CONTROLO DOS MICRORGANISMOS

evitar ou minimizar a contaminao de materiais inertes ou tecidos vivos por microrganismos que possam levar sua deteriorao ou causar doenas.

- Medicamentos (industria farmacutica) - Materiais (tecidos, calado, construo civil, etc.) - Ambiente (em hospitais, em laboratrios, em cozinhas industriais, em casa, etc.) - Corpo (na prtica clnica e cirurgica, etc.) - gua (de consumo, para uso industrial, etc.) - Alimentos (industria alimentar; qualidade e conservao de alimentos)

Esterilizao

- Destruio ou remoo de todas as formas de vida (Algumas so resistentes!) - Agentes fsicos (ex. calor, radiao ionizante, radiao UV) - Esterilizantes qumicos (ex. xido de etileno, glutaraldedo, cido peroxiactico, etc.)

Desinfeco

- Morte, inibio ou remoo de microrganismos patognicos - Desinfectantes - agentes qumicos - usados em objectos inanimados ou superfcies - Reduo da populao microbiana a nveis seguros - Desinfeco - baseado em padres de Sade Pblica - Preveno da infeco de tecidos vivos - Agentes antispticos (qumicos) - Aplicados em tecidos vivos solues no-txicas e no-corrosivas; uso clnico.

Sanitizao

Antispsia

Quimioterapia antimicrobiana
- Controlo e tratamento in vivo de infeces microbianas - Usa agentes quimioteraputicos (ex. antibiticos); toxicidade selectiva; uso clnico.

AGENTES ANTIMICROBIANOS FSICOS FILTRAO (aula sobre tcnicas da Microbiologia)

- Esterilizao por remoo

FRIO (refrigerao)
- inibio do crescimento microbiano (4-8C)

CALOR
morte trmica dos microrganismos

Radiao (UV ou ionizante)

Agentes antimicrobianos qumicos

Agentes qumicos, naturais ou sintticos, que matam ou inibem o crescimento de microrganismos - sufixo cida agente que mata (ex. Bactericida, fungicida, algicida) - sufixo sttico agente que inibe o crescimento (ex. Bacteristtico, fungisttico, algisttico)

Agentes bacteriostticos ou fungistticos*

( inibio do crescimento)

*Exemplo. Compostos qumicos que inibem a sntese de proteinas por ligao a ribossomas

Germicida - inclui bactericidas, fungicidas, e algicidas - no mata necessriamente endsporos

N total de clulas

N de clulas viveis

Alguns, tambm causam lise celular

Ex. agentes que causam inactivao de protenas e/ou a ruptura da membrana plasmtica.

Ex. agentes que inibem sntese da parede celular (p.ex. antibitico penicilina).

MEDIO DA ACTIVIDADE DE AGENTES ANTI-MICROBIANOS

Mtodo das diluies sucessivas Mtodo da difuso em agar

MTODO DAS DILUIES SUCESSIVAS Valor MIC

MIC - minimum inhibitory concentration (Concentrao mnima inibitria) do composto

antimicrobiano
- concentrao mais baixa que no permite o crescimento de um microrganismo-teste.

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MIC
O valor MIC de um dado agente antimicrobiano influenciado por:
- natureza do microrganismo teste; - quantidade de inculo; - tempo de incubao; - composio do meio de cultura; - condies ambientais (ex. temperatura, pH, arejamento). TESTES DE SUSCEPTIBILIDADE REALIZADOS EM CONDIES PADRONIZADAS

MTODO DA DIFUSO EM AGAR Dimetro dos halos de inibio

Aplicado, p.ex., na determinao da susceptibilidade de estirpes bacterianas a antibiticos - Procedimentos padronizados
- Valores do dimetro de halos de inibio tabelados (em www.e-escola.pt) - difuso do agente antimicrobiano no meio slido; - o valor MIC atingido a uma certa distncia do disco; Halo de inibio

Permitem: - determinar qual o agente mais efectivo contra um certo microrganismo; - comparar a susceptibilidade de diferentes microrganismos a um agente antimicrobiano.

