UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CC.QQ.

Y FARMACIA ESCUELA DE QUIMICA BIOLOGICA DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA CURSO DE MICROBIOLOGIA GENERAL Gua de Estudio: CONTROL DE MICROORGANISMOS INSTRUCCIONES: Para resolver la siguiente hoja de trabajo puede consultar: Brock Biologa de los Microorganismos 10a. Ed. Microbiologa Bsica de Volk, Microbiologa de Prescott, e internet (siempre y cuando ponga la referencia). Esta hoja es exclusivamente para estudio. 1. Defina los siguientes trminos:

Esterilizacin: Proceso para eliminar toda la contaminacin microbiana. Antimicrobiana: Es una sustancia que mata o inhibe el crecimiento de microbios, tales como las bacterias, hongos, parsitos o virus. Inhibicin: Disminucin o detencin de las funciones normales de una parte del organismo por medios qumicos. Dificultad o imposibilidad de una reaccin qumica, especialmente un catalizador, para transcurrir a su velocidad normal. Antibitico: Es una sustancia qumica producida por un ser vivo o derivada sinttica de ella que a bajas concentraciones mata o impide el crecimiento de ciertas clases de microorganismos. Microbicida: Sustancia que mata microbios. Descontaminacin: Serie de pasos para hacer inocuo el manejo de un instrumento o dispositivo mdico al reducir la contaminacin con microorganismos u otras sustancias nocivas. Tambin se puede decir que es el mtodo de conversin de las sustancias toxicas o nocivas en general, presentes en el ambiente para reducir o eliminar su peligrosidad. Microbiosttico: Sustancia que inhibe el crecimiento de los microorganismos, pero no los mata. Desinfeccin: Destruccin de los microorganismos patgenos en todos los ambientes, materias o partes en que pueden ser nocivos, por medios mecnicos, fsicos o qumicos contrarios a su vida o desarrollo. Desinfectante: Es un agente, por lo regular qumico, capaz de matar las formas de desarrollo, pero no necesariamente las formas de resistencia de microorganismos patgenos. Se aplica a sustancias que se usan en objetos inanimados. Seneamiento: Conjunto de acciones tcnicas y socioeconmicas de salud pblica que tienen por objetivo alcanzar niveles crecientes de salubridad ambiental Antisptico: Sustancias antimicrobianas que se aplican a un tejido vivo o sobre la piel para reducir la posibilidad de infeccin, sepsis o putrefaccin.

2. Cules son los mtodos fsicos para el control de microorganismos?

Son mtodos estndar que se emplean para destruir o eliminar microorganismos no deseados. Y son calor, radiaciones y filtracin. 3. Se usan tres trminos para indicar el grado de resistencia al calor que tienen las bacterias: Punto trmico letal, tiempo trmico letal y reduccin decimal del tiempo, defnalos.

Punto trmico letal: Temperatura mnima que mata a todas las bacterias en un tiempo determinado (normalmente el tiempo de referencia empleado es de 10 min). Tiempo trmico letal: Es el tiempo que se necesita para matar a todas las clulas a una temperatura determinada. Este tiempo depende del tamao de la poblacin ensayada dado que se requiere mayor tiempo para matar todas la clulas de una poblacin grande que de una pequea. Reduccin decimal del tiempo: Es el tiempo requerido para reducir al 10% la densidad de la suspensin, a una determinada temperatura (tambin llamado valor D).

4. Explique por qu el autoclave es el mejor mtodo para destruir las endosporas bacterianas? Cul es el factor que determina la resistencia de las mismas al calor? Por la elevada temperatura que alcanza, cuando el agua de vapor se somete a presin. Se debe a que con la autoclave se pueden alcanzar temperaturas por encima del punto de ebullicin y como tambin aplicar vapor de agua bajo presin. Y el factor es la presin.

habituales que se usan para esterilizar material limpio o con poca carga microbiana? Dispositivo sellado que permite la entrada de vapor de agua bajo presin. El procedimiento habitual consiste en calentar 1.1 kilogramos/centmetro cuadrado (kg/cm2) [15 lbs/pulg2] de presin de vapor, lo que permite alcanzar una temperatura de 121 C. A esta temperatura el tiempo de esterilizacin suele ser de 10 a 15 minutos. 6. Explique 3 precauciones que se deben tomar en cuenta en el manejo adecuado de la autoclave.

