Pulpzyme HC INDUSTRIA DE CELULOSA Y PAPEL: EN BUSCA DE UN FUTURO MAS VERDE.

INTRODUCCIN Las empresas han mostrado su preocupacin por la gran contaminacin que produce la industria del papel, y estn convencidos en biosoluciones que reemplacen a los productos qumicos txicos que ellos utilizan. Esta industria proporciona a los consumidores con 360 millones de toneladas de impresos, peridicos y cajas de cartn al ao. Muchos pensaron que con el internet, el papel quedara en la historia, sin embargo el consumo ha crecido un 60% en los ltimos 20 aos.

Son diferentes los procesos de refinamiento del papel, desde que se cae un rbol hasta que se encuentre el papel en nuestras manos, atravesando procesos qumicos, semiquimicos o mecnicos. Mediante el uso de enzimas, las fbricas de papel pueden ahorrar recursos y costos al tiempo que mejora la calidad general del trabajo final, gracias a su capacidad degradadora.

En el proceso qumico de las astillas de madera se cocinan en una presin fuerte alcalina o cida que desintegra las virutas en fibras individuales. La suspensin resultante, llamado brownstock, tiene un color marrn por la lignina que contiene, que se libera como cuando se cocinan las patatas fritas. Despus de la coccin, la lignina se lava de las fibras, que pueden ser opcionalmente blanqueadas para producir una pasta lista para la fabricacin de papel. La revista en sus manos y la bolsa que contiene sus alimentos ambos provienen de la pulpa qumica, lo que hace el papel fuerte. La principal razn del blanqueo de la pulpa es la de eliminar el contenido de lignina residual evitando as causar daos en la calidad de la fibra. ya que la lignina produce una decoloracin marrn en el papel final. La eliminacin de la lignina, que es un material qumicamente complejo, produce una pulpa con un matiz ms luminoso. En esta etapa se le otorga a la pulpa la blancura que corresponda segn los estndares establecidos para su comercializacin. El proceso de blanqueo del papel requiere muchos productos qumicos. La planta de blanqueo utiliza normalmente pasta qumica con el dixido de cloro y perxido de hidrgeno para lograr un color ms brillante. "La xilanasa Pulpzyme HC puede, ya en la fase anterior del lavado del brownstock, abrir la estructura de la fibra y la liberacin de la lignina de manera que se puede lavar con mayor facilidad. Esto significa que las fbricas pueden ahorrar en productos qumicos de blanqueo " (Bo Damgaard, Gerente de Mercadotecnia Global de Novozymes) http://www.novozymes.com/en/sustainability/sustainable-solutions/our-solutions-across-

industries/pulp-and-paper/turning-to-a-greener-page-for-paperproduction/Pages/default.aspx

Objetivo: Dado el inters de la aplicacin de enzimas como las xilanasas en la industria del papel, en las denominadas tecnologas limpias, el presente trabajo se enmarca en dos objetivos: - Por un lado, conocer el papel de las enzimas degradadoras en la industria del papel. As como ampliar el conocimiento de los aspectos bsicos de biologa molecular de estas enzimas.

REVISIN DE LA LITERATURA El xilano El xilano es un polisacrido muy abundante en la naturaleza; el ms abundante despus de la celulosa (Gallardo Oscar, Diaz Pilar y Pastor Javier. 2007). Forma parte de las hemicelulosas presentes en la matriz amorfa de la pared celular secundaria de los tejidos lignificados de las plantas leosas (Gallardo Oscar, Daz Pilar y Pastor Javier. 2007), aunque tambin se puede encontrar en la matriz de paredes primarias de clulas en crecimiento y de semillas y bulbos, donde tiene funcin de reserva. Es la principal hemicelulosa de las maderas duras (angiospermas), representando un 15 - 30% del peso seco de la pared vegetal, y es menos abundante en el caso de las maderas blandas (gimnospermas), donde representa un 7 - 12% del peso seco (Gallardo Oscar, Diaz Pilar y Pastor Javier. 2007). Su funcin parece ser bsicamente estructural, manteniendo la integridad de la pared celular junto con otras hemicelulosas, la celulosa, las pectinas y la lignina. Adems, junto con la lignina, ayuda a proteger las microfibrillas de celulosa de la biodegradacin. El xilano se encuentra unido a otros componentes de la pared celular, actuando como nexo de unin entre la lignina y el resto de polmeros de la pared secundaria de las plantas (Gallardo Oscar, Diaz Pilar y Pastor Javier. 2007) Tambin el xilano puede unirse a la celulosa y a otras cadenas de xilano y hemicelulosas mediante enlaces covalentes y no covalentes (puentes de hidrogeno y fuerzas de Van der Waals). ENZIMAS DEGRADADORAS DEL XILANO La capacidad de degradar xilano est ampliamente distribuida entre los microorganismos saprofitos, tanto bacterias como hongos, as como entre la microbiota del rumen. Estos

