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Cultivo
Proceso de laboratorio donde se induce el crecimiento in vitro de los microorganismos. Para conseguir la multiplicacin de agentes patgenos en sistemas artificiales es necesario aportar los elementos nutritivos mnimos suficientes, as como las condiciones fisicoqumicas ptimas para su desarrollo. Para ello se utilizan los medios de cultivo.
Requerimientos
Absolutos
- Fuente de Energa - Fuente de Carbono - Fuente de Nitrgeno - Sales - Agua
Adicionales
- Vitaminas - Factores de crecimiento - A esenciales
Ambientales
- Temperatura - Atmsfera - Humedad - Salinidad - pH
Tampones: Se utilizan fosfatos de Na o K. Proporcionan un pH estable para el ptimo crecimiento de MO y un pH de referencia estndar para aquellos medios en los que las reacciones cidas o alcalinas son usadas para identificar MO. Enriquecedores: sangre, suero, suplementos vitamnicos y extracto de levadura. Los suplementos son agregados al medio para recuperar MO fastidiosos.
Inhibidores: diferentes compuestos se pueden usar para inhibir el desarrollo de MO no deseados (medio secletivo).
Colorantes de anilina (verde brillante, eosina). Metales pesados (bismuto). Compuestos qumicos (azida, selenito, fenil-etil-alcohol). Agentes antimicrobianos (neomicina, colistn, ampicilina, vancomicina, cloranfenicol).
Indicadores de pH: Los ms usados fucsina, azul de metileno, rojo neutro, rojo fenol y prpura de bromocresol. Para medir cambios de pH en el medio resultante del metabolismo bacteriano de los sustratos dados. Indicadores miscelneos: pueden incluirse otros indicadores para detectar productos especficos (iones frricos y ferrosos para la deteccin de sulfuro de hidrgeno)
Indicadores de pH
Compuestos qumicos miscelneos: El agar, un extracto gelatinoso de las algas rojas es adicionado al medio en concentraciones variables como un agente gelificante.
Ejemplos
medio Agar MacConkey tipo S,D Inhibidor o indicador Sales biliares, cristal violeta, lactosa, rojo neutro proposito Selecciona entrobacteria y otros bacilos Gram -. Inhiben la mayora de los Gram +. Diferencian los bacilos Gram fermentadores de los no fermentadores. Enriquecimiento para Salmonella spp
Caldo selenito F
Sales de selenio
Agar sangre
E, D
Permite el desarrollo de una amplia gama de bacterias y evidenciar el tipo de hemlisis que estas producen.
Medios de cultivo
Uso Clasificacin
Uso
Objetivo es aislar y cultivar los microorganismos (MO) (bacterias) causantes de una infeccin, para llegar a un diagnstico certero y un tratamiento adecuado
Clasificacin
Fsico Componentes Funcin
Fsico
Slidos Semi slidos Lquidos 1,5 2,0 % agar 0,5 % agar sin agar
Medios slidos
Medios lquidos
Componentes
Naturales compuestos de origen natural (protenas, suero) sales
Sintticos
Clasificacin - Funcin
Medios nutritivos Medios enriquecidos Medios selectivos Medios diferenciales
Medios nutritivos
Contienen nutrientes que permiten que la mayora de los MO no fastidiosos crezcan en la misma proporcin en que se encuentran en la muestra, sin permitir que otro MO crezca de forma exagerada. Ej: Agar corazn. nutritivo, agar cerebro
Medios enriquecidos
Favorecen el sobrecrecimiento de un determinado MO a partir de una muestra que lo tiene en escasa cantidad, con predominio de la flora habitual. Agregando sustancias altamente nutritivas (sangre, suero etc) Ej: agar sangre, caldo selenito
Medios selectivos
Contienen uno o mas agentes inhibitorios (antibiticos, colorantes) que inhiben los MO excepto al que se desea recuperar. Ej: agar Mac Conkey, agar nutritivo con ampicilina, agar Skirrow.
Medios diferenciales
Emplean metabolitos que permiten que los MO expresen caractersticas metablicas que hacen posible distinguirlos de otros con caractersticas diferentes. Ej: agar Mc Conkey, agar sangre, agar urea
Estos medios contienen nutrientes bsicos, la caracterstica bioqumica que se quiere determinar (lactosa, para determinar su fermentacin) mas indicadores de pH, lo cuales al haber metabolismo de la bacteria estudio hay modificacin del pH del medio de cultivo evidencindose por el cambio de color.
