Tema 10: Bases de gentica Hay 5 tratados sobre gentica; todos sirven, pero el ms adecuado es el ltimo: Gentica, Griffiths

y cols. (1995). Editorial Interamericana. La gentica hoy es muy relevante, porque aparece relacionada a todos los temas de biologa. Es indispensable para el estudio de todo animal o planta. Vamos a centrarnos en el hombre. Se ha estudiado mucho a la mosca de la fruta (Drosophila), es sobre la especie que ms estudios hay. En ella se encontr un modelo sencillo para estudiar: tiene pocos cromosomas y es una especie fcil de reproducir durante muchas generaciones. La gentica es necesaria para entender la herencia de caracteres. En un primer momento se consider el estudio de la herencia. Pero la gentica no se llama gentica hasta los trabajos de G. Mendel. l es el primero que nos viene a hablar de la existencia de genes, de unos caracteres hereditarios. Cuando se conocen sus trabajos se entiende que la gentica es el estudio de todo lo relacionado con los genes. Estos genes estn en el ncleo. La membrana que tiene el ncleo es diferente de la membrana celular o plasmtica: no es una capa doble, son dos capas. Un poro sera como una puerta de discoteca, con un portero que slo deja pasar a algunos. Los poros estn formados por protenas. Los canales inicos permiten que los iones pasen, pero no otros elementos. De ese material gentico, desde Mendel, se sabe que lo importante es el gen. Gen: un trozo de cadena de la molcula de ADN; molcula blanquecina y cida, formada bsicamente por cido desoxirribonucleico. Estn codificadas en los genes las distintas caractersticas de las distintas especies. Genomio: es el conjunto de genes de un individuo. Estas cadenas formadas por ADN van a formar los cromosomas. El ADN es difcil de ver a microscopio electrnico, pero los cromosomas se pueden ver incluso al ptico. Eso indica que en ellos el ADN est empaquetado (con intervencin de histonas). En cada clula vamos a encontrar unas docenas de cromosomas y unas docenas de miles de genes. Cuando nos hablan de genes vienen a nuestra cabeza todos los avances actuales en Ingeniera Gentica. sta trabaja en busca de resultados positivos (p. ej. creacin de especies hbridas mejor adaptadas a las necesidades de la produccin). Tambin se est intentando aplicar a clulas somticas para tratar enfermedades como el cncer; o para tratar alteraciones gnicas, como el sndrome de Down. Pero la determinacin gnica no slo depende de los genes, sino tambin del ambiente. El ambiente influye mucho en la manifestacin de los genes con que cuenta el individuo. Los microambientes creados dentro de las clulas tambin van a ser considerados ambientes. Anemia Falciforme La hemoglobina es la protena que lleva el oxgeno en los glbulos rojos. La Anemia Falciforme es una prdida de capacidad para transportar. Es consecuencia de la sustitucin de un aminocido por otro (glutmico por valina) en la cadena de la

hemoglobina. Esto hace que los hemates cambien de forma, y que aparezcan cogulos. Cuando estos cogulos van por vasos grandes no pasa nada, pero el problema es cuando van por un vaso ms estrecho que el propio cogulo, entonces cortan la circulacin. Estos cortes de flujo sanguneo pueden producir fallos y lesiones en cualquier sistema corporal. Todo esto es consecuencia de un cambio en la informacin del ADN sobre la secuencia de aminocidos de la hemoglobina. Dos individuos podran tener el mismo genotipo? Y el mismo fenotipo? NO, es la respuesta para las dos preguntas. Tenemos mutaciones espontneas que se pueden producir en cualquier momento de nuestro desarrollo, as que ni los gemelos homocigticos tienen exactamente la misma dotacin gnica. Para lo que s pueden ser iguales dos individuos es para un gen concreto.

Un mismo genotipo puede dar diferentes fenotipos. Un mismo fenotipo puede proceder de diferentes genotipos. Esto depende del ambiente. Incluso el mismo ambiente, segn el gen, acta de diferente manera.