microorganismos poseen complejos sistemas enzimticos para llevar a cabo la degradacion del xilano. Se requiere un conjunto amplio de enzimas, para la completa degradacin del xilano. Eso debida a la heterogeneidad y elevada complejidad estructural de este (Gallardo Oscar, Diaz Pilar y Pastor Javier. 2007) Las enzimas degradadoras del xilano se clasifican en dos grupos: Enzimas que despolimerizan el esqueleto principal de xilosas: endoxilanasas. Enzimas que eliminan las cadenas laterales del xilano: accesorias o desramificantes.

Xilanasas: hidrolizan los enlaces internos entre molculas de xilosa. Existen molculas de diferente grado de polimerizacin, por lo que existe una gran variedad de xilanasas. Dado que el xilano es un polmero de elevado grado de polimerizacin, no puede penetrar dentro de los microorganismos para ser degradado, de manera que las xilanasas han de ser secretadas al medio extracelular, normalmente mediante sistemas de secrecin. Mecanismo cataltico:

APLICACIONES DE LAS XILANASAS Los sistemas enzimticos microbianos suponen actualmente un importante potencial biotecnolgico aplicable en numerosas industrias en el mbito de las denominadas tecnologas limpias o tecnologas sostenibles. En ellas se han introducido etapas biotecnolgicas en procesos productivos convencionales para dar lugar a unos procesos de produccin alternativos de impacto ambiental minimizado. Las industrias que ms se han beneficiado o se pueden beneficiar de la aplicacin de enzimas son principalmente las papeleras, textiles, agrcolas y de alimentacin, aunque recientemente est aumentando el inters por parte de industrias de bioconversion y sntesis de nuevos compuestos. En este sentido, las hemicelulasas bacterianas, y en especial las xilanasas, tienen importantes aplicaciones en la industria debido a su enorme potencial para modificar y transformar la lignocelulosa y otros materiales de la pared celular vegetal, muy abundantes en la biomasa vegetal, ampliamente utilizada como materia prima en un gran nmero de procesos industriales. Sus primeros usos en este sentido consistieron en su adiccin a las formulaciones de piensos animales, expandindose despus su utilizacin a las industrias de alimentacin, textil y papelera. Desde entonces el uso biotecnolgico de estas enzimas se ha incrementado de manera importante, cubriendo un amplio rango de sectores industriales. As, en la actualidad, las xilanasas juntamente con celulasas y pectinasas representan el 20% del mercado global de enzimas industriales. Actualmente, la principal aplicacin industrial de las xilanasas se da en la industria papelera. En ella, el tratamiento con xilanasas de la pasta de papel, previo al blanqueo qumico, comporta importantes beneficios econmicos y ventajas medioambientales (Gallardo Oscar, Diaz Pilar y Pastor Javier. 2007)

Las xilanasas no eliminan directamente la lignina, pero facilitan su extraccin de la pasta de papel al degradar el xilano, presente en los complejos xilano-lignina o reprecipitado sobre las fibras tras la coccin kraft. De esta manera, la aplicacin de xilanasas potencia el blanqueo qumico posterior, por lo que su utilizacin permite reducir un 20 - 25% el empleo de cloro para obtener el mismo grado de blancura y calidad en la pasta de papel, reducindose de esta forma la generacin de residuos organoclorados (AOX) un 15 - 20% (Gallardo Oscar, Daz Pilar y Pastor Javier. 2007) Adems, la reduccin en la cantidad de agentes qumicos requeridos para el blanqueo ha contribuido a la sustitucin del cloro elemental (Cl2) por el dixido de cloro (ClO2), mucho menos contaminante, dando lugar a las secuencias de blanqueo ECF (elemental chlorine free), o incluso a la eliminacin total de compuestos clorados y su reemplazo por otros agentes blanqueantes como el perxido de hidrogeno (H2O2) y el ozono (O3), en las denominadas secuencias de blanqueo TCF (total chlorine free). La aplicacin de xilanasas en el blanqueo de pastas papeleras puede modificar las propiedades del refino de estas, observndose en algunos casos que las pastas tratadas enzimticamente requieren un mayor nmero de revoluciones en el proceso de refinado para alcanzar las mismas propiedades que las pastas no tratadas (Vicuna et al., 1995). Tambin se ha observado que la hidrolisis del xilano disminuye la retencin de agua por las hemicelulosas y las propiedades fsicas de resistencia del papel no se ven afectadas. (Roncero et al., 2003). En relacin con el efecto de las xilanasas sobre la blancura del papel, se ha visto que su utilizacin puede reducir adems el envejecimiento o el amarilleamiento. (Buchert et al., 1997). Otra estrategia ms reciente para el blanqueo enzimtico de pastas papeleras consiste en eliminar directamente la lignina residual utilizando para ello enzimas degradadoras de lignina (lacasas y peroxidasas). MICROORGANISMOS UTILIZADOS Las enzimas estudiadas provienen de las cepas bacterianas Paenibacillus barcinonensis BP-23 y Bacillus sp. BP-7 Estas cepas fueron aisladas a partir de suelo de arrozal del Delta de L'Ebre (lugar rico en materia vegetal en descomposicin y por tanto adecuado para aislar degradadores de celulosa y xilano), mediante cultivos de enriquecimiento en paja de arroz. Estas cepas presentaban elevada actividad degradadora de xilano, celulosa, pectina, tributirina y aceite de oliva XILANASAS EN EL MERCADO Xilanasa A (XynA) de Bacillus subtilis, especficamente es una endoxilanasa (1,4--Dxylan xylanohydrolase). Es un pptido de 28 aminocidos. No tiene actividad sobre celulosas. Las condiciones ptimas de actuacin de XynA fueron determinadas, siendo estas 60 C de temperatura y pH 6, aunque mantiene un porcentaje elevado de actividad en mrgenes amplios alrededor de estos valores (de 40 a 70 C y pH de 4,5 a 8,5). Xilanasa B (XynB) de Paenibacillus barcinonensis. Esta xilanasa haba sido previamente caracterizada y presentaba una actividad inusualmente alta.

