Citologia

La biologa celular (antiguamente citologa de citos=clula y Logos=Estudio o Tratado ) es una disciplina acadmica que se encarga del estudio de las clulas en cuanto a lo que respecta a las propiedades, estructura, funciones, orgnulos que contienen, su interaccin con el ambiente y su ciclo ...

Biologa celular La biologa celular (antiguamente citologa de citos=clula y

Logos=Estudio o Tratado ) es una disciplina acadmica que se encarga del estudio de las clulas en cuanto a lo que respecta a las propiedades, estructura, funciones, orgnulos que contienen, su interaccin con el ambiente y su ciclo vital. Con la invencin del microscopio ptico fue posible observar estructuras nunca antes vistas por el hombre, las clulas. Esas estructuras se estudiaron ms detalladamente con el empleo de tcnicas de citoqumica y con la ayuda fundamental del microscopio electrnico. La biologa celular se centra en la comprensin del funcionamiento de los sistemas celulares, de cmo estas clulas se regulan y la comprensin del funcionamiento de sus estructuras. Una disciplina afn es la biologa molecular. Historia La primera referencia al concepto de clula data del siglo XVII cuando el ingls Robert Hooke utiliz este trmino celula (por su parecido con las habitaciones de los sacerdotes llamadas Celdas) para referirse a los pequeos huecos polidricos que constituan la estructura de ciertos tejidos vegetales como el corcho. No obstante hasta el siglo XIX no se desarrolla este concepto considerando su estructura interior. Es en este siglo cuando se desarrolla la teora celular, que reconoce la clula como la unidad bsica de estructura y funcin de todos los seres vivos, idea

que constituye desde entonces uno de los pilares de la Biologa moderna. Fue esta teora la que desplaz en buena medida las investigaciones biolgicas al terreno microscpico pues no son visibles a simple vista. La unidad de medida utilizada es el micrmetro (m) o micra (), existiendo clulas de entre 2 y 20 m. La investigacin microscpica pronto dara lugar al descubrimiento de la estructura celular interna incluyendo el ncleo, los cromosomas, el aparato de Golgi y otros orgnulos celulares as como la identificacin de la relacin existente entre la estructura y la funcin de los orgnulos celulares. Ya en siglo XX la introduccin del microscopio electrnico revel detalles de las ultraestructura celular y la aparicin de la histoqumica y de la citoqumica. Tambin se descubri la base material de la herencia con los cromosomas y el ADN con la aparicin de la citogentica. Atendiendo a su organizacin celular, los seres vivos se clasificarn en acelulares (virus, viroides) y celulares, siendo estos a su vez clasificados en eucariotas y procariotas

Tcnicas microscpicas

Portaobjetos mojados provisionales Un portaobjeto mojado es un espcimen de una platina en una gota de fluido (agua, solucin salina o solucin colorante) preparado para el examen bajo alta y baja tensin. Debido a que el fluido se evaporar, el portaobjeto es provisional. Limpie ambos lados de un portaobjeto de vidrio y de un cubreobjeto. Coloque una gota de agua en el centro del portaobjeto. Coloque un pequeo articulo (un pedazo de piel de cebolla, elodea, hoja, pelo, o gota de agua de estanque) en la gota de agua. Aada ms agua para cubrir el

artculo, si es necesario. Luego coloque el cubreobjeto sobre la gota. El mejor mtodo para colocar el cubreobjeto es sostenerlo en un ngulo de aproximadamente 45 en relacin al portaobjeto y hacerlo descender cuidadosamente con un alfiler hasta que cubra el agua. Se pueden eliminar las burbujas en el cubreobjeto con el extremo romo de un lpiz. Es posible eliminar el exceso de agua del portaobjeto tocando un extremo del cubreobjeto con papel filtro o papel secante. El papel absorbe el agua. Ud. ya ha preparado un portaobjeto mojado o un portaobjeto de agua. Este durar por algunas horas.

Para prevenir la hinchazn Es posible que las clulas que tienen una concentracin de sal relativamente alta se hinchen cuando se les monta en agua corriente o de acuario. Esta hinchazn puede prevenirse colocando las clulas en una solucin de sal (cloruro de sodio) al 0.7 por ciento; luego coloque el cubreobjeto. La solucin de sal no deber ser tan fuerte o concentrada como para que las clulas pierdan agua y se reduzcan.

Para retardar la evaporacin Para que las platinas duren ms tiempo, se puede aplicar vaselina, petrolato o cera de vela alrededor del cubreobjeto para retardar la evaporacin: Un mtodo para hacer esto es sumergir la boca de un tubo de ensayo en la vaselina o petrolato. Aplique este crculo de vaselina alrededor de la gota de material en el portaobjeto y coloque un cubreobjeto de tal manera que sus bordes queden sellados al costado.

Cortando secciones a mano La mayora de los tejidos no son lo suficientemente rgidos (inclusive cuando han sido fijados) como para ser cortados en secciones delgadas sin antes colocarlos en parafina. Sin embargo, algunas hojas de plantas y tallos leosos pueden ser insertados entre pedazos de zanahoria fresca y luego cortados con un micrtomo o a mano con una hoja de afeitar.

Corte un pedazo de zanahoria por la mitad. Coloque el articulo que se debe cortar entre las dos mitades. Envuelva este bulto, unindolo firmemente, y remjelo durante algunas horas. La mdula y el tejido adjunto se dilatarn y volvern rgidos. Entonces puede cortarse el material en secciones delgadas con una hoja de afeitar. La hoja deber sostenerse en un ngulo pequeo en relacin a la superficie del espcimen. Mantenga mojados el espcimen y la hoja de afeitar. Haga flotar las secciones en agua para que no se enrosquen. Haga flotar solamente las secciones buenas y unifrmente finas sobre un portaobjeto y cubra con un cubreobjeto. La coloracin (teido) es opcional.

Preparacin de gota suspendida Si se examinara una gota de agua bajo el microscopio, la luz seria reflejada en muchas direcciones. Para evitar esto, se aplana la gota con un cubreobjeto. Sin embargo, al hacer esto se reduce la movilidad del organismo o, inclusive, se les aplasta con el peso del cubreobjeto. Una preparacin de gota suspendida permite que los estudiantes estudien la movilidad de bacterias, la fisin en los protozoos, la germinacin de granos de polen y fenmenos similares. Use un portaobjeto y un cubreobjeto limpios para que la tensin superficial del agua no sea reducida. Corte una "arandela", un crculo cartulina gruesa con un agujero grande en l. El tamao del agujero deber ser ligeramente ms pequeo que el tamao del cubreobjeto. Aplique un poco de vaselina a los dos lados de la arandela de cartulina. Presinela sobre el portaobjeto. Coloque una gota de medio de cultivo sobre el cubreobjeto. Coloque el portaobjeto invertido sobre el cubreobjeto de manera que el borde del cubreobjeto y el de la arandela sean sellados con la vaselina. Invierta rpidamente toda la preparacin. La gota de medio deber estar ahora suspendida del cubreobjeto.

Si no se necesita una gota suspendida, pero Ud. no desea aplastar un articulo tan pequeo, puede levantarse el cubreobjeto con bastante facilidad. Se pueden colocar pedazos de cubreobjetos rotos (o para artculos ms grandes, pedazos de vidrio roto) sobre

el portaobjeto, alrededor del articulo, para que el cubreobjeto repose sobre el vidrio. Deber aadirse suficiente agua o medio como para llenar el espacio entre el portaobjeto de vidrio y el cubreobjeto.

Concentracin de los organismos en un cultivo Muchos estudiantes querrn examinar protozoos, flagelos y otros organismos mviles. Algunas veces, el cultivo puede estar demasiado diluido, es decir, solo hay unos cuantos organismos en el cultivo, lo que da como resultado un nmero reducido de especmenes incluidos en una gota de fluido para un portaobjeto provisional. Los estudiantes pueden aumentar el nmero de organismos vertiendo el cultivo en un frasco largo o en un tubo de ensayo, y cubriendo todo, excepto el cuarto superior del tubo, con papel carbn, o preparando un pedazo corto de tubera de vidrio. Insrtelo en un tapn de un solo agujero en un frasco lleno de cultivo, y cubra el frasco con papel carbn. Los protozoos se concentran en las partes descubiertas (la parte superior del tubo de ensayo o la tubera en los tapones porque la mayora de los protozoos poseen un fototropismo positivo o un geotropismo negativo, o se renen donde la concentracin de oxigeno es mayor en la superficie). Usando un gotero medicinal, es posible colocar un gran numero de organismos en un portaobjeto en una gota de medio.

Disminuyendo la velocidad de los protozoos Los protozoos, especialmente las formas ciliadas, se mueven con demasiada rapidez como para que los estudiantes de secundaria, en especial los principiantes, puedan observarlos bajo el

microscopio. Existen varias maneras de disminuir la velocidad de los ciliados para poder estudiarlos de cerca y con detenimiento.

Una manera es simplemente preparar portaobjetos con anticipacin y dejar que el fluido se evapore. A medida que la evaporacin contina, el peso del cubreobjeto es suficiente para disminuir la velocidad de estos organismos.

Se puede colocar un anillo de celulosa de metileno o solucin de gelatina en el portaobjeto y aadir una gota de medio de cultivo en el anillo. Se coloca el cubreobjeto sobre la mezcla. A medida que la celulosa de metileno se esparce hacia el centro de la gota, los protozoos disminuirn su velocidad.

Flujo citoplasmtico (ciclosis) El flujo citoplasmtico alrededor de una celarla puede ser observado en muchas celarlas vivas montadas en una solucin salina o en agua de acuario. Con frecuencia, los cloroplastos en las clulas de plantas verdes se mueven alrededor del borde de una celarla. Muchas plantas acuticas evidencien esta circulacin de citoplasma llamada ciclosis. Monte una hoja de elodea (Anacharis), Nitella, Chara, o Vollismeria sobre un portaobjeto limpio. En la elodea, use las puntas en crecimiento y concntrese en las clulas de la nervadura central. En la Nitella y Chara, concntrese especialmente en las clulas entre los nudos. Mantenga la capa de clulas ms elevada mirando hacia arriba en el portaobjeto. Coloque las hojas en agua caliente o acerque una luz para calentamiento al recipiente para estimular la ciclosis. La velocidad de flujo puede ser de 3 a 15 cm. por hora y alcanzar hasta 45 cm. por hora a una temperatura aproximada a los 30 C.

En la Nitella hay muchos ncleos en las clulas entre los nudos, y stos tambin se mueven. Sin embargo, los cloroplastos se encuentran fijos dentro de la superficie interior de las paredes celulares y, en consecuencia, no se mueven.

El flujo citoplasmtico puede tambin observarse en otras substancias vivas. Monte en agua o glicerina hilos de micelio del hongo del pan Mucor. Es posible observar citoplasma fluyendo hacia arriba uno de los lados del hilo y hacia abajo por el otro.

Pelos

unicelulares en las

races

de

plantas

pequeas

de

Tradescantia o los pelos estaminados en la flor tambin muestran muy bien la ciclosis. Monte el filamento del estambre, el cual tiene muchos pelos unidos a l, en agua sobre un portaobjeto. Es posible observar grnulos movindose de los filamentos alrededor del

ncleo a lo largo de la pared hacia otro filamento que va hacia el ncleo.

La epidermis obtenido de una de las escamas interiores de una cebolla tambin demostrar la ciclosis si se le monta en agua sin solucin colorante.

En amebas tambin se puede estudiar el flujo con facilidad. Monte una gota de la solucin de cultivo en un portaobjeto limpio. Aada pedazos de cubreobjeto de vidrio rotos para sostener el

cubreobjeto. Esto se hace para que los espcimenes no sean aplastados. Se podrn observar muchas vacuolas y el citoplasma fluyendo activamente que cambie de sol a gel.

Tcnicas simples para teir portaobjetos provisionales Substancias qumicas para tcnicas microscpicas

Tcnica para preservar partes de plantas en tela plstica Para Recoleccin Soluciones Soluciones Modelos

preparar y y

esqueletos preservacin medios

de de

plantas animales nutritivos biolgicas

Soluciones colorantes no vitales El yodo de Lugol, el violeta cristal y la solucin colorante de Gram tien ciertas estructuras de la clula. Durante este proceso de coloracin o teido, algunas protenas son desnaturalizadas y la clula muere inmediatamente. Las clulas vivas no pueden ser estudiadas con estas soluciones colorantes no vitales.

Soluciones colorantes vitales En muchas ocasiones puede necesitarse que clulas vivas resalten detalles especficos de la estructura celular. Las soluciones colorantes vitales matan los organismos lentamente. Los

organismos absorben estas soluciones colorantes y continan con sus funciones vitales por algn tiempo. En consecuencia, es posible teir la clula viva para mostrar cilios, flagelos o

estructuras intercelulares. Estas soluciones colorantes vitales son el azul de metileno, el rojo neutral y el rojo conga. Los mtodos para la preparacin de estas soluciones colorantes vitales se mencionan en la seccin "Tcnicas microscpicas Soluciones Colorantes".

Los mtodos para soluciones colorantes vitales y no vitales son los mismos. Las tcnicas de coloracin o teido que se mencionan aqu son utilizadas para portaobjetos provisionales. La mayora de los materiales pueden ser teidos efectivamente por estos mtodos. Los materiales utilizados por lo comn son clulas de la planta y piel de cebolla, celarlas de la epidermis de la mejilla humana, tejido animal, platinas de sangre y cultivos de protozoos y algas.

Tcnicas para teir Coloque una gota de solucin colorante en un portaobjeto limpio y djela secar como una pelcula uniforme sobre el portaobjeto. Puede preparar varios portaobjetos de estas pelculas secas de solucin colorante y mantenerlos almacenados en una caja limpia. Cuando se les vaya a usar, solamente aada una gota de cultivo de protozoos, bacteria, cultivo de levadura, o clulas de tejido en un portaobjeto. La solucin colorante se disolver lentamente en la gota de material en el portaobjeto. Cuando se prepare un portaobjeto mojado, aada una gota de solucin colorante sobre el espcimen o gota de medio de cultivo en el portaobjeto. Luego coloque el cubreobjeto. Sostenga el cubreobjeto a un ngulo de aproximadamente 45 en relacin al portaobjeto y hgalo descender lenta y suavemente con alfiler hasta que cubra el agua. Es posible eliminar las burbujas golpeando levemente el cubreobjeto con el extremo romo de un lpiz. Otro mtodo para preparar un portaobjeto mojado provisional (los cultivos de protozoos y algas no pueden ser teidos utilizando este mtodo) es colocando una gota de solucin colorante en uno de los extremos de un cubreobjeto y luego conducir la solucin colorante bajo el cubreobjeto absorbiendo el agua con un pedazo de papel filtro

desde el lado opuesto del cobreobjeto. La solucin colorante se esparcir en el material.

