METODOS DE MEJORAMIENTO GENETICO EN PLANTAS DE LA FAMILIA CURCUBITACEAS I.

INTRODUCCION

Melones, sandas, y calabazas pertenecen a la familia Cucurbitaceae, la mayora de cuyos miembros son sensibles a las bajas temperaturas ambientales, por lo que suelen crecer en regiones tropicales y subtropicales. Su cultivo tiene como principal objetivo el consumo de sus frutos. De acuerdo con su origen geogrfico, las cucurbitceas pueden clasificarse como especies del nuevo mundo o del viejo; as, vemos que el meln (Cucumis melo L.) y la sanda (Citrullus lanatus Thunb.) Tienen sus orgenes en frica, el pepino (Cucumis sativus L.) proviene de Asia, en tanto que las calabazas y calabacitas (Cucurbita spp.) son oriundas de Amrica, principalmente, de Mxico. Precisamente son estas cuatro cucurbitceas las ms importantes por su produccin en el mbito mundial. Mxico es un pas altamente productor y exportador de cucurbitceas; en 2006, ms de un milln de toneladas de melones, sandas, pepinos y calabacitas fueron exportados a ms de 20 pases, generando con esto una importante fuente de divisas para el pas, pues su valor ascendi a ms de 1,047 millones de dlares. Las cucurbitceas son muy susceptibles a plagas como insectos y caros, y a enfermedades causadas por diferentes virus, bacterias, micoplasmas y hongos. Adems, las cucurbitceas son altamente susceptibles a la escasez o exceso de agua. En los ltimos aos (especialmente el siglo pasado y el que transcurre) se han logrado grandes avances en el mejoramiento gentico de sanda. Investigadores en el sector pblico y privado alrededor del mundo han desarrollado variedades e hbridos con mejores caractersticas agronmicas; pero tambin se ha dado importancia a la resistencia a enfermedades, mejor contenido nutricional y a variados tamaos y formas del fruto, as como diversidad en color y tonalidad de pulpa. La popularidad de la sanda se debe en gran medida a la introduccin de hbridos triploides -sin semilla. OBJETIVO o Conocer los mtodos de mejoramiento gentico en cucurbitceas o Conocer la importancia de los mtodos de mejoramiento gentico en cucurbitceas II. REVISION BIBLIOGRAFICA A. METODOS DE MEJORAMIENTO GENTICO Los mtodos de seleccin convencionalmente utilizados incluyen Pedigree, Pedigree Modificado, Seleccin Masal, Seleccin Masal Estratificada, Seleccin Recurrente, Retrocruza a Lnea Endogmica, entre otros. La seleccin de los mtodos de fitomejoramiento y los parmetros de seleccin dependern en el mecanismo de reproduccin, la heredabilidad de los caracteres incluidos en el programa de mejoramiento (por ejemplo alta vs. baja heredabilidad) y el tipo de material a liberar comercialmente (por ejemplo hbrido F1, lnea pura, variedad sinttica, etc.).

