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uso de luvas para os casos de rachaduras ou ferimentos na pele das mos. culos protetores devero ser usados na execuo de procedimentos que produzam borrifos ou salpicos. b) Nvel de Biossegurana 02 (NB-2): O nvel de Biossegurana dois diz respeito ao laboratrio em conteno, onde so manipulados microrganismos da classe de risco dois, cujo risco individual moderado e para a comunidade baixo. Estes microrganismos podem provocar infeces, porm, dispe-se de medidas teraputicas e profilticas eficientes, sendo o risco de propagao limitado. Exemplos: Vrus da Febre Amarela e Schistosoma mansoni. O NB-2 se aplica aos laboratrios clnicos ou hospitalares de nveis primrios de diagnstico, sendo necessrio, alm da adoo das boas prticas, o uso de barreiras fsicas primrias (cabine de segurana biolgica e equipamentos de proteo individual) e secundrias (desenho e organizao do laboratrio). semelhante ao NB-1 e adequado ao trabalho que envolva agentes de risco moderado para as pessoas e meio ambiente. O NB-2 exigido em trabalhos que envolvam sangue humano, lquidos corporais, tecidos ou clulas em que a presena de um agente infeccioso pode ser desconhecida. Os maiores riscos em um laboratrio NB-2 so de acidentes percutneos, exposio das membranas mucosas ou ingesto de material infeccioso. No interior do laboratrio, os freqentadores devem utilizar roupas apropriadas, como jalecos, gorros, mscaras etc. Antes de sair do laboratrio para reas externas, a roupa protetora deve ser retirada e deixada no laboratrio. Todos os requisitos para entrada no laboratrio devem estar assinalados na porta de entrada. Usar culos de segurana e os protetores de face (visores), assim como outros dispositivos de proteo sempre que forem indicados para a proteo de olhos e face e contra os salpicos. c) Nvel de Biossegurana 03 (NB-3): O nvel de Biossegurana trs destinado ao trabalho com microrganismos da classe de risco trs ou para manipulao de grandes volumes e altas concentraes de microrganismos da classe de risco dois. O risco individual alto e para a comunidade limitado. O patgeno pode provocar infeces graves no homem e nos animais, podendo se propagar de indivduo para indivduo, porm existem medidas teraputicas e de profilaxia. Exemplos: Vrus da Encefalite Eqina Venezuelana e Mycobacterium tuberculosis. Estes microorganismos podem ser transmitidos por via respiratria e causar infeces srias e potencialmente fatais. A equipe laboratorial deve ter treinamento especfico no manejo de agentes patognicos e potencialmente letais, devendo ser supervisionados por cientistas com vasta experincia com esses agentes. O NB-3 aplicvel para laboratrios clnicos, de diagnstico, ensino e pesquisa ou de produo onde o trabalho com agentes exticos possa causar doenas srias ou potencialmente fatais como resultado de exposio por inalao. Devem ser mantidos controles rgidos quanto operao, inspeo e manuteno das instalaes e equipamentos. Alm das prticas microbiolgicas estabelecidas para o NB-2, o trabalho com agentes de risco trs exige que menores de 18 anos de idade no entrem no laboratrio. Os maiores riscos neste laboratrio de NB-3 so a autoinoculao, a ingesto e a exposio aos aerossis infecciosos. obrigatrio o uso de roupas de proteo
especficas (macaces, uniformes que possuam menor soluo de descontinuidade, no se admitindo roupas abotoadas na frente), uso de mscaras, gorros, luvas, prps ou sapatilhas. Os EPIs devem ser autoclavados antes de serem lavados ou descartados. Toda a equipe deve tomar banho ao deixar essas reas de trabalho. As linhas de vcuo devem estar protegidas com filtro de ar com elevada eficincia e coletores com lquido desinfectante. O ar de exausto no deve, portanto, ser recirculado e dever ser filtrado atravs de filtro HEPA (High Efficiency Particulated Air) antes de ser eliminado para o exterior do