Una solucin colorante de yodo teir el ncleo de marrn y el citoplasma de un marrn muy claro. Los azules de metileno teirn el ncleo de azul y el citoplasma de azul claro. Si la solucin colorante no es lo suficientemente oscura, se puede aadir otra gota de solucin colorante de la misma manera. Se puede aclarar el color aadiendo agua en lugar de solucin colorante para diluir la solucin colorante.

Manchas hechas con la punta de la raz de una cebolla Este es un mtodo fcil para la preparacin de portaobjetos tiles para explicar la mitosis. La clulas en divisin en las que los cromosomas se encuentran presentes pueden encontrarse con facilidad en un portaobjeto preparado de la siguiente manera.

Coloque un bulbo de cebolla en agua por uno o dos das hasta que comiencen a aparecer pequeas races blancas en el bulbo. Con una hoja de afeitar, corte el ltimo centmetro de la punta de la raz. Deje caer la raz en un vaso de laboratorio que contenga 1N HCl por solamente tres minutos. Luego retire la punta de la raz y colquela en un portaobjeto con varias gotas de solucin colorante de acetocarmn por varios minutos. No permita que la punta de la raz se seque. Con mucho cuidado corte y desprenda la porcin de la raz que presente una coloracin intensa. Descarte el resto del material. Con una hoja de afeitar, corte esta porcin restante en pedazos del tamao de la cabeza de un alfiler. Rpidamente coloque el cubreobjeto sobre el material. Cubra el portaobjeto y cubreobjeto con un pedazo de papel. Presione el cubreobjeto cuidadosa e uniformemente para aplastar las clulas; no tuerza el cubreobjeto. Retire el papel y examine las clulas. Si sella el extremo del portaobjeto con cera de vela, el portaobjeto puede durar 15 das

Manchas de sangre Las manchas de sangre son una tcnica para preparar portaobjetos permanentes o semipermanentes. Deber usarse sangre fresca de

un dedo o de un animal. Si se obtiene sangre del carnicero, deber aadirse 0,1 gramos de oxalato de potasio o sodio por cada 100 ml. de sangre. Esto prevendr que la sangre se coagule. Coloque una gota de sangre directamente sobre un extremo de un portaobjeto muy limpio. Artculos de vidrio lavados qumicamente son un requisito en la preparacin de manchas de sangre. Los

portaobjetos pueden limpiarse en alcohol de 95% y flamearse sobre una lmpara de alcohol. Coloque un segundo portaobjeto con un extremo en un ngulo de 30 en relacin al primer portaobjeto. Lleve el portaobjeto superior hasta la gota de sangre hasta que la gota de sangre se esparza de manera uniforme a lo largo del extremo angosto del portaobjeto. Empuje el portaobjeto superior hacia el extremo opuesto del primer portaobjeto para formar una pelcula delgada. Mientras mayor sea el ngulo entre los dos portaobjetos, ms gruesa ser la pelcula. Deje secar el portaobjeto al aire libre.

Tcnica de Wright para teir sangre La tcnica de Wright para teir sangre es un mtodo rpido y fcil para preparar una mancha de sangre que le permitir distinguir los diferentes tipos de clulas blancas. Utilice un portaobjeto con una mancha de sangre en l. Coloque el portaobjeto sobre un plato. Esto evitar que el exceso de solucin colorante toque o quede en la superficie inferior del portaobjeto. Cubra la pelcula de sangre seca completamente con solucin colorante de Wright de 1 a 3 minutos. Esto fija las clulas sanguneas al portaobjeto. Luego aada agua destilada al portaobjeto, gota a gota, hasta que la solucin colorante se diluya a la mitad y espuma de color verde metlico aparezca en la superficie del portaobjeto. Deje que esta solucin permanezca en el portaobjeto de 2 a 3 minutos. Luego lvelo con agua destilada; lave dos o tres veces. Ahora examine el portaobjeto bajo el microscopio; los grnulos en los basfilos debern teirse de azul intenso, las clulas eosinfilas de rojo brillante, y los neutrfilos de lila. Si el portaobjeto es demasiado oscuro, ste puede decolorarse lavando con ms agua destilada.

Solucin colorante de Giemsa La solucin colorante de Giemsa se usa tanto para manchas de sangre como para manchas de bacterias.

Una parte de la solucin base concentrada se deber diluir en diez partes de agua destilada.

Utilice una mancha de sangre secada al aire y fije la pelcula al portaobjeto colocndola en alcohol metlico de 70% de tres a cinco minutos. Seque el portaobjeto al aire. Luego coloque el portaobjeto en un plato o frasco (en el frasco de Coplin, si se cuenta con uno) que contenga solucin colorante de Giemsa de 15 a 30 minutos. Finalmente lave el portaobjeto en agua destilada y squelo.

Manchas de bacterias Para preparar manchas de bacterias, las bacterias debern encontrarse en una suspensin liquida. Si las bacterias provienen de agur slido o de un cultivo de papa, se deber transferir una pequea colonia a 5 ml. de agua esterilizada y mezclarse. Se coloca un pequeo lazo de alambre lleno de la suspensin sobre un portaobjeto limpio. Se deber esparcir la gota para obtener una pelcula fina y dejar a sta secar al aire. Cuando la pelcula se haya secado, pase la superficie inferior del portaobjeto a travs de la llama de un mechero de bunsen tres voces, o seis veces a travs de la llama de una lmpara de alcohol. El fondo del portaobjeto deber sentirse tibio y no demasiado caliente al tacto. Las bacterias ya han sido fijadas al portaobjeto y no se desprendern durante el proceso de teido.

Muchas soluciones colorantes (generalmente aquellas que son tintes bsicos de anilina, como la fucsina bsica, el violeta cristal, el azul de metileno y la safranina) puede ser usadas para colorear la bacteria. Se deber diluir la solucin colorante; vierta una parte de la solucin base concentrada en diez partes de agua. Se deber aplicar la solucin colorante de uno a dos minutos, lavando luego y, por ltimo, secando con papel secante. Los cubreobjetos no son necesarios a menos que quiera volver sus portaobjetos en

permanentes. En tal caso, aada una gota de blsamo cuando el portaobjeto est seco y luego aada un cubreobjeto.

Mtodo de Gram para teir manchas de bacterias El mtodo de Gram para teir manchas de bacterias es importante para clasificar y distiguir bacterias. Los organismos grampositivos se tien de violeta o azul. Generalmente, stas son bacterias cocceas (redondas), excepto los grupos de meningococos, gonococos y catarrales. Las bacterias gramnegativas toman un tinte rosado o rojizo. Los espirilos, espiroquetas, la mayora de los bacilos (bastoncitos) que son bacterias a prueba de cidos, y muchas formas que producen esporas son gramnegativos.

El procedimiento involucra teir, desteir o decolorar, y luego volver a teir. Los organismos grampositivos no se decoloran y mantienen el color violeta; los organismos gramnegativos pierden todo el color del primer teido y recogen solamente el rojo del segundo teido.

Tome una mancha de bacterias que haya sido fijada pasndola varias veces a travs de la llama de un quemador y cubra el portaobjeto con solucin colorante violeta cristal por un minuto. Vierta la solucin colorante y aada solucin colorante de Gram por un minuto. Quite esta solucin lavando con agua y decolore con alcohol etlico de 95%. Lave varias veces con alcohol etlico de 95% hasta que no se desprenda ms solucin colorante. Vuelva a lavar el portaobjeto en agua y vuelva a teir cubriendo totalmente el portaobjeto con tinte de safranina por medio minuto. Lave con agua, seque y examine bajo el microscopio.

Tcnicas microscpicas para portaobjetos permanentes El procedimiento general para teir y montar portaobjetos permanentes es el siguiente:

1. 2. 3. 4. 5.

Fije Deshidrate Limpie por

el medio el Encaje

tejido de una tejido en secciones con

y serie de en

endurezca. alcoholes. xilol. parafina. un micrtomo.

Corte

en

6. 7.

Fije

secciones

en parafina

un con

portaobjeto. xilol.

Disuelva

8. Pase por una serie de alcoholes hasta llegar al agua destilada. 9. Tia, vuelva a teir, destia, si es necesario.

10. Deshidrate por medio de una serie de alcoholes hasta llegar al xilol. 11.

Monte

en

blsamo.

12. Estudie bajo el microscopio. Fijacin Los tejidos deben ser colocados en fijadores por dos razones. Primero, porque las clulas deben ser matadas rpida y

uniformemente para que el contenido de las mismas se conserve y se parezca mucho al de la clula viva. La segunda razn es que el fijador endurece el tejido de manera que pueda ser cortado en secciones delgadas y transparentes.

Algunos fijadores deben ser eliminados por medio del lavado antes de que las clulas puedan ser teidas. Normalmente, las clulas se colocan en el fijador por suficiente tiempo para asegurar que todas las clulas hayan sido matadas (48 horas para especmenes grandes). Luego se elimina el fijador por medio del lavado, y el tejido se coloca en un preservativo hasta que se le vaya a teir. Los fijadores que contienen cloruro mercrico o cido pcrico deben ser lavados por lo menos durante una hora en alcohol de 70%. Si el tejido contiene dicromato de potasio, el tejido deber ser lavado en agua corriente por lo menos durante una hora. Ms adelante se puede encontrar una seccin con una lista de fijadores y preservativos.

Deshidratacin Una vez que el tejido ha sido fijado y los fijadores han sido eliminados, el siguiente paso es eliminar el agua del tejido. Esto deber hacerse de manera gradual de manera que la diferencia entre la velocidad de difusin del alcohol y la del agua no deformen los delicados tejidos y que la parafina entre a todos los espacios

normalmente ocupados por el agua. Esto brinda soporte al tejido cuando ste est siendo cortado en secciones finas.

Normalmente se transfieren los tejidos del preservativo a alcohol etlico de 70%. Sin embargo, los tejidos muy delicados primero se lavan en agua y luego, gradualmente, se les lleva hasta alcohol de 70%, pasando por alcohol de 30% y 50%. Mantenga los tejidos por una hora en cada solucin de alcohol. Una vez que el tejido haya permanecido en alcohol de 70% por unas cuantas horas, transfiralo a alcohol de 95% por una hora, luego a alcohol puro (100%) por no ms de una hora.

Del alcohol puro transfiera el tejido a xilol, un agente limpiador, (tambin llamado xileno) para preparlo para la fijacin en cera. Se utiliza el xilol para eliminar el alcohol de los tejidos y permitir que la parafina penetre los espacios en el tejido. Mantenga el tejido en xilol de dos a tres horas. Si el xilol se vuelve turbio, regrese el tejido a alcohol puro fresco; la turbiedad indica algunas voces que el tejido no ha sido deshidratado completamente.

Encajar o fijar Cuando los tejidos han sido limpiados, stos se encuentran listos para ser encajados o fijados en parafina derretida. cera deber ser derretida con anticipacin y mantenida en un horno de parafina, o en un bao de agua (se deber colocar un cristal de reloj sobre los recipientes con parafina y una plancha de vidrio grande sobre el recipiente lleno de agua). La temperatura de la cera se deber mantener a uno o dos grados sobre el punto de fusin.

Se deber colocar el espcimen en un pequeo recipiente de papel y cubrrsele con parafina fresca (se puede fabricar un recipiente pequeo doblando papel y dndole la forma de un cubo de una pulgada). Despus de una hora, se deber retirar la cera y aadirse cera fresca. Despus de otra hora, se deber colocar cera fresca en el recipiente con el espcimen. Entonces se retira el recipiente de la parafina y se le deja enfriar. Se puede acelerar el proceso de enfriamiento colocando el recipiente en agua fra. Una vez que se haya formado una pelcula sobre la cera, se puede sumergir el

bloque. Cuando la cera se haya endurecido por completo, sta puede ser retirada del recipiente de papel. Recorte el bloque de parafina a un tamao pequeo para que quepa en el soporte del micrtomo, pero de manera que an quede cera alrededor del espcimen. Sujete el bloque al soporte derritiendo uno de los extremos del bloque y presionndolo contra el soporte.

Seccionar Una vez que el bloque y el soporte han sido unidos firmemente y montados en el micrtomo, se debern acomodar la hoja y el bloque de manera que se pueda cortar una seccin de 6 a 9 micras de ancho. (Una micra es igual a 1/25,000 de pulgada). A medida que se corta, se va formando una tira de secciones de cera; levante unas cuantas secciones con la ayuda de una aguja y una hoja, y hgalas flotar en agua ligeramente caliente que est cubriendo un portaobjeto preparado. El portaobjeto deber prepararse con una pelcula delgada de albmina. La temperatura del agua deber encontrarse por debajo del punto de fusin de la parafina. Las secciones de cera se hincharn hasta alcanzar su tamao mximo (no se debern formar arrugas y, de ocurrir, descarte). Elimine el agua y coloque el portaobjeto en un horno de secado a 37C por 24 horas. Si se acorta este periodo, las secciones se desprendern durante el proceso de teido.

Hidratacin Se deber eliminar la cera de los portaobjetos para que los tejidos puedan ser teidos. El portaobjeto se coloca en xilol por cinco minutos para disolver la cera. Luego se le transfiere a alcohol absoluto por tres minutos para eliminar el xilol.

Luego se pasa el portaobjeto por alcoholes de 95%, 70%, 50% y 30% por un periodo de dos minutos en cada solucin. Luego se le coloca en agua destilada por un minuto. Ahora se encuentra listo para ser teido porque la mayora de las soluciones colorantes son acuosas.