Agar XLD
Agar Mc Conkey
Agar TSI
Agar LIA
Agar MacConkey
Es un medio selectivo y diferencial
Frmula (g/L):
Peptona Proteasa peptona Lactosa Sales biliares Cloruro de sodio Rojo neutro Cristal violeta Agar pH 17,0 3,0 10,0 1,5 5,0 0,03 0,001 13,5 7,1 0,2
Agar MacConkey
Selectivo: inhiben D de Gram + y Selectivo permite la seleccin y recuperacin de las enterobacterias. Diferencial: rojo fenol como indicador de pH, al haber fermentacin de la lactosa por parte de la bacteria el medio de cultivo vira de color a fucsia.
L (-)
L (+)
Agar MacConkey
Agar SS A. Klebsiella pneumoniae; B. Escherichia coli C: Salmonella sp. ; D: Proteus mirabilis E: Pseudomona aeruginosa
Agares cromognicos
Son medios de cultivo selectivos y diferenciales. Contiene en su composicin metabolitos e indicadores que permiten el crecimiento y clasificacin simultanea o diagnstico de un MO en particular.
Cromocoli
Agar selectivo y diferencial para la deteccin simultnea de Escherichia coli y recuento total de coliformes mesfilos en agua y alimentos. Las cepas Gram + y algunas Gram se inhiben por la presencia de tergitol 7. La E. coli se presenta de color azul-violeta por los componentes del medio de cultivo.
Cromoaureus
Es un medio de cultivo selectivo y diagnstico para el cultivo, aislamiento , diferenciacin y diagnstico de Staphylococcus aureus. Los colores son producidos especficamente por reacciones enzimticas del St. aureus que combinadas con las substancias cromgenas contenidas en el medio producen el viraje de las colonias al color malva-violeta.
Cromocandida
Es un medio selectivo para levaduras y hongos. Para la diferenciacin de estas especies en base a los diferentes colores de sus colonias producidos por reacciones enzimticas de especie especficas con un sustrato cromgeno contenido en el medio.
MEDIO CROMOCANDIDA mostrando desarrollo de: Candida tropicalis colonias azules violceas Candida albicans colonias verdes Candida glabrata colonias rosa-rojizas Candida krusei colonias rosa plido
Medios de transporte
Son un sistema de obtencin y transporte de muestras microbiolgicas para su cultivo y posterior identificacin. Consiste en una trula estril y un tubo con el medio de transporte correspondiente en el cual se introduce la trula con la muestra, lo que permite que los MO permanezcan viables hasta el momento del cultivo.
Medio Stuart
Medio de transporte eficaz para la recuperacin y viabilidad de microorganismos como Streptococcus pneumoniae, Str. pyogenes , N. gonnorrhoeae, Haemophilus sp. y otros microorganismos lbiles. Se utiliza tambin para el transporte de muestras de secreciones oculares, ticas, heridas y abscesos. Los microorganismos permanecen viables de 6 das a 8 semanas. Se recomienda para la toma de muestras en sitios estriles.
Recoleccin
Preparacin del sitio: muestra obtenida con aguja o aspiracin, se debe desinfectar la piel. Alcohol 70%, seguido por yodforo, durante 1 min. En reas muy contaminadas repetir procedimiento. Volumen: esto depende de el tipo de muestra, consultar en el laboratorio. Se encuentran estandarizadas la toma de muestra para hemocultivo, LCR para cultivo de hongos y orina para cultivo.
Envase y aparato recolector: La trula debe ser de un material que no inhiba el crecimiento bacteriano. Una vez tomada la muestra se introduce en un frasco estril o medio de transporte. Muestras lquidas envases estriles con tapa rosca. Nmero de muestras: Solo las muestras de hemocultivo, coprocultivo, baciloscopas, y cultivo de Koch se encuentran normadas. En el resto tomar mas de una muestra en innecesario y caro.
Tcnicas de recoleccin: Para la obtencin de una correcta toma de muestra, se debe seguir un manual de toma de muestra. En general las muestras menos satisfactorias son las obtenidas con trula, las ptimas con jeringa. Medio de transporte: No deben usarse trulas sin medio de transporte (excepto para tcnicas especficas) porque esto lleva a la desecacin de la muestra.
En el caso de secreciones se recomienda medio tipo tampn como Stuart o Amies. Como no tienen nutrientes ayudan a preservar los MO de la muestra evitando el sobrecrecimiento. Para coprocultivos se utiliza el medio Cary Blair, que permite una mejor recuperacin de enteropatgenos. Muestras de aspirado o lquidos que se solicite cultivo anaerobio, deben colocarse en frascos o recipientes con medio de transporte y atmsfera sin O2 (medio de transporte anaerobio). Sobreviven app 24 horas a RT.
Transporte de muestras: Aun usando medio de transporte, las muestras deben llevarse lo ms rpido posible, antes de las dos horas. Algunas muestras se pueden refrigerar hasta 12 horas (expectoracin y orina). Las muestras de Neisseria o anaerobios deben mantenerse a RT.