holzinger ser igual a 0, 875 ou 87,5%, porque H = 0,95 0 ,60 = 0,875. Se a reao serolgica em 1 0,60

estudo mostrasse concordncia igual a 100% nos pares MZ, o ndice de herdabilidade de Holzinger dessa reao seria igual a 1 ou 100%, qualquer que fosse a proporo de dizigticos concordantes (evidentemente menor que 100 %), pois H = 100%. Exemplifiquemos, agora, com um carter raro. Consideremos que, ao investigar uma srie grande de casos de estenose pilrica, um pesquisador tivesse encontrado 20 que possuam um irmo gmeo MZ e 30 que possuam um irmo gmeo DZ. Se a proporo de pares concordantes quanto estenose pilrica fosse 65% nos pares MZ e de apenas 3% nos DZ, o pesquisador pode concluir que a estenose pilrica uma malformao que depende de um componente gentico importante para a sua manifestao, porque a proporo de concordncia dessa alterao significativamente mais alta nos gmeos MZ do que nos DZ. Por outro lado, esses dados tambm sugerem que grande a influncia de fatores do ambiente para a manifestao da estenose pilrica, visto que 35% dos pares MZ foram discordantes no que diz respeito a essa alterao. Com base nesses dados, o ndice de herdabilidade de Holzinger para a estenose pilrica pode estimado em 0,639 ou 63,9% porque H = 0,65 0,03 = 0,639. 1 0,03 1 x igual a 1 ou 1 x

Apesar de sua ampla utilizao em Gentica Humana, o ndice de herdabilidade de Holzinger recebeu crticas negativas, por ser um ndice completamente arbitrrio. Visto que os gmeos podem fornecer subsdios importantes a respeito da participao genotpica em doenas que no so monognicas, vrios autores se empenharam na criao de um mtodo mais elaborado para estimar a participao desse componente. Esse mtodo parte do princpio de que essas doenas podem ser encaradas como um carter de variao quase95

contnua (Grneberg, 1951,1952). Em outras palavras, a predisposio ou vulnerabilidade para a manifestao da doena teria, por hiptese, distribuio normal, mas a doena somente se manifestaria a partir de um determinado limiar. Com base nesse modelo,

Falconer (1965) deu grande avano metodolgico para poder avaliar a herdabilidade de doenas a partir de estudos de consangneos de pacientes. O mtodo de Falconer foi melhorado por Edwards (1969) e, posteriormente, Smith (1970, 1972,1974) dedicou-se sua aplicao aos gmeos. A aceitao do modelo de variao quase-contnua para as doenas permite interpretar a proporo de concordncia como correspondente a um coeficiente de correlao de predisposio doena entre parentes, no caso entre gmeos. Mas, para estimar esse coeficiente de correlao necessrio saber no apenas a proporo de concordncia, mas, tambm, a freqncia da doena na populao. A tabela 1.4, adaptada de Smith (1974) serve para mostrar como se estima esse coeficiente de correlao. Assim, por exemplo, suponhamos que a freqncia de uma doena na populao seja 5 por 10.000, isto , 0,0005 e que a porcentagem de concordncia dos gmeos com seus propsitos seja 40% ou 0,400 nos pares MZ e 3,8% ou 0,038 nos pares DZ. Nesse caso, a tabela 1.4 nos permitir estimar em 0,9 o coeficiente de correlao de predisposio da doena nos pares MZ e em 0,5 nos pares DZ. Por corresponderem a coeficientes de correlao intraclasse obtidos para caracteres quantitativos, vrios autores consideraram plausvel aplicar os coeficiente de correlao obtidos para os caracteres qualitativos na frmula proposta de Holzinger para o clculo da herdabilidade de caracteres quantitativos, isto , exemplo serviriam para estimar a rMZ rDZ . Assim, os dados de nosso 1 rDZ da doena estudada em

herdabilidade

0 ,9 0,5 = 0,8. Evidentemente, existem autores, como Smith (1974), que se opem 1 0 ,5 utilizao dessa frmula porque, como j foi explicitado no captulo anterior, ela no permite estimar a herdabilidade propriamente dita.

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Tabela 1.4 Taxa de concordncia dos propsitos em relao freqncia do carter na populao e ao coeficiente de correlao de predisposio doena entre os gmeos.

Freqncia na populao r
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 0,95 0.99 0,0001 0,001 0,002 0,004 0,009 0,018 0,036 0,070 0,138 0,291 0,459 0,736 0,0005 0,002 0,004 0,010 0,020 0,038 0,070 0,125 0,221 0,400 0,558 0,789 0,001 0,003 0,007 0,014 0,028 0,051 0,090 0,152 0,255 0,434 0,585 0,789 0,005 0,011 0,021 0,037 0,062 0,098 0,151 0,226 0,336 0,507 0,642 0,841 0,01 0,019 0,034 0,055 0,086 0,129 0,187 0,266 0,376 0,542 0,670 0,845 0,05 0,074 0,105 0,143 0,188 0,244 0,310 0,392 0,495 0,637 0,742 0,885 0,10 0,133 0,172 0,216 0,266 0,324 0,390 0,468 0,563 0,689 0,779 0,898 0,20 0,241 0,284 0,331 0,381 0,436 0,496 0,565 0,645 0,750 0,823 0,922 0,50 0,532 0,564 0,597 0,631 0,667 0,705 0,747 0,795 0,857 0,899 0,957 0,80 0,810 0,821 0,833 0,845 0,859 0,874 0,891 0,911 0,937 0,956 0,981

Do exposto pode-se concluir, pois, que, os estudos de gmeos tambm so timos para demonstrar que um carter qualitativo depende de um componente gentico importante, porque, nesse caso, suficiente provar que a proporo de pares concordantes quanto a esse carter significativamente maior nos gmeos MZ do que nos DZ. J os resultados de todos os tratamentos dos dados, feitos posteriormente, visando ao clculo da herdabilidade por intermdio do estudo de gmeos sero sempre pouco precisos.

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