Teido y montaje

Normalmente el portaobjeto se saca del agua y se le coloca en una solucin colorante nuclear (una solucin colorante bsica que tie cromosomas, centrosomas, nuclolos, corcho, epidermis

cutinizada y xilema de plantas) por dos minutos. Luego se lava el portaobjeto en agua fresca hasta que el color se destia. El proceso de deshidratacin se sigue hasta llegar al alcohol de 90% (es el inverso del proceso de hidratacin). En este nivel se coloca el portaobjeto en una solucin colorante bsica (citoplasmtica) por un minuto. Esta tie el plasma, los cilios y las estructuras celulosas de las clulas. Luego se enjuaga el portaobjeto en alcohol de 95%, llevndosele despus a xilol donde permancer hasta que se le monte en blsamo de Canad.

Existen muchas soluciones colorantes cidas y bases, y cada una tendr un proceso recomendado para su uso. Algunos de stos se indican en la seccin sobre soluciones colorantes.

Tiiendo secciones de Gimnosperma y Angiosperma Materiales requeridos: Pinceles Aguja. Cristales Una hoja de afeitar de nueva y verde claro, violeta de de de alcohol al 30%, 50%, 70% y de de borde reloj. afilado. pequeos (de los usados para acuarelas).

Portaobjetos Safranina, Aceite Blsamo Soluciones Xilol.

cubreobjetos. genciana, naranja. clavero. Canad. 100%.

Solucin de caucho (usada para la reparacin de bicicletas).

Procedimiento: Corte la parte que se requiere (tallo, raz, hoja, peciolo, etc.) de material fresco o de material preservado en alcohol de 70%. Corte secciones delgadas y uniformes con la hoja de afeitar. La seccin se deber sumergir en agua en un cristal de reloj. Manteniendo la seccin en el portaobjeto, examnela bajo un microscopio compuesto. Tenga cuidado de que todas las partes se

encuentren presentes y limpias. Transfiera la seccin del agua, con un pincel, a un pequeo montculo de safranina en otro cristal de reloj. Mantngala ah de 3 a 4 minutos (si se le deja por ms tiempo, la seccin tomar" una coloracin rojo oscuro). Retire la seccin con un pincel y transfirala a alcohol de 30% en otro cristal de reloj. Luego de 3 a 5 minutos, transfirala a alcohol de 50%. Mantngala ah de 3 a 5 minutos y transfirala luego a alcohol de 70%. La seccin se deber mantener ah por 5 minutos si es de color rojo oscuro, o por 3 minutos si el color es claro. Luego transfirala a alcohol de 100% de 3 a 5 minutos. Lvela en aceite de clavero. Aada un poco de verde claro al aceite de clavero y mantngala ah de 3 a 5 minutos. Nuevamente, transfiera la seccin a otro cristal de reloj que contenga aceite de clavero. (Es posible mantener las secciones en aceite de clavero por perodos ms extensos). Examine la seccin bajo un microscopio compuesto. Tome la seccin en el portaobjeto junto con una gota de aceite de clavero. Use una aguja de vidrio para colocar una gota de blsamo de Canad en el centro del portaobjeto y coloque la seccin en la gota. Sostenga el cubreobjeto en un ngulo de 45 y, con la aguja, deje caer el cubreobjeto gradual y lentamente mientras que el blsamo de Canad se est esparciendo. Esto evita la entrada de burbujas en el blsamo. Se deber tener cuidado de que el blsamo no se escape del cubreobjeto. Si se forman burbujas de aire, caliente el portaobjeto con cuidado sobre una lmpara de alcohol para eliminarlas. Elimine el exceso de blsamo con xilol.

Mezcle xilol y solucin de caucho de manera que se forme un lquido pejagoso. Una vez que el portaobjeto haya reposado por dos o tres das selle los extremos del cubreobjeto con la mezcla pejagosa de xilol-solucin de caucho. Si el portaobjeto est completamente seco, el sello no es necesario. Si no ha secado, deber ser sellado para prevenir que el aire penetre.

Cualquier seccin puede ser teida usando el mtodo antes descrito. La combinacin deber ser safranina y verde claro o violeta de genciana y naranja. Por lo general, los vasos de xilema

tomarn la safranina o solucin colorante violeta, y las otras partes la solucin colorante verde claro o naranja. FRACCIONAMIENTO CELULAR

El fraccionamiento celular es usado para investigar la bioqumica y fisiologa de organelos fuera del ambiente complejo de la clula intacta. El objetivo principal de este experimento es aislar los

cloroplastos, ncleo y mitocondria del tejido de plantas por el mtodo de fraccionamiento celular. Los otros objetivos son examinar esas fracciones microscpicamente y estimar el coeficiente de

sedimentacin de los cloroplastos.

HOMOGENIZACIN

Para preparar los tejidos para el fraccionamiento celular, primero se debe suspender en un medio apropiado(una solucin amortiguadora, salina azcar isotnica). Para mantener la integridad de los

organelos y enzimas durante el procedimiento de la fraccionacin , todas las soluciones y cristalera debe mantenerse fras. Despus de rebanar las hojas, el tejido est preparado para la homogenizacin, procedimiento que rompe los enlaces celulares y libera el contenido celular, sin daar el medio en suspensin. La suspensin de clulas constituyentes se llama homogenado. Para los tejidos de plantas, la homogenizacin se debe realizar con un mortero(fig.1), al cual se le aade arena como abrasivo. En este proyecto los cloroplastos se aislarn de la espinaca; ncleos y mitocondria se aislarn de la coliflor.

CENTRIFUGACION

Debido a las diferencias en tamao y densidad, cada componente celular est sujeto a una fuerza centrfuga. La fuerza generada por la centrfuga se expresa como fuerza centrfuga relativa(RCF)en unidades de g. La RCF es una funcin de velocidad de centrifugacin en

revoluciones por minutos (rpm) y la distancia de partculas desde el eje de rotacin. Conociendo esta distancia (x) y el (rpm), se puede determinar el RCF de la ecuacin : RCF = 1.19 x 10-5 (rpm)2x, donde x se toma como la distancia (en cm) desde el eje de rotacin hasta el margen de afuera del tubo de centrfuga.

CENTRIFUGACION DIFERENCIAL

En la centrifugacin diferencial, el homogenado es centrifugado repetidas veces a altas velocidades ,sedimentndolo progresivamente en pequeas partculas. El mtodo est ilustrado en la fig. 2. La primera centrifugacin es a 600g por 10 minutos, el cual sedimenta la fraccin nuclear. Este pellet contiene el ncleo, clulas intactas y tejido.. L prxima separacin es el sobrenadante postnuclear partculas suspendidas en lquido sobre el pellet nuclear, el cual es tranferido a otro tubo de centrfuga y se centrfuga a 10,000 g por 30 minutos en una centrfuga refrigerada. El material sedimentado se conoce como fraccin mitocondrial ; ste contiene mitocondria y micro cuerpos. Los cloroplastos de las clulas de espinaca se aislarn utilizando el mtodo modificado de F.R Whatley y D.I.Arnon (1962). La espinaca se homogeniza en un amortiguador de sal. Despus que el tejido de la planta se macera en un mortero, el homogenado se filtra a travs de una gaza para remover los pedazos grandes de tejidos. El filtrado es centrifugado a 200 g por 1 minuto. El sobrenadante se centrfuga a 1300 g por 5 minutos, sedimentando los clorosplastos.

La fraccin nuclear y mitocondrial de las clulas de las clulas de la coliflor se obtendrn utilizando una centrifugacin diferencial escrita por W.D. Bonner (1967). El tejido se homogeniza en una solucin amortiguadora de mannitol. Despus se la filtracin a travs de una gaza, el homogenado es centrifugado como se ilustra en la fig. 2, paso 3.

EXAMINACION MICROSCPICA

Todas la s fracciones aisladas se examinarn microscpicamente para identificar los organelos presentes.

Cloroplastos.

Los cloroplastos son relativamente rganelos

grandes, por lo tanto, se algunos detalles internos se observan con el microscopio de luz. Luego de examinar la morfologa normal de los

cloroplastos de la espinaca, se estudiarn los efectos de dos compuestos orgnicos. Los cloroplastos sern tratados con una solucin saturada de urea y una solucin acuosa de Triton X-100, el cual es un detergente fuerte. Urea es conocida para desnaturalizar protenas, alguna de las cuales salen de la membrana de los cloroplastos. Ncleo. Para la observacin de los ncleos se debe realizar una tincin. El tinte a utilizar ser lacto-aceto-orcein, el cual tie de rojo la cromatina. Cada nucleolo aparece como un rea prominente, redonda y clara.

Mitocondria. Las mitocondrias son teidas con el tinte Janus green B. Despus de la tincin, la mitocondria tie azul-verdosa, la cual es el color del tinte en su forma oxidada; en su forma reducida, el tinte es incoloro. El Janus green se mantiene en estado oxidado por el sistema de oxidasa citocromo de la mitocondria.

PROCEDIMIENTO:

I.

DETERMINACIN

DE

LAS

VELOCIDADES

DE

CENTRIFUGACION REQUERIDAS PARA EL AISLAMIENTO DE CLOROPLASTOS

1. Mide el radio del rotor ( la distancia en centmetros desde el centro del rotor hasta el extremo inferior de un tubo de centrfuga colocado horizontalmente). Anote este dato en la tabla de la pg. 125.

2. Calcula las rpm requeridas para cada una de las centrifugaciones (200g y 1300g) para obtener una fraccin conteniendo cloroplastos, usando la frmula RCF= 1.119 x 10-2 (rpm)26 x. Anote los datos en la tabla de la pgina 125. 3. Usando los datos obtenidos en el paso anterior ajusta el tacmetro en la centrfuga con el propsito e obtener los rpm requeridos equivalentes a 200 g y a 1,300 g.

II.

AISLAMIENTO DE LA FRACCION DE CLOROPLASTOS

1. Pese 4 g de hojas frescas de espinaca, a las cuales se les removieron las venas centrales. 2. Corte las hojas en pequeos pedazos y colquelas en un mortero fro. Aada 15 ml de la solucin amortiguadora de Tris-NaCl fra y arena purificada. Macere el tejido por 2 minutos. 3. Filtre la suspensin a travs de varias capas de gaza a un tubo de centrfuga de 15 ml fro. 4. Centrifuge el lquido filtrado a 200 g por 1 minuto. Verifique que los tubos de centrfuga estn balanceados. 5. Decante el sobre nadante a un tubo fro y centrifuge a 1300 g por 5 minutos. 6. Despus de la centrifugacin, mida las distancias A y B (Fig. 10.3). A es la distancia en centmetros desde el extremo inferior del tubo de centrfuga al tope del pellet. Anote los datos en la pgina 125; stos se utilizarn para calcular el Coeficiente de Sedimentacin. 7. Decante y descarte el sobre nadante y usando una probeta , asda 10 ml de la solucin amortiguadora fra de Tris-NaCl al pellet que qued en el tubo de centrfuga. Resuspenda el pellet con una pipeta Pasteur.

8. Tape el tubo de centrfuga, e invierta el mismo para mezclar su contenido. Colocar en hielo.

III.

OBSERVACIN MICROSCPICA DE LA FRACCION DE CLOROPLASTOS

1. Con una pipeta Pasteur remueva una gota de la suspensin de cloroplastos y lleve a cabo una preparacin hmeda wet mount. Use una pequea gota de modo que no tenga que ejercer presin sobre el cubreobjetos, daando los cloroplastos. 2. Examine los cloroplastos bajo el objetivo de alta potencia y luego y luego bajo el objetivo de inmersin en aceite. 3. Mida el largo de y el ancho de 5 cloroplastos. Anote los datos en la pgina 12 4. Observa la morfologa de varios cloroplastos. Identifica los cloroplastos que tengan una morfologa interna poco homognea y contesta las preguntas de las pgina 12. 5. En el espacio provista en la pgina 1, represente con un diagrama los cloroplastos que muestren detalles internos e identifique sus estructuras.

IV.

OBSERVACIN MICROSCPICA DE LOS CLOROPLASTOS TRATADOS CON UREA

1. Coloque

una

pequea

gota

de

la

suspensin

de

cloroplastos en una laminilla limpia. Aada una gota de la solucin de urea saturada y coloque un cubreobjetos. Cuidado de no presionar el cubreobjetos. 2. Examine los cloroplastos bajo el objetivo de alta potencia y el de inmersin de aceite por 5 minutos y conteste las preguntas de la pgina 12 3. Dibuje los cloroplastos que presenten una morfologa alterada.

V.

OBSERVACIN MICROSCPICA DE LOS CLOROPLASTOS TRATADOS CON TRITON

1. Prepare un montaje hmedo usando una pequea gota de la suspensin de cloroplastos y una gota de solucin de Triton X-100 al 2%. 2. Examine la preparacin bajo el objetivo de alta potencia y el de inmersin de aceite y conteste las preguntas de la pgina 12.

VII.

DETERMINACIN DEL COEFICIENTE DE SEDIMENTACIN

1. Determine el coeficiente de sedimentacin para los cloroplastos que inicialmente estaban en la parte

superior de la suspensin y luego de la centrifugacin se movieron al tope de l pellet. Para determinar S, calcule la distancias X1 y X2. Como de se demuestra en la fig. 10.3; X1= radio del rotor- A; y X2= radio del rotor-B. Anote los valores para X1 y X2 en la tabla de la pg. 11.

2. Anote los valores para rpm y (t2-t1) (en segundos). Calcule S usando la ecuacin :

S= 210 log(x2/x1) (rpm)2 (t2-t1)

VIII.

AISLAMIENTO

DE

FRACCIONES

CELULARES

MITOCONDRIALES

1. Remueva 20 g de la parte externa del coliflor con un escalpelo. 2. Coloque el tejido en un mortero fro con 40 ml de medio de maceracin de Mannitol (Mannitol grinding medium) y 5 g de arena purificada. Macrelos tejidos por 4 minutos. 3. Filtre la suspensin a travs de 4 capas de gaza a un tubo de centrfuga. Deje reposar el tubo por 2 minutos. 4. Decante cuidadosamente el sobre nadante a un tubo y centrifuge a 600 g por 10 min. a 0-4 C . 5. Decante el sobre nadante post nuclear a un tubo de centrfuga y coloque el pellet nuclear en un bao de hielo. 6. Centrifuge el sobre nadante post nuclear a 10,000 g por 30 min a 0-4 C. Durante la centrifugacin examine

microscpicamente .