 Esta enzima tiene potencial aplicacin en la industria alimentaria y farmacutica INVESTIGACIONES EN CURSO EXPRESIN DE XILANASA EN LEVADURAS. Se ha conseguido ensayar con xitos la expresin y secrecin de la xilanasa XynA de Bacillus sp. BP-7 en Saccharomyces cerevisiae, como primer paso para su posible utilizacin biotecnolgica en la industria alimentaria. (Gallardo Oscar, Daz Pilar y Pastor Javier. 2007)

OTROS BENEFICIOS DE LAS XILANASAS UTILIZADAS EN EL BLANQUEO DE LA PASTA DE PAPEL Actualmente se est llevando a cabo nuevos ensayos para cuantificar la efectividad potenciadora del blanqueo de XynA en nuevas secuencias ECF y en secuencias TCF. (Gallardo Oscar, Daz Pilar y Pastor Javier. 2007) En este sentido, seria tambin de inters la utilizacin de la xilanasa doble mutante XynB S15L/M93V en ensayos papeleros, para comprobar si su aplicacin a las pastas papeleras a temperaturas ms altas y durante ms tiempo, gracias a su aumentada termoestabilidad, permite mejorar los resultados obtenidos hasta el momento con la xilanasa B salvaje. (Gallardo Oscar, Daz Pilar y Pastor Javier. 2007) MTODOS CONVENCIONALES DE BLANQUEAMIENTO DE PAPEL

La siguiente etapa en el proceso de obtencin del papel es el del blanqueo de la pulpa. Durante el blanqueo se completa el procesado de la pulpa, consiguiendo exactamente las caractersticas deseadas en cuanto a cantidades de lignina, hemicelulosa, residuos orgnicos. (http://www.textoscientificos.com/papel/pulpa/blanqueo) El mtodo ms antiguo de obtener papel blanqueado, era someter a las telas, que se utilizaban como materia prima, a decoloracin natural mediante exposicin a la luz solar, pero el efecto de la radiacin ultravioleta produca sobre la tela una accin de debilitamiento que no resulta nada conveniente. (http://www.textoscientificos.com/papel/pulpa/blanqueo) A finales del siglo XVIII se dispona de cloro y de hipoclorito para el blanqueo. Concretamente, el hipoclorito clcico (Ca(ClO)2) fue el compuesto elegido por su facilidad de preparacin y transporte en forma de polvo. (http://www.textoscientificos.com/papel/pulpa/blanqueo) El hipoclorito fue prcticamente el nico agente empleado para el blanqueo hasta los aos 30 del pasado siglo, al aplicar comercialmente el cloro elemental como agente blanqueador de pulpa. Este procedimiento se revel muy interesante cuando se aplic a las pulpas Kraft, las cuales alcanzaban un grado de blancura muy alta, pues la accin del cloro sobre la pulpa es el de eliminar la lignina, compuesto muy abundante en las pulpas Kraft. El principal problema para la implantacin del mtodo al cloro era la resistencia de los materiales, lo que se pudo resolver con la aparicin del acero inoxidable. (http://celulosapapel.blogspot.com/2007/12/curso-de-papel-clase-8-mtodos-de.html)) El siguiente paso de vital importancia en el proceso de blanqueo de pastas es la aplicacin del dixido de cloro (Cl2O). La accin blanqueadora de este compuesto se