AGENTES ANTIMICROBIANOS PARA USO TERAPUTICO

Medicina, Veterinria, Agricultura. Naturais produzidos por microrganismos ou plantas; eficazes em doses baixas Semi-sintticos derivados qumicos de antibiticos naturais; podem ser
mais eficazes que os naturais

Agentes quimioteraputicos

Sintticos

Toxicidade selectiva (capacidade de inibir ou matar micorganismos patognicos sem

causar efeitos adversos/txicos no organismo hospedeiro) Espectro de actividade antimicrobiana de alguns agentes quimioteraputicos

PENICILLINS -lactam antibiotics

- Produced by Penicillium chrysogenum (fungi) - primarily active against Gram-positive Bacteria

(gram-negative cells are impermeable to the antibiotic)

- Effective against Gram-negative pathogenic Bacteria

(structural differences in the N-acyl group inside gram-negative bacteria)

Resistant strains synthesis of -lactamases (plasmid encoded)

Isolamento e rastreio de microrganismos produtores de antibiticos antibacterianos a partir de amostra de solo (espcies do gnero Streptomyces)

Alvos biolgicos de agentes quimioteraputicos antibacterianos

PABA cido p-aminobenzico faz parte da molcula do cido flico (percursor dos cidos nucleicos); DHF dihidrofolato; THF - tetrahidrofolato

Alvos biolgicos tipicos de clulas do tipo procariota. Estes antibiticos actuam selectivamente sobre populaes de bactrias atravs da inibio do seu crescimento ou estmulo da morte celular.

Alvos biolgicos de agentes quimioteraputicos antifungicos

Fungos - clulas do tipo eucariota - Toxicidade selectiva mais difcil de conseguir;
- Algumas drogas s podem ser usadas topicamente, devido ao grau de toxicidade para hospedeiros. - Outras drogas tm alvos biolgicos especficos de fungos.

(uso agrcola) (uso clnico) (uso clnico e agrcola)

(uso clnico) (uso clnico, uso agrcola)

Resistncia a drogas antimicrobianas

Capacidade adquirida dum microrganismo para resistir aos efeitos de um agente quimioteraputico ao qual era susceptvel.

Diminuio ou perda da eficincia do agente quimioteraputico no tratamento da doena infecciosa causada pelo microrganismo

Problema de Sade Publica

Aparecimento de resistncia a drogas em diversas bactrias patognicas para os humanos.

Alguns microrganismos desenvolveram resistncia a multiplas drogas (fenmeno MDR MultiDrug Resistance).

*na figura ao lado

Espcies que incluem estirpes bacterianas resistentes a multiplos antibiticos presentemente, muitas delas so intratveis com antibiticos antibacterianos conhecidos.

Uso indiscriminado de drogas antimicrobianas (p.ex. Uso clnico excessivo ou errado, drogas em raes para animais, etc.) + Produtos de limpeza domstica ou pessoal antibacterianos

(Disseminao do fenmeno de resistncia a agentes desinfectantes e antispticos).

(A) Relao entre a utilizao de antibiticos antibacterianos no tratamento de doentes com diarreia e a percentagem de ocorrncia de estirpes bacterianas fecais resistentes a antibiticos.

(B) Evoluo da percentagem de casos reportados de gonorreia causada por estirpes resistentes a penicilina da bactria Neisseria gonorrhoeae. Desde 1990, a penicilina deixou de ser recomendada para o tratamento da gonorreia, devido emergncia de resistncia a drogas.

Mecanismos de 5 categorias principais: - Reduo da permeabilidade da membrana plasmtica droga; resistncia a - Inactivao da droga (modificao qumica ou quebra enzimtica) drogas - Modificao qumica do alvo biolgico em estirpes - Desenvolvimento de via bioqumica alternativa microbianas - Expulso da droga para fora da clula por sistema de transporte activo (efluxo) resistentes

Resistncia resulta da seleco e expresso de genes especficos, presentes em plasmdeos (Plasmdeos R) ou no genoma bacterianos.