Seleccin masal y recurrente son mtodos que se pueden utilizar en el mejoramiento de Poblaciones tanto de autofecundacin como de fecundacin cruzada. Una poblacin genticamente variable de individuos heterocigotos es creada a travs de cruzar entre ellos y de manera aleatoria o abierta diferentes parentales. Las mejores plantas son seleccionadas en base a su desempeo individual o en base a la progenie que producen considerando en dicha progenie caractersticas sobresalientes. Las plantas seleccionadas son cruzadas nuevamente de manera 'abierta' entre ellas para producir una nueva poblacin en la que se repetir un ciclo ms de seleccin. As se contina por ciclos sucesivos hasta alcanzar los objetivos del programa. Hay modificaciones de este esquema que combinan poblaciones similares que solo difieren por pocos caracteres que se han introducido de manera recurrente en las poblaciones. El mejoramiento por retrocruza se ha utilizado para transferir una caracterstica cualitativa (con heredabilidad alta) a una lnea que sera superior si no careciera del carcter por incorporar en su constitucin gentica. La fuente de la caracterstica por transferirse se denomina parental 'donador' y el individuo recibiendo la misma se denomina 'recurrente'. Se espera que el genotipo resultante de este proceso contenga los atributos del padre recurrente ms el carcter favorable del donador. Despus de la primer cruza los individuos que poseen la caracterstica del padre donador son cruzados de manera repetitiva al padre recurrente. Existen otros mtodos de mejoramiento y esquemas de seleccin pero en general los aqu expuestos son los ms tpicos en un programa de mejoramiento de sanda. MEJORAMIENTO GENTICO El mejoramiento gentico est enfocado a: 1. Mejorar el rendimiento, calidad de fruto y semilla, tanto para consumo en fresco como para procesamiento. 2. Produccin de hbridos, con caractersticas de maduracin temprana, incremento de vigor y uniformidad. 3. Buscar resistencia a las principales enfermedades 4. Para las especies que proveen semilla se busca obtener materiales con mayor nmero de frutos por planta, ms semillas por fruto y mayor proporcin de aceite en la semilla (Montes, 1991; Prez et al., 1998; Villanueva, 2007). La tolerancia y/o resistencia a plagas, enfermedades y factores abiticos (sequa, salinidad, temperaturas altas o bajas, entre otros) estn determinadas por las caractersticas genticas que distinguen a cada una de ellas. Hasta la fecha, para las cucurbitceas ms importantes (sanda, pepino, meln y calabazas), se han descrito 55, 100, 163, y 105 genes, respectivamente, y ms de 400 marcadores moleculares en total. Algunos alelos de esos genes reportados determinan resistencia y/o tolerancia a plagas, enfermedades y diversos factores abiticos, as como otros que controlan las caractersticas que aumentan la calidad del fruto. En el caso especfico del gnero Cucumis (pepino y meln), existen especies silvestres cercanamente emparentadas, las cuales muestran caractersticas agronmicas altamente deseables, tales como una alta tolerancia a insectos, hongos y bacterias, adems de ser capaces de crecer en reas de baja disponibilidad de agua. Desafortunadamente, se presentan barreras genticas sexuales que impiden obtener hbridos entre el meln y esas especies silvestres.

Las dos especies ms importantes de Cucumis (Cucumis melo L. y Cucumis sativus L.) muestran casi una total incapacidad para cruzarse con las especies silvestres de ese gnero. La biotecnologa de plantas, sin embargo, ofrece un amplio abanico de oportunidades para evitar o superar esas barreras genticas y obtener plantas cucurbitceas tolerantes a virus, bacterias, hongos y dems plagas que las atacan, de tal manera que se pueda mejorar la calidad y el nmero de frutos por planta en un tiempo menor que usando los sistemas tradicionales de mejoramiento gentico. El mejoramiento gentico tradicional del meln (Cucumis melo L.), como en la mayora de las cucurbitceas, es un proceso lento y est limitado al fondo gentico (la cantidad y el tipo de genes que presenta una planta y que determinan sus caractersticas) disponible por hibridacin tradicional. Es posible obtener melones hbridos de alto valor comercial a partir de cruzas intraespecficas en las variedades comerciales de meln y sus pares silvestres, para transferir algunas caractersticas particulares como resistencia a hongos, bacterias y virus o tolerancia a factores ambientales como salinidad, sequa, bajas y/o altas temperaturas. No obstante, al cruzar las variedades de meln silvestre con las de alto valor comercial, puede ocurrir que genes valiosos que controlan el alto contenido de azcares se pierdan o que, por el contrario, genes no deseables que son responsables de concentrar un alto contenido de sustancias amargas o una elevada acidez sean transferidos a la variedad comercial, disminuyendo la calidad del fruto. Debido a lo anterior, es altamente deseable aplicar otras herramientas y metodologas de mejoramiento gentico para obtener variedades de meln mejoradas. La biotecnologa y la biologa molecular son alternativas viables que permiten la transferencia de genes de especies no relacionadas genticamente, creando variedades de plantas con alto valor comercial. Estas metodologas son comparables a las utilizadas previamente en el mejoramiento tradicional del meln. B. BIOTECNOLOGA APLICADA AL MELN Los procesos biotecnolgicos para obtener plantas transgnicas de meln que presentan caractersticas de alto valor comercial se han descrito y revisado de manera explcita y puntual con anterioridad; por lo tanto, son tecnologas que funcionan de manera comprobable, y pueden ser utilizadas para generar plantas que tengan mayor adaptabilidad a las condiciones del medio ambiente de nuestro pas. El proyecto de investigacin sobre mejoramiento gentico de meln y otras cucurbitceas (sanda, pepino y calabazas) mediante la aplicacin de tcnicas de biotecnologa moderna llevado a cabo en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales y Manipulacin Gentica de Plantas, y en el Laboratorio de Plantas Tropicales y Salud Humana, ambos del Departamento de Ingeniera Gentica de Plantas del Cinvestav-IPN, campus Guanajuato, se enfoca a la creacin de melones con una prolongada vida de anaquel, una mayor calidad del fruto y un contenido incrementado de vitaminas tales como el cido flico, y nutrientes. Se conoce mucho acerca de la biologa del meln y por esta razn se pueden seleccionar determinados genes para ser manipulados, alterando su expresin con el fin de obtener los resultados deseados. El sistema de regeneracin in vitro y manipulacin gentica del meln con el que contamos en los Laboratorios de Cultivo de Tejidos Vegetales y Manipulacin