7. Decante y descarte el sobre nadante post mitocondrial y aada 5 ml del medio e mannitol fro al pellet mitocondrial. 8. Con una esptula remueva el pellet mitocondrial de las paredes del tubo de centrfuga y luego con una pipeta Pasteur, resuspndalo en el medio de mannitol. 9. Transfiera la suspensin mitocondrial a un tubo de ensayo y colquelo en un bao de hielo.

IX.

OBSERVACIN NUCLEAR

MICROSCPICA

DE

LA

FRACCION

1. Con una esptula remueva una pequea cantidad del pellet nuclear y aplquelo en una laminilla. Aada varias gotas del tinte para ncleo lacto-aceto-orceina. Luego de 15 seg, aada un cubreobjetos y remueva usando un poco de presin el exceso de tinte con papel toalla. 2. Examine la preparacin bajo el objetivo de alta potencia usando un filtro verde. Luego de identificar los ncleos, utilice el objetivo de inmersin en aceite. Mida sus dimetros y antelos en el espacio provisto en la pg. 12 3. Represente con un diagrama los ncleos observados e identifique los nuclelos.

X. OBSERVACIN MITOCONDRIAL

MICROSCPICA

DE

LA

FRACCION

1. Coloque 5 gotas de la suspensin mitocondrial en un tubo pequeo. Aada 5 gotas del tinte verde Janus (Janus green stain), agite y espere 10 minutos. 2. Coloque una gota de la mezcla en una laminilla limpia y observe bajo el objetiva de alta potencia y el de inmersin en aceite del microscopio. Identifique las mitocondrias.

3. Mida el largo y ancho de 5 mitocondrias. Calcule la media de los valores 4. Observe la morfologa de las mitocondrias

Metabolismo

Esquema del adenosn trifosfato, una coenzima intermediaria principal en el metabolismo energtico. El metabolismo es el conjunto de reacciones bioqumicas y procesos fsico-qumicos que ocurren en una clula y en el organismo.1 Estos complejos procesos interrelacionados son la base de la vida a escala molecular, y permiten las diversas actividades de las clulas: crecer, reproducirse, mantener sus estructuras, responder a estmulos, etc. El metabolismo se divide en dos procesos conjugados: catabolismo y anabolismo. Las reacciones catablicas liberan energa; un ejemplo es la gluclisis, un proceso de degradacin de compuestos como la glucosa, cuya reaccin resulta en la liberacin de la energa retenida en sus enlaces qumicos. Las reacciones anablicas, en cambio, utilizan esta energa liberada para recomponer enlaces qumicos y construir

componentes de las clulas como lo son las protenas y los cidos nucleicos. El catabolismo y el anabolismo son procesos acoplados que

hacen al metabolismo en conjunto, puesto que cada uno depende del otro. La economa que la actividad celular impone sobre sus recursos obliga a organizar estrictamente las reacciones qumicas del metabolismo en vas o rutas metablicas, donde un compuesto qumico (sustrato) es transformado en otro (producto), y este a su vez funciona como sustrato para generar otro producto, siguiendo una secuencia de reacciones bajo la intervencin de diferentes enzimas (generalmente una para cada sustrato-reaccin). Las enzimas son cruciales en el metabolismo porque agilizan las reacciones fsico-qumicas, pues hacen que posibles reacciones termodinmicas deseadas pero "desfavorables", mediante un acoplamiento, resulten en reacciones favorables. Las enzimas tambin se comportan como factores reguladores de las vas metablicas, modificando su funcionalidad y por ende, la actividad completa de la va metablica en respuesta al ambiente y necesidades de la clula, o segn seales de otras clulas. El metabolismo de un organismo determina qu sustancias encontrar nutritivas y cules encontrar txicas. Por ejemplo, algunas procariotas utilizan sulfuro de hidrgeno como nutriente, pero este gas es venenoso para los animales.2 La velocidad del metabolismo, el rango metablico, tambin influye en cunto alimento va a requerir un organismo. Una caracterstica del metabolismo es la similitud de las rutas metablicas bsicas incluso entre especies muy diferentes. Por ejemplo: la secuencia de pasos qumicos en una va metablica como el ciclo de Krebs es universal entre clulas vivientes tan diversas como la bacteria unicelular Escherichia coli y organismos pluricelulares como el elefante.3 Esta estructura metablica compartida es muy probablemente el resultado de la alta eficiencia de estas rutas, y de su temprana aparicin en la historia evolutiva.4 5 Investigacin y manipulacin

Red metablica del ciclo de Krebs de la planta Arabidopsis thaliana. Las enzimas y los metabolitos se muestran en rojo y las interacciones mediante lneas. Clsicamente, el metabolismo se estudia por una aproximacin

reduccionista que se concentra en una ruta metablica especfica. La utilizacin de los diversos elementos en el organismo son valiosos en todas las categoras histolgicas, de tejidos a clulas, que definen las rutas de precursores hacia su producto final.6 Las enzimas que catabolizan estas reacciones qumicas pueden ser purificadas y as estudiar su cintica enzimtica y las respuestas que presentan frente a diversos inhibidores. Otro tipo de estudio que se puede llevar a cabo en paralelo es la identificacin de los metabolitos presentes en una clula o tejido; al estudio de todo el conjunto de estas molculas se le denomina metabolmica. Estos estudios ofrecen una visin de las estructuras y funciones de rutas metablicas simples, pero son inadecuados cuando se quieren aplicar a sistemas ms complejos como el metabolismo global de la clula.7 En la imagen de la derecha se puede apreciar la complejidad de una red metablica celular que muestra interacciones entre tan slo 43 protenas

y 40 metabolitos: esta secuencia de genomas provee listas que contienen hasta 45.000 genes.8 Sin embargo, es posible usar esta informacin para reconstruir redes completas de comportamientos bioqumicos y producir ms modelos matemticos holsticos que puedan explicar y predecir su comportamiento.9 Estos modelos son mucho ms efectivos cuando se usan para integrar la informacin obtenida de las rutas y de los metabolitos mediante mtodos clsicos con los datos de expresin gnica obtenidos mediante estudios de protemica y de chips de ADN.10 Una de las aplicaciones tecnolgicas de esta informacin es la ingeniera metablica. Con esta tecnologa, organismos como las levaduras, las plantas o las bacterias son modificados genticamente para hacerlos ms tiles en algn campo de la biotecnologa, como puede ser la produccin de drogas, antibiticos o qumicos industriales.11
12 13

Estas

modificaciones genticas tienen como objetivo reducir la cantidad de energa usada para producir el producto, incrementar los beneficios y reducir la produccin de desechos.14 Biomolculas principales

Estructura de un lpido, el triglicrido. La mayor parte de las estructuras que componen a los animales, plantas y microbios pertenecen a alguno de estos tres tipos de molculas bsicas: aminocidos, glcidos y lpidos (tambin denominados grasas). Como

estas molculas son vitales para la vida, el metabolismo se centra en sintetizar estas molculas, en la construccin de clulas y tejidos, o en degradarlas y utilizarlas como recurso energtico en la digestin. Muchas biomolculas pueden interaccionar entre s para crear polmeros como el ADN (cido desoxirribonucleico) y las protenas. Estas macromolculas son esenciales en los organismos vivos. En la siguiente tabla se muestran los biopolmeros ms comunes:

Tipo molcula

de Nombre monmero

de

forma

de Nombre polmero

de

formas

de

Pptidos

Aminocidos

Protenas (o polipptidos)

Carbohidratos

Monosacridos

Polisacridos

cidos nucleicos

Nucletidos

Polinucletidos

Aminocidos y protenas Las protenas estn compuestas por los aminocidos, dispuestos en una cadena lineal y unidos por enlaces peptdicos. Las enzimas son protenas que catalizan las reacciones qumicas en el metabolismo. Otras protenas tienen funciones estructurales o mecnicas, como las protenas del citoesqueleto que forman un sistema de andamiaje para mantener la forma de la clula.15 celular.17 Lpidos Los lpidos son las biomolculas que ms diversidad presentan. Su funcin estructural bsica es formar parte de las membranas biolgicas
16

Las protenas tambin son partcipes de la

comunicacin celular, la respuesta inmune, la adhesin celular y el ciclo

como la membrana celular, o bien como recurso energtico.17 Los lpidos son definidos normalmente como molculas hidrfobicas o anfipticas, que se disuelven en solventes orgnicos como la bencina o el cloroformo.18 Las grasas son un grupo de compuestos que incluyen cidos grasos y glicerol; una molcula de glicerol junto a tres cidos grasos ster dan lugar a una molcula de triglicrido.19 Se pueden dar variaciones de esta estructura bsica, que incluyen cadenas laterales como la esfingosina de los esfingolpidos y los grupos hidroflicos tales como los grupos fosfato en los fosfolpidos. Esteroides como el colesterol son otra clase mayor de lpidos sintetizados en las clulas.20 Carbohidratos

La glucosa puede existir en forma de cadena y de anillo. Los carbohidratos son aldehdos o cetonas con grupos hidroxilo que pueden existir como cadenas o anillos. Los carbohidratos son las molculas biolgicas ms abundantes, y presentan varios papeles en la clula; algunos actan como molculas de almacenamiento de energa (almidn y glucgeno) o como componentes estructurales (celulosa en las plantas, quitina en los animales).17 Los carbohidratos bsicos son llamados monosacridos e incluyen galactosa, fructosa, y el ms importante la glucosa. Los monosacridos pueden sintetizarse y formar polisacridos.21

Nucletidos Los polmeros de ADN (cido desoxirribonuclico) y ARN (cido ribonuclico) son cadenas de nucletidos. Estas molculas son crticas para el almacenamiento y uso de la informacin gentica por el proceso de transcripcin y biosntesis de protenas.17 Esta informacin se encuentra protegida por un mecanismo de reparacin del ADN y duplicada por un mecanismo de replicacin del ADN. Algunos virus tienen un genoma de ARN, por ejemplo el HIV, y utilizan retrotranscripcin para crear ADN a partir de su genoma viral de ARN; 22 estos virus son denominados retrovirus. El ARN de ribozimas como los ribosomas es similar a las enzimas y puede catabolizar reacciones qumicas. Los nuclesidos individuales son sintentizados mediante la unin de bases nitrogenadas con ribosa. Estas bases son anillos heterocclicos que contienen nitrgeno y, segn presenten un anillo o dos, pueden ser clasificadas como pirimidinas o purinas,

respectivamente. Los nucletidos tambin actan como coenzimas en reacciones metablicas de transferencia en grupo.23 Coenzimas

Estructura de una coenzima, el coenzima A transportando un grupo acetilo (a la izquierda de la figura, unido al S). El metabolismo conlleva un gran nmero de reacciones qumicas, pero la gran mayora presenta alguno de los mecanismos de catlisis bsicos de reaccin de transferencia en grupo.24 Esta qumica comn permite a las clulas utilizar una pequea coleccin de intermediarios metablicos para trasladar grupos qumicos funcionales entre diferentes reacciones. 23 Estos intermediarios de transferencia de grupos son denominados

coenzimas. Cada clase de reaccin de grupo es llevada a cabo por una coenzima en particular, que es el sustrato para un grupo de enzimas que lo producen, y un grupo de enzimas que lo consumen. Estas coenzimas son, por ende, continuamente creadas, consumidas y luego recicladas.25 La coenzima ms importante es el adenosn trifosfato (ATP). Este nucletido es usado para transferir energa qumica entre distintas reacciones qumicas. Slo hay una pequea parte de ATP en las clulas, pero como es continuamente regenerado, el cuerpo humano puede llegar a utilizar su propio peso en ATP por da.25 El ATP acta como una conexin entre el catabolismo y el anabolismo, con reacciones catablicas que generan ATP y reacciones anablicas que lo consumen. Tambin es til para transportar grupos fosfato en reacciones de fosforilacin. Una vitamina es un compuesto orgnico necesitado en pequeas cantidades que no puede ser sintetizado en las clulas. En la nutricin humana, la mayora de las vitaminas trabajan como coenzimas modificadas; por ejemplo, todas las vitaminas hidrosolubles son fosforiladas o acopladas a nucletidos cuando son utilizadas por las clulas.26 La nicotinamida adenina dinucletido (NAD), un derivado de la vitamina B, es una importante coenzima que acta como aceptor de protones. Cientos de deshidrogenasas eliminan electrones de sus sustratos y reducen el NAD+ en NADH. Esta forma reducida de coenzima es luego un sustrato para cualquier componente en la clula que necesite reducir su sustrato.27 El NAD existe en dos formas relacionadas en la clula, NADH y NADPH. El NAD+/NADH es ms importante en reacciones catablicas, mientras que el NADP+/NADPH es principalmente utilizado en reacciones anablicas.