PREVENO DA RESISTNCIA A DROGAS

Preveno da infeco (higiene; imunizao; prtica clnica adequada) Diagnstico e tratamento efectivo da infeco Uso cuidadoso e controlado de agentes antimicrobianos Prevenir a transmisso de microrganismos patognicos (isolamento de reas infectadas, quebrar a cadeia de contgio, etc.)

PROCURA DE SOLUES
Procura de novas drogas antimicrobianas - Derivados qumicos de drogas j existentes - Design computorizado de drogas (modelos/relaes estrutura-actividade)

Aumento do conhecimento sobre os sobre os mecanismos de infeco dos hospedeiros e sobre os mecanismos de resistncia a drogas nos microrganismos-alvo - era ps-genmica

Agentes antimicrobianos qumicos (uso externo)

Phenolic compounds

Aldehydes

Gases

Quaternary amonium compounds

Halogenated compound

Antispticos
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Agente
lcool/solues aquosas etanol ou isopropanol a 60-85%

Uso
Pele

Modo de aco
Solvente de lipdos, desorganizao das membranas, desnaturao de protenas

Compostos fenlicos (clorohexidina, hexaclorofeno)

Sabes, sabonetes, loes, cosmticos, desodorizantes,...

Ruptura da membrana celular

Detergentes catinicos (compostos de amnio quaternrio, cloreto de benzalcnio)

Sabes, loes

Interaco com os fosfolipdos membranares

Perxido de hidrognio (soluo 3%)

Pele

Agente oxidante

Solues iodadas (ex: Betadine)

Pele

Iodao de resduos de tirosina, agentes oxidantes

Nitrato de prata

Olhos de recmnascidos, para evitar a cegueira por infeco por Neisseria gonorreia

Precipitao de protenas

Desinfectantes e esterilizantes
Agente
Solues alcolicas (Etanol ou isopropanol a 60-85%) Detergentes catinicos compostos de amnio quaternrio Cloro gasoso Compostos clorados (cloraminas, lixvia, dixido de cloro) Sulfato de cobre xido de etileno

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Uso
Instrumentos mdicos, bancadas e superfcies Instrumentos mdicos, equipamentos de industriais alimentares e de lacticneos Desinfectante de guas de consumo Desinfectantes de guas de consumo e de equipamentos de industrias alimentares e de lacticnios Algicida em piscinas, guas de consumo Esterilizante de materiais de laboratrio sensveis ao calor (como os plsticos) Solues de 3-8% usadas como desinfectante de superfcies; 37% (formalina) ou vapor usados como esterilizantes Solues de 2% usadas como desinfectantes ou esterilizantes Vapor usado como esterilizante Desinfeco de instrumentos mdicos, superfcies laboratoriais Desinfectante de superfcies laboratoriais Desinfectante de guas de consumo humano Solues de 0,2% usadas como desinfectantes eficientes ou esterilizantes Desinfectantes de superfcies laboratoriais

Modo de aco
Solvente de lpidos e desnaturao de protenas Interaco com os fosfolpidos das membrans celulares Oxidao de macromolculas Oxidao de macromolculas Agente oxidante Agente alquilante (Esterilizante)

Formaldedo

Agente alquilante

(Esterilizante)

Glutaraldedo Perxido de hidrognio Compostos iodados Cloreto de mercrio Ozono cido peractico Compostos fenlicos

Agente alquilante Agente oxidante Agente oxidante

(Esterilizante)

Reaco com grupos tiol (-SH) de protenas Agente oxidante forte Agente oxidante forte (Esterilizante) Desnaturao de proteinas; desorganizao das membranas

Alguns desinfectantes e antispticos de uso comum e eficincia relativa

Alcoois, perxido de hidrognio e compostos iodforos (usualmente, em soluo aquosa) podem actuar como antispticos, desinfectantes ou esterilizantes, dependendo da concentrao e tempo de exposio.