Gentica de Plantas, y en el de Plantas Tropicales y Salud Humana, fue desarrollado para una variedad especfica (HoneyBrew) del meln tipo Inodorus (segn NezPalenius et al.; resultados no publicados); sin embargo, se ha demostrado que puede ser aplicado con bastante xito a cualquier variedad de meln recalcitrante (plantas que no se han podido transformar genticamente) a la manipulacin gentica mediante biotecnologa. Estos resultados abren la oportunidad de manipular genticamente cualquier variedad de meln e insertar el o los genes deseados para mejorar la calidad del fruto, aumentar la produccin, obtener plantas tolerantes a factores biticos (enfermedades y plagas), y a factores abiticos (exceso o escasez de agua, salinidad, altas y bajas temperaturas, entre otros). C. MEJORAMIENTO GENETICO a. SANDAS TRIPLOIDES La produccin de sanda sin semilla (tambin conocida como sanda triploide o en ingles 'seedless watermelon') se logra a travs de la manipulacin del nmero de cromosomas en uno de los parentales con los que se formar el hbrido. La sanda en su 'estado' natural es diploide y el nmero aploide de cromosomas = 11. Es decir cada una de las celulas de una sanda (semilla, planta, tallo, flor, fruto) tienen 22 cromosomas (diploide=2N=22). A travs de un tratamiento qumico se puede lograr que el nmero de cromosomas se duplique. Por lo tanto cada clula de una sanda qumicamente tratada tendr 44 cromosomas. El producto qumico ms convencional es un alcaloide llamado colchicina (C22H25O6N). Este producto distorsiona la segregacin o separacin de los cromosomas al momento de replicacin y se consigue que las clulas contengan un mayor nmero de cromosomas. Durante el proceso de este tratamiento con colchicina varias cosas pueden pasar. Es posible matar las plantas debido a fitotoxicidad causada por el producto. Tambin es posible obtener plantas aneuploides y plantas quimeras; es decir que son parcialmente diploide y parcialmente tetraploide (y en raros casos hay incluso sectores triploides). Una vez que se ha comprobado que las plantas que sobrevivieron el tratamiento con colchicina son tetraploides se procede a autofecundarlas para incrementar la semilla tetraploide. En las primeras generaciones de autofecundacin el contenido de semilla por fruto suele ser muy bajo debido al estrs que la planta esta teniendo (hay que recordar que se esta alterando su estado natural de diploide). Despus de varias generaciones (ciclos) de autofecundacin se logra estabilizar la lnea para que se mantenga en fase tetraploide y que produzca buena semilla. El mantenimiento de las lneas tetraploides se hace por autofecundacin, de igual manera que se mantendra una lnea diploide. Pero se debe de poner especial cuidado al momento de producirla porque un porcentaje mnimo en la poblacin tatraploide va a tener la tendencia de regresar a su estado natural diploide. Estas plantas debern removerse del lote de produccin para no tener problemas de contaminacin en el futuro. A continuacin se presenta un esquema para la produccin de semilla triploide:

Sanda Normal con 2N cromosomas (Diploide) Tratamiento qumico (C22H25O6N) Sanda tetraploide con 4N cromosomas Flor femenina de planta tetraplodide(4N) X Flor masculina de planta diploide (2N) Frutos con semilla triploide La produccin de semilla triploide (que despus producir frutos sin semilla) se logra a travs de cruzar una lnea tetraploide como el componente femenino con una lnea diploide como el donador de polen. La cruza inversa no produce semilla. El polen que producen las plantas triploides es no-viable y la cantidad del mismo es mnima. Es por ello que en un campo de produccin de sandias sin semillas se debe de sembrar las plantas triploides acompaadas con un polinizador diploide. Companion - Polinizador de entrenudo corto En la produccin de sandas sin semilla o triploides, usualmente entre un tercio y un cuarto del campo tiene que ser plantado con sanda diploide con el fin de tener suficiente polen para asegurar un buen amarre de fruta y buenos rendimientos. Siguiendo esta prctica se consigue un buen amarre de fruta triploide pero tambin habr frutos diploides. Al momento de cosechar en el mismo campo se encontrar fruta con semilla y fruta sin semilla. Esto puede hacer la cosecha ms laboriosa pues se tendrn que estar separando las frutas o se tendrn que dar varias pasadas al campo. El otro inconveniente es al momento de tratar de estimar rendimiento de frutas sin semilla pues siempre se tendr el factor de confusin de las frutas con semilla. Existe an otra desventaja, usualmente la maduracin de las sandas con semilla es ms temprano que la de las triploides. Si se quiere aprovechar las frutas diplodes el equipo de cosecha entrar al campo y ms pronto empezarn a pisar sobre las plantas y a causar algn dao a las mismas. Un mtodo conveniente para obtener mayor cantidad de frutas sin semilla por unidad de superficie es a travs de utilizar un polinizador ms eficiente. Un polinizador que permita que ms plantas triploides sean trasplantadas en el campo y que no compita por nutrientes o espacio. Con la utilizacin del polinizador de entrenudo corto (PEC) se consigue precisamente lo que se describi en el prrafo anterior. Las plantas de entrenudos cortos no representarn la misma competencia que las plantas diploides de entrenudos de tamao normal (o gua larga). Estas plantas de entrenudo corto tienen la misma capacidad de producir polen como cualquier otro diploide de tal manera que haya un buen amarre de fruta en el hbrido triploide El polinizador de entrenudo corto debe ser plantado en la misma cama de siembra donde se plantan las triploides. La proporcin entre diploide y triploide es de una planta de PEC por cada 2 o 3 de triploides. (Ver esquema posterior). Como se puede observar en el diagrama, la poblacin de plantas triploides es aumentada y por lo tanto se esperara un incremento de frutos triploides por unidad de