laboratrio. d) Nvel de Biossegurana 04 (NB-4): O nvel de Biossegurana 4, ou laboratrio de conteno mxima, destina-se a manipulao de microrganismos da classe de risco 4, onde h o mais alto nvel de conteno, alm de representar uma unidade geogrfica e funcionalmente independente de outras reas. Estes microorganismos podem ser transmitidos por via respiratria que no se tenha registro de vacina ou terapia disponvel, podendo levar morte em poucas horas ou dias. O risco individual e para a comunidade elevado. So microrganismos que representam srio risco para o homem e para os animais, sendo altamente patognicos, de fcil propagao, no existindo medidas profilticas ou teraputicas. Exemplos: Vrus Marburg e Vrus Ebola. Recomenda-se que os laboratrios de nvel de Biossegurana quatro, s funcionem sob o controle direto das autoridades sanitrias, alm disso, dada a grande complexidade do trabalho, a equipe do laboratrio dever ter um treinamento especfico e completo direcionado para a manipulao de agentes infecciosos extremamente perigosos e dever ser capaz de entender as funes da conteno primria e secundria, das prticas padres especficas, do equipamento de conteno e das caractersticas do planejamento do laboratrio. A instalao deste laboratrio deve ser em um edifcio separado ou de uma rea claramente demarcada e isolada dentro do edifcio. necessrio a elaborao de um manual de trabalho pormenorizado, que deve ser testado previamente atravs de exerccios de treinamento. Esses laboratrios requerem, alm dos requisitos fsicos e operacionais dos nveis de conteno um, dois e trs, barreiras de conteno (instalaes, desenho equipamentos de proteo) e procedimentos especiais de segurana. Os maiores riscos relacionados e este nvel de Biossegurana so as exposies respiratrias aos aerossis infecciosos, exposies das mucosas e/ou pele lesionada s gotculas infecciosas e a autoinolculao. O material removido do laboratrio de conteno mxima dever ser autoclavado em autoclave de dupla porta, cmara de fumigao, ou sistema de antecmara pressurizada. Equipamentos ou materiais que no resistem a temperaturas elevadas devem ser descontaminados utilizando-se gases e vapor em cmara especfica. Materiais e equipamentos que no possam ser descontaminados na autoclave devem passar por tanque de imerso com desinfetante ou cmara de fumigao. O supervisor tem por responsabilidade final no controle do acesso ao laboratrio. As pessoas autorizadas devem cumprir com rigor as instrues de procedimento para entrada e sada, havendo portanto, um registro com horrio e assinatura. O acesso ao laboratrio bloqueado por portas hermeticamente fechadas.
Para adentrar ao laboratrio a roupa comum, de rua deve ser trocada por roupa protetora, completa e descartvel. As manipulaes com agentes de classe de risco quatro, conduzidas no laboratrio, devem ser realizadas em cabine de segurana biolgica de classe III, ou cabines de classe I ou II, neste caso usadas em associao com roupas de proteo pessoal com presso positiva, ventiladas por sistemas de suporte de vida.
Fonte: bioucp.blogspot.com
- A ala de platina dever ser famblada antes e depois de ser utilizada. Para isso, aquecer at o rubro. Antes de tocar no meio de cultura ou material, esta deve ser resfriada, mantendo-a prximo chama. - Lave sempre as mos. Qualquer acidente deve ser tomado as providncias necessrias. - Manter canetas, dedos e outros longe da boca, no atender telefones. - No realizar movimentos bruscos em qualquer tipo de cultura. - No colocar fsforo riscado, algodo, papel, etc., nas pias. Fazer isso nas latas de lixo que estaro distribuidas no laboratrio. - O microscpio um instrumento valioso e deve ser manipulado e usado cuidadosamente. Ao fim de cada prtica, limpar a lente ocular e todas as objetivas com papel absorvente macio. - Anotar cuidadosamente os resultados dos trabalhos. Essas anotaes servem de base para o aprendizado.