Factores que influenciam a actividade de agentes antimicrobianos

Dimenso da populao microbiana alvo

Composio da populao microbiana alvo - Ter em ateno espcies e formas de vida resistentes Concentrao do agente anti-microbiano

Temperatura / pH / actividade de gua do material a tratar

Presena de matria orgnica no material a tratar Biofilmes

Aplicaes industriais de agentes anti-microbianos quimicos

Metais pesados, compostos fenlicos e cloro podem ser usados para prevenir o crescimento microbiano em produtos de interesse comercial e equipamento industrial. Mas o seu uso pode produzir resduos ou sub-produtos nocivos para o Ambiente; trata-se de compostos com aco antimicrobiana generalizada e com potencial de toxicidade para os ecossistemas naturais.

Conservantes qumicos para preservao de alimentos

Others: bacteriocins; acetic acid; lactic acid (natural; microbial origin)

NOTAS SOBRE MODOS DE ACO DE AGENTES ANTIMICROBIANOS QUMICOS

Alcois
Usados como desinfectantes e antispticos Aco bactericida e fungicida, mas no esporicida; Inactivam alguns virus Desnaturam protenas e desorganizam membranas celulares Solues aquosas a 65-85% (v/v) mais eficientes do que solues mais concentradas

Compostos fenlicos

Usados como desinfectantes em hospitais, laboratrios, limpeza de WCs, etc Mecanismo de aco: desnaturao de protenas e ruptura de membranas Eficientes mesmo na presena de matria orgnica e aco duradoura odor desagradvel e podem causar irritao da pele

Halogneos
IODO E COMPOSTOS IODADOS
Anti-sptico da pele Agente oxidante: oxida constituintes celulares e reage com protenas causando a sua inactivao Concentraes altas podem inactivar esporos Desvantagem: pode causar colorao e irritao na pele, Compostos iodoforos Complexo entre iodo e composto orgnico; este liberta o iodo de forma gradual (ex. Betadine); mais suave (como antisptico)

CLORO E COMPOSTOS CLORADOS

Agente oxidante, oxida constituintes celulares Destri clulas vegetativas de bactrias e fungos, mas no esporos; actua sobre alguns virus Pode reagir com matria orgnica e formar compostos carcinognicos Formas mais usadas:
cloro liquefeito (tratamento de gua de consumo e de piscinas), hipoclorito de sdio ou de clcio (=lixvia desinfectante domstico, laboratorial e em unidades industriais), compostos orgnicos libertadores de cloro (ex. Halazone desinfeco de gua) Formulaes desinfectantes com compostos libertadores de cloro (ex. Cloramina-T, desinfeco de instrumentos e superfcies no metlicas)

Compostos quaternrios de amnio

Detergentes Molculas orgnicas com extremidades hidrofilicas e hidrofbicas Causam ruptura das membranas celulares Actuam como emulsionantes Detergentes catinicos so desinfectantes eficientes Matam maior parte das bactrias, mas no Mycobacterium tuberculosis ou endosporos Fcil de usar e sem efeitos secundrios, mas inactivada por gua dura e sabo Antispticos; desinfectantes de superfcie e equipamento

Metais pesados
P.ex., sais de mercurio, prata, zinco, cobre Eficientes, mas usualmente so txicos Estabelecem ligaes com grupos especficos de protenas, inactivando-as ou levando sua precipitao Podem ser usados como antispticos ou desinfectantes

Aldeidos

So molculas altamente reactivas Aco bactericida, fungicida, virucida e esporocida; podem ser usados como esterilizantes qumicos Agentes alquilantes; combinam-se com cidos nucleicos e protenas e causam a sua inactivao.

Gases esterilizantes
Usados para esterilizao a frio de materiais sensveis ao calor (ex. Placas de Petri descartveis; material clnico de plstico, etc.) Aco microbicida e esporocida Agentes alquilantes; combinam-se com protenas e cidos nucleicos.