superficie. En teora el rendimiento de fruta triploide debe ser mayor que con el sistema convencional de plantacin. Las plantas de entrenudo corto son distribuidas de manera que provean de polen a las plantas que las rodean. Aunque se mencionaron las proporciones de 2:1 o 3:1 otros diseos pueden ser experimentados para encontrar el arreglo en campo que ofrezca los mejores resultados. Mucho de ello depender en las condiciones de la regin, temperatura ambiental, presencia de abejas que transporten el polen, etc. Si se llegasen a plantar todos los diploides de entrenudo corto en un surco y los triploides en surco diferente, se corre el riesgo de retardar el amarre de fruta o inclusive de no tener frutas triploides. El polinizador de entrenudo corto puede ser plantado al mismo tiempo que los triploides aunque se recomienda plantarlo de 10-14 das despus de haber plantado la triploide. Mtodo Standard Usando PEC D T PEC T T T T PEC D T T T PEC T T D T PEC T T T T PEC D T Es recomendable que se remuevan los frutos de las plantas de entrenudo corto. Con ello se lograra extender el periodo de floracin masculina y por tanto la disponibilidad de polen. Al remover los frutos de las plantas de entrenudo corto tambin se evita que los mismos alcancen tamao completo. Bajo condiciones favorables estos frutos diploides pueden llegar a medir unos 20 x 17 cm y pesar unos 3 - 4.5 kg. Se recomienda la colocacin de abejas en el campo para garantizar una buena distribucin de polen y altos rendimientos de fruta triploide de buena calidad. Sandas sin semilla con fruto de tamao individual ("sandas personales") La principal diferencia entre las 'tradicionales' sandas sin semilla o triploides y las sandas triploides de tamao individual es al momento de trasplantar. Especficamente la distancia entre plantas en la misma cama de siembra o surco. Estas plantas se deben de plantar ms cerca una de la otra. Los mismos cuidados respecto a la humedad y temperatura ptima para germinacin de la semilla que se toman en cuenta en las triploides regulares aplican para las de fruta ms pequea. Lo mismo para otras prcticas culturales como es la fertilizacin, riego y presencia de insectos para transportar el polen. Durante el desarrollo de estos hbridos triploides de fruta pequea, el personal de investigacin de Seminis ha evaluado diferentes densidades de plantacin. Basado en resultados obtenidos se ha encontrado que una poblacin de aproximadamente 4,000 plantas por acre (unas 10,000 por Hectrea) es la ms adecuada para conseguir un rendimiento satisfactorio. Se recomienda que se usen

otras densidades para determinar cul es la ms conveniente para condiciones de manejo especficas. PLANTAS POR ACRE Espacio entre plantas 18" 24" Surcos a 80" 4,354 3,265 Surcos a 84" 4,148 3,111 PLANTAS POR HECTAREA Espacio entre plantas 45 cm. 60 cm Surcos a 2.0 m ~11,000 8,350 Surcos a 2.2 m ~10,000 . 7,515

Las tablas anteriores proporcionan una gua general de las poblaciones de plantas de sanda por unidad de superficie. Las poblaciones en mencin son "poblaciones totales". Se debe de tomar en cuenta que entre un 20% a un 30% de la poblacin total ser dedicada al polinizador diploide. Lo que es de menor tamao en estos hbridos triploides es el fruto; las plantas crecen del mismo tamao y a la misma tasa de crecimiento que las triploides convencionales. Las plantas del polinizador (o diploides) deben ser trasplantadas al mismo tiempo que se trasplantan las triploides o una semana despus. Con ello se asegura la disponibilidad de polen para que el amarre de fruta sea satisfactorio. El polinizador se debe de plantar en el mismo surco intercalado con las triploides para que haya amarre de fruta desde la base de la planta. b. MEJORAMIENTO GENTICO EN CALABAZA Los procedimientos de mejoramiento que se han seguido en calabaza son: Autofecundacin, seleccin y retrocruzamiento. Entre los sistemas de seleccin recurrente ms utilizados para mejorar caracteres cuantitativos en cucurbitceas se encuentran: el uso de lneas S1, seleccin masal y familiar (medios hermanos y hermanos completos) (Kohashi, 1960). Se iniciaron trabajos de coleccin de germoplasma de Cucurbita en 1957 por el Departamento de Horticultura de la Oficina de Estudios Especiales en el Campo Agrcola Experimental el "Horno" en Chapingo, Mxico, y se continuaron con el Departamento de Hortalizas del Instituto Nacional de Investigaciones Agrcolas (INIA), y hasta la fecha en el campo Agrcola experimental Bajo en Celaya, Guanajuato, donde a partir de 1975 se estableci el banco de germoplasma de Cucurbita. A partir de 1996, la Universidad Autnoma Chapingo desarroll un programa de caracterizacin y mejoramiento gentico de calabazas de las cuatro diferentes especies cultivadas. Se han realizado numerosos estudios en el sistema milpacalabaza, obtenindose importantes resultados en la mejora de la cantidad y calidad de frutos y semilla por fruto producidos por planta; incremento en la cantidad de azcares y del color en la pulpa; cultivares resistentes a herbicidas, resistentes a hongos del suelo, y partenorcarpia (Ayala, 2002; Aragn, 2005; Mndez, 2010). Actualmente ya se han desarrollado variedades (de semilla sin cscara; tipo brujitas y partenocrpicas, todas arbustivas y precoces) listas para su registro (Villanueva, comunicacin personal).