5. Explique cmo funciona el autoclave y cules son las condiciones

Se debe mantener libre el paso de aire por la vlvula Se debe evitar la acumulacin excesiva de presin dentro del aparato No se deben autoclavear sustancias orgnicas u objetos que las contengan.

7. Cmo un control de calidad, qu comprueba que el autoclave est esterilizando, se recomienda usar ampollas que contienen esporas de Bacillus stearothermophilus, del funcionamiento del autoclave explique en que se basa su uso?

Estas bacterias pueden producir esporas, y por lo tanto se puede determinar si las esporas estn siendo matadas dentro de la autoclave. 8. La pasteurizacin elimina todos los tipos de microorganismos? Si su respuesta es NO, explique por qu y a cules si elimina. Actualmente se usa pasteurizacin UHT, qu significa y en qu se diferencia de la pasteurizacin tradicional? No, ya que esta consiste en la aplicacin de calor controlado que slo mata a ciertos tipos de microorganismos pero no a todos, con la finalidad de reducir la poblacin microbiana. El proceso HTST es un mtodo empleado en los lquidos a granel, como la leche, los zumos de fruta, la cerveza, etc. Es el ms conveniente, ya que expone al alimento a altas temperaturas durante un perodo breve y adems se necesita poco equipamiento industrial para poder realizarlo. Entre las desventajas del proceso est la necesidad de contar con personal altamente cualificado para la realizacin de este trabajo, que necesita controles estrictos durante todo el proceso de produccin. Existen dos mtodos distintos bajo la categora de pasteurizacin HTST: en "batch" (o lotes) y en "flujo continuo". Para ambos mtodos la temperatura es la misma (72 C durante 15 segundos). En el proceso "batch" una gran cantidad de leche se calienta en un autoclave. Es un mtodo empleado hoy en da, sobre todo por los pequeos productores debido a que es un proceso ms sencillo. En el proceso de "flujo continuo", el alimento se mantiene entre dos placas de metal, tambin denominadas intercambiador de calor de placas (PHE) o bien un intercambiador de calor de forma tubular. Este mtodo es el ms aplicado por la industria alimenticia a gran escala, ya que permite realizar la pasteurizacin de grandes cantidades de alimento en relativamente poco tiempo. El proceso UHT y es de flujo continuo y mantiene la leche a una temperatura superior ms alta que la empleada en el proceso HTST, y puede rondar los 138 C durante un perodo de por lo menos 2 segundos. Debido a este periodo de exposicin, aunque breve, se produce una mnima degradacin del alimento. La leche cuando se etiqueta como "pasteurizada" generalmente se ha tratado con el proceso HTST, mientras que para la leche etiquetada como "ultrapasteurizada" o simplemente "UHT", se debe entender que ha sido tratada por el mtodo UHT. Este mtodo es muy adecuado para los alimentos lquidos ligeramente cidos (la acidez se mide con el pH), tal como los zumos de frutas y los zumos de verduras (como el gazpacho), ya que permite perodos de conservacin de 10 a 45 das si se almacenan refrigerados a 10 C. 9. Cmo actan las bajas temperatura sobre los microorganismos? Los elimina totalmente? Si su respuesta es NO, explique. Las temperaturas bajas a la ptima para el desarrollo, hacen caer el ndice metablico, y si la temperatura es bastante baja, el desarrollo y el metabolismo cesan. Las bajas temperaturas son tiles para preservar

cultivos, ya que los microorganismos tienen la capacidad nica de sobrevivir al fro muy intenso. Los microorganismos que se mantienen a temperaturas de congelacin o subcongelacin se consideran en latencia, ya que desarrollan actividad metablica no detectable. Esta condicin es base del xito en la aplicacin de bajas temperaturas para preservar alimentos. As, desde un punto de vista prctico, se puede considerar a las temperaturas altas como microbicidas y a las bajas congelacin o menores como microbiostticas. 10. En qu se basa el mtodo de filtracin para esterilizar?