Estructura de la hemoglobina. Las subunidades proteicas se encuentran sealadas en rojo y azul, y los grupos hemo de hierro en verde. Minerales y cofactores Los elementos inorgnicos juegan un rol crtico en el metabolismo; algunos son abundantes (sodio y potasio, por ejemplo), mientras que otros actan a concentraciones mnimas. Alrededor del 99% de la masa de un mamfero se encuentra compuesta por los elementos carbono, nitrgeno, calcio, sodio, cloro, potasio, hidrgeno, oxgeno y azufre.28 Los compuestos orgnicos (protenas, lpidos y carbohidratos) contienen, en su mayora, carbono y nitrgeno, mientras que la mayora del oxgeno y del hidrgeno estn presentes en el agua.28 Los elementos inorgnicos actan como electrolitos inicos. Los iones de mayor importancia son sodio, potasio, calcio, magnesio, cloruro y fosfato, y el ion orgnico bicarbonato. El gradiente inico a lo largo de las membranas de la clula mantienen la presin osmtica y el pH.29 Los iones son tambin crticos para nervios y msculos ya que el potencial de accin en estos tejidos es producido por el intercambio de electrolitos entre el fluido extracelular y el citosol.30 Los electrolitos entran y salen de la clula a travs de protenas en la membrana plasmtica, denominadas

canales inicos. Por ejemplo, la contraccin muscular depende del movimiento del calcio, sodio y potasio a travs de los canales inicos en la membrana y los tbulos T.31 Los metales de transicin se encuentran presentes en el organismo principalmente como zinc y hierro, que son los ms abundantes.32
33

Estos metales son usados en algunas protenas como cofactores y son esenciales para la actividad de enzimas como la catalasa y protenas transportadoras del oxgeno como la hemoglobina.34 Estos cofactores estn estrechamente ligados a una protena; a pesar de que los cofactores de enzimas pueden ser modificados durante la catlisis, siempre tienden a volver al estado original antes de que la catlisis tuviera lugar. Los micronutrientes son captados por los organismos por medio de trasportadores especficos y protenas de almacenamiento especficas tales como la ferritina o la metalotionena, mientras no son utilizadas.35 36 Catabolismo El catabolismo es el conjunto de procesos metablicos que liberan energa. Estos incluyen degradacin y oxidacin de molculas de alimento, as como reacciones que retienen la energa del Sol. El propsito de ests reacciones catablicas es proveer energa, poder reductor y componentes necesitados por reacciones anablicas. La naturaleza de estas reacciones catablicas difiere de organismo en organismo. Sin embargo, estas diferentes formas de catabolismo dependen de reacciones de reduccin-oxidacin que involucran

transferencia de electrones de molculas donantes (como las molculas orgnicas, agua, amonaco, sulfuro de hidrgeno e iones ferrosos), a aceptores de dichos electrones como el oxgeno, el nitrato o el sulfato.37 En los animales, estas reacciones conllevan la degradacin de molculas orgnicas complejas a otras ms simples, como dixido de carbono y agua. En organismos fotosintticos como plantas y cianobacteria, estas

transferencias de electrones no liberan energa, pero son usadas como un medio para almacenar energa solar.38 El conjunto de reacciones catablicas ms comn en animales puede ser separado en tres etapas distintas. En la primera, molculas orgnicas grandes como las protenas, polisacridos o lpidos son digeridos en componentes ms pequeos fuera de las clulas. Luego, estas molculas pequeas son llevadas a las clulas y convertidas en molculas an ms pequeas, generalmente acetilos que se unen covalentemente a la coenzima A, para formar la acetil-coenzima A, que libera energa. Finalmente, el grupo acetil en la molcula de acetil CoA es oxidado a agua y dixido de carbono, liberando energa que se retiene al reducir la coenzima nicotinamida adenina dinucletido (NAD+) en NADH. Digestin Las macromolculas como el almidn, la celulosa o las protenas no pueden ser tomadas por las clulas automticamente, por lo que necesitan que se degraden en unidades ms simples antes de usarlas en el metabolismo celular. Muchas enzimas digieren estos polmeros. Estas enzimas incluyen peptidasa que digiere protenas en aminocidos, glicosil hidrolasas que digieren polisacridos en disacridos y

monosacridos, y lipasas que digieren los triglicridos en cidos grasos y glicerol. Los microbios simplemente secretan enzimas digestivas en sus alrededores39 clulas
40

mientras que los animales secretan estas enzimas desde al aparato digestivo.41 Los aminocidos,

especializadas

monosacridos, y triglicridos liberados por estas enzimas extracelulares son absorbidos por las clulas mediante protenas especficas de transporte.42 43

Un diagrama simplificado del catabolismo de protenas, carbohidratos y lpidos. Energa de compuestos orgnicos El catabolismo de carbohidratos es la degradacin de los hidratos de carbono en unidades menores. Los carbohidratos son usualmente tomados por la clula una vez que fueron digeridos en monosacridos. 44 Una vez dentro de la clula, la ruta de degradacin es la gluclisis, donde los azcares como la glucosa y la fructosa son transformados en piruvato y algunas molculas de ATP son generadas.45 El piruvato o cido pirvico es un intermediario en varias rutas metablicas, pero la mayora es convertido en acetil CoA y cedido al ciclo de Krebs. Aunque ms ATP es generado en el ciclo, el producto ms importante es el NADH, sintetizado a partir del NAD+ por la oxidacin del acetil-CoA. La oxidacin libera dixido de carbono como producto de desecho. Una ruta alternativa para la degradacin de la glucosa es la ruta pentosa-fosfato, que reduce la coenzima NADPH y produce azcares de 5 carbonos como la ribosa, el azcar que forma parte de los cidos nucleicos. Las grasas son catalizadas por la hidrlisis a cidos grasos y glicerol. El glicerol entra en la gluclisis y los cidos grasos son degradados por beta oxidacin para liberar acetil CoA, que es luego cedido al nombrado

ciclo de Krebs. Debido a sus proporciones altas del grupo metileno, los cidos grasos liberan ms energa en su oxidacin que los carbohidratos, ya que los carbohidratos como la glucosa tienen ms oxgeno en sus estructuras. Los aminocidos son usados principalmente para sintentizar protenas y otras biomolculas; slo los excedentes son oxidados a urea y dixido de carbono como fuente de energa.46 Esta ruta oxidativa empieza con la eliminacin del grupo amino por una aminotransferasa. El grupo amino es cedido al ciclo de la urea, dejando un esqueleto carbnico en forma de cetocido.47 Los aminocidos glucognicos pueden ser transformados en glucosa mediante gluconeognesis.48 Vanse tambin: Respiracin celular y Fermentacin Fosforilacin oxidativa

Estructura de la ATP-sintasa; el canal protnico est marcado en azul y la subunidad sintasa, en rojo. En la fosforilacin oxidativa, los electrones liberados de molculas de alimento en rutas como el ciclo de Krebs son transferidas con oxgeno, y la energa es liberada para sintetizar adenosn trifosfato. Esto se da en las clulas eucariotas por una serie de protenas en las membranas de la

mitocondria llamadas cadena de transporte de electrones. En las clulas procariotas, estas protenas se encuentran en la membrana interna.49 Estas protenas utilizan la energa liberada de la oxidacin del electrn que lleva la coenzima NADH para bombear protones a lo largo de la membrana.50 Los protones bombeados fuera de la mitocondria crean una diferencia de concentracin a lo largo de la membrana, lo que genera un gradiente electroqumico.51 Esta fuerza hace que vuelvan a la mitocondria a travs de una subunidad de la ATP-sintasa. El flujo de protones hace que la subunidad menor gire, lo que produce que el sitio activo fosforile al adenosn difosfato (ADP) y lo convierta en ATP.25 Energa de compuestos inorgnicos Las procariotas poseen un tipo de metabolismo donde la energa se obtiene a partir de un compuesto inorgnico. Estos organismos utilizan hidrgeno,52 compuestos del azufre reducidos (como el sulfuro, sulfuro de hidrgeno y tiosulfato),2 xidos ferrosos53 o amonaco54 como fuentes de poder reductor y obtienen energa de la oxidacin de estos compuestos utilizando como aceptores de electrones oxgeno o nitrito.55 Estos procesos microbiticos son importantes en ciclos biogeoqumicos como la nitrificacin y la desnitrificacin, esenciales para la fertilidad del suelo56 57 Energa de la luz La energa solar es captada por plantas, cianobacterias, bacterias prpuras, bacterias verdes del azufre y algunos protistas. Este proceso est ligado a la conversin del dixido de carbono en compuestos orgnicos, como parte de la fotosntesis.58 59 La captura de energa solar es un proceso similar en principio a la fosforilacin oxidativa, ya que almacena energa en gradientes de concentracin de protones, que da lugar a la sntesis de ATP. 25 Los electrones necesarios para llevar a cabo este transporte de protones

provienen de una serie de protenas denominadas centro de reaccin fotosinttica. Estas estructuras son clasificadas en dos dependiendo de su pigmento, siendo las bacterias quienes tienen un solo grupo, mientras que en las plantas y cianobacterias pueden ser dos.60 En las plantas, el fotosistema II usa energa solar para obtener los electrones del agua, liberando oxgeno como producto de desecho. Los electrones luego fluyen hacia el complejo del citocromo b6f, que usa su energa para bombear protones a lo largo de la membrana tilacoidea del cloroplasto.38 Estos protones se mueven a travs de la ATP-sintasa, mediante el mismo mecanismo explicado anteriormente. Los electrones luego fluyen por el fotosistema I y pueden ser utilizados para reducir la coenzima NADP+, que ser utilizado en el ciclo de Calvin, o recicladas para la futura generacin de ATP.61 Anabolismo El anabolismo es el conjunto de procesos metablicos constructivos en donde la energa liberada por el catabolismo es utilizada para sintetizar molculas complejas. En general, las molculas complejas que dan lugar a estructuras celulares son construidas a partir de precursores simples. El anabolismo involucra tres facetas. Primero, la produccin de precursores como aminocidos, monosacridos, isoprenoides y

nucletidos; segundo, su activacin en reactivos usando energa del ATP; y tercero, el conjunto de estos precursores en molculas ms complejas como protenas, polisacridos, lpidos y cidos nucleicos. Los organismos difieren en cuntas molculas pueden sintetizar por s mismos en sus clulas. Los organismos auttrofos, como las plantas, pueden construir molculas orgnicas complejas y protenas por s mismos a partir molculas simples como dixido de carbono y agua. Los organismos hetertrofos, en cambio, requieren de una fuente de sustancias ms complejas, como monosacridos y aminocidos, para producir estas molculas complejas. Los organismos pueden ser clasificados por su fuente de energa:

Fotoauttrofos y fotohetertrofos, que obtienen la energa del Sol. Quimiohetertrofos y quimioauttrofos, que obtienen la energa mediante reacciones oxidativas.

Fijacin del carbono

Clulas de plantas (rodeadas por paredes violetas) y dentro, cloroplastos, donde se da la fotosntesis. La fotosntesis es la sntesis de glucosa a partir de energa solar, dixido de carbono (CO2) y agua (H2O), con oxgeno como producto de desecho. Este proceso utiliza el ATP y el NADPH producido por los centros de reaccin fotosintticos para convertir el CO2 en 3-fosfoglicerato, que puede ser convertido en glucosa. Esta reaccin de fijacin del CO 2 es llevada a cabo por la enzima RuBisCO como parte del ciclo de Calvin.62 Se dan tres tipos de fotosntesis en las plantas; fijacin del carbono C3, fijacin del carbono C4 y fotosntesis CAM. Estos difieren en la va que el CO2 sigue en el ciclo de Calvin, con plantas C3 que fijan el CO 2 directamente, mientras que las fotosntesis C4 y CAM incorporan el CO 2 en otros compuestos primero como adaptaciones para soportar la luz solar intensa y las condiciones secas.63 En procariotas fotosintticas, los mecanismos de la fijacin son ms diversos. El CO2 puede ser fijado por el ciclo de Calvin, y asimismo por el Ciclo de Krebs inverso,64 o la carboxilacin del acetil-CoA.65
66

Los

quimioauttrofos tambin pueden fijar el CO2 mediante el ciclo de Calvin,

pero utilizan la energa de compuestos inorgnicos para llevar a cabo la reaccin.67 Carbohidratos En el anabolismo de carbohidratos, se pueden sintetizar cidos orgnicos simples desde monosacridos como la glucosa y luego sintetizar polisacridos como el almidn. La generacin de glucosa desde compuestos como el piruvato, el cido lctico, el glicerol y los aminocidos es denominada gluconeognesis. La gluconeognesis transforma piruvato en glucosa-6-fosfato a travs de una serie de intermediarios, muchos de los cuales son compartidos con la gluclisis.45 Sin embargo, esta ruta no es simplemente la inversa a la gluclisis, ya que varias etapas son catalizadas por enzimas no glucolticas. Esto es importante a la hora de evitar que ambas rutas estn activas a la vez dando lugar a un ciclo ftil.68 69 A pesar de que la grasa es una forma comn de almacenamiento de energa, en los vertebrados como los humanos, los cidos grasos no pueden ser transformados en glucosa por gluconeognesis, ya que estos organismos no pueden convertir acetil-CoA en piruvato.70 Como resultado, tras un tiempo de inanicin, los vertebrados necesitan producir cuerpos cetnicos desde los cidos grasos para reemplazar la glucosa en tejidos como el cerebro, que no puede metabolizar cidos grasos.71 En otros organismos como las plantas y las bacterias, este problema metablico es solucionado utilizando el ciclo del glioxilato, que sobrepasa la descarboxilacin en el ciclo de Krebs y permite la transformacin de acetil-CoA en cido oxalactico, el cual puede ser utilizado en la sntesis de glucosa.72 70 Los polisacridos y los glicanos son sintetizados por medio de una adicin secuencial de monosacridos llevada a cabo por glicosiltransferasas de un donador reactivo azcar-fosfato a un aceptor como el grupo hidroxilo en el polisacrido que se sintetiza. Como cualquiera de los grupos hidroxilos del anillo de la sustancia puede ser aceptor, los

polisacridos producidos pueden tener estructuras ramificadas o lineales.73 Estos polisacridos producidos pueden tener funciones metablicas o estructurales por s mismos o tambin pueden ser transferidos a lpidos y protenas por medio de enzimas.74 75 cidos grasos, isoprenoides y esteroides

Versin simplificada de la sntesis de esteroides con los intermediarios de IPP (Isopentenil pirofosfato), DMAPP (Dimetilalil pirofosfato), GPP (Geranil pirofosfato) y escualeno. Algunos son omitidos para mayor claridad. Los cidos grasos se sintentizan al polimerizar y reducir unidades de acetil-CoA. Las cadenas en los cidos grasos son extendidas por un ciclo de reacciones que agregan el grupo acetil, lo reducen a alcohol, deshidratan a un grupo alqueno y luego lo reducen nuevamente a un grupo alcano. Las enzimas de la sntesis de cidos grasos se dividen en dos grupos: en los animales y hongos, las reacciones de la sntesis son llevadas a cabo por una sola protena multifuncional tipo I,76 mientras que

en plstidos de plantas y en bacterias son las enzimas tipo II por separado las que llevan a cabo cada etapa en la ruta.77 78 Los terpenos e isoprenoides son clases de lpidos que incluyen carotenoides y forman la familia ms amplia de productos naturales de la planta.79 Estos compuestos son sintentizados por la unin y modificacin de unidades de isopreno donadas por los precursores reactivos pirofosfosfato isopentenil y pirofosfato dimetilalil.80 Estos precursores pueden sintentizarse de diversos modos. En animales y archaeas, estos compuestos se sintentizan a partir de acetil-CoA,81 mientras que en plantas y bacterias se hace a partir de piruvato y gliceraldehdo 3-fosfato como sustratos.82
80