descubri en 1920, pero su primera aplicacin comercial no tuvo lugar hasta los aos cincuenta, pues adems de problemas en cuanto a resistencia de materiales, exista el problema de la elevada toxicidad y el riesgo de explosiones (explota a concentraciones en fase acuosa superiores al 15%). (http://www.textoscientificos.com/papel/pulpa/blanqueo) Otros agentes blanqueadores importante son el hidrosulfuro, utilizado para blanquear pulpas mecnicas; hacia mediados de siglo se introdujo tambin el perxido, en forma de perxido de sodio o d hidrgeno. (http://www.textoscientificos.com/papel/pulpa/blanqueo) Un agente blanqueador muy potente tambin es el oxgeno, pero no fue empleado hasta los aos 70; la mayor ventaja radica en que la materia prima es gratuita, pues proviene del aire, pero el proceso de separacin puede ser demasiado costoso si no es para fbricas de tamao considerable. Otro agente que puede ser utilizado es el ozono, pero ste presenta problemas de toxicidad y peligro en el manejo. (http://celulosapapel.blogspot.com/2007/12/curso-de-papel-clase-8-mtodos-de.html) La eleccin del mtodo de blanqueo, adems de atender a requerimientos tcnicos de efectividad y viabilidad econmica y tcnica, ha de contar como parmetro de decisin el efecto contaminante sobre el medio ambiente, tanto en vertidos gaseosos como acuosos, y en menor medida, slidos, ya que los compuestos utilizados como los compuestos residuales de los tratamientos de blanqueo, que son procesos oxidativos, pueden producir intermedios peligrosos y residuos nocivos para la salud humana y del entorno natural, por lo que en la evaluacin de alternativas, ha de considerarse el coste de equipos adecuados para el tratamiento de dichos compuestos. (http://www.textoscientificos.com/papel/pulpa/blanqueo)
CONCLUSIONES El principal papel o labor de las enzimas degradadoras en la industria del papel es disminuir el impacto ambiental que causan las tecnologas convencionales, y causar el mnimo impacto al medio ambiente. En este caso especfico analizamos una xilanasa sintetizada por Novozymes, usada para destruir los enlaces del xilano dentro de la hemicelulosa de la clula vegetal. Tambin se analizaron brevemente el proceso bioqumico que realiza esta enzima y el beneficio que ello conlleva.

BIBLIOGRAFA Gallardo Oscar, Daz Pilar y Pastor Javier. Cloning and production of Xylanase B from Paenibacillus barcinonensis in Bacillus subtilis hosts. Biocatalysis and Biotransformation, Barcelona (Espaa). March August 2007; 25(2_4): 157_162. Disponible en: http://www.scribd.com/doc/2595882/Caracterizacion-de-Nuevas-Xilanasas-BacterianasIngenieria-de-Enzimas-con-la-Xilanasa-XynB-de-Paenibacillus-barcinonensis. Consultado: 7 de octubre de 2011. Blanqueo de la pulpa de papel. Consultado: 24 de octubre de 2011. Disponible en: http://www.textoscientificos.com/papel/pulpa/blanqueo.

Cost effective celluloses boost runnability of recycled furnishes. Disponible en: http://papermart.in/2009/11/16/cost-effective-celluloses-boost-runnability-of-recycledfurnishes/. Consultado: 7 de octubre de 2011. Curso de Papel. Clase 8: Mtodos de blanqueo de pulpa (Parte 2) . consultado: 24 de octubre de 2011. Disponible en: http://celulosapapel.blogspot.com/2007/12/curso-de-papel-clase-8mtodos-de.html Enzyme application in paper making process. Disponible en: http://papermart.in/2009/09/21/enzyme-application-in-paper-making-process/. Consultado: 7 de octubre de 2011. Turning to a greener page for paper production. Disponible en: http://www.novozymes.com/en/sustainability/sustainable-solutions/our-solutions-acrossindustries/pulp-and-paper/turning-to-a-greener-page-for-paperproduction/Pages/default.aspx. Consultado: 7 de octubre de 2011.

UNIVERSIDAD DE CUENCA
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA DE INGENIERA AGRONMICA

TRABAJO DE BIOTECNOLOGA

TEMA: XILANASAS EN LA INDUSTRIA DEL PAPEL

REALIZADO POR: PABLO ROJAS Y LUIS MEDINA

CICLO: SPTIMO

Octubre 2011