El retculo endoplsmico es el que reconstruye la membrana nuclear despus de la divisin celular. El retculo endoplsmico est conectado a su vez a la membrana celular. Hay zonas de estrechamiento de la membrana nuclear, ah estn los poros. Los poros estn constituidos por protenas, que regulan la entrada y salida de molculas. Por qu tenemos que pensar entonces que el ADN es el transmisor de la informacin? En el ncleo vemos zonas claras y zonas densas. En las densas el ADN est ms espiralizado y condensado, asociado a protenas; recibe el nombre de heterocromatina. En las claras est menos condensado y recibe el nombre de eucromatina. Esta eucromatina, que est menos espiralizada, es la que puede ser leda, la heterocromatina no. El ADN se condensa en etapa de la divisin celular dando lugar a los cromosomas metafsicos. Podemos marcar el material con que se va a sintetizar nuevo ADN para verlo de otro color. Se forman as los llamados 'cromosomas arlequn': el material marcado hace que tengan dos colores. Estos cromosomas con material marcado permiten ver el efecto de las drogas en el intercambio de ADN entre cromosomas. Se pueden observar los cromosomas incluso al microscopio ptico. Si algn cromosoma est anmalo eso va a afectar a muchas caractersticas (no en vano muchos genes estn afectados). Experimentos importantes para la gentica Estos experimentos son de un diseo muy simple y muy claro. Lo importante en investigacin son las ideas ms que el dinero.

Primer experimento: Griffith (1928) El primer experimento que vamos a ver es de los aos 20. Este experimento lo realiz Griffith en 1928. Trabajaba en la sanidad inglesa, cuyo principal problema en aquella poca era la neumona (una muerte segura). Esta enfermedad es causada por bacterias. Una bacteria es un ser muy primitivo, unicelular, procariota (que no tiene ncleo y por lo tanto la informacin gnica est en el citoplasma). Se saba que unas bacterias causaban la enfermedad y que otras, sin cpsula, no hacan enfermar. Realiz las siguientes pruebas y obtuvo estos resultados: 1.Las bacterias con cpsula s mataban al ratn 2.Las bacterias sin cpsula no mataban al ratn 3.Las bacterias con cpsula y matadas con calor no mataban al ratn 4.Las bacterias sin cpsula + las bacterias matadas con calor s mataban al ratn Ante el 4 caso mir en la sangre de los ratones muertos y vio bacterias encapsuladas y virulentas. Algo se haba transmitido de unas a otras (un principio transformante). Crey que ese principio transformante era algo que haba en la bacteria. Segundo experimento: Harshey y Chase (1952) Ya se conocan los istopos radiactivos. Los fagos son virus, ADN encapsulado. Un virus slo puede reproducirse infectando a un ser o clula procariota o eucariota. Hay virus que tiene como informacin ADN y otros que tienen ARN. Partan de los fagos (de bacterifagos, "comedores de bacterias"). Cogieron fagos y los pusieron a reproducirse en un medio con fsforo radiactivo. As, cuando hicieron su copia sta qued marcada. Otros fagos se pusieron un medio con istopos de azufre. Su cpsula est formada por protenas (que contienen S); y, cuando se reproduzcan, incorporan azufre radiactiva en dicha cpsula. Vemos que en los primeros fagos lo marcado es la informacin gnica y en los segundos la cpsula. Luego estos fagos se ponen en contacto con las bacterias. Se agita la unin para que las cpsulas de los virus se separen de la superficie de las bacterias. Se centrifuga para que cpsulas de virus vacas y bacterias infectadas, al tener distinta densidad, queden en distintas capas. Se demostr que el ADN es el transmisor ya que, en el primer caso, eran las bacterias las que presentaban radiactividad y en el segundo eran las cpsulas vacas. Cmo es el ADN? Antes del modelo de Watson y Crick ya se saba que el ADN estaba formado por mdulos (nucletidos) unidos entre s. Los nucletidos pentosa + cido fosfrico (fosfato) + base nitrogenada. Esta informacin no era la nica con la que contaban estos dos investigadores, sino que tambin obtenan informacin por difraccin de rayos X: pareca ser una hlice. Adems, se saba que el nmero de T+C=A+G, y que el de T=A

