mbito farmacutico

fitoterapia

PaClitaXEl

DEsCuBRiMiEnto, PRoPiEDaDEs Y uso ClniCo

El paclitaxel es uno de los agentes antitumorales ms prometedores desarrollados en las ltimas dcadas. Recientemente se cumplieron 30 aos desde el descubrimiento del modo de accin de este frmaco, obtenido a partir de un extraco vegetal, y 15 desde la aprobacin de su uso para el tratamiento del cncer de mama. En este trabajo se recuerda el proceso que hizo posible que hoy dispongamos de esta valiosa opcin teraputica.
JOSEP J. CENTELLES
Dr. en Qumica. Profesor Titular. Departamento de Bioqumica y Biologia Molecular. Facultad de Biologa. Universitat de Barcelona.

SANTIAGO IMPERIAL
Dr. en Qumica. Profesor Titular. Departamento de Bioqumica y Biologia Molecular. Facultad de Biologa. Universitat de Barcelona.

imagen del tejo presente en los jardines del edificio histrico de la universitat de Barcelona.

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l paclitaxel es un agente antitumoral que se emplea para el tratamiento de algunos tipos de cncer debido a su capacidad de inhibir la multiplicacin de las clulas tumorales. Identificado y extrado inicialmente a partir de la corteza del tejo (Taxus brevifolia), actualmente su uso est recomendado en el tratamiento del cncer de mama (tabla 1) y en combinacin con otros compuestos (cisplatino), constituye la quimioterapia de primera lnea para el tratamiento del cncer de ovario. El descubrimiento del paclitaxel es un ejemplo muy ilustrativo de cmo los conocimientos adquiridos durante siglos en la medicina tradicional y en el estudio de los productos naturales pueden ser aplicados por la industria farmacetica y la comunidad cientfica para el desarrollo de nuevos frmacos y constituye una muestra ms de la importancia que puede llegar a tener en el futuro el preservar la biodiversidad de nuestro planeta.

caractersticas y la historia del rbol europeo (Taxus baccata), el descubrimiento no parecer tan sorprendente.

caracterSticaS botNicaS DeL teJo

El tejo es un rbol que puede alcanzar un gran tamao, una altura de hasta 20 m y un tronco de hasta 1,5 m de dimetro (vase la imagen de apertura de este artculo). Adems de por su tamao, el tejo destaca por que es muy longevo: algunos ejemplares han superado los 1.500 aos de vida y se consideran los rboles ms antiguos de Europa. Las hojas del tejo son perennes, tienen entre 10 y 30 mm de longitud y estn dispuestas en dos hileras opuestas, de color verde oscuro por la cara superior y amarillento por el envs. Su fruto es carnoso y de un color rojo vivo y brillante. Otra particularidad interesante del tejo es que tanto las hojas, las ramas como la madera contienen alcaloides muy txicos, denominados en su conjunto taxinas, que actan sobre el sistema nervioso central, paralizndolo. De hecho en el tejo todo es venenoso salvo la envoltura roja que rodea el fruto. La ingestin de tejo causa en un principio la aceleracin del pulso cardiaco, y

iDeNtificaciN

El paclitaxel se aisl como resultado de un programa pblico de identificacin de nuevos compuestos antitumorales desarrollado en Estados Unidos a finales de la dcada de los 60 y principios de los 70 del siglo xx. En este programa se tomaron muestras de miles de plantas de diferentes partes del mundo y se seleccionaron en funcin de su actividad. Entre ellas se encontraban muestras de corteza del tejo del Pacfico (Taxus brevifolia) que crece en la costa occidental de los Estados Unidos y de Canad. Dichas muestras presentaron una potente actividad citotxica y antileucmica. Al analizar el principio activo del extracto se identific el paclitaxel. Visto con la prespectiva del tiempo, no es de extraar que a partir del tejo se hayan obtenido molculas interesantes desde el punto de vista farmacolgico. Nadie poda entonces prever que se fuera a obtener precisamente el paclitaxel, pero cuando en Fig. 1. Estructura del paclitaxel los parrafos siguientes se describan las

TABLA 1. FasEs DEl DEsaRRollo DEl PaClitaXEl CoMo agEntE QuiMiotERaPutiCo

1963 1971 1979 1983 1991 1994 1998 2000

El national Cancer institute de Estados unidos observa actividad antitumoral en extractos de corteza de tejo. se identifica el principio activo: paclitaxel. se determina el modo de accin del paclitaxel. Comienzan los ensayos clinicos Fase i. la empresa farmacetica Bristol-Myers squibb se hace cargo del desarrollo y comercializacin del paclitaxel bajo el nombre de Taxol. se publica la sintesis total del paclitaxel. se autoriza el uso de Taxol en Estados unidos para el tratamiento del cncer de mama. se aprueba el uso clnico de Taxol para el tratamiento del carcinoma de ovario se permite el desarrollo de paclitaxel como medicamento genrico.