Aventais e Jalecos: So indicados para evitar a contaminao da roupa e para proteger a pele contra o sangue fresco. Os aventais devem ser longos e impermeveis.
protetor facial, bota de borracha, touca, ps para recolhimento do material, pina para estilhaos de vidro, panos de esfrego e papel toalha para o cho, baldes, soda custica ou bicarbonato de sdio para neutralizar cidos, areia seca para cobrir lcalis, detergente no inflamvel, vaporizador de formaldedo, desinfetantes e sacos plsticos. Kit de primeiros socorros: composto de material usualmente indicado, inclusive antdoto universal contra cianureto e outros antdotos especiais.
As paredes da sala de microbiologia so desinfetadas semanalmente com soluo de hipoclorito de sdio, 5mL de soluo em um litro de gua; O cho da sala de microbiologia limpo diariamente com soluo de hipoclorito de sdio. (5mL/L de gua); c) Demais dependncias (sala de limpeza, sala de preparao de meios, sala de incubao); O cho limpo diariamente com soluo de hipoclorito de sdio (5mL/L de gua); As bancadas so limpas diariamente com lcool 70%. d) Operadores Os operadores do laboratrio devem usar uniformes (guarda-p, cala, toca e mscara, brancos e limpos); Devem trabalhar com os cabelos presos, no deve utilizar perfumes fortes, as unhas devero estar bem cortadas e limpas e as mulheres no podero utilizar batom; Ao iniciar o trabalho dirio no laboratrio, obrigatrio lavar as mos com detergente apropriado, completando-se a desinfeco com a aplicao de lcool 70%; E proibida a entrada de pessoa estranhas ao setor nas dependncias do laboratrio a menos que estejam acompanhados de um dos analistas ou tcnicos. e) Geladeira A geladeira usada para manter amostras destinadas s anlises microbiolgicas, para incubar bactrias aerbicas psicrotrfilas e para manter meios de cultura preparados; Quando utilizada para incubar bactrias aerbicas psicrotrfilas e necessario o controle da temperatura da geladeira. O compartimento de refrigerao limpo mensalmente com gua e detergente apropriado e desinfetado com lcool 70%; O compartimento de congelamento descongelado a cada trs meses; O material contido na geladeira mantido em caixa de isopor durante a limpeza da mesma. f) Estufas O interior das estufas limpo e desinfetado semanalmente com lcool a 70%.
1.6.2 Esterilizao
A esterilizao o processo que inativa todos os microrganismos presentes em determinado material ou ambiente, portanto o mtodo indicado para uso em itens que de forma alguma podem ser usados quando houver qualquer tipo de contaminao, classificados como crticos, ou seja, aqueles que durante o atendimento odontolgico penetraro em pele e mucosa, ou sero introduzidos diretamente na corrente sangnea, sendo portanto de alto risco. A melhor maneira de garantirmos a destruio de microrganismos presentes em instrumentos e equipamentos mediante o uso do calor. A maioria dos microrganismos que causam infeces em seres humanos desenvolvem-se em temperaturas prximas a do corpo, ou seja, 37C. Assim, ao serem expostos a altas
temperaturas, so destrudos; o que no acontece quando os colocamos em contato com baixas temperaturas, pois nesse caso o microrganismo fica apenas inibido, e no destrudo. Alguns microrganismos produzem esporos, que so formas de resistncia, podendo permanecer inativos por longos perodos e depois voltar ao estgio inicial de infectividade. Portanto as tcnicas de esterilizao devem destruir tanto a clula bacteriana, como os esporos. Existem diversos mtodos de esterilizao: Fsicos ou Qumicos. Mas definitivamente os mtodos de esterilizao mais empregados em odontologia so os que utilizam o calor, seja este mido (autoclave) ou seco (estufa, ou forno de Pasteur), sendo que o desempenho do calor mido (autoclave) melhor. a) Esterilizao por calor seco (Estufa ou forno de Pasteur) realizada a temperaturas de 140C a 180C, com tempo de exposio de 60 a 120 minutos em estufas eltricas equipadas com termostatos. O calor seco ou ar quente em temperatura suficientemente alta levam a desnaturao e oxidao das protenas, que resultam na morte dos microrganismos. A utilizao do calor seco leva mais tempo que o calor mido, mas como existem materiais que no podem ser