Se basa en el tamao de los poros del filtro y en la capacidad del mismo de retener microorganismos ms grandes que el tamao de los poros de que se trate. Haga un esquema del sistema de filtracin ms usado Escriba dos ejemplos de su uso. Esterilizacin de lquidos; esterilizacin en laboratorios. Qu tipo de materiales se esterilizan por este mtodo?

11.

Qu tipos de radiacin existen? Microondas Radiacin ultravioleta Rayos X Radiaciones gamma los electrones Fotorreactivacion Radiacin ionizante ionizante

no

Cmo actan?

Radiacin no ionizante: Son aquellas que no son capaces de producir iones al interactuar con los tomos de un material. Radiacin Ultravioleta: La radiacin Ultravioleta es una Radiacin electromagntica cuyas longitudes de onda van aproximadamente desde los 400 nm, el lmite de la luz violeta, hasta los 15 nm, donde empiezan los rayos X. Este tipo de radiacin aunque en cierta forma es beneficiosa, si se excede los lmites admisibles por la vida terrestre puede causar efectos nocivos en plantas y animales e incluido el hombre en lo que respecta a la piel y los ojos. Radiacin Ionizante: Son radiaciones con energa necesaria para arrancar electrones de los tomos. Radiacin : Las partculas son conjuntos de dos protones y dos neutrones, es decir, el ncleo de un tomo de helio, eyectadas del ncleo de un tomo radiactivo.

Radiacin : Las partculas tienen una carga negativa y una masa muy pequea, por ello reaccionan menos frecuentemente con la materia que las pero su poder de penetracin es mayor que en estas. Son frenadas por metros de aire, una lmina de aluminio o unos cm. de agua. Este tipo de radiacin se origina en un proceso de reorganizacin nuclear en que el ncleo emite un electrn, junto con una partcula no usual, casi sin masa, denominada antineutrino que se lleva algo de la energa perdida por el ncleo. Tiene lugar en tomos ricos en neutrones, y suelen ser elementos producidos en reacciones nucleares naturales, y ms a menudo, en las plantas de energa nuclear. Radiacin gamma: Se originan en el ncleo excitado generalmente, tras emitir una partcula o , el ncleo tiene todava un exceso de energa, que es eliminado como ondas electromagnticas de elevada frecuencia. Los rayos gamma no poseen carga ni masa; por tanto, la emisin de rayos gamma por parte de un ncleo no conlleva cambios en su estructura, interaccionan con la materia colisionando con las capas electrnicas de los tomos con los que se cruzan provocando la prdida de una determinada cantidad de energa radiante con lo cual pueden atravesar grandes distancias, Su energa es variable, pero en general pueden atravesar cientos de metros en el aire, y son detenidas solamente por capas grandes de hormign, plomo o agua.

Mencione dos aplicaciones de la radiacin. Se han desarrollado muchas aplicaciones de las radiaciones ionizantes para esterilizar materiales biolgicos y esterilizar sustancias sensibles al calor. Se puede usar el horno de microondas para esterilizar medios de cultivo? S, porque, puede reducir el crecimiento microbiano de forma eficaz aplicando la dosis durante el periodo de tiempo adecuados. Los efectos antimicrobianos de las microondas se deben, al menos en parte, a efectos trmicos. 12. Elabore un cuadro donde incluya los mtodos fsicos para el control de microorganismos, su mecanismo de accin y dos aplicaciones prcticas de cada uno. METODO Calor hmed o: Autoclave Vapor fluyent e o agua hirvien te Calor seco: Horno calient e USOS RECOMENDADOS Esterilizacin de instrumentos, lienzos, utensilios y bandejas de tratamiento, medios y otros lquidos. Destruccin de patgenos no formadores de esporas, ropa, ropa de cama y vajillas. LIMITACIONES Sin efecto contra organismos dentro de materiales impermeables al vapor, no se puede usar para artculos sensibles al calor. No se garantiza que produzcan esterilizacin en una sola exposicin.