Una reaccin que usa estos donadores isoprnicos

activados es la biosntesis de esteroides. En este caso, las unidades de isoprenoides son unidas covalentemente para formar escualeno, que se pliega formando una serie de anillos dando lugar a una molcula denominada lanosterol.83 El lanosterol puede luego ser transformado en esteroides como el colesterol. Protenas La habilidad de los organismos para sintetizar los 20 aminocidos conocidos vara. Las bacterias y las plantas pueden sintetizar los 20, pero los mamferos pueden sintetizar solo los diez aminocido no esenciales. 17 Por ende, los aminocidos esenciales deben ser obtenidos del alimento. Todos los aminocidos son sintetizados por intermediarios en la gluclisis y el ciclo de Krebs. El nitrgeno es obtenido por el cido glutmico y la glutamina. La sntesis de aminocidos depende en la formacin apropiada del cido alfa-keto, que luego es transaminado para formar un aminocido.84 Los aminocidos son sintetizados en protenas al ser unidos en una cadena por enlaces peptdicos. Cada protena diferente tiene una secuencia nica e irrepetible de aminocidos: esto es la estructura primaria. Los aminocidos pueden formar una gran variedad de protenas dependiendo de la secuencia de estos en la protena. Las protenas son

constituidas por aminocidos que han sido activados por la adicin de un ARNt a travs de un enlace ster.85 El aminoacil-ARNt es entonces un sustrato para el ribosoma, que va aadiendo los residuos de aminocidos a la cadena proteica, sobre la base de la secuencia de informacin que va "leyendo" el ribosoma en una molcula de ARN mensajero.86 Los nucletidos son sintetizados a partir de aminocidos, dixido de carbono y cido frmico en rutas que requieren una cantidad mayor de energa metablica.87 tienen un sistema
89 88

En consecuencia, la mayora de los organismos eficiente para resguardar los nucletidos

preformados.87

Las purinas son sintetizadas como nuclesidos (bases

unidas a ribosa). Tanto la adenina como la guanina son sintetizadas a partir de un precursor nuclesido, la inosina monofosfato, que es sintetizada usando tomos de los aminocidos glicina, glutamina y cido asprtico; tambin ocurre lo mismo con el HCOO que es transferido desde la coenzima tetrahidrofolato. Las pirimidinas, en cambio, son sintetizadas desde el cido ortico, que a su vez es sintetizado a partir de la glutamina y el aspartato.90 Xenobiticos y metabolismo reductor Todos los organismos se encuentran constantemente expuestos a compuestos y elementos qumicos que no pueden utilizar como alimento y seran dainos si se acumularan en sus clulas, ya que no tendran una funcin metablica. Estos compuestos potencialmente dainos son llamados xenobiticos.91 Los xenobiticos como las drogas sintticas, los venenos naturales y los antibiticos son detoxificados por un conjunto de enzimas xenobiticas-metabolizadoras. En los humanos, esto incluye a las citocromo oxidasas P450,92 las UDP-glucuroniltransferasas93 y las glutation-S-transferasas.94

Este sistema de enzimas acta en tres etapas. En primer lugar, oxida los xenobiticos (fase I) y luego conjuga grupos solubles al agua en la molcula (fase II). El xenobitico modificado puede ser extrado de la clula por exocitosis y, en organismos pluricelulares, puede ser ms metabolizado antes de ser excretado (fase III). En ecologa, estas reacciones son particularmente importantes por la biodegradacin microbiana de agentes contaminantes y la biorremediacin de tierras contaminadas.95 Muchas de estas reacciones microbiticas son

compartidas con organismos pluricelulares, pero debido a la mayor biodiversidad de microbios, stos son capaces de tratar con un rango ms amplio de xenobiticos en contraste a los que pueden llevar a cabo

los organismos pluricelulares; los microbios pueden incluso degradar agentes contaminantes como compuestos organoclorados.96 Un problema relacionado con los organismos aerbicos es el estrs oxidativo.97 Sin embargo, una bacteria estresada podra ser ms efectiva para la degradacin de estos contaminantes.98 Los procesos como la fosforilacin oxidativa y la formacin de enlaces disulfuro durante el plegamiento de protenas producen especies reactivas del oxgeno como el perxido de hidrgeno.99 Estos oxidantes dainos son neutralizados por metabolitos antioxidantes como el glutation y por enzimas como las catalasas y las peroxidasas.100 101 Un ejemplo de metabolismo xenobitico es la depuracin de los frmacos por parte del hgado, como puede verse en el diagrama adjunto. Homeostasis: regulacin y control Debido a que el ambiente de los organismos cambia constantemente, las reacciones metablicas son reguladas para mantener un conjunto de condiciones en la clula, una condicin denominada homeostasis.102
103

Esta regulacin permite a los organismos responder a estmulos e interactuar con el ambiente.104 Para entender cmo son controladas las vas metablicas, existen dos conceptos vinculados. En primer lugar, la regulacin de una enzima en una ruta es cmo incrementa o disminuye su actividad en respuesta a seales o estmulos. En segundo lugar, el control llevado a cabo por esta enzima viene dado por los efectos que, dichos cambios de su actividad, tienen sobre la velocidad de la ruta (el flujo de la ruta).105 Por ejemplo, una enzima muestra cambios en su actividad; pero si estos cambios tienen un efecto mnimo en el flujo de la ruta metablica, entonces esta enzima no se relaciona con el control de la ruta.106

Esquema E: P:

de

un espacio membrana

receptor

celular. extracelular. plasmtica.

I: espacio intracelular. Existen mltiples niveles para regular el metabolismo. En la regulacin intrnseca, la ruta metablica se autorregula para responder a cambios en los niveles de sustratos o productos; por ejemplo, una disminucin en la cantidad de productos puede incrementar el flujo en la ruta para compensarlo.105 Este tipo de regulacin suele implicar una regulacin alostrica de las actividades de las distintas enzimas en la ruta.107 El control extrnseco implica a una clula en un organismo pluricelurar, cambiando su metabolismo en respuesta a seales de otras clulas. Estas seales son enviadas generalmente en forma de mensajeros como las hormonas, y los factores de crecimiento, que son detectados por receptores celulares especficos en la superficie de la clula.108 Estas seales son transmitidas hacia el interior de la clula mediante mensajeros secundarios que generalmente involucran la fosforilacin de protenas.109 Un ejemplo de control extrnseco es la regulacin del metabolismo de la glucosa mediante la hormona denominada insulina.110 La insulina es producida como consecuencia de un aumento de la concentracin de azcar en la sangre. La unin de esta hormona a los receptores de insulina activa una cascada de proten-quinasas que estimulan la absorcin de glucosa por parte de la clula para transformarla en molculas de almacenamiento como los cidos grasos y el glucgeno.111

El metabolismo del glucgeno es controlado por la actividad de la glucgeno fosforilasa, enzima que degrada el glucgeno, y la glucgeno sintasa, enzima que lo sintetiza. Estas enzimas son reguladas de un modo recproco, siendo la fosforilacin la que inhibe a la glucgeno sintentasa, pero activando a su vez a la glucgeno fosforilasa. La insulina induce la sntesis de glucgeno al activar fosfatasas y producir una disminucin en la fosforilacin de estas enzimas.112 Termodinmica de los organismos vivos Los organismos vivos deben respetar las leyes de la termodinmica. La segunda ley de la termodinmica establece que en cualquier sistema cerrado, la cantidad de entropa tendr una tendencia a incrementar. A pesar de que la complejidad de los organismos vivos contradice esta ley, la vida es posible ya que todos los organismos vivos son sistemas abiertos que intercambian materia y energa con sus alrededores. Por ende, los sistemas vivos no se encuentran en equilibrio, sino que son sistemas de disipacin que mantienen su estado de complejidad ya que provocan incrementos mayores en la entropa de sus alrededores. 113 El metabolismo de una clula logra esto mediante la relacin entre los procesos espontneos del catabolismo con los procesos no-espontneos del anabolismo. En trminos termodinmicos, el metabolismo mantiene el orden al crear un desorden.114 La respiracin aerbica es un tipo de metabolismo energtico en el que los seres vivos extraen energa de molculas orgnicas, como la glucosa, por un proceso complejo en el que el carbono es oxidado y en el que el oxgeno procedente del aire es el oxidante empleado. En otras variantes de la respiracin, muy raras, el oxidante es distinto del oxgeno (respiracin anaerbica). La respiracin aerbica es el proceso responsable de que la mayora de los seres vivos, los llamados por ello aerobios, requieran oxgeno. La respiracin aerbica es propia de los organismos eucariontes en general y de algunos tipos de bacterias.

El oxgeno que, como cualquier gas, atraviesa sin obstculos las membranas biolgicas, atraviesa primero la membrana plasmtica y luego las membranas mitocondriales, siendo en la matriz de la mitocondria donde se une a electrones y protones (que sumados constituyen tomos de hidrgeno) formando agua. En esa oxidacin final, que es compleja, y en procesos anteriores se obtiene la energa necesaria para la fosforilacin del ATP. En presencia de oxgeno, el cido pirvico, obtenido durante la fase primera anaerobia o gluclisis, es oxidado para proporcionar energa, dixido de carbono y agua. A esta serie de reacciones se le conoce con el nombre de respiracin aerbica. La reaccin qumica global de la respiracin es la siguiente: C6H12O6 + 6O2 6CO2 + 6H2O + energa (ATP) Etapas de la respiracin aerbica Para facilitar su estudio, la respiracin aerobia se ha subdividido en las siguientes etapas:

Durante la gluclisis, una molcula de glucosa es oxidada y escindida en dos molculas de cido pirvico (piruvato). En esta ruta metablica se obtiene dos molculas netas de ATP y se reducen dos molculas de NAD+; el nmero de carbonos se mantiene constante (6 en la molcula inicial de glucosa, 3 en cada una de las molculas de cido pirvico). Todo el proceso se realiza en el citosol de la clula. La glicerina (glicerol) que se forma en la liplisis de los triglicridos se incorpora a la gluclisis a nivel del gliceraldehdo 3 fosfato. La desaminacin oxidativa de algunos aminocidos tambin rinde piruvato; que tienen el mismo destino metablico que el obtenido por gluclisis. [editar] Descarboxilacin oxidativa del cido pirvico Artculo principal: Descarboxilacin oxidativa El cido pirvico penetra en la matriz mitocondrial donde es procesado por el complejo enzimtico piruvato deshidrogenasa, el cual realiza la descarboxilacin oxidativa del piruvato; descarboxilacin porque se arranca uno de los tres carbonos del cido pirvico (que se desprende en forma de CO2) y oxidativa porque, al mismo tiempo se le arrancan dos tomos de hidrgeno (oxidacin por deshidrogenacin), que son captados por el NAD+, que se reduce a NADH. Por tanto; el piruvato se transforma en un radical acetilo (-CO-CH3, cido actico sin el grupo hidroxilo) que es captado por el coenzima A (que pasa a acetil-CoA), que es el encargado de transportarlo al ciclo de Krebs. Este proceso se repite dos veces, una para cada molcula de piruvato en que se escindi la glucosa. El ciclo de Krebs es una ruta metablica cclica que se lleva a cabo en la matriz mitocondrial y en la cual se realiza la oxidacin de los dos acetilos transportados por el acetil coenzima A, provenientes del piruvato, hasta producir dos molculas de CO2, liberando energa en forma utilizable, es decir poder reductor (NADH, FADH2) y GTP.

Para cada glucosa se producen dos vueltas completas del ciclo de Krebs, dado que se haban producido dos molculas de acetil coenzima A en el paso anterior; por tanto se ganan 2 GTPs y se liberan 4 molculas de CO2. Estas cuatro molculas, sumadas a las dos de la descarboxilacin oxidativa del piruvato, hacen un total de seis, que es el nmero de molculas de CO2 que se producen en respiracin aerbica (ver ecuacin general). Cadena respiratoria y fosforilacin oxidativa

Son las ltimas etapas de la respiracin aerbica y tienen dos finalidades bsicas: 1. Reoxidar las coenzimas que se han reducido en las etapas anteriores (NADH y FADH2) con el fin de que estn de nuevo libres para aceptar electrones y protones de nuevos substratos oxidables. 2. Producir energa utilizable en forma de ATP. Estos dos fenmenos estn ntimamente relacionados y acoplados mutuamente. Se producen en una serie de complejos enzimticos situados (en eucariotas) en la membrana interna de la mitocondria; cuatro complejos realizan la oxidacin de los mencionados coenzimas

transportando los electrones y aprovechando su energa para bombear protones desde la matriz mitocondrial hasta el espacio intermembrana. Estos protones solo pueden regresar a la matriz a travs de la ATP sintasa, enzima que aprovecha el gradiente electroqumico creado para fosforilar el ADP a ATP, proceso conocido como fosforilacin oxidativa. Los electrones y los protones implicados en estos procesos son cedidos definitivamente al O2 que se reduce a agua. Ntese que el oxgeno atmosfrico obtenido por ventilacin pulmonar tiene como nica finalidad actuar como aceptor final de electrones y protones en la respiracin aerobia.

Obtenido "http://es.wikipedia.org/wiki/Respiraci%C3%B3n_aer%C3%B3bica"

de

La respiracin anaerbica es un proceso biolgico de oxidorreduccin de monosacridos y otros compuestos en el que el aceptor terminal de electrones es una molcula inorgnica distinta del oxgeno, y ms raramente una molcula orgnica. La realizan exclusivamente algunos grupos de bacterias y para ello utilizan una cadena transportadora de electrones anloga a la de las mitocondria en la respiracin aerbica.1 No debe confundirse con la fermentacin, que es un proceso tambin anaerbico, pero en el que no participa nada parecido a una cadena transportadora de electrones y el aceptor final de electrones es siempre una molcula orgnica. Consideraciones generales En la respiracin anaerbica no se usa oxgeno, sino que para la misma funcin se emplea otra sustancia oxidante distinta, como el sulfato o el nitrato. En las bacterias con respiracin anaerobia interviene tambin una cadena transportadora de electrones en la que se reoxidan los coenzimas reducidos durante la oxidacin de los substratos nutrientes; es anloga a la de la respiracin aerobia, ya que se compone de los mismos elementos (citocromos, quinonas, protenas ferrosulfricas, etc.). La nica

diferencia, por tanto radica, en que el aceptor ltimo de electrones no es el oxgeno. Todos los posibles aceptores en la respiracin anaerobia tienen un potencial de reduccin menor que el O2, por lo que, partiendo de los mismos sustratos (glucosa, aminocidos, triglicridos), se genera menos energa en este metabolismo que en la respiracin aerobia convencional. No hay que confundir la respiracin anaerbica con la fermentacin, en la que no existe en absoluto cadena de transporte de electrones, y el aceptor final de electrones es una molcula orgnica; estos dos tipos de metabolismo tienen solo en comn el no ser dependientes del oxgeno.