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despus ste se va volviendo ms lento e irregular hasta que finalmente se produce la muerte por parlisis respiratoria. longevidad, como smbolo de la vida eterna. Durante siglos tambin fue costumbre plantarlo al construir grandes monumentos para que perdurara y fuera testigo de su historia. La madera del tejo es de color rojizo y de una dureza extraordinaria, lo que la hace muy apta para ebanistera y talla. No obstante

apuNteS HiStricoS

La toxicidad del tejo y su extraordinaria longevidad, que le hace parecer inmortal, ha hecho que, desde tiempo inmemorial, fuese considerado como un rbol sagrado. As El procEso quE ha pErmitido disponEr dEl los pueblos celtas lo veneraban y sus paclitaxEl como agEntE quimiotErapEtico sacerdotes, los druidas, lo usaban en sus rituales. Otros pueblos de la Es un EjEmplo muy ilustrativo dE cmo los pennsula ibrica como los antiguos conocimiEntos adquiridos durantE siglos cntabros y astures, as como algunos de los pobladores de la Galia, lo puEdEn sEr aplicados para El dEsarrollo dE utilizaban como veneno cuando eran nuEvos frmacos capturados por sus enemigos. Uno de los casos mejor documentados es la escasez de piezas de suficiente grosor, debido al lento crecimienel que describe Julio Csar en su tratado sobre la Guerra de las to del rbol, limita su uso para estos fines. Su dureza, unida a su reGalias (libro IV), en el cual narra como Catocoluus, jefe de los sistencia al frotamiento, ha hecho que durante siglos la madera de eburones, se ha suicidado tomando extracto del tejo. Hoy sabetejo haya sido muy utilizada tambin para fabricar los ejes de los mos que los eburones eran una tribu de descendencia germnicarros. Adems, durante la Edad Media fue muy empleada para la ca que habit el norte de la Galia, entre el ro Mosa y el Rin. elaboracin de arcos y ballestas, por su resistencia y flexibilidad. La llegada del cristianismo no cambi el aura mstica asoCuenta la leyenda que la ballesta de Guillermo Tell era de esta maciada con el tejo. Los cristianos, al adaptar algunas de las tradera. Hubo un tiempo en que los bosques de tejos tenan una enordiciones paganas, construyeron iglesias y cementerios junto me importancia estratgica. Tener muchos tejos significaba que el a los tejos en lugares que ya haban sido sagrados para los suministro de armas en tiempos de guerra estaba garantizado. celtas. El tejo se plantaba debido a su follaje perenne y su

formaciN DeL HeteroDDmero

iNiciaciN

poLimerizaciN, eLoNgaciN

maps, mg2+ gtp a-tubulina ca2+, 0c centro de nucleacin polimerizacin normal

microtbulos estabilizados 13 protofilamentos 25 nm dimetro protofilamento

b-tubulina Heterodmero (ab) taxol

polimerizacin favorecida por taxol

microtbulos estabilizados 12 protofilamentos 22 nm dimetro

Fig. 2. Mecanismo de polimerizacin de los microtbulos. En la parte inferior del esquema se observa la modificacin de los microtbulos en presencia de paclitaxel

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piruvato

gliceraldehido-3-p

DXp

mep

hidroximetilbutenil difosfato

isopentenil difosfato

dimetilalil difosfato

Fig. 3. Esquema simplificado de la biosntesis del paclitaxel a partir de isopentenil difosfato y dimetilaldifosfato. El paclitaxel se sintetiza a partir

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taxol

baccatina iii

VitamiNaS HormoNaS caroteNoiDeS

taxadieno

geranilgeranil difosfato

de ggPP, formado en los cloroplastos a travs de la via metablica del metileritritol fosfato (MEP).