esterilizados no calor mido, o calor seco o preferido. indicado para esterilizar vidrarias, instrumentos de corte ou de ponta, os quais podem oxidar na presena do vapor da autoclave, e materiais impermeveis como ceras, pomadas e leos. Para ser eficiente, este processo depende de: - Aquecimento da estufa at a temperatura desejada antes da colocao do material. - Os materiais devem estar rigorosamente limpos e adequadamente embalados. - A colocao do material deve permitir a circulao do ar, portanto a estufa no pode estar abarrotada de material. Deve ser mantida uma distncia de 2 cm entre as caixas. - O tempo de esterilizao deve ser contado apenas aps a colocao do material na estufa, e a partir do momento em que a temperatura foi atingida novamente. b) Esterilizao pelo Calor mido O calor mido pode ser utilizado para destruir microrganismos presentes em materiais atravs das formas de: vapor dgua, gua fervente e gua aquecida abaixo de seu ponto de ebulio. - gua fervente a gua levada ao ponto de ebulio: 100C, este procedimento destri os microrganismos vegetativos presentes no meio lquido. Entretanto, os materiais ou objetos contaminados no so esterilizados com segurana pois alguns esporos bacterianos podem resistir a 100C por mais de 1 hora. - Vapor dgua O vapor dgua sob presso a mais prtica e segura aplicao do calor mido. O aparelho destinado a este fim a AUTOCLAVE. um processo mais eficiente para destruir os microrganismos e os esporos, que o calor seco. A autoclavao feita a 121 C com tempo de exposio de 15 a 30 minutos. A penetrao do vapor no material garante maior nvel de destruio dos microrganismos, e por este motivo mais rpido.
c) Controle da Esterilizao imprescindvel o controle de qualidade nos processos de esterilizao. Como se trata de um processo que inclui diversas variveis (tempo, temperatura, limpeza prvia, conhecimento da pessoa responsvel pelo processo, etc), se qualquer destas variveis for negligenciada, o processo no ser efetivo e o risco de contaminao eminente. O controle deve ser realizado atravs de mtodos qumicos e bacteriolgicos. Os mtodos qumicos utilizam uma fita especial que mostra, atravs da mudana de cor, se a temperatura desejada foi atingida. Os mtodos bacteriolgicos utilizam a bactria chamada Bacillus subtilis, que por ser produtora de esporos, uma eficiente indicadora da qualidade do processo. Este controle deve fazer parte da rotina do laboratrio para garantir a sade dos operadores.
1.6.3 Desinfeco
Este processo pode ser realizado de forma fsica (Pasteurizao) e qumica (Desinfectantes), e pode ser classificado como sendo uma desinfeco de alto, intermedirio ou de baixo nvel, dependendo da quantidade de microrganismos inativados. Desinfeco de alto nvel: inativa todos os microrganismos, exceto esporos. Ex: HBV, HIV e M. tuberculosis. Este tipo de desinfeco indicado para itens classificados como semi-crticos, ou seja, que entram em contato com mucosas ntegras e pele no ntegra. Desinfeco de nvel intermedirio: que inativa bactrias na forma vegetativa (M. tuberculosis), fungos e a maioria dos vrus. indicada para uso em itens classificados como no-crticos, ou seja, aqueles materiais que entram em contato apenas com a pele ntegra. Desinfeco de baixo nvel: inativa a maioria das bactrias na forma vegetativa, exceto M. tuberculosis, alguns fungos e vrus. indicada tambm para itens de uso nocrtico. a) Desinfeco por agentes fsicos: Temperaturas abaixo de seu ponto de ebulio (100 C). Pasteurizao: o aquecimento lento a baixas temperaturas, suficiente para eliminar as clulas vegetativas de microrganismos, mas no os esporos, portanto, um mtodo de desinfeco de alto nvel. indicado o uso de temperatura de 77C por 30 minutos. b) Desinfeco por agentes qumicos: b.1) Mtodo de Desinfeco de alto nvel: Glutaraldedo: indicado qualquer objeto sensvel ao calor, e para rpida desinfeco de itens reutilizados. utilizado em soluo a 2% com pH alcalino (7,58,5) por 30 minutos. Formaldedo: Pode ser encontrado na forma slida (pastilhas formalina) ou como soluo aquosa 37-40% (diludo em lcool ou gua). A soluo deve ser usada por30 minutos sendo a concentrao de 8% em soluo alcolica e 10% em soluo aquosa.