En la siguiente tabla se muestran distintos aceptores de electrones, sus productos y algunos ejemplos de microorganismos que realizan tales procesos:

Aceptor

Producto final

Microorganismo

Nitrato

Nitritos,

xidos

de

nitrgeno y N2

Pseudomonas, Bacillus

Sulfato

Sulfuros

Desulfovibrio, Clostridium

Azufre

Sulfuros

Thermoplasma

CO2

Metano

Methanococcus, Methanosarcina, Methanopyrus

Fe3+

Fe2+

Shewanella,

Geobacter,

Geospirillum, Geovibrio

Mn4+

Mn2+

Shewanella putrefaciens

Selenato

Selenito

Arsenato

Arsenito

Desulfotomaculum

Fumarato

Succinato

Wolinella

succinogenes,

Desulfovibrio, E. coli

DMSO

DMS

Campylobacter, Escherichia

TMAO

TMA

Clorobenzoato Benzoato

Desulfomonile

Utilizacin de nitrato como aceptor de electrones Muchas bacterias aerbicas contienen las enzimas nitrato-reductasas que catalizan la reduccin de nitrato a nitrito:2 NO3 + 2e + 2H+ NO2 + H2O No obstante, el producto resultante (nitrito) es muy txico por lo que algunas especies de Pseudomonas y Bacillus pueden reducir el nitrato ms all del nivel de nitrito hasta nitrgeno molecular: NO3 + 10e + 12H+ N2 + 6H2O El resultado final, nitrgeno, es un gas inerte y no txico. Este proceso se conoce como desnitrificacin que, si se produce en el suelo se considera perjudicial para la agricultura ya que ocasiona la prdida de los nitratos, necesarios para el crecimiento de las plantas.1 Las bacterias reductoras de nitratos son anaerobias facultativas ya que el uso de nitratos y nitritos como aceptores de electrones son procesos alternativos que pueden utilizar estas bacterias para crecer en ausencia de oxgeno. En presencia de l, aunque el nitrato est presente, la respiracin procede enteramente a travs de la cadena aerbica de transporte de electrones. Utilizacin de sulfato como aceptor de electrones

Diagrama de la corrosin en condiciones anaerbicas causada por bacterias del gnero Desulfovibrio. La utilizacin de sulfato como aceptor de electrones es una habilidad rara, restringida al gnero Desulfovibrio y algunas especies de Clostridium. Todas estas bacterias son anaerbicas estrictas, de modo que la reduccin del sulfato no es una alternativa de su metabolismo, como lo es la reduccin del nitrato. La reaccin es la siguiente: SO42 + 8e + 8H+ S2 + 4H2O Las bacterias reductoras de sulfatos atacan solo unos pocos compuestos orgnicos, siendo el cido lctico y los cidos dicarboxlicos de 4 carbonos sus principales substratos. Utilizacin de dixido de carbono como aceptor de electrones Un pequeo grupo de procariotas anaerbias estrictas, las arqueas productoras de metano, utilizan dixido de carbono como aceptor de electrones; la reduccin da lugar a metano (CH4). El caso ms simple es la oxidacin de hidrgeno molecular, reaccin productora de energa: 4H2 + CO2 CH4 + 2H2O El hidrgeno no es un gas comn en la biosfera, de modo que estos microorganismos habitan lugares muy especficos como en sedimentos anaerobios del fondo de lagos y pantanos, o en el tubo digestivo de los

rumiantes, donde otros microorganismos producen el H2 libre que precisan. Utilizacin de ion frrico como aceptor de electrones El ion frrico (Fe3+) puede ser utilizado por varias bacterias como aceptor de electrones, reducindolo a ion ferroso (Fe2+); este proceso lo realizan muchos de los microorganismos que reducen nitrato. El ion frrico se halla en el suelo y las rocas, muchas veces formando hidrxido frrico (Fe(OH)3) insoluble; en condiciones anaerbicas, estas bacterias pueden reducirlo al estado ferroso. El ion ferrosos es mucho ms soluble que el frrico, con lo cual el hierro se moviliza, siendo este un primer paso importante en la formacin de un tipo de depsito mineral llamado hierro de los pantanos1 Adenosn trifosfato

Trifosfato de adenosina (ATP). El trifosfato de adenosina o adenosn trifosfato (ATP, del ingls adenosine triphosphate) es un nucletido fundamental en la obtencin de energa celular. Est formado por una base nitrogenada (adenina) unida al carbono 1 de un azcar de tipo pentosa, la ribosa, que en su carbono 5 tiene enlazados tres grupos fosfato. Se encuentra incorporada en los cidos nucleicos.

Se produce durante la fotosntesis y la respiracin celular, y es consumido por muchas enzimas en la catlisis de numerosos procesos qumicos. Su frmula es C10H16N5O13P3. ATP Las reacciones endergnicas se manifiestan durante los procesos anablico que requieren que se le aade energa a los reactivos (sustratos o combustibles metablicos), se le suma energa (contiene ms energa libre que los reactivos). Por otro lado, durante las reacciones exergnicas se libera energa como resultado de los procesos qumicos (ej, el catabolismo de macromolculas). La energa libre en un estado organizado, disponible para trabajo biolgico til. Las reacciones endergnicas se llevan a cabo con la energa liberada por las reacciones exergnicas. Las reacciones exergnicas pueden estar acopladas con reacciones endergnicas. Reacciones de oxidacin-reduccin (redox) son ejemplos de reacciones exergnicas y endergnicas acopladas. Los organismos pluricelulares del Reino Animal nos alimentamos principalmente de metabolitos complejos (protenas, lpidos, glcidos) que degradamos a lo largo del tracto intestinal, de modo que a las clulas llegan metabolitos menos complejos que los ingeridos. En la clula son oxidados por una serie de reacciones qumicas degradativas (catabolismo). Como productos del catabolismo se obtienen metabolitos simples y energa. Ambos son los precursores para la sntesis de los componentes celulares. Todo el conjunto de reacciones de sntesis se llama anabolismo. En el catabolismo (oxidacin) se produce una liberacin de electrones que son captados por molculas transportadoras de electrones como el NAD+ (que al aceptar electrones se reduce a NADH). Por otra parte, la energa liberada queda retenida en su mayora en el ATP. La sntesis (anabolismo) de los compuestos celulares se realiza con los metabolitos simples, utilizando la energa contenida en el ATP y los

electrones contenidos en el NADH, ya que ste es un proceso reductivo (toma electrones). El ATP es esa moneda de intercambio energtico debido a su estructura qumica. Cuando se hidroliza libera mucha energa que va a ser captada por las enzimas que catalizan las reacciones de biosntesis. Hidrlisis del ATP Molcula de ATP y su hidrlisis a ADP + Pi:

Se puede representar as: A-P~P~P Donde ~ son los enlaces anhdrido de cido, que son de alta energa. En la hidrlisis del ATP se est hidrolizando uno de esos enlaces anhdrido de cido. Esto libera gran energa, concretamente 7'7kcal/mol. Es decir: G = -7,7 kcal/mol Es una reaccin muy exergnica. Su keq es 11. As se comprende que el ATP tiene tendencia a hidrolizarse de forma natural y liberar energa. Razones qumicas de la tendencia a la hidrlisis del ATP Las razones qumicas de esa tendencia son tres:

1. Energa de estabilizacin por resonancia: viene dada por la deslocalizacin electrnica, es decir, que debido a la distinta electronegatividad entre el P y el O, existe un desplazamiento de los electrones de los dobles enlaces hacia el O. En el enlace doble tienen cierto carcter de sencillo y viceversa.

Pues bien, la energa de estabilizacin por resonancia es ms alta en los productos de hidrlisis que en el ATP. Esto se debe fundamentalmente a que los electrones (los puntos rojos en los O) de los oxgenos puente entre los P son fuertemente atrados por los grupos fosfricos. La competencia por los electrones crea una tensin en la molcula; sta es evidentemente menor (o est ausente) en los productos de hidrlisis. Por lo tanto, hay mayor energa de estabilizacin por resonancia en los productos de hidrlisis. 2. Tensin elctrica entre las cargas negativas vecinas existente en el ATP (las flechas entre los O de los Pi). Esa tensin es evidentemente menor en los productos de hidrlisis. 3. Solvatacin: la tendencia natural es hacia una mayor solvatacin. La energa de solvatacin es mayor en los productos de hidrlisis que en el ATP. En la clula existen muchos enlaces de alta energa, la mayora de los cuales son enlaces fosfato. El ATP ocupa una posicin intermedia entre los fosfatos de alta energa. Una de las ms importantes funciones del ATP es dar el paso para que ingresen las sustancias a la celula. esta gran energia puede ser util para fines de recarga a seres artificiales, ya que su hidrolisis libera una cantidad significante de energia. Enlaces externos

Metabolismo de la Glucosa La gluclisis se inicia en el citosol y produce dos cidos pirvicos a partir de cada molcula de Glucosa, de tal manera que cada conjunto de reacciones de matriz ocurren dos veces durante el metabolismo de una sola molcula de Glucosa.

En la matriz mitocondrial ocurre la formacin de CoA y el Ciclo del cido Ctrico o ciclo de Krebs, llamado as en honor de su descubridor Hans Krebs.

Primera

etapa:

Formacin

de

acetil

CoA

El cido pirvico se divide en CO2 y un grupo acetil. El grupo acetil se une a la coenzimaA para formar acetil CoA. Simultneamente el NAD+ recibe dos electrones y un ion hidrgeno para formar el NADH. El acetil CoA entra a la segunda etapa de las reacciones en la matriz.

Segunda etapa: Ciclo del cido Ctrico o Ciclo de Krebs 1.- El acetil CoA cede su grupo acetil al cido oxalactico para formar cido 2.El cido ctrico se reordena para formar cido ctrico. isoctrico.

3.- El cido isoctrico cede un carbono para el CO2 formando cido isocetoglutrico; se forma NADH a partir de NAD+.

4.- El cido isocetoglutrico pierde un carbono hacia CO2, formando cido succnico, se forma NADH a partir de NAD+ y energa adicional que est almacenada en forma de ATP. En este punto, se han producido dos molculas de CO2. (Estas dos molculas de CO2, junto con la que fue liberada durante la formacin de acetil CoA se toman en cuenta para los tres carbonos del cido pirvico original.)

5.- El cido succnico se convierte en cido fumrico, y el transportador de 6.electrones El cido FAD fumrico es se cargado convierte para en formar cido FADH2. malico.

7.- El cido malico se convierte en cido oxalactico y se forma NADH a partir de NAD+.

8.- El ciclo del cido ctrico produce tres molculas de CO2 y NADH, una de FADH2 y una de ATP por cada acetil CoA.

9.- El NADH y el FADH donarn sus electrones al sistema de transporte de electrones de la membrana interna, donde la energa de los electrones se utilizar para sintetizar ATP.

10.- Los electrones de los transportadores de electrones NADH y FADH2 entran al sistema de transporte de electrones de la membrana mitocondrial interna. Aqu su energa se utiliza para elevar el gradiente de iones hidrgeno. El movimiento de iones hidrgeno hacia su gradiente a travs de las enzimas que sintetizan ATP produce la sntesis de 32 a 34 molculas de ATP. Al final del sistema de transporte de electrones, se combinan dos electrones con un tomo de oxgeno y dos iones hidrgeno para formar agua. Organizacin Un ser vivo es resultado de una organizacin muy precisa; en su interior se realizan varias actividades al mismo tiempo, estando relacionadas stas actividades unas con otras, por lo que todos los seres vivos poseen una organizacin especfica y compleja a la vez. Como grado ms sencillo de organizacin en un organismo est la clula. Los procesos que se efectan en todo el organismo son el resultado de las funciones coordinadas de todas las clulas que lo constituyen. En vegetales y animales superiores se observan grados de organizacin ms compleja, como los tejidos-rganos y el ms avanzado, sistemas. Homeostasis Debido a la tendencia natural de la prdida del orden, denominada entropa, los organismos estn obligados a mantener un control sobre sus cuerpos, al que se denomina homeostasis, y de esta forma mantenerse sanos. Para lograr este cometido se utiliza mucha cantidad de energa. Algunos de los factores regulados son:

Termorregulacin: Es la regulacin del calor y el fro.

Osmorregulacin: Regulacin del agua e iones, en la que participa el sistema excretor principalmente.

Irritabilidad La reaccin a ciertos estmulos (sonidos, olores, etc.) del medio ambiente constituye la funcin de la irritabilidad. Por lo general los seres vivos no son estticos, son irritables, responden a cambios fsicos o qumicos, tanto en el medio externo como en el interno. Los estmulos que pueden causar una respuesta en plantas y animales son: cambios en la intensidad de luz, ruidos, sonidos, aromas, cambios de temperatura, variacin en la presin, etc. Metabolismo El fenmeno del metabolismo permite a los seres vivos procesar sus alimentos para obtener nutrientes, utilizando una cantidad de estos nutrientes y almacenando el resto para usarlo cuando efectan sus funciones. En el metabolismo se efectan dos procesos fundamentales:

Anabolismo: Es cuando se transforman las sustancias sencillas de los nutrientes en sustancias complejas.

Catabolismo: Cuando se desdoblan las sustancias complejas de los nutrientes con ayuda de enzimas en materiales simples liberando energa.

Durante el metabolismo se realizan reacciones qumicas y energticas. As como el crecimiento, la auto reparacin y la liberacin de energa dentro del cuerpo de un organismo. A estas reacciones las denominamos procesos metablicos:

El ciclo material, es decir, los cambios qumicos de sustancia en los distintos perodos del ciclo vital, crecimiento, equilibrio e involucin.