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las no deseadas, por ejemplo las cancerosas. La parada del ciclo puede efectuarse en la interfase o en la mitosis, aunque la mayora de los compuestos antitumorales, entre ellos el paclitaxel, actan sobre la mitosis, es decir son compuestos antimitticos. Durante la profase desaparece la membrana nuclear y el nucleolo y se hacen patentes un cierto nmero de cromosomas constituidos por 2 cromtidas unidas por un estrangulamiento denominado centrmero. Cada cromtida es una larga cadena de ADN. Durante la metafase se hace visible el huso donde, a travs del centrmero, se insertan los cromosomas que se desplazan hasta situarse en el ecuador del huso. Durante la anafase el centrmero se divide y cada cromosoma se separa en sus dos cromtidas. Los centrmeros avanzan a lo largo de las fibras del huso en direcciones opuestas, arrastrando cada uno una cromtida. Finalmente, durante la telofase las cromtidas se descondensan, se reeStructura DeL pacLitaXeL constituye la membrana nuclear alrededor de cada conjunto croEl paclitaxel tiene una estructura qumica muy compleja en mosmico y tiene lugar la divisin del citoplasma. Para entender la que destaca un esqueleto hidrocarbonado formado por tres el efecto del paclitaxel es importante conocer cmo se forma y se ciclos de 6, 8 y 6 carbonos (fig. 1, en amarillo) polisustituido degrada el huso mittico, puesto que esta estructura celular es de gran imEl dEscubrimiEnto dEl paclitaxEl constituyE portancia durante la proliferacin ceuna muEstra ms dE la importancia dE lular. Si no es posible formar el huso, las clulas no podrn duplicarse, eviprEsErvar la biodivErsidad dE nuEstro tandose as su proliferacin. planEta, ya quE En las EspEciEs En pEligro dE El huso mittico est formado por Extincin sE puEdE Encontrar la clavE para El microtbulos, que son tubos formados por combinacion de 2 tipos de dEsarrollo dE los frmacos quE nEcEsitE la protenas: a-tubulina y b-tubulina humanidad En El futuro (fig. 2). Estas protenas forman heterodmeros ab, capaces de agruparse en polimeros (microtbulos) en presencia de otras protenas con cuatro metilos y ocho funciones oxigenadas (entre ellas, denominadas MAPs (del ingls microtubul associated protein, una de b-fenilisoserina que esterifica la posicin C-13). La protenas asociadas a microtbulos), de GTP y de Mg2+. Los mimolcula posee un total de once estereocentros. La determinacin de su estructura en 1971 a partir del ancrotbulos poseen dos extremos. En uno de ellos, identificado lisis mediante difraccin por rayos X fue todo un reto para con un signo matemtico (), es donde se inicia la nucleacin los cientficos de la poca; as como lo fue tambin posteriory en el otro (+) el microtbulo va creciendo. Una vez iniciado el mente su sntesis total publicada en 1994. crecimiento del microtbulo, ste adopta un aspecto cilndrico, de unos 25 nm de dimetro, con 13 protofilamentos que forman el crculo del microtbulo. mecaNiSmo De acciN Los microtbulos son estrucutras dinmicas, lo que signifiEl paclitaxel, debido a su actividad biolgica, se clasifica dentro del ca que se pueden alargar aadindose ms heterodmeros (tugrupo de las denominados frmacos antimitticos. Para entender bulina-GTP) en el extremo (+); pero tambin pueden acortarse mejor su modo de accin conviene recordar que, si no se duplican, (si el GTP se hidroliza) y liberarse heterodmeros (tubulinalas clulas se encuentran en estado de reposo, tambin llamado fase GDP) del extremo (). Durante la interfase, los microtbulos G0. Por el contrario las clulas que proliferan siguen un ciclo, denoforman una red desde el centro por todo el citoplasma, pero al minado ciclo celular, que consta de dos etapas: la mitosis, tambin comenzar la mitosis, los microtbulos se disgregan para poder llamada fase M o de divisin, y la interfase, que incluye a su vez las formar el huso mittico. En este momento, los microfilamenfases G1, S y G2. En la interfase se produce el crecimiento celular tos se encuentran en un estado poco habitual de rpido ensamcon sntesis de protenas y cidos nucleicos necesario para que, dublaje y desensamblaje, lo cual explica la extrema sensibilidad rante la fase M, la clula se pueda dividir en dos clulas hijas. del huso a distintos compuestos que se unen a la tubulina. La interfase consta de la fase G1 o fase de crecimiento (en la que se sintetiza RNA y protenas), la fase S o fase de sntesis de DNA y la fase G2 o segunda fase de crecimiento (en la ANTIMITTICOS que se sintetiza ms RNA y protenas). En la fase M o mitosis Los frmacos anticancergenos responsables de afectar la dinmise produce la divisin celular, y consta de cuatro etapas: proca de los microtbulos o de unirse a tubulina son los denominafase, metafase, anafase y telofase. dos frmacos antimitticos, pues alteran el buen funcionamiento Una parada o bloqueo del ciclo celular puede inhibir la prolidel huso mittico. Entre estos antimitticos destacan los frmaferacin celular y, por tanto, interrumpir el crecimiento de clucos responsables de inhibir el ensamblaje del microtbulo (famiLa importancia de este rbol a lo largo de la Historia ha quedado reflejada tambin en la geografia. Sin ir ms lejos, son numerosos los topnimos de pueblos espaoles que derivan del tejo, como Teixeiro, Teixido o El Tejo. Estos pueblos le deben su nombre y son un reflejo de la importancia que tuvo ste rbol en pocas pasadas. En cuanto a sus propiedades curativas, son conocidas desde hace milenios. El emperador romano Claudio public un edicto en el que sealaba al tejo como el mejor antdoto contra las picaduras de las serpientes. A lo largo de la historia se ha usado tambin como abortivo. No obstante, con el tiempo, la utilidad medicinal del tejo fue quedando en desuso hasta el descubrimiento del paclitaxel a principios de la dcada de los 70 del siglo pasado.