Perxido de Hidrognio: Age em presena de matria orgnica e deve-se fazer a imerso do material em soluo com concentrao de 3-6% por 15-30 minutos. cido Peractico: A concentrao de uso varivel para a desinfeco, sendo que o tempo de exposio deve ser no mnimo de 20 minutos. b.2) Mtodo de Desinfeco de nvel intermedirio: Compostos Clorados: Causam a inibio de reaes enzimticas intracelulares, desnaturao de protenas, e inativao de cidos nuclicos.Apresentam atividade antimicrobiana de amplo espectro, tem baixo custo e ao rpida, entretanto seu uso limitado, pois irritante, instvel por 24 horas, fotossensvel e voltil, alm de ser corrosivo para metais. Seu uso indicado para artigos de vidro e borracha, sendo contra-indicado para metais ( corrosivo). Apresenta-se na forma lquida (ex: Hipoclorito de sdio) e na forma slida (ex: Hipoclorito de Clcio), e o tempo de exposio dos artigos a estes compostos de aproximadamente 10 minutos. lcoois(Etlicos e Isoproplicos): Seu mecanismo de ao atravs da desnaturao de protenas. So usados em concentrao de 70% peso por 10 minutos, para a desinfeco de superfcies. O uso destas substncias contraindicado para materiais mdico-cirrgicos, borracha, plsticos e acrlico. Fenlicos: Seu mecanismo de ao atravs do rompimento da parede celular, precipitando protenas, quando usado em alta concentrao, e alterao dos sistemas enzimticos fundamentais, quando utilizado em baixa concentrao. Sua concentrao para uso de 0,4-5% sendo que o tempo de exposio deve ser menor ou igual a 10 minutos. Seu uso indicado para descontaminao de ambiente hospitalar, itens cirrgicos e mdicos no-crticos, sendo que devem ser consideradas as limitaes devido a toxicidade (hiperbilirrubinemia crianas berrios), e ao residual em materiais porosos. Iodforos: Sua ao atravs de seu alto poder de penetrao na parede celular, levando a ruptura de protenas. So utilizados em concentrao de 30 a 50 ppm por um tempo menor ou igual a 10 minutos. b.3) Mtodo de Desinfeco de baixo nvel lcoois. Compostos Clorados. Fenlicos: em concentrao menor que 5%. Iodforos: em concentrao menor que 30 ppm. Compostos de Amnio Quaternrio: Age atravs da inativao de enzimas, desnaturao de protenas essenciais, ruptura da membrana celular. Sua concentrao para uso de 0,4 a 0,6% por um tempo de no mnimo 10 minutos. indicado para a limpeza de ambiente hospitalar (pisos, paredes e superfcies). Detergentes: So agentes tensoativos, com ao detergente, umectante e emulsionante. Podem ser classificados como Catinicos (p. ex. Quaternrios de Amnio), Aninicos (p. ex. sabes, detergentes sulfatados ou sulfonados), e Enzimticos. Este ltimo tem como princpio ativo enzimas proteinases, amilase e lpases, e,portanto, causam transformaes em protenas, polissacardeos e gorduras.