El ciclo energtico, o sea, la transformacin de la energa qumica de los alimentos en calor cuando el animal est en reposo, o bien en calor y trabajo mecnico cuando realiza actividad muscular, as como la transformacin de la energa luminosa en energa qumica en las plantas. En los organismos hetertrofos, la sustancia y la energa se obtienen de los alimentos. stos actan formando la sustancia propia para crecer, mantenerse y reparar el desgaste, suministran energa y proporcionan las sustancias reguladoras del metabolismo.

Desarrollo o crecimiento Una caracterstica principal de los seres vivos es que stos crecen. Los seres vivos (organismos) requieren de nutrientes (alimentos) para poder realizar sus procesos metablicos que los mantienen vivos, al aumentar el volumen de materia viva, el organismo logra su crecimiento. El desarrollo es la adquisicin de nuevas caractersticas. Reproduccin Los seres vivos son capaces de multiplicarse (reproducirse). Mediante la reproduccin se producen nuevos individuos semejantes a sus

progenitores y se perpeta la especie. En los seres vivos se observan dos tipos de reproduccin:

Asexual : En la reproduccin asexual un solo organismo es capaz de originar otros individuos nuevos, que son copias exactas del progenitor desde el punto de vista gentico. Un claro ejemplo de reproduccin asexual es la divisin de las bacterias en dos clulas hijas, que son genticamente idnticas. En general, es la formacin de un nuevo individuo a partir de clulas maternas, sin que exista meiosis, formacin de gametos o fecundacin. No hay, por lo tanto, intercambio de material gentico (ADN). El ser vivo progenitado respeta las caractersticas y cualidades de sus progenitores.

Sexual : La reproduccin sexual requiere la intervencin de dos individuos, siendo de sexos diferentes. Los descendientes

producidos como resultado de este proceso biolgico, sern fruto de la combinacin del ADN de ambos progenitores y, por tanto, sern genticamente distintos a ellos. Esta forma de reproduccin es la ms frecuente en los organismos complejos. En este tipo de reproduccin participan dos clulas haploides originadas por meiosis, los gametos, que se unirn durante la fecundacin. Adaptacin Las condiciones ambientales en que viven los organismos vivos cambian ya sea lenta o rpidamente y los seres vivos deben adaptarse a estos cambios para sobrevivir. El proceso por el que una especie se condiciona lenta o rpidamente para lograr sobrevivir ante los cambios ocurridos en su medio, se llama adaptacin o evolucin biolgica. Mediante la evolucin todos los seres vivos mejoran sus caractersticas de adaptacin al medio en el que se encuentran, para maximizar sus probabilidades de supervivencia

Clula procarionte y clula eucarionte

Las clulas se han clasificado, de acuerdo a la presencia o ausencia de ncleo verdadero, en dos grandes grupos: clulas procariontes y clulas eucariontes. Clulas procariontes: son aquellas en las que el ncleo se encuentra difuso en el citoplasma, es decir, son las que no poseen un ncleo celular rodeado por una membrana (pro = antes de, karyon = ncleo). Clulas eucariontes: son aquellas que poseen un ncleo celular delimitado por una doble membrana (eu = verdadero, karyon = ncleo).

Clulas

procariontes

procariotas son la forma de vida ms simple que se conoce, en cuanto a estructura y funcin. Clula cuyo material gentico ni se organiza en un ncleo bien definido ni se reparte durante la reproduccin celular. Los seres procariontes unicelulares al reino de son y los Clula procarionta o procariota

siempre pertenecen

moneras, como las bacterias y las algas verde-azuladas.

La mitosis representa la forma de reproduccin para los organismos unicelulares. Existen organismos procariontes de muy variadas formas: hay

organismos esfricos, con forma de bastn, con forma espiralada y con forma ovoide. Aunque su forma externa sea diferente su composicin interna es muy parecida. En general poseen una cubierta externa protectora llamada pared celular, bajo la cual se encuentra la membrana plasmtica, que tiene por funcin intercambiar sustancias entre la clula y el medio que la rodea y delimitar, adems, al citoplasma o citosol donde ocurren todos los procesos qumicos que permiten el desarrollo y funcionamiento de la clula. En las clulas procariontes, el material gentico (DNA) se encuentra libre en el citoplasma sin ninguna estructura que lo delimite, es decir, se halla difuso.

Otra caracterstica que presentan estas clulas es que no poseen organelos

membranosos. Las enzimas que permiten la degradacin (transformacin en sustancias ms

simples) de lpidos e hidratos de carbono para obtener energa se encuentran en el citoplasma al igual que el DNA y otras estructuras que permiten el funcionamiento de la clula. Los bilogos postulan que las clulas procariontes son la lnea evolutiva ms antigua que se conoce y que de ellas se habran derivado las clulas eucariontes. Ellos creen que una clula procarionte fue capaz de formar un ncleo verdadero y que, posteriormente, esta primitiva clula eucarionte incorpor en su citoplasma a otra clula procarionte de menor tamao. Clula eucarionte (eucariota o eucaritica) Las clulas eucariotas son generalmente mayores y con una estructura ms compleja que las clulas procariotas. La morfologa de estos organismos puede incluir apndices, pared celular, membrana y varias estructuras internas. Estn presentes en clulas que forman parte de los tejidos de organismos pluricelulares, que pertenecen a los reinos fungi, metazoo y metafta.

Clula eucariota Se caracterizan por tener un ncleo delimitado por una doble membrana (membrana nuclear), que lo separa del resto del citoplasma, donde se almacena el material gentico; poseen adems organelos membranosos (mitocondrias, lisosomas, cloroplastos, etc). Poseen formas y tamaos muy variados, de acuerdo a la funcin que cumpla la clula eucarionte en el organismo. Las clulas eucariontes poseen ms DNA (cido desoxirribonucleico) que las clulas procariontes. El DNA eucarionte se une a protenas,

constituyendo los cromosomas. Adems poseen complejos supramoleculares muy importantes, como es el caso del citoesqueleto, el cual es un verdadero esqueleto interno.

El citoesqueleto celular consiste en una malla Citoesqueleto tridimensional de filamentos proteicos cuyas principales funciones son: proporcionar el soporte estructural para la membrana plasmtica y los orgnulos celulares proporcionar el medio para el movimiento intracelular de organelas y otros componentes del citosol proporcionar el soporte para las estructuras celulares mviles

especializadas, como cilios y flagelos, responsables de la propiedad contrctil de las clulas en tejidos especializados como el msculo Hay que tener presente que no todas las clulas eucariontes presentan los mismos organelos. En las clulas vegetales y animales es donde se producen las mayores diferencias. Cilios y flagelos Algunas clulas tienen proyecciones del citoesqueleto que sobresalen de la membrana plasmtica. Si las proyecciones son pocas y muy largas, reciben el nombre de flagelos. El nico ejemplo de clula humana dotada de flagelo es el espermatozoide que lo utiliza para desplazarse. Si las proyecciones son muchas y cortas, se denominan cilios. El ejemplo ms tpico son las clulas del tracto respiratorio cuyos cilios tienen la

misin de atrapar las partculas del aire. Al igual que las bacterias, muchas Espermatozoides clulas eucariotas poseen estas

estructuras para la locomocin. Los cilios de las eucariotas son idnticos a los flagelos de las procariotas en estructura, aunque son ms cortos y numerosos. Su estructura es ms

compleja que la de las procariotas, estn compuestos por microtbulos, 9 pares que rodean un par central todo ello rodeado por una membrana. El flagelo de las eucariotas se mueve como un ltigo al contrario de las procariotas que lo hacen rotando como un sacacorchos. Pared celular Plantas, algas y hongos poseen pared celular mientras que el resto de las eucariotas no la poseen. La pared celular mantiene la forma celular y previene de la presin osmtica. La pared celular de las plantas, algas y hongos son distintas a la de las bacterias en cuanto a su composicin y estructura fsica. Por ejemplo, la pared celular de eucariotas no contiene peptidoglucano. En plantas est compuesta de polisacridos como la celulosa y pectina. La de los hongos filamentosos contiene quitina y celulosa y en levaduras manano. En las algas existe celulosa, otros polisacridos y carbonato clcico. Membrana citoplsmica o citiplasmtica Independientemente de que la clula eucariota posea o no pared celular, posee membrana citoplasmtica que rodea a la parte principal de la clula. La membrana semipermeable es una bicapa lipdica que posee insertadas protenas. Algunas de estas protenas atraviesan enteramente la membrana creando poros a travs de los cuales los nutrientes entran dentro de la clula. A estas protenas se las denomina permeasas.

Las diferencias existentes entre la membrana de eucariotas y procariotas son: Los eucariotas contienen esteroles (fundamentalmente colesterol) que le confieren rigidez a la membrana. En aquellos eucariotas que no poseen pared celular, la membrana est reforzada por microtbulos de las protenas actina y miosina.

 Los eucariotas no localizan los enzimas implicados en la generacin de energa metablica en su membrana. Organelos o argnulos celulares Dentro de la membrana citoplsmica est el protoplasma que se divide en carioplasma y citoplasma. El carioplasma es el material que hay dentro de la membrana nuclear, mientras que el citoplasma es el material existente entre la membrana nuclear y la membrana citoplsmica. En el citoplasma es donde se encuentran los orgnulos celulares (verdaderas fbricas en miniatura) que son estructuras rodeadas de membrana que realizan funciones especiales, tales como la fotosntesis y respiracin. Al contrario que las procariotas, el citoplasma de las eucariotas posee una extensa red de microtbulos y estructuras proteicas que constituyen el citoesqueleto de la clula. Este citoesqueleto genera la forma de la clula y a travs de l se mueven los orgnulos en el citoplasma. Los argnulos son: Ncleo El ncleo de las eucariotas se caracteriza por su membrana nuclear; es una doble membrana la cual se asemeja a dos membranas

citoplasmticas juntas, que contiene muchos poros grandes a travs de los cuales pasan sustancias como protenas y RNA. Normalmente posee forma esfrica u oval. El ncleo contiene la informacin hereditaria de la clula en la forma de DNA. En el carioplasma que no se est dividiendo el DNA est combinado con protenas como las histonas, dndole una apariencia fibrilar. Esta combinacin de DNA y protenas se llama cromatina. Durante la divisin celular la cromatina se condensa en cromosomas.

Dentro del carioplasma se encuentra el nuclolo, el cual aparece ms oscuro con el microscopio electrnico. Alrededor del cinco al diez por

ciento del nuclolo es RNA, siendo el resto protena. Esta estructura es el lugar de sntesis del RNA ribosomal y de los componentes esenciales del ribosoma. Los componentes proteicos de los ribosomas sintetizados en el citoplasma entran en el ncleo a travs de los poros nucleares para combinarse con el RNA ribosomal recin sintetizado. Tanto las protenas como el RNA forman las dos subunidades de los ribosomas que salen del carioplasma a travs de los poros y se convierten en funcionales en el citoplasma. Los ribosomas de eucariotas son mayores que los de procariotas. Retculo endoplsmico El retculo endoplsmico es una red membranosa de sacos y tbulos que a menudo estn conectados a la membrana nuclear y citoplsmica.

En esquema, arriba derecha y abajo izquierda, retculos endoplasmticos

Existen dos formas de retculo endoplsmico: el rugoso y el liso.

El rugoso posee ribosomas y el liso no. Las protenas sintetizadas en el rugoso son liberadas en el citoplasma o pasan a travs de su membrana dentro de los canales por donde son distribuidas a distintas partes de la clula. El retculo endoplsmico liso est implicado en la sntesis de glucgeno, lpidos y esteroides. Los canales del retculo endoplsmico liso tambin sirven para la distribucin de las sustancias sintetizadas en l. Aparato de Golgi (o complejo de Golgi) Est compuesto de sacos membranosos que tienen vesculas esfricas en sus extremos. Fue

descrito por primera vez por Camillo Golgi en 1898. Es el centro de de las

empaquetamiento clulas

eucariotas,

responsable del transporte seguro de los compuestos sintetizados al exterior de la clula. El aparato de Golgi est conectado a la membrana citoplasmtica donde se Aparato de Golgi

fusiona y as poder excretar el contenido fuera de la

clula, proceso que se llama exocitosis. Otra funcin es la de empaquetar ciertos enzimas sintetizados en el retculo endoplsmico rugoso en unos orgnulos llamados lisosomas. Estos enzimas catalizan reacciones hidrolticas incluyendo proteasas, nucleasas, glicosidasas, sulfatasas, lipasas y fosfatasas. El contenido de los lisosomas no se excreta sino que permanece en el citoplasma y participa en la digestin citoplsmica de los materiales ingeridos o absorbidos por la clula.

El que los enzimas hidrolticos permanezcan dentro del lisosoma protege a la clula de la accin ltica de estos enzimas. En adiccin, el aparato de Golgi contiene glicosiltransferasas que unen molculas de carbohidrato a protenas para formar glicoprotenas. Mitocondria Es un orgnulo citoplsmico donde se generan las molculas de ATP durante la respiracin aerbica. La membrana interna est muy invaginada y es donde tiene lugar la conversin de energa. Aunque las mitocondrias son orgnulos de clulas eucariotas se parecen a las clulas procariotas; contienen sus propios

ribosomas, su propio DNA el cual es una nica molcula circular que contiene la informacin gentica necesaria para la

sntesis de un limitado nmero de protenas cuya sntesis tiene lugar en los propios ribosomas de las mitocondrias. Mitocondria Finalmente, las mitocondrias se dividen para formar nuevas mitocondrias de forma parecida a como lo hacen los procariotas e independientemente del ncleo celular; sin embargo, no se pueden dividir si se sacan del citoplasma. Cloroplastos Es el lugar donde ocurren las reacciones fotosintticas, donde se utiliza la luz como fuente de energa para convertir el CO2 en azcar y los tomos de O2 del H2O en molculas de O2 gaseoso. El cloroplasto es una estructura rodeada por una doble membrana cuyo interior se denomina estroma. La membrana interna se pliega en el estroma formando sacos en forma de discos llamados tilacoides, los cuales contienen la clorofila y los carotenos que intervienen en la fotosntesis.

Cada conjunto de tilacoides se llama grano. Algunos tilacoides se unen a otros de otro grano formando una red. Los cloroplastos poseen que las las

mismas

caractersticas

mitocondrias (ribosomas 70 S, DNA circular, fisin binaria). La similitud de las mitocondrias y Cloroplasto los cloroplastos con los microorganismos procariotas dio base a la teora endosimbitica del origen de estos orgnulos.