Fundamentos da Engenharia Gentica

No mbito do estudo da Gentica faz todo sentido falar sobre os Fundamentos da Engenharia Gentica. Esta a tcnica que permite a interveno no genoma de um organismo construindo novos genomas por recombinao de segmentos de DNA de um mesmo ou diferentes cromossomas. Assim, a engenharia gentica permite conhecer melhor algumas doenas humanas, evoluir os mtodos de agricultura relativamente aos adubos e pesticidas e permite ainda produzir produtos sedutores indstria (os transgnicos organismos em que todas as clulas so portadoras de material gentico estranho que lhe foi introduzido por tcnicas de engenharia gentica). Foi no sculo XX que foi conseguido o isolamento das enzimas de restrio. As enzimas de restrio so produzidas por bactrias que reagem assim num mecanismo de defesa contra os vrus. Existem dois tipos de enzimas de restrio: do tipo I e do tipo II. Para a tcnica do DNA recombinante (tcnica que iremos abordar) as enzimas teis so as do tipo II, uma vez que permitem um maior controlo sobre o local de corte de uma dada enzima e as extremidades geradas. Reconhecem e actuam sobre sequncias especificas de DNA, catalizando a destruio de uma ligao fosfodister entre dois nucletidos consecutivos ligados a determinadas bases, isto , fragmentam o DNA por hidrlise em locais especficos (as zonas de restrio). A especificidade dada pela sequncia de nucletidos que a enzima reconhece, dividindo o DNA em fragmentos menores. Estes fragmentos contm nas suas extremidades a sequncia que foi reconhecida pela enzima de restrio. As extremidades podem denominar-se coesivas se estas se ligarem facilmente, atravs da formao de pontes de hidrognio, ou no coesivas se a ligao com estas for menos eficiente. Podemos ento dizer que as extremidades so as pores terminais dos fragmentos de DNA originados pelo corte efectuado pelas enzimas de restrio. Podem ligar-se, por complementaridade, a outro DNA por aco de outras enzimas denominadas ligases do DNA. Estas catalizam o processo que permite que fragmentos de DNA se voltem a ligar. Algumas enzimas de restrio mais faladas so as EcoR I, Hind III, e Taq I. Por exemplo, a enzima Taq I reconhece a poro da hlice dupla 5 TGCA 3 e s cortar a molcula de DNA se encontrar esta sequencia de bases nas duas cadeias e lidas sempre de 5 para 3, fazendo um corte entre o nucletido de timina (T) e o nucletido de guanina (G) em cada cadeia. A tcnica em que temos vindo a falar baseia-se na transferncia de genes de uma molcula de DNA para outra, ou seja, de um organismo para outro. Por isso, necessrio algo que leve o material gentico do genoma de onde foi retirado (o DNA a ser clonado ou inserto) para o genoma que o vai receber. A este transportador d-se o nome de vector. Existem vrios vectores (DNAs receptores): os plasmdeos das bactrias (molculas de DNA de cadeia de cadeia dupla e circular com capacidade de replicao autnoma no citoplasma de bactrias) e os vrus. Alguns plasmdeos possuem genes que lhes conferem resistncia a um antibitico, o que permite localizar as bactrias que tm o DNA recombinante. Este DNA o que resulta da introduo artificial, de uma sequncia de DNA de um organismo no genoma de outro a partir da aco das enzimas de restrio, ligases e vectores. A tcnica do DNA recombinante tem sido bastante desenvolvida, visto que tem muitas finalidades, tais como: . A produo de insulina;

. A produo de algumas protenas do sangue; . A produo de hormonas do crescimento; . A produo de alguns tipos de activadores das defesas orgnicas para o tratamento do cancro; . A criao de vacinas sintticas contra, por exemplo, a malria e hepatite B; . A criao e desenvolvimento de biotecnologias para a pesquisa segura de substncias cuja manipulao envolve alto risco biolgico; . Teste de paternidade. Nesta tcnica as bactrias so denominadas por clulas hospedeiras do gene a ser copiado. As clulas hospedeiras podem ser tambm leveduras ou outras clulas eucariticas. Em suma, a tcnica do DNA recombinante consiste em, utilizando as enzimas de restrio bacterianas cortar dois DNAs diferentes e, pela aco das ligases, unir os segmentos resultantes e formar um DNA recombinante. Recolocado na bactria, o plasmdeo recombinante duplica ao mesmo tempo que o DNA bacteriano, permitindo a formao de novas cpias, num processo de multiplicao apelidado clonagem molecular. Apesar de a clonagem molecular ser eficiente, muito trabalhosa, delicada e demorada. Sendo assim, tem-se vindo a desenvolver a tcnica do PCR (tcnica da reaco em cadeia da polimerase), tcnica que muito mais rpida para a produo de cpias de DNA. No podemos acabar esta apresentao sem falar nos organismos geneticamente modificados (OGM). Podem ser plantas ou animais em cujo genoma foram introduzidos outros genes que determinam outras caractersticas. Acerca destes levantam-se algumas questes: . Estes organismos so prejudiciais sade humana? . Quais os efeitos que provocam a nvel ambiental? . Vo perturbar o equilbrio das populaes naturais?