lcoois (7080%)
Antisspticos Desinfectantes
Fenis
Desinfectantes
GramCompostos positivas Quaternrios Gramde amnio negativas Grampositivas Gramnegativas BAAR Grampositivas Gramnegativas BAAR Grampositivas Gramnegativas BAAR Grampositivas Gramnegativas BAAR Grampositivas Gramnegativas
Cloro
Efeito imediato
Iodo
Antisspticos Desinfectantes
Inativao enzimtica
Efeito imediato
Iodforos
Antisspticos Desinfectantes
Inativao enzimtica
Efeito imediato
Aldedos
Curto Desnaturao Desinfectantes (formas Tempo de protica (instrumentos e vegetativas) exposio agente superfcies) Prolongado longo alquilante (esporos) Antisspticos Inativao enzimtica S agem enquanto em contato No atuam sobre BAAR e esporos
Metais pesados
Fonte: autor
b) Semeadura em Meio Semi-Slido: Em tubos de ensaio: Para semeadura em meio semi-slido, utiliza-se a agulha de platina, coleta-se o inculo a ser semeado, introduzindo-o na profundidade do meio (figura 3). 1- Mergulhar a Agulha de nquel-cromo esterilizada na cultura bacteriana. 2- Fazer uma injeo com a agulha carregada com bactrias no meio de cultivo semi-slido. Figura 3: Semeadura em meio semi-slido
Fonte: autor
c) Semeadura em Meio Slido: Em tubo de ensaio (gar Inclinado) Utiliza-se a ala de platina, coleta-se o inculo a ser semeado, semeando o inculo na superfcie do meiorealizando uma estria sinuosa ou estria reta (figura 4). Aps estes procedimentos, deve-se incubar em condies apropriadas. 1- Mergulhar a Ala de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe apresentada. 2- Encostar levemente a ala na parte mais baixa do plano inclinado e suba fazendo estrias na superfcie do gar. Figura 4: Semeadura em meio slido em tubo de ensaio
Fonte: autor
Em Placas de Petri: Semeadura por Esgotamento (estrias mltiplas): Recolher o inculo com ala de platina previamente flambada e resfriada, estender o material biolgico sobre a superfcie do meio em estrias bem prximas, continuar fazendo estrias em dois ou trs setores da placa sem carreg-la novamente, aumentando-se a distncia entre as estrias, com objetivo de se obter quantidades progressivamente menores de material biolgico (figura 5). Incubar com gar invertido em ambiente ideal. Esta tcnica utilizada para a obteno de colnias isoladas (formadas a partir de um
microorganismo). Cada clula bacteriana isolada, aps incubao por 18 a 24 h a 36C, dar origem a uma Unidade Formadora de Colnia (UFC). 1- Dividir a Placa de Petri em trs partes, fazendo linhas com a caneta retroprojetor na parte de baixo da placa. 2- Mergulhar a Ala de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe apresentada. 3- Fazer estrias em cada diviso, respeitando as linhas e utilizando da melhor forma possvel toda a superfcie da placa.
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Semeadura por Distenso: Com uma pipeta, colocar no centro da superfcie do meio 0,1 ml da suspenso bacteriana ou do material a ser semeado (diludo em soluo fisiolgica esterilizada) e espalhar uniformemente com auxlio de esptula de Drigalsky ou Swab; incubar em placas invertidas em ambiente adequado.
Os microorganismos microaerfilos necessitam de uma tenso menor de oxignio, e maior de CO2 (5 a 10%), que pode ser obtida pelo mtodo da vela ou com estufas de CO2.
bioqumicas selecionam um grupo de bactrias por conterem substncias inibidoras para outras bactrias, chamadas de substncias bacterioimpedientes. Ex: Agar MacConkey (os sais biliares e o cristal violeta inibem o crescimento de bactrias gram positivas e algumas gram negativas exigentes. As bactrias fermentadoras de lactose formam cido, provocando a viragem do indicador de pH, as colnias fermentadoras aparecem avermelhadas e as no-fermentadoras so amarelas, incolores ou translcidas). Meios diferenciais ou indicadores: proporcionam a distino dos diversos gneros bacterianos de uma famlia atravs do estudo de suas propriedade bioqumicas. Ex: Agar Sangue, TSI, Citrato de Simmons, etc. Meios de Dosagem Bioqumica: so meios quimicamente definidos de composio determinada utilizados para a dosagem de vitaminas, aminocidos ou antibiticos que foram metabolizados ou produzidos pelas bactrias.