y el de C=G. A partir de todo esto ellos pudieron desentraar la estructura del ADN. Eran las bases nitrogenadas las que enlazaban las dobles cadenas, que corran paralelas. Los enlaces entre las bases eran muy dbiles: de puente de hidrgeno. El enlace de hidrgeno tiene un 3% de la fuerza de uno covalente. Es fruto de la atraccin entre H y O. Siempre se enlazara adenina con timina y guanina con citosina. El enlace CG es ms fuerte que el AT: el CG implica 3 enlaces de H y el AT slo 2. En la hlice doble van sumndose las fuerzas de estos enlaces hasta que es necesaria una fuerza considerable para separar ambas cadenas. Las cadenas son complementarias. As, cuando se separan las cadenas, cada una va a servir como molde para que se forme la complementaria y se obtengan dos dobles cadenas iguales. Este descubrimiento de Watson y Crick es del 53. A partir de entonces se empez a desentraar el funcionamiento. El cdigo de informacin tiene que estar en lo que cambia: las bases nitrogenadas. Introduccin a la estructura molecular del ADN El ADN es una macromolcula grande, compleja, formada por una secuencia de monmeros repetitivos. Todos los organismos contienen cadenas de ADN en sus clulas. La caracterstica principal es su capacidad para la replicacin. Estn formados por:

Grupos fosfato: fsforo unido a oxgeno. Anillos de azcar (pentosas): cclicos, pentagonales. Estas pentosas estn basadas en el carbono. La ribosa aparece en el ARN, la desoxirribosa en el ADN. La diferencia es que en la ribosa hay un grupo hidroxilo (OH) que en la desoxirribosa es slo un H. Bases nitrogenadas: purinas (adenina y guanina) y pirimidinas (citosina, timina y uracilo). ADN y ARN contienen purinas y pirimidinas, pero en el ARN en lugar de timina hay uracilo.

Lo que confiere al ADN la capacidad de codificar la informacin es la sucesin de bases a lo largo de la cadena. La cadena est constituida por la unin de bases complementarias. La informacin est en funcin de la secuencia de las bases. La estructura de Watson y Crick se bas en cristalizar molculas de ADN y pasar rayos X a travs de ellas. Esto les llev a creer que era una doble hlice. Propusieron que cada una de las dos hebras era complementaria a la otra. El esqueleto de cada hlice estara formado por pentosas (desoxirribosas) unidas por enlaces fosfato. La unin de las bases sera lateral a los azcares. Las dos cadenas, complementarias, estaran unidas por las bases mediante enlaces de puente de hidrgeno. Los enlaces sera AT (2 enlaces de hidrgeno) y CG (3 enlaces de hidrgeno, ms fuerte). Hoy, con microscopa electrnica, se pueden obtener imgenes tridimensionales de las molculas de ADN.

Los organismos son capaces de replicar su ADN. Se propusieron varios modelos:

Modelo conservativo: se conservaba la molcula de ADN original y se haca una copia que era la molcula hija. Modelo dispersivo: se copiaban fragmentos de la molcula de ADN original. En cada una de las dos molculas resultantes haba trozos de la original y otros trozos nuevos. Modelo semiconservativo: en las molculas de ADN hijas una hebra parental y la otra sintetizada (hija).