Para esterilizar materiales Destruyen los materiales que no se impermeables o que se daan pueden someter a temperaturas por la humedad, como aceites, elevadas pero lleva mucho tiempo. vidrio, instrumentos cortantes, metales.

Incineracin

Radiaciones: Luz ultravi oleta Radiaciones ionizantes Filtracin: Filtros de membrana Filtros de fibra de vidrio (HEPA) Limpieza fsica Ultrasnica Lavado

Para objetos contaminados Capacidad del incinerador; debe ser desechables que no se adecuada para quemar cargar volvern a usar. grandes de manera rpida y efectiva; contaminante potencial del aire. Control de las infecciones Debe ser absorbida para ser efectiva transmitidas por el aire; no pasa a travs del vidrio desinfeccin de superficies. transparente u objetos opacos; irrita los ojos y la piel, baja penetracin. Para la esterilizacin de Caro y requiere facilidades especiales material quirrgico sensible al para su uso. calor y otros materiales usados en medicina. Para esterilizar lquidos Los lquidos deben estar biolgicos sensibles al calor. relativamente libres de partculas suspendidas. Desinfeccin del aire Costos

Efectiva para descontaminacin instrumentos delicados. Manos, piel, objetos.

la No es efectiva sola, pero como procedimientos auxiliar incrementa la afectividad de otros mtodos. Limpia, reduce la flora microbiana.

13. Enumere los factores que afectan la actividad de los agentes qumicos sobre los microorganismos que se desean controlar o eliminar. Explique a qu se refiere naturaleza del medio adyacente (volk, PP 180). 1. 2. 3. 4. 14. Neutralizacin por materiales orgnicos. Tapetes y biopelculas que recubren a los microorganismos. Presencia de endosporas resistentes. Composicin de la pared celular de algunas bacterias. Enumere las caractersticas de un agente qumico ideal. Actividad microbiana No deber corroer ni teir Solubilidad Propiedad desodorante Estabilidad Capacidad detergente Homogeneidad Disponibilidad Capacidad de penetracin No deber ser toxica al hombre u otros animales No deber reaccionar con material orgnico extrao Toxicidad par los microorganismos a la temperatura ambiente y a la del cuerpo.

15. Dentro de las actividades de los agentes qumicos, cuando reaccionan con las protenas, pueden darse cinco mecanismos. Diga

cules son y ponga un ejemplo con cidos, halgenos y metales pesados. Mecanismos: o Inhibicin del reconocimiento de un aminoacil-ARNt (aa-ARNt) hacia el sitio A del ribosoma. o Introduccin de errores en la lectura de los ARNm. o Inhibicin de la reaccin de formacin del enlace peptdico. o Inhibicin de la traslocacin del peptidil-ARNt (pp-ARNt) desde el sitio A al sitio P. o Bloqueo de los factores de elongacin. cidos y bases: actan alterando la permeabilidad y coagulando las protenas, acido sulfrico y cido ntrico. Metales pesados: los ms efectivos son el mercurio, plata, cobre y zinc. Actan inactivando las protenas celulares al combinarse con ella. Halgenos: principalmente el cloro y el yodo, son agentes que oxidan los grupos SH, aminos, ndoles y hidroxifenol de la tirosina y las protenas en general. 16. Mencione dos tipos de agentes qumicos que afecten membranas y sus mecanismos de accin. Compuestos que contienen fenol (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol, clorhexidina): estos compuestos alteran (rompen) la membrana celular. Detergentes catinicos: interaccionan con los fosfolpidos de la membrana.

17. Escriba dos ejemplos de cidos utilizados como preservantes de alimentos. Hipoclorito sdico y cido ctrico. 18. Cul es el alcohol que se recomienda para uso mdico y a qu concentracin? Por qu no se puede usar etanol al 95% 100%? Cul es su mecanismo de accin? El alcohol llamada medicinal o desnaturalizado que se encuentra al 70%