Exemplos de preparo de alguns meios de Cultura: a) gar padro para contagem (PCA = Plate Count Agar) Material: Triptona : 5g; Extrato de leveduras: 2,5g; Glicose:1,0 g; gar: 15,0 g; gua destilada: 1,0 L. Mdodos: Suspender os componentes na gua destilada. Ferver at a dissoluo do material. Ajustar o pH em 7,0. Distribuir em frascos apropriados e autoclavar por 15 min a 121C. b) Caldo simples ou caldo nutriente Material: Extrato de carne: 3,0 g; Peptona: 5,0g; gua desilada: 1,0 L. Mtodos: Suspender os componentes na gua destilada. Ferver at a dissoluo do material. Ajustar o pH em 6,7. Distribuir em frascos apropriados e autoclavar por 15 min a 121C. c) gar simples ou gar nutriente Material: Extrato de carne: 3,0 g; Peptona: 5,0g; gar: 15,0 g; gua desilada: 1,0 L. Mtodos: Suspender os componentes na gua destilada. Ferver at a dissoluo do material. Ajustar o pH em 7,3. Distribuir em frascos apropriados e autoclavar por 15 min a 121C. d) Caldo Sabouraud (para bolores e leveduras) Material: Glicose: 40,0 g; Peptona: 10,0g; gua desilada: 1,0 L. Mtodos: Suspender os componentes na gua destilada. Ferver at a dissoluo do material. Distribuir em frascos apropriados e autoclavar por 15 min a 121C. O pH final deve ser 5,8 e) gar Sabouraud (para bolores e leveduras) Material: Glicose:40,0 g; Peptona: 10,0g; gar: 15,0 g; gua desilada: 1,0 L. Mtodos: Suspender os componentes na gua destilada. Ferver at a dissoluo do material. Distribuir em frascos apropriados e autoclavar por 15 min a 121C. O pH final deve ser 5,6.
ser utilizado no meio de cultura um extrato do tecido do hospedeiro. Em todo caso, deve-se determinar as necessidades do microorganismo em estudo para o sucesso da cultura.
Fonte: http://static.infoescola.com/wp-content/uploads/2010/03/bacterias-gram-positivas-negativas.jpg
Existem tambm coloraes especiais que so utilizadas que se objetiva corar e identificar apenas partes especficas do microorganismo, exemplos desse tipo de colorao so a colorao dos flagelos, a colorao da cpsula, a colorao dos
ncleos e a colorao dos esporos. Essas coloraes envolvem corantes e tcnicas especficos a de acordo com o que se quer corar.
