Bacillus cereus Es un bacilo formador de esporas responsable de intoxicaciones alimentarias, siendo su hbitat natural el suelo, contamina con frecuencia

cereales, leche, budines, cremas pasteurizadas y especias, entre otros alimentos. La resistencia trmica de esporas de B. cereus en un medio con elevado contenido de agua vuelve a este microorganismo un potencial peligro para el desarrollo de una intoxicacin, si las medidas higinico sanitarias y de elaboracin no son las adecuadas. Es un microorganismo gram positivo en los cultivos jvenes y a medida que envejece puede verse como gram variable o gram negativo. Las esporas aparecen claras en la tincin de gram y verdes con la tincin de esporas estas pueden estar dentro de la pared bacteriana o puede deformar la pared. Las temperaturas de crecimiento: mnima estn entre 15C a 20C y la mxima es entre 40C a 45C con un ptimo de 37C. Son saprofitos ampliamente distribuidos en el ambiente natural en suelos de todo tipo, y puede ser encontrado en el polvo y en el aire, por lo tanto tiene considerable oportunidad para estar presente en o sobre los alimentos. Los alimentos secos como condimentos, leche en polvo y harinas pueden estar contaminados con esporas. Las cepas de B. cereus son muy variables en cuanto a su crecimiento y caractersticas de supervivencia. Algunas son psictrofas, siendo capaces de crecer a 4-5grados pero no a 30-35 grados, mientras que otras cepas son mesfilas y pueden crecer entre los 15 grados y los 50-55 grados. En general, no obstante, la temperatura ptima de crecimiento vara de 30 a 40 grados. Las formas esporuladas, son muy termo-resistentes, y slo se eliminan mediante la esterilizacin. Por definicin, se trata de microorganismos anaerobios facultativos, lo que significa que se desarrollan tanto con las concentraciones normales de oxgeno del aire como cuando este contenido en oxgeno disminuye. Agar Bacillus cereus: Bacillus cereus, ha sido implicado en toxiinfecciones alimentarias, particularmente asociado al consumo de arroz contaminado, y tambin en algunos procesos infecciosos en seres humanos y animales. En el medio de cultivo, el contenido de peptona es bajo (0.1%), y la adicin de piruvato de sodio y emulsin de yema de huevo mejora el aislamiento y esporulacin de esta bacteria. Para verificar la utilizacin del manitol, se usa un indicador de pH, azul de bromotimol. Este medio es selectivo, por el agregado del suplemento para Bacillus cereus (cdigo B03-606-32) con el que se obtiene una concentracin final de 100 U de Polimixina B por ml de medio. Frmula (en gramos por litro) Peptona de carne 1.0 Manitol 10.0 Cloruro de sodio 2.0 Sulfato de magnesio 0.1 Fosfato disdico 2.5 Fosfato monopotsico 0.25 Azul de bromotimol 0.12 Piruvato de sodio 10.0 Agar 14.0 pH final 7.2 0.2

El diagnstico primario se basa en la morfologa y color de la colonia, en la precipitacin de la lecitina hidrolizada y en la falta de utilizacin del manitol por Bacillus cereus. Las colonias tpicas de B. cereus son crenadas, filamentosas de aproximadamente 5 mm de dimetro a las 24 horas de incubacin, y tienen un color turquesa (peacock blue) rodeado por un precipitado de hidrlisis de yema de huevo. A las 48 horas de incubacin presentan el color con centro grisceo. Fundamento de las pruebas bioqumicas Reduccin de nitrato: Sirve para determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos. Algunas bacterias pueden usar nitratos como aceptor final de e en la respiracin. El nitrato puede ser reducido a nitrito o en un paso ms a gases (xidos de nitrgeno). Prueba positiva, coloracin roja.

Gelatina nutritiva: La mayora de los polmeros son demasiado grandes para ser transportados dentro de las clulas. Las bacterias excretan enzimas extracelulares que hidrolizan esos polmeros transportando al interior de la clula en monmeros que les sirven para crecer. La produccin de proteasas es evaluada por incorporacin de una protena (gelatina o casena) en un medio slido en placa. La placa se inunda con cido que precipita la protena no hidrolizada. Fermentacin de azucares: Las bacterias anaerobias o anaerbicas facultativas a menudo fermentan carbohidratos a cidos orgnicos y gas (H2 o CO2). Estos pueden detectarse incluyendo en el medio un indicador de pH y una campana Durham. Se pueden ensayar diferentes azcares como sustrato para diferenciar especies sobre todo bacterias entricas. Se inocula la bacteria en un medio conteniendo una pequea cantidad de peptona, un indicador de pH y una fuente de carbono fermentable al 1-2 % y se coloca dentro de los tubos una campana Durham. Para el recuento de B. cereus: 1. Si todas las pruebas bioqumicas son positivas

Relacin= Recuento presuntivo x inversa de la dilucin 2. Si no todas las pruebas bioqumicas son positivas

Relacin= Recuento presuntivo x n de colonias confirmadas N de colonias presuntivas ensayadas

10 g 90 ml

1 ml 9 ml

1 ml 9 ml

Alimento Condimento
1 ml 1 ml 1 ml

Incubacin 25-37C/24-48 h

AGAR BACILLUS CEREUS Colonias azules rugosas, bordes irregulares

Agar Kliger Pruebas bioqumicas Reduccin de nitratos Gelatina Fermentacin de azucares