ESTUDIOS DE RESITENCIA A CMV Martn (1960) (citado por Garzn et al., 1993) report las colectas PI .176959 y PI 174192 como tolerantes al CMV, sin embargo, estos materiales no son utilizados en los programas de mejoramiento debido a que sus caractersticas fenotpicas los hacen poco atractivos comercialmente. Provvidenti y Gonsalves (1984) detectaron un alto nivel de resistencia en especies silvestres, como C. cordata, C. cilindrata y C.digitata, entre otras. En 1983 en "el Campo Experimental El Bajo, en Celaya, Guanajuato, evaluaron bajo condiciones de campo 165 colectas de materiales criollos nacionales de las especies C. 11 moschata, C. mxima y C. mixta; detectaron dos fenotipos de C. moschata (BG-389 Y BG-509) con alto nivel de tolerancia a virosis, no obstante estos presentaron incompatibilidad al cruzar con el cultivar grey zucchini (Garzn et al., 1993). Por otra parte, Rodrguez, (1988) al evaluar variedades e hbridos de calabacita encontr que algunos materiales fueron altamente tolerantes y que por lo tanto pueden ser utilizadas como fuentes de resistencia, y aunque no son atractivos comercialmente, la cruza de stos con variedades comerciales podra generar hbridos con ambas caractersticas. Brouwn et al. (2003) reportan en Estados Unidos germoplasma de Cucurbita moschata con resistencia monognica y dominante al CMV. IMPORTANCIA DEL Cucumber mosaic virus (CMV) El CMV es uno de los diez virus fitopatgenos ms importantes en el mundo por: su gran nmero de variantes; su amplia distribucin geogrfica y por los daos que causa a una gran cantidad de especies de plantas de inters econmico (Valverde 1984). Su infeccin a pepino fue reportada por primera vez en 1954 en Estados Unidos (Brunt, et al 1996). Actualmente ha sido reportado en todas las zonas hortcolas del pas; afecta a 361 especies vegetales se adapta tanto a climas clidos como templados, es transmitido fcilmente por fidos en forma no persistente, tambin puede ser transmitido de manera mecnica y por semilla. Afecta hojas y frutos, causa infecciones sistmicas, los principales sntomas son mosaicos severos, moteados, clorosis, enanismo, necrosis y distorsin de las hojas y frutos. El predomina en los trpicos y subtrpicos, produce sntomas an a temperaturas mayores a 32 C, por lo que se le considera termorresistente. En Cucurbita spp. causa manchones amarillos sistmicos despus de 20 das, as como mosaicos, laciniaduras, abarquillamiento ligero, manchas amarillas y reduccin de la lmina foliar. En frutos produce deformaciones y protuberancias, causando disminucin en rendimiento y calidad del fruto. D. CONCLUSIONES Los mtodos ms adecuados de mejoramiento para la calabaza es Autofecundacin, seleccin y retro cruzamiento y para la sanda es retro cruzamiento y seleccin masal y recurrente. Es importancia los mtodos de mejoramiento gentico por: Mejorar el rendimiento, calidad de fruto y semilla, tanto para consumo en fresco como para procesamiento. Produccin de hbridos, con caractersticas de maduracin temprana, incremento de vigor y uniformidad. Buscar resistencia a las principales enfermedades y plagas.

E. BIBLIOGRAFA

Ceron L (2010) Carcterizacion de calabazas (curcubita spp.) mexicanas como

fuente de resistencia al Cucumber mosaic virus (CMV) Tesis dostorado en Ciencias de Horticultura, Universidad Autnoma Chapingo

Aragn L R (2005) Caracterizacin de materiales experimentales de calabaza

(Cucurbita spp.) y verificacin de su resistencia al Damping off. Tesis Maestra en Ciencias de Horticultura, Universidad Autnoma Chapingo

MSc. Benito Jurez Garca (2005) Programa De Mejoramiento Gentico De

Sanda En Seminis

http://www.unsa.edu.pe/index.php?
option=com_content&view=article&id=259&Itemid=315