3.3 Microscopia
Os microorganismos so seres vivos que no podem ser visualizados sem o auxlio da microscopia. Microscpio ptico, Microscpio eletrnico, Iluminao em campo escuro, Microscopia de fase e Auto-radiografia so alguns exemplos dos mtodos pticos utilizados na analise de microorganismos; O estudo dos microorganismos iniciou com o desenvolvimento da microscopia. O microscpico ptico (microscpio de luz) utiliza ftons para gerar as imagens observadas, o mais usado em analises biolgicas, sendo um aparelho formado por um suporte mecnico e uma parte ptica formada por lentes oculares, que aumentam o material observado e lentes objetivas que aumentam o poder de resoluo e a capacidade de diferenciar dois objetos prximos. O aumento total observado neste tipo de microscpio obtido multiplicando-se do aumento da lente objetiva pelo aumento da lente ocular, em bacteriologia, por exemplo, geralmente utiliza-se objetivas com capacidade de aumento de 90 vezes e ocular com um poder de aumento de 10 vezes, aumentando a amostra 900 vezes (90 x 10). O microscpico eletrnico emprega feixes de eltrons possibilitando uma resoluo superior a do microscpio de luz; aps atravessarem a clula, estes feixes de eltrons chegam a uma tela fluorescente formando uma imagem visvel sobre uma chapa fotogrfica. Esse tipo de microscopia exige uma colorao com metais pesados, como ouro, chumbo, urnio. O primeiro microscpio eletrnico a ser construdo foi o microscpio eletrnico de transmisso, que possui algumas caractersticas em comum com o microscpio ptico, porm a resoluo mxima 40.000 vezes melhor que no microscpio ptico, mas ainda no conseguimos aproveitar toda essa capacidade, obtendo apenas uma resoluo 2.000 vezes melhor. Nesse microscpico podemos observar facilmente vrus com dimetro de 0,01 2m. Outro tipo de microscpio eletrnico o microscpio eletrnico de varredura, este possui um menor poder resoluo que o microscpio eletrnico de transmisso, porm fornece imagens tridimensionais da amostra analisada.
4 CONTROLE DE MICROORGANSMOS
O controle de microorganismos caracterizado por destruir, remover, inibir o crescimento e/ou prevenir a transmisso destes seres vivos. Um microorganismo considerado inativo quando perde permanentemente sua capacidade de multiplicao. Muitas vezes, diferentes microorganismos e em diferentes estgios evolutivos caracterizam o ambiente onde necessrio a descontaminao, e estes podem apresentar diferenas na sua resistncia aos processos de controle. Desse modo importante definir os padres de descontaminao e os procedimentos de controle mais adequados para cada situao. Existem diversos mtodos de controle que podem ser empregados nos alimentos, nas indstrias, nos laboratrios. Esses mtodos de controle podem ser realizados por agentes fsicos (o calor o mais utilizado) ou por agentes qumicos.
Alguns agentes fsicos de controle: - Calor mido: Esterilizao a partir de temperaturas acima da temperatura de fervura da gua, o que conseguido em autoclaves. - Calor seco: Flambagem, incinerao, utilizao de fornos, so formas de esterilizao utilizando calor seco. - Pasteurizao: Aquecer e em seguida resfriar rapidamente o material a ser descontaminado. Mtodo que no assegura esterelizao. - Radiaes: Radiaes ionizantes e radiaes no-ionizantes so utilizadas para o controle de microorganismos, mas seus efeitos dependem do comprimento de onda, da intensidade, do tempo de exposio e da distncia da fonte de radiao. - Filtros: So utilizados filtros que retm microorganismos. Mtodo no eficaz no controle de vrus. Alguns agentes qumicos de controle: - Alcois: Desnaturao de protenas do microorganismo. - Aldedos e derivados: utilizados em solues aquosas em concentraes que podem ser bactericidas. - Fenis e derivados: Atuam em protenas. Primeiro agente qumico a ser utilizado como desinfetante na prtica cirurgica, porm um desinfetante fraco. - Halognicos e derivados: Interagem com os aminocidos aromticos. Um exmplo a tintura de iodo, um dos antispticos mais utilizados em prticas cirrgicas. - Agentes oxidantes: Liberam oxignio nascente, que reage e oxida substncias importantes para a sobrevivncia dos microorganismos. Os agentes antimicrobianos podem ser: (1) bacteriostticos, quando apenas inibem a multiplicao bacteriana, o que pode ser reversvel com a retirada deste agente. Ou (2) bactericidas, que tem a capacidade de destruir o microorganismo, impedindo sua multiplicao de maneira irreversvel. Os efeitos destes agentes de controle de microorganismos podem ser: - Leso do DNA, como por exemplo, os efeitos da radiao ou de algumas substncias qumicas reativas ao DNA. - Desnaturao de protenas (desorganizao da estrutura terciaria de uma protena), como por exemplo, a ao de alcois e outros agentes qumicos e fsicos. - Ruptura da Membrana ou Parede celular.