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lias de la colchicina y la vinblastina) y los responsables de promover la unin y estabilizar el microtbulo (familia del paclitaxel). La colchicina, un alcaloide que se extrae del azafrn silvestre, se une al heterodmero y evita su polimerizacin, con lo que no es posible formar el huso mittico. El modo de accin del paclitaxel tambin evita la formacin del huso mittico, pero en este caso provocando la formacin de un polmero demasiado largo. El paclitaxel se une a la b-tubulina, y con ello favorece la formacin de largos polmeros, incluso en presencia de GDP, que no podrn acortarse. El microtbulo estabilizado con paclitaxel posee 12 protofilamentos (en lugar de los 13 protofilamentos normales) y un dimetro inferior al normal (de 22 nm). La estabilizacin de los microtbulos provoca la prdida de funcin del huso, la consiguiente parada del ciclo celular en la transicin metafase/anafase y, finalmente, la muerte celular.

transcurre en unas diez etapas para dar lugar a la baccatina III. En las ltimas etapas de la ruta de sntesis de paclitaxel tiene lugar la unin de la cadena lateral de N-benzoil-3-fenilisoserina.

obteNciN
A pesar de su inters como agente quimioterapetico, el uso del paclitaxel se ha visto restringido como consecuencia de las limitaciones de disponibilidad derivadas de las dificultades para su obtencin. Entre ellas cabe destacar su baja concentracin en la corteza del tejo (0,007% del peso seco) y el elevado coste del proceso de extraccin. As, se requiere procesar unos 750 rboles para obtener 1 kg de paclitaxel. Adems, como ya se ha indicado, el tejo es un rbol de crecimiento muy lento que necesita unos 70 aos para alcanzar los 7-9 m de altura y los 25 cm de dimetro necesarios para la correcta explotacin de la corteza. A ello hay que aadir que la tala indiscriminada del tejo podra causar la rpida extincin de la especie, a la vez que comprometera la propia fuente natural del paclitaxel. La escasez y las dificultades de extraccin del paclitaxel a partir de su fuente natural trae como consecuencia que dicho compuesto tenga un precio muy elevado y ha conducido a la bsqueda de fuentes alternativas para su obtencin. Una de ellas es la sntesis qumica, aunque resulta compleja, laboriosa y no es comercialmente rentable debido a los altos costes del proceso. Actualmente una alternativa para la obtencin de paclitaxel y de compuestos anlogos es la semisntesis a partir de intermediarios de la va de biosntesis como la baccatina III y la 10-desacetil-baccatina III, mucho ms asequibles al estar presente en las distintas especies de Taxus o en tejidos renovables como las hojas o los frutos y cuya recoleccin no requiere aos de cultivo ni compromete su viabilidad. En este tipo de sntesis enantioselectiva se han conseguido rendimientos de hasta el 75%. Tambin se estn buscando anlogos estructurales del paclitaxel que podran tener efectos parecidos sobre los microtbulos y que pudieran permititr mejorar las propiedades farmacolgicas del paclitaxel. Entre ellos destaca el docetaxel (fig. 4). Of

bioSNteSiS
El paclitaxel es un compuesto de naturaleza isoprenoide. Los isoprenoides constituyen una familia compleja de compuestos (ms de 35.000 identificados hasta el momento) que presentan una gran variedad de estructuras y funciones. No obstante, a pesar de su gran diversidad, todos los isoprenoides derivan de dos precursores estructurales comunes de cinco tomos de carbono, el isopentenil difosfato y su ismero, el dimetilalildifosfato (fig. 3). El esqueleto central de la molcula de paclitaxel es un anillo de taxano de naturaleza isoprenoide y deriva del geranilgeranil difosfato (GGPP), el precursor comn de los isoprenoides de 20 tomos de carbono (diterpenos), entre los que se encuentran compuestos tales como los carotenoides, la cadena de fitol de las clorofilas o las giberelinas, que participan en el crecimiento y desarrollo de las plantas. La primera etapa especfica de la biosntesis de paclitaxel es la ciclacin del GGPP en taxa-4(5),11(12)-dieno, reaccin catalizada por la enzima taxadieno sintasa. Posteriormente el esqueleto de taxano es modificado oxidativamente en un proceso que

Fig. 4. Estructura del docetaxel.

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