Watson y Crick eligieron ste ltimo modelo como el ms posible. Pero, cmo se explica? Experimento de Meselson y Stahl (1958) Meselson y Stahl intentaron demostrar cul era el modelo que explicaba la replicacin del ADN. Llenaron un tubo de ensayo con cloruro de cesio (CsCl). El cloruro de cesio es una sal, y el cesio un elemento muy pesado. Hicieron que el tubo se centrifugara a altas velocidades. Esto produjo un gradiente, una distribucin de molculas a lo largo del tubo que van de menor concentracin a mayor concentracin. Luego cultivaron bacterias (que tienen el ADN circular), rompieron su pared celular y extrajeron su ADN. Lo introdujeron en el extremo superior del tubo. Centrifugaron de nuevo. El gradiente del CsCl no iba a cambiar, pues se haba establecido un equilibrio entre fuerzas antagnicas (centrfuga y de sedimentacin), pero el ADN iba a bajar hasta detenerse en un punto en que su densidad coincidiera con la densidad del CsCl de esa porcin del tubo. Lo que hay que hacer es distinguir el ADN marcado radiactivamente del ADN no marcado. Para marcar introdujeron una fuente radiactiva, cloruro de amonio radiactivo (15*NH4Cl), en el cultivo. El ADN de las bacterias incorpora ese 15*N radiactivo a su estructura (a sus bases). El 14N normal tiene un peso atmico de 14, el 15*N radiactivo que aadieron al cultivo tiene peso atmico 15. Esta diferencia en peso podra producir 2 bandas distintas en el tubo. El ADN con 15*N forma una banda un poco ms alejada (ms al fondo). Cuanto ms pesadas son las molculas ms se acercan al fondo del tubo. Para llegar a la conclusin de que el modelo de replicacin adecuado era el semiconservativo hicieron lo siguiente: incubaron bacterias con 15*NH4Cl (radiactivo). Observaron la banda que formaba el ADN marcado en el tubo (con luz ultravioleta, pues el ADN tiene la propiedad de absorberla). Luego pasaron algunas bacterias a un cultivo con 14N normal. A medida que las generaciones avanzan la banda del 15*N va desapareciendo, apareciendo bandas intermedias entre la del 15*N y la del 14N. Interpretacin: en un principio todas las bacterias tendran en su ADN 15*N (radiactivo). En la primera generacin, si suponemos que la replicacin es del tipo semiconservativo, las dobles hlices contendran una cadena parental (radiactiva: con 15*N) y otra sintetizada (no radiactiva: con 14N).

Experimento de Taylor (1958) Vena a demostrar lo mismo que el anterior, pero de manera ms sencilla. Taylor extrajo clulas vegetales de la raz de una planta (judas). Las clulas vegetales las incub in vitro. Les aadi timidina marcada con un istopo de H radiactivo (3*H). El resultado es timidina tritiada (3*H-T) -radiactiva-. sta se aadi al medio de cultivo durante un tiempo para que las clulas la incorporaran. Pusieron una placa fotogrfica sobre el medio de cultivo, que permita observar lo que ocurra en los cromosomas. Vieron que en la metafase ambas cromtidas del cromosoma estaban marcadas. Cmo lograron esto: aadiendo colchicina (una sustancia vegetal), que puede impedir la generacin del huso mittico. Si impedimos la generacin del huso, podemos detener la mitosis y observar los cromosomas metafsicos. Pusieron algunas de estas clulas en otros cultivos con timidina normal. En la segunda divisin aadieron colchicina y observaron que una cromtida estaba marcada y otra no. Interpretacin: asumimos que una cromtida est formada por una sola doble hlice de ADN. Si asumimos la hiptesis semiconservativa, en la segunda generacin una hebra estar marcada y la otra no. Esto fue lo que, en efecto, se observ. Experimento de Cairns Consiste en coger unas bacterias y ponerlas en un medio en el que las sustancias (la materia para construir las bases nitrogenadas) estn marcadas. Cuando las bacterias vayan a duplicar su ADN tomarn ese material marcado. Cairns dej que las bacterias se duplicaran una vez, luego otra, e hizo una autorradiografa. En qu consiste la autorradiografa? El material marcado emite una radiacin y puede velar, tras un tiempo, una emulsin fotogrfica. Lo velado queda de color negro y lo dems transparente. Es una tcnica compleja pero muy potente. Cairns us la autorradiografa tras la segunda replicacin. Encontr que las cadenas de ADN de esa bacteria apareca: Cuando se volvieron a dividir aparecan: Haba que interpretar: tenemos una doble cadena en forma de anillo, con una hebra marcada y la otra no. Cuando se estuvieran duplicando veramos: Habra un punto de inicio, donde se empiezan a copiar las cadenas. Tambin habr un punto final. Nosotros, que no tenemos un ADN en forma de anillo, tenemos muchos puntos de iniciacin porque nuestras cadenas son mucho ms largas. Organismos mucho ms simples que nosotros, como son las levaduras, tienen ya 400 puntos de inicio. A partir de entonces se busc qu produca que el ADN se duplicara: se buscaban enzimas que funcionaran como catalizadores de este proceso. Arthur Kornberg descubri las polimerasa de ADN. sta simplemente permita que una cadena de ADN

se duplicara. Es muy activa. Permite que se d una polimerizacin (de ah su nombre). La polimerasa I (o de ADN) tiene la propiedad de copiar en direccin nica (5'3'). Las cadenas de ADN son antiparalelas. Y, aunque la polimerasa I permita copiar en una sola direccin, cmo es que el proceso de copia avanza en las dos direcciones? Nunca se ha encontrado una enzima que lea en la otra direccin. En estas investigaciones, que buscaban una enzima que leyera en direccin contraria, se hallaron sin embargo otras polimerasas, y se descubri que la polimerasa I serva tambin para eliminar errores. La polimerasa II era la que reparaba el error. Se descubri otra polimerasa: la ligasa, que una el trozo trado por la polimerasa II. Tambin se descubri una polimerasa que sirve para deshacer la cadena, abrindola, pero sin daarla: la helicasa. Estas polimerasas actan constantemente. Si son daos muy grandes ya no son capaces de repararlos (p. ej.: los producidos por radiaciones altas). La polimerasa I hace que el ADN se replique en direccin 5'3'. La llamada cadena retrasada se sabe como se forma gracias a Okazaki. Este japons descubri cmo se forman las cadenas retrasadas y que no se copiaban de continuo, sino en pequeos trozos, conocidos hoy como fragmentos de Okazaki. Hay un cebador (el ARN cebador), sobre el que se coloca la polimerasa y va leyendo la cadena de ADN. Luego el ARN cebador se coloca en otro lado y lee otro fragmento, y as sucesivamente. Luego llega la ligasa y va uniendo esos fragmentos que se van duplicando. Cuestiones: 1.- Si nosotros tenemos que la T constituye el 15% de las bases nitrogenadas cul ser el porcentaje de citosina? T=A=15%; T+A=30% T+A+C+G=100%; 15%+15%+C+G=100%; C+G=70% C=G C=35% 2.- Si tenemos ADN que presenta un 46% de enlaces CG cul es el porcentaje de cada base en esa cadena? C=46/2=23% G=C=23% 100-GC=AT; 100-46=AT; AT=54% A=54/2=27% T=A=27%

3.- Puedo utilizar una tcnica de desnaturalizacin para estimar los enlaces que existen de CG? La energa que haya que aplicar ser dependiente del nmero de enlaces. Puesto que el CG tiene 3 enlaces de H y el AT slo 2, cuanto mayor sea el calor necesario para desnaturalizar, mayor nmero de enlaces CG habr. 3 Generacin 0 Generacin 1 Generacin 2 Generacin 3 ADN No marcado ADN Marcado , y no como cabra esperar: de ah que veamos: de ah que veamos: 3' 5' 5' 3' polimerasa I polimerasa II ligasa 5' 5' 3' 3' Ligasa

ARN cebador Polimerasa I